Name: Gelişmiş beyin floresan boyaması ve immün boyama için Drosophila kafalarının doğrudan kriyoseksiyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-07T14:10:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: Keşfedin Drosophila beyin dokusu işleme için basitleştirilmiş kriyoseksiyon protokolünü. Bu yöntem karmaşık diseksiyonları ortadan kaldırarak immünohistokimya ve görüntüleme analizini kolaylaştırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Fabbri-Destro, M., Rizzolatti, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mirror+neurons+and+mirror+systems+in+monkeys+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Mirror neurons and mirror systems in monkeys and humans.</a> Physiology. 23, 171-179 (2008).</li>
<li>Faust, T. E., Gunner, G., Schafer, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+governing+activity-dependent+synaptic+pruning+in+the+developing+mammalian+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mechanisms governing activity-dependent synaptic pruning in the developing mammalian CNS.</a> Nat Rev Neurosci. 22, 657-673 (2021).</li>
<li>Roozendaal, B., McEwen, B. S., Chattarji, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress%2C+memory+and+the+amygdala%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Stress, memory and the amygdala.</a> Nat Rev Neurosci. 10, 423-433 (2009).</li>
<li>Arber, S., Costa, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Networking+brainstem+and+basal+ganglia+circuits+for+movement%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Networking brainstem and basal ganglia circuits for movement.</a> Nat Rev Neurosci. 23, 342-360 (2022).</li>
<li>GBD 2019 Dementia Forecasting Collaborators. Estimation of the global prevalence of dementia in 2019 and forecasted prevalence in 2050: an analysis for the Global Burden of Disease Study 2019. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Lancet+Public+Health%22">Lancet Public Health</a>. 7, e105-e125 (2022).</li>
<li>Huang, Y., Li, Y., Pan, H., Han, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global%2C+regional%2C+and+national+burden+of+neurological+disorders+in+204+countries+and+territories+worldwide%5BTitle%5D)+AND+%22J+Glob+Health%22%5BJournal%5D)">Global, regional, and national burden of neurological disorders in 204 countries and territories worldwide.</a> J Glob Health. 13, 04160(2023).</li>
<li>Crick, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+dogma+of+molecular+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Central dogma of molecular biology.</a> Nature. 227, 561-563 (1970).</li>
<li>Ugur, B., Chen, K., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+tools+and+assays+for+the+study+of+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Drosophila tools and assays for the study of human diseases.</a> Dis Model Mech. 9, 235-244 (2016).</li>
<li>Hales, K. G., Korey, C. A., Larracuente, A. M., Roberts, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+on+the+Fly%3A+A+primer+on+the+Drosophila+model+system%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetics on the Fly: A primer on the Drosophila model system.</a> Genetics. 201, 815-842 (2015).</li>
<li>Larkin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FlyBase%3A+updates+to+the+Drosophila+melanogaster+knowledge+base%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">FlyBase: updates to the Drosophila melanogaster knowledge base.</a> Nucleic Acids Res. 49, D899-D907 (2021).</li>
<li>Jeibmann, A., Paulus, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+melanogaster+as+a+model+organism+of+brain+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Drosophila melanogaster as a model organism of brain diseases.</a> Int J Mol Sci. 10, 407-440 (2009).</li>
<li>Winding, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+connectome+of+an+insect+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The connectome of an insect brain.</a> Science. 379, eadd9330(2023).</li>
<li>Bargiello, T. A., Jackson, F. R., Young, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration+of+circadian+behavioural+rhythms+by+gene+transfer+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Restoration of circadian behavioural rhythms by gene transfer in Drosophila.</a> Nature. 312, 752-754 (1984).</li>
<li>Zehring, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P-element+transformation+with+period+locus+DNA+restores+rhythmicity+to+mutant%2C+arrhythmic+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">P-element transformation with period locus DNA restores rhythmicity to mutant, arrhythmic Drosophila melanogaster.</a> Cell. 39, 369-376 (1984).</li>
<li>Huang, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+discoveries+of+molecular+mechanisms+for+the+circadian+rhythm%3A+The+2017+Nobel+Prize+in+Physiology+or+Medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+J%22%5BJournal%5D)">The discoveries of molecular mechanisms for the circadian rhythm: The 2017 Nobel Prize in Physiology or Medicine.</a> Biomed J. 41, 5-8 (2018).</li>
<li>Mahmood, T., Yang, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Western+blot%3A+technique%2C+theory%2C+and+trouble+shooting%5BTitle%5D)+AND+%22N+Am+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Western blot: technique, theory, and trouble shooting.</a> N Am J Med Sci. 4, 429-434 (2012).</li>
<li>Ong, S. E., Foster, L. J., Mann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+spectrometric-based+approaches+in+quantitative+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Mass spectrometric-based approaches in quantitative proteomics.</a> Methods. 29, 124-130 (2003).</li>
<li>Behnke, J. A., Ye, C., Moberg, K. H., Zheng, J. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+to+detect+neurodegeneration+in+Drosophila+melanogaster+whole-brain+mounts+using+advanced+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">A protocol to detect neurodegeneration in Drosophila melanogaster whole-brain mounts using advanced microscopy.</a> STAR Protoc. 2, 100689(2021).</li>
<li>Moraes, R. C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apolipoprotein+E+induces+lipid+accumulation+through+Dgat2+that+is+prevented+with+time-restricted+feeding+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%22%5BJournal%5D)">Apolipoprotein E induces lipid accumulation through Dgat2 that is prevented with time-restricted feeding in Drosophila.</a> Genes. 15 (11), 1376(2024).</li>
<li>Roth, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin+reduces+neuronal+mutant+huntingtin+aggregation+and+ameliorates+locomotor+performance+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Aging+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rapamycin reduces neuronal mutant huntingtin aggregation and ameliorates locomotor performance in Drosophila.</a> Front Aging Neurosci. 15, 1223911(2023).</li>
<li>Currier, T. A., Pang, M. M., Clandinin, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+processing+in+the+fly%2C+from+photoreceptors+to+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Visual processing in the fly, from photoreceptors to behavior.</a> Genetics. 224, (2023).</li>
<li>McKellar, C. E., Siwanowicz, I., Dickson, B. J., Simpson, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlling+motor+neurons+of+every+muscle+for+fly+proboscis+reaching%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Controlling motor neurons of every muscle for fly proboscis reaching.</a> Elife. 9, (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1000 uL Pipet</td><td>Eppendorf</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>1000 uL Pipet Uçları</td><td>Olympus Plastics</td><td>23-165R</td><td></td></tr><tr><td>10X Fosfat Tamponlu Salin (PBS)</td><td>Fisher</td><td>J62036.K7</td><td>ph=7.4</td></tr><tr><td>200 Kanıt Etanol</td><td>Decon Laboratuvarları</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>20X Tris Tamponlu Salin</td><td>Thermo Scientific</td><td>J60877.K2</td><td>pH=7.4</td></tr><tr><td>AF750 Keçi Anti-Fare İkincil Antikoru</td><td>Alexa Fluor</td><td>A21037</td><td></td></tr><tr><td>Rulo Önleyici Cam</td><td>IMEB</td><td>AR-14047742497</td><td></td></tr><tr><td>ApoE Fare Birincil Antikoru</td><td>Santa Cruz</td><td>SC13521</td><td></td></tr><tr><td>Sığır Serumu Albümini</td><td>Fisher</td><td>9048-46-8</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj Tüpleri 1.5 mL</td><td>Fisher</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>Şarjlı Slaytlar</td><td>Globe Scientific</td><td>1415-15</td><td></td></tr><tr><td>Kriyoseksiyon Kalıpları</td><td>Fisher</td><td>2363553</td><td></td></tr><tr><td>Kriyostat</td><td>Leica</td><td>CM 3050 S</td> Kriyostat Bıçakları <td></td></tr><tr><td></td><td>CL Sturkey</td><td>DT554N50</td><td></td></tr><tr><td>Damıtılmış Su</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kuru Buz</td><td>???</td><td>???</td><td></td></tr><tr><td>İnce Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Fly Pad</td><td>Tritech Research</td><td>MINJ-DROS-FP</td><td></td></tr><tr>Dapi <td>Vectashield</td><td>H-1800</td><td></td>Kimwipes<td>ile sertleştirme montaj Ortamı</td></tr><tr><td></td><td>Kimtech</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Olympus</td><td>SZ61</td><td></td></tr><tr><td>Nil Kırmızısı&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>N3013</td><td></td></tr><tr><td>Optimum Kesme Sıcaklığı Bileşiği</td><td>Fisher</td><td>4585</td><td></td></tr><tr><td>Orbital Çalkalayıcı</td><td>OHAUS</td><td>SHLD0415DG</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit %20</td> <td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>15713</td><td></td></tr><tr><td>Tıraş Bıçağı</td><td>Gravey</td> <td># 40475</td><td></td></tr><tr><td>Bahar Makası</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>15000-10</td><td></td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>Balıkçısı</td><td>S5-500</td><td></td></tr></tbody></table>

gelişmiş beyin floresan boyaması ve immün boyama için drosophila kafalarının doğrudan kriyoseksiyonu

Direct Cryosectioning of Drosophila Heads for Enhanced Brain Fluorescence Staining and Immunostaining

Yukarıda açıklanan yöntem, yetişkin sinek beyinlerinin güvenilir bir şekilde ve sıkıcı diseksiyon olmadan floresan görüntülemesine izin verir. Şekil 1'de basit bir şekilde gösterildiği gibi, yöntem basittir ve tüm numuneler, ekipman ve malzemeler hazırsa hızlı bir şekilde gerçekleştirilebilir. Alternatif olarak, OCT kalıp aşamasında -80 °C'lik depolama kullanılarak, numuneler daha sonra kullanılmak üzere saklanabilir. Araştırmacıların basit diseksiyon ve gömm...

Gelişmiş beyin floresan boyaması ve immün boyama için Drosophila kafalarının doğrudan kriyoseksiyonu

Immunostaining Drosophila melanogaster brains is essential for exploring the mechanisms behind complex behaviors, neural circuits, and protein expression ...

direct-cryosectioning-drosophila-heads-for-enhanced-brain

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video, glial hücrelerin tek hücreli görüntülenmesi için transgenik bir Drosophila beyninin immünofloresan boyamasını göstermektedir. Beyin, glial spesifik bir rekombinaz sisteminin kontrolü altında farklı antijenik epitop kombinasyonları ile kaynaşmış zar hedefli proteinleri eksprese eder. İzole ve sabit beyinler, antijenik epitoplara özgü primer antikorlarla boyanır, ardından florofor konjuge sekonder antikorlar gelir. Bu etiketleme, çeşitli beyin bölgelerinde farklı glial hücre alt...

Glial Hücrelerin Tek Hücreli Görüntülenmesi için Drosophila Beyinlerinin İmmünofloresan Boyaması

İmmün boyama, dokulardaki belirli hücre tiplerini ve proteinleri görselleştirmek için etkili bir tekniktir. Sonikasyonu kullanarak, burada açıklanan protokol, immünostainingden önce Drosophila melanogaster dokularını geç evre embriyolardan ve larvalardan ayırma ihtiyacını hafifletir. Formaldehitle sabitlenmiş bütün mount larvalarının immün boyaması için etkili bir metodoloji sunuyoruz.

Geç evre embriyonik ve larva soniklenmesi-kolaylaştırdı Immunoflorasan Boyama<em&gt; Drosophila</em&gt; Dokular<em&gt; Yerinde</em

Yetişkin Drosophila beyin nöronal devreleri, yüksek beyin fonksiyonları ve karmaşık bozuklukları çalışmak için değerli bir sistemdir. Etkin bir yöntem, beyin temelli çalışmalar kolaylaştıracak küçük sinek kafasından tüm beyin dokusu incelemek için. Burada iyi korunmuş morfolojisi ile yetişkin beyinlerinde basit, tek adımlı diseksiyon protokol açıklar.

Basit Bir adım Yetişkin Tüm montaj Hazırlama Diseksiyon Protokolü<em&gt; Drosophila</em&gt; Brain

Bu iletişim kuralı diseksiyon ve yetişkin Drosophila melanogaster immunostaining açıklar beyin dokuları. Özellikle, bu iletişim kuralı doğru nöronal gelişim birçok yönlerini temel genel prensipler ortaya çıkarmak için kullanılabilecek örnek nöronal alt kümeleri olarak Drosophila mantar beden ve photoreceptor nöronlar kullanımı vurgulamaktadır.

Diseksiyon ve mantar vücut immünfloresan boyama ve yetişkin Drosophila melanogaster beynindeki nöronlar Photoreceptor

Hücre türleri farklı morfoloji görüntülemek ve a değişiklik-in onların komşuları ile etkileşim kurmak. Bu iletişim kuralı tek hücre morfolojisi açıklamaya ve hücre-hücre etkileşim köklü Gal4/UAS ifade sistemi kullanılarak incelemek için açıklar.

Yüksek çözünürlüklü tek hücre türleri morfoloji ve Glia Drosophila içinde etkileşimlerin hücre çalışmaya uygulama çok renkli FlpOut tekniği

Protein toplama ve merkezi sinir sistemi Drosophila modellerinin autophagic akı floresan-görüntüleme tabanlı cep biyolojik çalışmalar nicel veri ayıklamak için bir basit ve uyarlanabilir iş akışı geliştirdiğimiz ateş.

Ateş Drosophila ImageJ kullanarak Fluorescently Tagged proteinlerin tarafsız analizi ile yılında niceliksel hücre biyolojisi

Bu kağıt doku immünhistokimya, Batı analiz ve RNA-ekstraksiyon için işlenmesi için protokolleri ile birlikte Drosophila pupa retina dissekan için cerrahi bir yöntem sunuyor.

Drosophila pupa Retina diseksiyon immünhistokimya, Batı analiz ve RNA izolasyon için

Genişleme Destekli Yinelemeli Floresan In Situ Hibridizasyon (EASI-FISH), kalın dokuda birden fazla genin ekspresyonunu tespit etmek için genleşme mikroskobunu floresan in situ hibridizasyon (FISH) ile birleştiren sağlam bir tekniktir. Bu protokol, yöntemdeki son gelişmeleri ve bozulmamış Drosophila merkezi sinir sistemini etiketlemek için adaptasyonunu özetlemektedir.

Genişleme Destekli Yinelemeli Floresan In Situ Hibridizasyon Kullanılarak Sağlam Drosophila Beyindeki Gen Ekspresyonunun Multipleks Tespiti

Drosophila kalp kesiti ve floresan görüntüleme protokolü, kalp yapısını ve patolojilerini incelemeyi basitleştirir. Bu yaklaşım, geleneksel diseksiyon için gereken teknik uzmanlığı atlayarak basit kesit alma, boyama ve görüntülemeyi içerir. Erişilebilirliği artırarak Drosophila'yı daha geniş bilimsel topluluk içinde kardiyak ile ilgili araştırmalar için daha yaygın olarak kullanılabilir bir model haline getirir.

Kriyoseksiyon ile Drosophila Kalp Floresan Boyama için Yeni ve Etkili Yöntem

Çift Floresans In situ Taze Beyin Bölüm Hibridizasyon

Keşfedin Drosophila beyin dokusu işleme için basitleştirilmiş kriyoseksiyon protokolünü. Bu yöntem karmaşık diseksiyonları ortadan kaldırarak immünohistokimya ve görüntüleme analizini kolaylaştırır.

Gelişmiş beyin floresan boyaması ve immün boyama için Drosophila kafalarının doğrudan kriyoseksiyonu

Daha fazla video keşfet