Name: Nörorejenerasyonun Görüntülenmesi için Kanallı Agar Pedleri Üzerinde Caenorhabditis elegans Oryantasyonunun İnce Ayarlanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-31T14:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 12 s
Description: Öğrenin, kanallı agar pedleri kullanarak Caenorhabditis elegans'ın oryantasyonunu ince ayarlayarak nörorejenerasyon görüntüleme kalitesini nasıl artırabileceğinizi. Bu yöntem, sinirsel yapıların görünürlüğünü iyileştirir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Hayvan Oryantasyonunu Kontrol Etmek İçin PDMS Kalıpları Kullanarak Kanallı Agar Pedlerinin İmalatı

<ol><li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77 (1), 71-94 (1974).</li>
<li>Bargmann, C. I., Avery, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+killing+of+cells+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Laser killing of cells in Caenorhabditis elegans.</a> Methods Cell Biol. 48, 225-250 (1995).</li>
<li>Zhang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+self-regulating+feed-forward+circuit+controlling+C-elegans+egg-laying+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">A self-regulating feed-forward circuit controlling C-elegans egg-laying behavior.</a> Curr Biol. 18 (19), 1445-1455 (2008).</li>
<li>Chung, S. H., Mazur, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Femtosecond+laser+ablation+of+neurons+in+C.+elegans+for+behavioral+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Phys+A-Mater+Sci+Process%22%5BJournal%5D)">Femtosecond laser ablation of neurons in C. elegans for behavioral studies.</a> Appl Phys A-Mater Sci Process. 96 (2), 335-341 (2009).</li>
<li>Zellag, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CentTracker%3A+a+trainable%2C+machine-learning-based+tool+for+large-scale+analyses+of+Caenorhabditis+elegans+germline+stem+cell+mitosis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">CentTracker: a trainable, machine-learning-based tool for large-scale analyses of Caenorhabditis elegans germline stem cell mitosis.</a> Mol Biol Cell. 32 (9), 915-930 (2021).</li>
<li>Huang, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+neuron+in+C.+elegans+orchestrates+multiple+motor+outputs+through+parallel+modes+of+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">A single neuron in C. elegans orchestrates multiple motor outputs through parallel modes of transmission.</a> Curr Biol. 33 (20), 4430-4445.e6 (2023).</li>
<li>Rasmussen, N. R., Dickinson, D. J., Reiner, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ras-dependent+cell+fate+decisions+are+reinforced+by+the+RAP-1+small+GTPase+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Ras-dependent cell fate decisions are reinforced by the RAP-1 small GTPase in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 210 (4), 1339-1354 (2018).</li>
<li>Rivera Gomez, K., Schvarzstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immobilization+of+nematodes+for+live+imaging+using+an+agarose+pad+produced+with+a+vinyl+record%5BTitle%5D)+AND+%22MicroPubl+Biol%22%5BJournal%5D)">Immobilization of nematodes for live imaging using an agarose pad produced with a vinyl record.</a> MicroPubl Biol. 2018, (2018).</li>
<li>Chung, S. H., Clark, D. A., Gabel, C. V., Mazur, E., Samuel, A. D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+the+AFD+neuron+in+C.+elegans+thermotaxis+analyzed+using+femtosecond+laser+ablation%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The role of the AFD neuron in C. elegans thermotaxis analyzed using femtosecond laser ablation.</a> BMC Neuroscience. 7 (1), 30(2006).</li>
<li>Gerhold Abigail, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+the+regulation+of+stem+and+progenitor+cell+mitotic+progression+by+in+situ+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Investigating the regulation of stem and progenitor cell mitotic progression by in situ imaging.</a> Curr Biol. 25 (9), 1123-1134 (2015).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>125 mL Erlenmeyer şişesi</td><td>Corning</td><td>4980-125</td><td></td></tr><tr><td>33 1/2 RPM veya 12 inç uzun çalma (LP) vinil plak&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Bireysel kanal derinliği: 50 &mikro; m, genişlik: 200 & m</td></tr><tr><td>30 mL plastik şırınga</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-793-817</td><td></td></tr><tr><td>%90 Platin, %10 İridyum Tel</td><td>Tritech Research&nbsp;</td><td>PT-9010</td><td>platin çekme alüminyum folyo oluşturmak için kullanılır</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Amazon</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür</td><td>Fisher Scientific</td><td>AAL131910B</td><td></td></tr><tr><td>cam bölme</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>7 inç x 5 cam bölmeden alınmıştır&nbsp;</td></tr><tr><td>cam pipet</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20A</td><td>platin toplama sıcak plaka oluşturmak için kullanılır</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Thermofisher</td><td>SP88857104</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum Sülfat</td><td>Fisher Scientific</td><td>AA3333736</td><td></td></tr><tr><td>mikroskobu slaytları&nbsp;</td><td>Mckesson</td><td>938360</td><td></td></tr><tr><td>moleküler biyoloji sınıfı agar&nbsp;</td><td>Benchmark Scientific</td><td>A1705</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum Fosfat dibazik&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>P290-500</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum Fosfat monobazik&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>P285-500</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Azid</td><td>Fisher Scientific</td><td>AAJ2161022</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Klorür&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP358-212</td><td></td></tr><tr><td>kare kapaklı cam</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-541-016</td><td></td></tr><tr><td>SYLCAP 284-F (Hızlı Kürlenme) Silikon Elastomer Kapsülleyici Kiti, şeffaf, optik olarak şeffaf, 10:1 karışım, 500 gm/ml (0,5 kg), Sylgard 184 ve benzerlerinden daha hızlı&nbsp;</td><td>MicroLubrol</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>vakumlu kurutucu&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-648-100</td><td></td></tr><tr><td>tartı kabı</td><td>Balıkçı Bilimsel</td><td>01-549-750</td><td></td></tr></tbody></table>

nörorejenerasyonun görüntülenmesi için kanallı agar pedleri Üzerinde caenorhabditis elegans oryantasyonunun İnce ayarlanması

Fine Adjustment of Caenorhabditis elegans Orientation on Channeled Agar Pads for Imaging Neuroregeneration

PDMS kalıbının imalatı Kalıp imalatı sırasında vakum basıncının çevrilmesi, kürlenmemiş PDMS'yi deler ve hava kabarcıklarını giderir, böylece kabarcıksız bir kalıp sağlar. Şekil 3D'de gösterildiği gibi, kabarcıklar yüzeye çıkar ve delinir. Kabarcıksız kalıplar temiz kanallar üretebilir.
PDMS kalıbının katılaşması Cam bölmeyi vinil plağın üzerine yerleştirirken hava boşlukları oluşturmaktan kaçının. Bu boşluklar eşit olmayan kalınlığa veya yüzey kusurlarına yol açabilir. Kabarcıklar, varsa, görsel olarak tespit edilebilir. Cam panelin bir taraftan diğer tarafa bastırılması havanın yerini alır, kabarcık oluşumunu en aza indirir ve Şekil 4A'da gösterilen eşit bir küf kalınlığı sağlar.
C. elegans'ın ince oryantasyonu için kanallı agar pedlerinin kullanılması Kanallı agar pedleri, C. elegans'ın hassas bir şekilde yönlendirilmesine izin verir. Vulva veya S şeklindeki bağırsak gibi yer işaretlerini kullanarak yönlendirmeyi doğrularken, hayvanı bir platin tel çekme ile hafifçe yuvarlayarak hayvan yönünü belirledik (Şekil 5A,C). Hayvanları Şekil 5B,D'de gösterilen ters çevrilmiş bir mikroskoba aktarmadan önce bir floresan diseksiyon mikroskobu altında oryantasyonu doğrularız.
Kanallı agar pedleri ile nöron liflerinin rejenerasyonunun değerlendirilmesi Kanallı agar pedleri, hayvanı en iyi şekilde yönlendirerek nöronal rejenerasyonun görüntüleme kalitesini iyileştirir. Rejenere nöron liflerinin objektif merceğe daha yakın konumlandırılması, ışık saçılımını ve emilimini azaltarak görüntü netliğini artırır. Şekil 5E,F, rejenerasyon bölgesini hedefe daha yakın yerleştirmenin, nöronal yeniden büyümenin daha doğru analizini kolaylaştırarak görüntüleme kalitesini artırdığını göstermektedir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67811/67811fig01.jpg"> 
Resim 1: Caenorhabditis elegans düz ve kanallı pedler üzerinde. (A) DV oryantasyonunda düz agar pedi üzerindeki hayvan; Vulva yüzleri lamel ile karşı karşıyadır. (B) Lamel girişi vulvayı yana doğru iterek hayvanı yanal yönlendirmeye zorlar. (C) DV oryantasyonunda kanallı agar pedi üzerindeki hayvan. (D) Lamel girişinden sonra hayvan DV oryantasyonunda kalır. (E) DV oryantasyonunda kanallı agar pedi üzerinde silindir mutantın parlak alan görüntüsü. (F) Lamelli parlak alan görüntüsü, E ile aynı hayvan DV yönünde kalır. Kısaltmalar: DV = dorsal-ventral; lat = yanal. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67811/67811fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67811/67811fig02.jpg"> 
Şekil 2: PDMS üretimi için malzeme ve ekipman. (A) SYLCAP 284-F Silikon Elastomer Kiti. (b) Ölçek. (C) Plastik şırınga. (D) Vakum desikatör. (E) Sıcak plaka. (F) 12 inç uzun çalan vinil plak, gerektiği gibi parçalayın. (G) Cam bölme. Kısaltma: PDMS = polidimetilsiloksan. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67811/67811fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67811/67811fig03.jpg"> 
Şekil 3: Kürlenmemiş PDMS'nin karıştırılması ve vakumlanması. (A) Tabanı ve sertleştiriciyi tepside karıştırın. (B) Tepsiyi bir vakum odasına yerleştirin. (C) Kabarcıkların yüzeye çıkmasına izin vermek için vakumu üç kez çevirin. (D) Bir saat sonra çoğu baloncuk patladı. PDMS üzerinden geliştirilmiş iletimi not edin. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67811/67811fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67811/67811fig04.jpg"> 
Şekil 4: Kabarcıklar olmadan kürlenmemiş PDMS'ye bir cam bölmenin tanıtılması. (A) Kabarcıksız vinil plak üzerine cam panelin tanıtılması. (B) Katılaşmış PDMS kalıbı, iç detaylandırma kanalları ile kayıttan çıkarıldı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67811/67811fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67811/67811fig05.jpg"> 
Şekil 5: Kanallı agar üzerine monte edilmiş C. elegans'ın parlak alan ve floresan görüntüleri. (A) İki taraflı DV oryantasyonunda bir hayvanın parlak alan görüntüsü. DV oryantasyonu için anatomik dönüm noktası: burundan kuyruğa olan mesafenin ~% 60'ını geçen spiral S-şekilli bağırsak (okla gösterilen daha koyu doku). (B) DV oryantasyonundaki nöronların floresan görüntüsü, A ile aynı hayvan. (C) Enlem yönündeki bir hayvanın parlak alan görüntüsü. Enlem oryantasyonu için anatomik dönüm noktası: vulvaya bakan taraf. (D) Enlem oryantasyonundaki nöronların floresan görüntüsü, C ile aynı hayvan. (E) Bir hayvanın daha derin (uzak) tarafında rejenerasyon (ok) ile oryantasyon. (F) Hedefe daha yakın olan daha sığ yan hayvanda rejenerasyon ile oryantasyon; rejenerasyon daha net (ok). Ölçek çubukları = 20 μm. Kısaltmalar: DV = dorsal-ventral; lat = yanal. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67811/67811fig05large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Nörorejenerasyonun Görüntülenmesi için Kanallı Agar Pedleri Üzerinde Caenorhabditis elegans Oryantasyonunun İnce Ayarlanması

Caenorhabditis elegans is a model organism widely used for studying biological processes. Its transparency and small size make it ideal for imaging ...

fine-adjustment-caenorhabditis-elegans-orientation-on-channeled-agar

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

C. elegans'ın canlı görüntülemesi sırasında, nematodu zarar vermeden veya kurutmadan hareketsiz tutmak için bir agaroz pedi kullanılabilir. Bu video, mikroskopi için basit bir montaj pedinin nasıl hazırlanacağını açıklamaktadır.

Nematod Slayt Hazırlama: Hayvanları Bir Agar Pedi Üzerine Monte Etmek İçin Bir Yöntem

Kaynak: Doser, R., et al. Nöronal Kalsiyum İşleminin In Vivo Hücre Altı Görüntülenmesi. J. Vis. Uzm. (2023)Bu video, transgenik Caenorhabditis elegans suşlarının ventral sinir kordonu nöronlarındaki hücre altı kalsiyum akışının in vivo görüntülemesini göstermektedir. İki farklı kalsiyum indikatörü kullanılır: bir suşta bir sitoplazmik indikatör ve diğerinde bir mitokondriyal indikatör kullanılır. Nöronlar, nöronal sitoplazma ve mitokondri içindeki floresan yoğunluğundaki gerçek zamanlı...

Caenorhabditis elegans Nöronlarında Hücre Altı Kalsiyum Dinamiğinin Görüntülenmesi

Onun küçük şeffaf gövde, iyi belgelenmiş nöroanatomi ve müsait genetik teknikler ve reaktiflerin bir dizi...

C. vivo Nöronal Kalsiyum Imaging&#39;de elegans

Biz solucan amylopathies yönlerini incelemek için yöntemler...

Bir<em&gt; Caenorhabditis elegans</emAmylopathy Çalışmaları&gt; Model Sistemi

Bu protokol, görüntüye Caenorhabditis elegans embriyolarında bir doku içinde bölünen hücreleri açıklamaktadır. Birkaç protokoller embriyonun erken görüntü hücre bölünmesi için, bu protokol nasıl mid geç embriyonik dönemde gelişmekte olan bir doku içinde hücre bölünmesi görüntü açıklar nasıl tarif ederken.

Sırasında Neuroblast Sitokinez görselleştirme<em&gt; C. elegans</em&gt; Embriyo

Hayvanın hareketsiz hale getirilmeden uzun zaman ölçeklerinde davranışı ve nöral aktiviteyi görüntülemek, davranışı anlamak için bir ön koşuldur. Agaroz mikroakışkan odacıkların görüntülenmesi (), Caenorhabditis elegans'ın tüm yaşam evreleri için nöral aktivite ve davranışı görüntülemek için kullanılabilir.

Uzun süreli Kalsiyum Görüntüleme için Agaroz microchambers<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Caenorhabditis elegans (C. elegans) aksonlar ve hücre içi taşıma çalışma için iyi bir modeldir. Burada, vivo içinde kayıt ve analiz C. elegansaksonlar ve intraflagellar taşıma için bir protokol açıklayın.

Caenorhabditis elegans nöron hücre içi taşıma analiz immobilizasyon

Bu çalışmada, sinaptik boyut ve lokalizasyon, kas Morfoloji ve marochondrial şekil nicel ölçümler serbestçe kullanılabilir görüntü işleme araçları kullanarak C. elegans özetliyor. Bu yaklaşım, C. elegans 'da gelecekteki çalışmaların, genetik mutasyonların bir sonucu olarak doku ve organel yapısal değişikliklerin kapsamını nicel olarak karşılaştırmasına olanak sağlar.

Caenorhabditis elegans hücresel yapıları ve organelle morfoloji eğitim için nicel yaklaşımlar

Dinamik mikrotübüllerin floresan etiketli Uç bağlayıcı protein kullanılarak vivo olarak görüntülenmesi için bir protokol sunulmuştur. C. elegans'ınPosterior lateral mikrotübül (PLM) nöronunda dinamik mikrotübülleri etiketleme, görüntüleme ve analiz etme yöntemlerini açıkladık.

In vivo Caenorhabditis elegans Nöronlarında Mikrotübül Dinamiklerinin ve Oryantasyonunun Değerlendirilmesi

Makale, canlı bir nematoda tek nöron çözünürlüğünde endojen etiketli kargoların aksonal taşınmasını görselleştirmek için floresan mikroskobu edinim parametrelerinin optimizasyonunu açıklamaktadır.

Canlı Caenorhabditis elegans'ta Floresan Mikroskobu ile Endojen Yükün Aksonal Taşınmasının Görüntülenmesinin Optimize Edilmesi

Öğrenin, kanallı agar pedleri kullanarak Caenorhabditis elegans'ın oryantasyonunu ince ayarlayarak nörorejenerasyon görüntüleme kalitesini nasıl artırabileceğinizi. Bu yöntem, sinirsel yapıların görünürlüğünü iyileştirir.

Nörorejenerasyonun Görüntülenmesi için Kanallı Agar Pedleri Üzerinde Caenorhabditis elegans Oryantasyonunun İnce Ayarlanması

Daha fazla video keşfet