Name: Kriyoseksiyon ile Drosophila Kalp Floresan Boyama için Yeni ve Etkili Yöntem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T14:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 7 s
Description: Keşfedin kriyoseksiyon ve floresan boyama yöntemleriyle Drosophila kalp yapısını yüksek çözünürlüklü görüntüleme tekniklerini kullanarak. Bu protokol karmaşık diseksiyon ihtiyacını ortadan kaldırarak kardiyak protein belirteçlerinin daha iyi görselleştirilmesini sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Baker, K. D., Thummel, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetic+larvae+and+obese+flies-emerging+studies+of+metabolism+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Diabetic larvae and obese flies-emerging studies of metabolism in Drosophila.</a> Cell Metab. 6 (4), 257-266 (2007).</li>
<li>Bhide, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+autophagy+and+blocking+Nrf2+suppress+laminopathy-induced+age-dependent+cardiac+dysfunction+and+shortened+lifespan%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Increasing autophagy and blocking Nrf2 suppress laminopathy-induced age-dependent cardiac dysfunction and shortened lifespan.</a> Aging Cell. 17 (3), e12747(2018).</li>
<li>Bier, E., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%2C+an+emerging+model+for+cardiac+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Drosophila, an emerging model for cardiac disease.</a> Gene. 342 (1), 1-11 (2004).</li>
<li>Bodmer, R., Venkatesh, T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+development+in+Drosophila+and+vertebrates%3A+conservation+of+molecular+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Genet%22%5BJournal%5D)">Heart development in Drosophila and vertebrates: conservation of molecular mechanisms.</a> Dev Genet. 22 (3), 181-186 (1998).</li>
<li>Gill, S., Le, H. D., Melkani, G. C., Panda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-restricted+feeding+attenuates+age-related+cardiac+decline+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Time-restricted feeding attenuates age-related cardiac decline in Drosophila.</a> Science. 347 (6227), 1265-1269 (2015).</li>
<li>Melkani, Y., Pant, A., Guo, Y., Melkani, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+assessment+of+cardiac+dynamics+in+aging+and+dilated+cardiomyopathy+Drosophila+models+using+machine+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Automated assessment of cardiac dynamics in aging and dilated cardiomyopathy Drosophila models using machine learning.</a> Commun Biol. 7 (1), 702(2024).</li>
<li>Ocorr, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KCNQ+potassium+channel+mutations+cause+cardiac+arrhythmias+in+Drosophila+that+mimic+the+effects+of+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">KCNQ potassium channel mutations cause cardiac arrhythmias in Drosophila that mimic the effects of aging.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (10), 3943-3948 (2007).</li>
<li>Piazza, N., Wessells, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+models+of+cardiac+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Mol+Biol+Transl+Sci%22%5BJournal%5D)">Drosophila models of cardiac disease.</a> Prog Mol Biol Transl Sci. 100, 155-210 (2011).</li>
<li>Wolf, M. J., Rockman, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%2C+genetic+screens%2C+and+cardiac+function%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Drosophila, genetic screens, and cardiac function.</a> Circ Res. 109 (7), 794-806 (2011).</li>
<li>Lee, J. H., Bassel-Duby, R., Olson, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart-and+muscle-derived+signaling+system+dependent+on+MED13+and+Wingless+controls+obesity+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Heart-and muscle-derived signaling system dependent on MED13 and Wingless controls obesity in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci. 111 (26), 9491-9496 (2014).</li>
<li>Adams, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genome+sequence+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The genome sequence of Drosophila melanogaster.</a> Science. 287 (5461), 2185-2195 (2000).</li>
<li>Rotstein, B., Paululat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+morphology+of+the+Drosophila+heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Dev+Dis%22%5BJournal%5D)">On the morphology of the Drosophila heart.</a> J Cardiovasc Dev Dis. 3 (2), 15(2016).</li>
<li>Alayari, N. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+labeling+of+Drosophila+heart+structures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Fluorescent labeling of Drosophila heart structures.</a> J Vis Exp. (32), e1423(2009).</li>
<li>Guo, Y., Abou Daya, F., Le, H. D., Panda, S., Melkani, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diurnal+expression+of+Dgat2+induced+by+time%E2%80%90restricted+feeding+maintains+cardiac+health+in+the+Drosophila+model+of+circadian+disruption%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Diurnal expression of Dgat2 induced by time‐restricted feeding maintains cardiac health in the Drosophila model of circadian disruption.</a> Aging Cell. 23 (7), e14169(2024).</li>
<li>Melkani, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Huntington%27s+disease-induced+cardiac+amyloidosis+is+reversed+by+modulating+protein+folding+and+oxidative+stress+pathways+in+the+Drosophila+heart%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Huntington's disease-induced cardiac amyloidosis is reversed by modulating protein folding and oxidative stress pathways in the Drosophila heart.</a> PLoS Genet. 9 (12), e1004024(2013).</li>
<li>Hartley, P. S., Coward, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+podocyte+biology+using+Drosophila+nephrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Modeling podocyte biology using Drosophila nephrocytes.</a> Methods Mol Biol. 2067, 11-24 (2020).</li>
<li>Watson, J. R., Roth, J., Melkani, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+cryosectioning+of+Drosophila+heads+for+enhanced+Brain+Fluorescence+Staining+and+Immunostaining%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Direct cryosectioning of Drosophila heads for enhanced Brain Fluorescence Staining and Immunostaining.</a> J. Vis. Exp. , Press e67791(2025).</li>
<li>Kelso, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flytrap%2C+a+database+documenting+a+GFP+protein%E2%80%90trap+insertion+screen+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nuc+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Flytrap, a database documenting a GFP protein‐trap insertion screen in Drosophila melanogaster.</a> Nuc Acids Res. 32 (suppl_1), D418-D420 (2004).</li>
<li>Dietzl, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+transgenic+RNAi+library+for+conditional+gene+inactivation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila.</a> Nature. 448 (7150), 151-156 (2007).</li>
<li>Mery, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+muscle+LIM+protein%2C+Mlp84B%2C+is+essential+for+cardiac+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">The Drosophila muscle LIM protein, Mlp84B, is essential for cardiac function.</a> J Exp Biol. 211 (1), 15-23 (2008).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1000 ve mikro; L Pipet</td><td>Eppendorf</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>1000 & mikro; L Pipet Uçları</td><td>Olympus Plastics</td><td>23-165R</td><td></td></tr><tr><td>10X Fosfat Tamponlu Tuzlu Su (PBS)</td> <td>Fisher</td><td>J62036.K7</td><td>ph=7.4</td></tr><tr><td>200 Kanıt Etanol</td><td>Decon Laboratuvarları</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>20X Tris Tamponlu Tuzlu</td><td>Su Termo Scientific</td><td>J60877. K2</td><td>pH=7.4</td></tr><tr><td>Rulo Önleyici Cam</td><td>IMEB</td><td>AR-14047742497</td><td></td></tr><tr><td>Sığır Serumu Albümin</td><td>Fisher</td><td>9048-46-8</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj Tüpleri 1.5 mL</td><td>Fisher</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>Şarjlı Slaytlar</td><td>Globe Scientific</td><td>1415-15</td><td></td></tr><tr><td>Kriyoseksiyon Kalıpları</td><td>Fisher</td><td>2363553</td><td></td></tr><tr><td>Kriyostat</td><td>Leica</td><td>CM 3050 S</td> Kriyostat Bıçakları <td></td></tr><tr><td></td><td>CL Sturkey</td><td>DT554N50</td><td></td></tr><tr><td>Kuru Buz</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>İnce Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>Fly Pad</td><td>Tritech Araştırma</td><td>MINJ-DROS-FP</td><td></td></tr><tr>Dapi <td>Vectashield</td><td>H-1800</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td> Kimtech ile Sertleştirme montaj Ortamı <td></td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Olympus</td><td>SZ61</td><td></td></tr><tr><td>Optimum Kesme Sıcaklığı Bileşiği</td><td>Fisher</td><td>4585</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit %20</td> <td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>15713</td><td></td></tr><tr><td>Phalloidin 594</td><td>Abnova</td><td>U0292</td><td></td></tr><tr><td>Tıraş Bıçağı</td><td>Gravey</td><td>#40475</td><td></td></tr><tr><td>Yaylı Makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>15000-10</td><td></td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>Fisher</td><td>S5-500</td><td></td></tr></tbody></table>

kriyoseksiyon ile drosophila kalp floresan boyama için yeni ve etkili yöntem

Novel And Efficient Method for Drosophila Heart Fluorescence Staining with Cryosectioning

Yukarıda açıklanan yöntem, sıkıcı diseksiyon olmadan floresan görüntüleme kullanarak Drosophila kalbinin incelenmesini kolaylaştırır. Geleneksel kalp diseksiyonu yöntemi karmaşık motor becerilerin geliştirilmesini gerektirdiğinden, bu yöntemin ana yararı budur. Şekil 1'de gösterildiği gibi, yöntem yeni araştırmacılar için kalp diseksiyonundan daha ulaşılabilir ve deney esnekliğine izin veriyor. Alternatif olarak, OCT kalıp aşamasında -80 °C'lik depolama kullanılarak, numuneler daha ...

Kriyoseksiyon ile Drosophila Kalp Floresan Boyama için Yeni ve Etkili Yöntem

Drosophila heart models are widely employed in studying cardiac aging and modeling&#160;human cardiac diseases. However, the dissection of Drosophila ...

Araştırma laboratuvarım, yaşlanma ve metabolik bozukluğu incelemek, metabolik, kalp kası, uyku ve diğer yaşlanma hastalıklarına müdahale olarak zaman kısıtlı beslenme ve egzersizi araştırmak için drosophila modelini kullanıyor. Fizyolojik genetik ve beslenme stratejisi ile makine öğrenimi ve omik, 3D baskılı cihazlar ve makine öğrenimi yaklaşımlarını kullanarak drosophila testini kolaylaştırıyor. Drosophila kalplerinin floresan immünohistokimyası, genotipler ve yaşlar arasında çoklu protein tespitini mümkün kılar, ancak karmaşık diseksiyonlar, doku koruması ve belirli bir protein ekspresyon paternlerinin yüksek çözünürlüklü görüntülenmesi gibi zorluklarla karşı karşıyadır.Bu protokol, doku korunmasını, antikor penetrasyonunu ve görüntüleme çözünürlüğünü iyileştirerek kardiyak protein belirteçlerinin daha iyi görselleştirilmesini sağlar. Geleneksel tüm kalp montaj yönteminde karmaşık diseksiyon, doku hasarı ve sınırlı çözünürlük gibi zorlukları ele alır. Bu protokol, karmaşık diseksiyonu ortadan kaldırarak, tek elle yürütmeyi mümkün kılarak ve maliyetli konfokal mikroskopiden kaçınarak drosophila kalp araştırmalarının erişilebilirliğini artırır ve yüksek çözünürlüklü görüntülemeyi daha uygun hale getirir.Başlamak için, bir karbondioksit sinek matı kullanarak 5 ila 10 sineği uyuşturun. Sinekleri mikroskop altında 1X ila 2X büyütme ile görüş alanına yerleştirin. Yaylı makas kullanarak sineklerin kafasını kesin, kanatları kırpın ve bacakları çıkarın.Gövde olarak adlandırılan göğüs ve karın bölgesini bir arada tutun. Bir fırça kullanarak, tüm deney grupları toplanana kadar gövdeleri buz üzerinde etiketli 1,5 mililitrelik tüplere nazikçe yerleştirin. Tüpleri buzdan çıkardıktan sonra, her tüpe pH 8'de 100 mikrolitre 10 milimolar etilen glikol tetraasetik asit ekleyin.Tüm cisimlerin suya batırıldığından emin olun ve tüpleri 10 dakika boyunca bir orbital çalkalayıcı üzerine yerleştirin. Ardından, etilen glikol tetraasetik asit çözeltisini tüplerden çıkarın ve atın. Dokuyu 10 dakika boyunca yıkamak için her tüpe 100 mikrolitre PBS pipetleyin.Yıkama işlemi sırasında tüpleri orbital çalkalayıcıya yerleştirin. PBS'yi attıktan sonra, her tüpe PBS çözeltisinde 100 mikrolitre% 4 paraformaldehit pipetleyin. Tüpleri 15 dakika boyunca 100 ünitelik bir orbital çalkalayıcı üzerine yerleştirin ve dokuların solüsyonla temas halinde kalmasını sağlayın.Ardından paraformaldehit çözeltisini atın. Son yıkama tamamlandıktan sonra, gövdeleri PBS'de% 10'luk bir sükroz çözeltisine aktarın. Gövdelerin tüp içindeki çözelti ile temas halinde olduğundan emin olun.Kuru buzu depodan alın ve küçük bir metal veya plastik tepsiye yerleştirmek için birkaç parça seçin. Kalıbın yerleştirilmesine izin veren boyutlara sahip bir tepsi seçin ve doğrudan tek bir büyük ve düz kuru buz parçasının üzerine yerleştirin. Etiketli bir kalıbı, kabarcıkları en aza indirmek için yavaşça dökerek optimum kesme sıcaklığı veya OCT bileşiği ile %50'ye kadar doldurun.Bir fırça ile, disseke edilmiş ve sabitlenmiş drosophila cisimciklerini kalıbın içindeki OCT bileşiğinin yüzeyine dikkatlice yerleştirin. Forseps kullanarak, her bir gövdeyi, göğüs kafesinin ve karın bölgesinin sırt duvarı genellikle alt kısım boyunca hizalanacak şekilde kalıbın altına itin. Gövdeleri, karın kalıbın dibi boyunca düz duracak şekilde ayarlayın.Her bölümün tüm konuları aynı anda içermesini sağlamak için X, Y ve Z boyutlarındaki tüm gövdeleri hizalayın. Özellikle erkeklerde karın eğriliğini, vücutları delmeden veya ezmeden mümkün olduğunca düzleştirmek için düzeltin. Tüm denekler yerine oturduktan sonra, kalıbı, alt kısım doğrudan bir parça kuru buzun üzerine oturacak şekilde konumlandırın.OCT bileşiğinin temas halinde donmaya başladığından emin olun ve tüm denekler kalıba tamamen girene kadar devam edin. Dondurulduktan sonra, tamamen donmaya izin vermek için kalıbı eksi 20 santigrat dereceye ayarlanmış bir dondurucuya aktarın. Tamamen donduktan sonra, kalıbın kalan kısmını OCT bileşiği ile doldurun.Kalıba bir ayna ucu takmak için, bloğa bol miktarda OCT bileşiği uygulayın. Ucu bileşiğin üzerine düz bir şekilde bastırın ve kriyostatta tipik olarak beş dakika içinde tamamen donmasına izin verin. Ardından ayna ucunu ve OCT bloğunu kalıptan çıkarın.Ucu aynaya yerleştirin, bloğun yukarıdan aşağıya doğru düzgün bir şekilde yönlendirildiğinden emin olun ve ucu sabitlemek için ayna anahtarını sıkın. Şimdi, ayar düğmelerini ve ayna derinliği kontrollerini kullanarak bloğu bıçakla hizalayın ve kesit genişliğini 20 mikrometre veya daha düşük bir değere ayarlayın. Yavaş ama tutarlı bir hareketle bloktan her dilimi kesin ve rulo önleyici camın kesildiği sırada her dilimi yakalamasına izin verin.Isıtılmış slaytlar kullanarak bölümleri toplayın. Bir tıraş bıçağıyla, bölümleri çevreleyen fazla OCT bileşiğini çıkarın. Yıkama ve leke solüsyonlarını dokuyla sınırlı tutmak için hidrofobik bir işaretleyici kullanarak her slaytın kenarlığını çizin.1000 mikrolitrelik bir pipet kullanarak, slaytları dokuya dokunmadan her biri beş dakika boyunca PBS ile üç kez yıkayın. Son yıkamayı attıktan sonra, floresan leke solüsyonunu dokulara pipetleyin ve karanlıkta oda sıcaklığında bir saat inkübe edin. Ardından, floresan lekesini atın ve slaytları PBS ile her biri beş dakika boyunca üç kez yıkayın.Daha sonra, slayt üzerinde az miktarda çözelti bırakarak son PBS yıkamasını atın. 1000 mikrolitrelik bir pipet kullanarak, dokuya doğrudan uygulamadan kaçınarak lam üzerine üç ila beş damla montaj ortamı pipetleyin. Forseps kullanarak, kapak kızağını bir kenara yerleştirin ve diğer tarafı sürgü ile aynı hizaya gelene kadar kademeli olarak indirin.Slaytları neon veya parıltı olmadan oje ile kapatın. Montaj ortamı sertleşmiyorsa, floresan lekesine bağlı olarak hemen görüntüyü oluşturun veya slaytları daha sonra kullanmak üzere saklayın. Görüntülemeden önce, slaytları temizlik açısından inceleyin ve su solüsyonunda %70 etanol içeren bir mendil kullanarak nazikçe temizleyin.Her floresan kanalı için uygun maruz kalma sürelerini seçmek için deneydeki en parlak floresan nesneleri analiz edin. Doğru pozlama ayarlarını onaylamak için her deney grubunu tüm kanallar için canlı görüntüde inceleyin. Tutarlılık için, aynı floresan kanalını kullanarak her konuya odaklanın ve tüm konular için görüntüler yakalayın.Görüntülemeden sonra, ileride görüntü almak için slaytları karanlıkta dört santigrat derecede saklayın. Floresan görüntüleme yöntemi, drosophila kalbinin ostia, kapak, uzunlamasına lifler ve çevresel lifler gibi temel özelliklerini korudu. Tüm kalp tüpü yapısı ve ayrıntılı küçük yapılar, tüm yapı için 10X ve çevresel kasılma lifleri ve uzunlamasına stabilize edici lifler gibi daha ince ayrıntıları gösteren 40X ila 60X büyütme ile farklı büyütmelerde yakalandı.Temsili floresan mikrografları, DAPI ile boyanmış çekirdekler, yeşile boyanmış lipitler ve falloidin ile kırmızıya boyanmış aktin içeren miyofibriller ile w1118 drosophila'da korunmuş kalp yapılarını gösterdi. Phalloidin boyama, uzunlamasına ve çevresel lifleri etkili bir şekilde vurgulayarak, donma ve kesit gerilmelerine rağmen korunmuş aktin filament yapısını gösterdi. Lipid nokta boyaması, kalp tüpünün yakınında lokalize yağ depolanmasını ortaya çıkardı.

novel-efficient-method-for-drosophila-heart-fluorescence-staining

Research

JoVE Journal

Genetics

Genetik

Burada larva ve yetişkin kalp tüplerin farklı unsurları floresan etiketlenmesi için temel bir protokol...

VE Floresan Etiketleme Drosophila Kalp Yapıları

Biz fiksasyon, gömme, kesit, bir süreç tarif etmek, ve geç dönem...

Elektron Mikroskobu için embriyo Hazırlık Drosophila Embriyonik kalp tüpü

Biz belirli genotipler Drosophila embriyolar "fileto" hazırlıkları üretmek için akıcı bir protokol açıklar. Bu protokol, genetik ekranlardan çeşitli verimli bir şekilde yürütülmesini sağlar. Aynı zamanda geç embriyo yapıları mükemmel görselleştirme sağlar.

VE Canlı Diseksiyon Drosophila Embriyolar: Aerodinamik Antikor Boyama Mutant Koleksiyonlar Eleme Yöntemleri

Kas hasarı altta yatan mekanizmaların belirlenmesi çok önemlidir. Burada parafine gömülü ve Drosophila torasik kasları bölümleri dondurulmuş hazırlamak için histolojik teknik sunuyoruz. Bu kas morfoloji ve protein ve diğer kas hücre bileşenleri lokalizasyonu analizi sağlar.

Parafin ve Dondurulmuş Bölüm Drosophila Yetişkin Kaslar

Tüm Dağı RNA Floresan<em&gt; In situ</emVe&gt; Hibridizasyon<em&gt; Drosophila</em&gt; Embriyolar

İmmün boyama, dokulardaki belirli hücre tiplerini ve proteinleri görselleştirmek için etkili bir tekniktir. Sonikasyonu kullanarak, burada açıklanan protokol, immünostainingden önce Drosophila melanogaster dokularını geç evre embriyolardan ve larvalardan ayırma ihtiyacını hafifletir. Formaldehitle sabitlenmiş bütün mount larvalarının immün boyaması için etkili bir metodoloji sunuyoruz.

Geç evre embriyonik ve larva soniklenmesi-kolaylaştırdı Immunoflorasan Boyama<em&gt; Drosophila</em&gt; Dokular<em&gt; Yerinde</em

Bozulmamış embriyonik ve doğum sonrası kalplerin derinliklerindeki floresan protein etiketli hücreleri hacimsel olarak görüntülemek için bir protokol tanımlıyoruz. Tüm montaj boyama ile birlikte doku temizleme yöntemlerini kullanarak, embriyonik veya doğum sonrası bir kalbin içindeki tek floresan protein etiketli hücreler net ve doğru bir şekilde görüntülenebilir.

Görüntüleme Tek hücreli Çözünürlük embriyonik ve Postnatal Kalpleri Temizlendi

Protein toplama ve merkezi sinir sistemi Drosophila modellerinin autophagic akı floresan-görüntüleme tabanlı cep biyolojik çalışmalar nicel veri ayıklamak için bir basit ve uyarlanabilir iş akışı geliştirdiğimiz ateş.

Ateş Drosophila ImageJ kullanarak Fluorescently Tagged proteinlerin tarafsız analizi ile yılında niceliksel hücre biyolojisi

Burada, Drosophila embriyo proteini ve RNA'nın toplanmasından ön gömülmesine ve gömülmesine, immünoboyamaya ve mRNA in situ hibridizasyonuna kadar tespiti ve lokalizasyonu için bir protokol tarif ediyoruz.

Erken Drosophila Embriyosunda İmmünohistokimya ve RNA In-situ Dağılımı için Bir Protokol

Genişleme Destekli Yinelemeli Floresan In Situ Hibridizasyon (EASI-FISH), kalın dokuda birden fazla genin ekspresyonunu tespit etmek için genleşme mikroskobunu floresan in situ hibridizasyon (FISH) ile birleştiren sağlam bir tekniktir. Bu protokol, yöntemdeki son gelişmeleri ve bozulmamış Drosophila merkezi sinir sistemini etiketlemek için adaptasyonunu özetlemektedir.

Genişleme Destekli Yinelemeli Floresan In Situ Hibridizasyon Kullanılarak Sağlam Drosophila Beyindeki Gen Ekspresyonunun Multipleks Tespiti

Bu çalışma, dekapitasyon, fiksasyon, kriyoseksiyon, floresan boyama, immün boyama ve görüntülemeyi içeren, konfokal ve multifoton görüntülemeye genişletilebilen basitleştirilmiş bir doku işleme protokolü sunmaktadır. Yöntem, gelişmiş motor becerilere olan ihtiyacı atlayarak karmaşık diseksiyonlarla karşılaştırılabilir etkinliği korur. Kantitatif görüntü analizi, kapsamlı bir araştırma potansiyeli sağlar.

Gelişmiş beyin floresan boyaması ve immün boyama için Drosophila kafalarının doğrudan kriyoseksiyonu

Keşfedin kriyoseksiyon ve floresan boyama yöntemleriyle Drosophila kalp yapısını yüksek çözünürlüklü görüntüleme tekniklerini kullanarak. Bu protokol karmaşık diseksiyon ihtiyacını ortadan kaldırarak kardiyak protein belirteçlerinin daha iyi görselleştirilmesini sağlar.

Kriyoseksiyon ile Drosophila Kalp Floresan Boyama için Yeni ve Etkili Yöntem

Daha fazla video keşfet