Name: Amiloid Beta 1-40 Kaplı Altın Kolloidlerin pHa Bağlı Tersinir Kendi Kendine Montajının Karakterizasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-21T14:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Keşfedin, altın nanopartiküller üzerindeki amiloid beta 1-40'ın pH'a bağlı tersinir kendi kendine montajını SERS ve UV-Vis spektroskopisi ile. Bu yöntem, protein katlanma dinamiklerini ve Alzheimer araştırmaları için kritik oligomer oluşumunu aydınlatır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Aβ 1-40 kaplı altın nanopartiküllerin hazırlanması
<ol>
	<li>Bir şırınga iğnesi kullanarak 1 mg liyofilize Aβ 1-40'a (MW: 4.2 kDa,% 98 HPLC saflığı) 1 mL hacimde damıtılmış deiyonize su ekleyin. Çözeltiyi yaklaşık 30 saniye boyunca bir vorteks karıştırıcı ile karıştırın ve oda sıcaklığında (RT; ~ 20 ° C) çözelti içinde katı parçacık gözlenmediğinden emin olun.<ol>
		<li>Deiyonize ve damıtılmış su (~ 18 MΩ · cm) kullanarak tüm stok çözeltilerini hazırlayın.</li>
		<li>1390 cm'nin 275'ε moleküler sönme katsayısına sahip olan 275 nm32'de tirozin absorpsiyonunu kullanarak konsantrasyonu spektroskopik olarak tanımlayın-1· M-1 olarak adlandırılır.</li>
		<li>Aβ 1-40 stok çözeltilerini -80 °C'de saklayın. (Aβ 1-40 ticari ürünleri için Malzeme Tablosuna bakınız.)</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Veri toplamadan yaklaşık 5 dakika önce peptit stok çözeltisini çözün. 15 mL'lik bir santrifüj tüpünde 8 μL'lik bir peptit çözeltisi hacmini 800 μL altın kolloidal parçacıklarla karıştırın. 4.2 mL hacimce deiyonize damıtılmış su ekleyin ve ardından numuneyi 10 s30,31,33,34 için girdaplayın.</li>
	<li>Aβ 1-40 peptitlerin konsantrasyonunu 1.8 nmol olacak şekilde sabitleyin ve Aβ 1-40 peptitlerin oranını ayarlayın. Altın kolloidlerin sayısı ~ 500: 1 ile ~2000: 1 25 arasında değişmektedir.</li>
</ol>
2. Yinelemeli pH değişimi ve karşılık gelen SPR bant kaymasının izlenmesi
<ol>
	<li>Ultraviyole-görünür-yakın kızılötesi (UV-Vis-NIR) spektrofotometresinin sıcaklık kontrol ünitesini kullanarak çözelti sıcaklığını belirlenen bir değere (örn. 25 °C) ayarlayın.</li>
	<li>Bir pH metre kullanarak numune çözeltisinin ilk pH'ını izleyin ve pH 7'nin biraz altına ayarlayın. Absorpsiyon spektrumunu 400 nm ile 1000 nm arasında toplayın.</li>
	<li>10 μL'lik hacimlerde 0,1 M HCl ekleyerek numunenin pH'ını ~pH 4'e (yani pH 4,0 ± 0,3) değiştirin ve 400 nm ile 1000 nm arasındaki absorpsiyon spektrumunu toplayın.</li>
	<li>10 μL hacimlerde 0,1 M NaOH ekleyerek numunenin pH'ını ~pH 10'a (yani pH 10 ± 0,3) değiştirin ve 400 nm ile 1000 nm arasındaki absorpsiyon spektrumunu toplayın.</li>
	<li>pH 4 ile pH 10 arasındaki pH'ı HCl ve NaOH ile 10 kez değiştirin ve absorpsiyon spektrumunu sürekli olarak 25 ± 0.2 °C'detoplayın 29,30. NOT: Tüm numune çözeltileri için, SPR bandının tepe noktasının optik yoğunluğu 0.2 civarında tutulmuştur. Bir çözeltideki artık tampon çözeltisinden dolayı bir tampon etkisi beklenir. Böylece, denge onaylandıktan sonra nihai pH değeri belirlendi. pH değeri, ±0.005 pH hassasiyete sahip bir mikro pH elektrodu kullanılarak bir numune küvet hücresinde doğrudan ölçülmüştür.</li>
	<li>Soğuruculuğun bir fonksiyonu olarak bilgi değişimi (ASCII) dalga boyları veri seti için Amerikan standart kodunu elde edin. Peak Fit programını kullanarak bant tepe noktalarının ortalama konumunu çıkarın.<ol>
		<li>Çizim işlevini kullanarak optik yoğunluğu dalga boyunun (nm) bir fonksiyonu olarak görüntülemek için veri kümesini çizin.</li>
		<li>İlk tepe dalga boylarını λ1, λ2 ve λ3 çizilen verilerdeki yaklaşık konumlarını seçerek işaretleyin ve RUN işlevini kullanarak verileri sığdırın.</li>
		<li>Her bir bandın alanı (Ai) ile her birinin (λi), XCi'nin merkezi zirvesini içeren grafiği elde edin.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Çıkarılan tepe konumlarını ve alanlarını bir elektronik tablo programına aktarın ve belirli bir pH'ta ortalama tepe konumunu hesaplayın.<ol>
		<li>Bandın alanını (Ai) tüm bantların toplam alanıyla karşılaştırarak her bir tepe merkezi λi'nin ağırlık faktörü a i'yi şu şekilde belirleyin: . <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq01.jpg" style="margin: auto;"></li>
		<li>Denklem (1) kullanarak ortalama tepe konumunu <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;"> (pH) çıkarın. 
		<img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq03.jpg" style="margin: auto;">(1)</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Aşağıdaki işlemi kullanarak bir tersinirlik grafiği oluşturun:<ol>
		<li>Ortalama tepe konumlarını tablo haline getirin, <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;">, her bir "işlem" sayısının bir fonksiyonu olarak, n olarak <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;"> vs. n. ~pH 7'de asit ilavesinden önce numune için işlem numarasını, n'yi 1 yapın. İşlem sayısını her seferinde 1 artırın, pH'ı HCl ile ~pH4 veya NaOH ile pH'ı ~pH 10 olacak şekilde değiştirin. n'yi asidik bir durumda (yani, ~pH 4) eşit ve bazik bir durumda (yani, pH 10) tek yapın.</li>
		<li>30 formülünü kullanarak her n, <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;"> (n) = λ(n)'deki tepe konumunu analiz edin 
		<img alt="Equation 4" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq04.jpg" style="margin: auto;">(2) NOT: A ile n = 1'de bir başlangıç ortalama tepe konumunu temsil edin. B ve C parametrelerini n'ye bağlı tepe konum kayması olarak ifade edin. D parametresini tekrarlama sönümleme faktörü E'nin bir genliği olarak yapın. Tepe konumunun dalgalanmasını n'nin bir fonksiyonu olarak göstermek için sinüs fonksiyonunu kullanın.</li>
		<li>(x, y) veri setini Origin yazılımına aktarın ve çizin.</li>
		<li>Analizin Doğrusal Olmayan Eğri Uydurma Fonksiyonu altında Denklem (2)'de verilen Özelleştirilmiş fonksiyonu oluşturun. İlk A, B, C, D ve E değerlerini yazın ve sığdırmayı tamamlamak için ÇALIŞTIR'a tıklayın.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>TEM görüntüleme<ol>
		<li>Formvar kaplı bakır ızgaralı Aβ 1-40 kaplı 20 nm altın kolloidlerin TEM örneklerini yapın. Numuneleri 80 kV'da çalıştırılan bir TEM ile inceleyin.</li>
		<li>XR-40 model 4 megapiksel CCD dijital kamerada (AMT) 28.000x veya 71.000x nominal büyütmede görüntüler toplayın. N =1 (~pH 7), n = 2, 4, 6, 8 ve 10 (pH 4) ve n = 3, 5, 7 ve 9 (pH 10) işlem numaralarında Aβ 1-40 kaplamalı 20 nm altın için TEM görüntülerini toplayın.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Raman görüntüleme ve tersinir toplamanın araştırılması
<ol>
	<li>100 μL çözeltiyi bir mika diske (1 cm çapında) n numaralı işlemde her numune için yerleştirin. Ölçümden önce numuneleri gece boyunca kurutun.</li>
	<li>Her işlem numarası n'de beyaz ışık görüntüleri toplayın. Her n numaralı işlem için pH sürekli olarak ~pH 4 ile ~pH 10 arasında değiştirildiği için ayrı numuneyi bir mika disk üzerinde hazırlayın (Şekil 3).</li>
	<li>~200 cm-1 ile ~2.800 cm-1 arasındaki bölge için 500 ms/spektrum süresine sahip 100 ms/spektrumdan oluşan bir ızgarada 100 ×± 0,05 mW güçte ~0,43 μm uzamsal çözünürlüğe sahip 0,5 μm güçte λ = 633 nm dalga boyuna sahip bir lazerle her n işlem numarasında Raman görüntüsünü toplayın (Şekil 4).</li>
	<li>n'nin bir fonksiyonu olarak hizalanmış her n için temsili spektrumu çizin ve üç boyutlu SERS spektrumunu Aβ1-40 kaplı 20 nm altın için n'nin bir fonksiyonu olarak oluşturun (Şekil 5A). Belirli bir pH koşulu (yani, ~pH 4 ve ~pH 10) ile ilişkili spesifik modları çıkarmak için üç boyutlu SERS spektrumunun üstten görünümünü bir kontur haritası (Şekil 5B) olarak kullanın. Yalnızca nçift veya yalnızca ntek için geliştirilmiş herhangi bir spektral özelliği çıkarın.</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Amiloid beta peptit 1-40 (A ve beta; 1&ndash; 40</alt> peptit)</td><td>r-Peptid (Bogart, GA, ABD)</td><td>A-1156-2</td><td></td></tr><tr><td>CCD dijital kamera</td><td>AMT</td><td>XR-40 4 megapiksel CCD&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q- su sisteminden damıtılmış deiyonize su</td><td>Millipore Sigma (Burlington, MA, ABD)</td><td>Milli-Q IQ 7000</td><td></td></tr><tr><td>Dondurucu -86 oC</td><td>Thermo Scientific</td><td>Revco Chilly Willy&nbsp; RLE Serisi Birim Kimliği 187004 Yapı Numarası 40.04</td><td></td></tr><tr><td>Altın Kolloid (10 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, Kaliforniya, ABD)</td><td>15703-20</td><td></td></tr><tr><td>Altın Kolloid (100 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, Kaliforniya, ABD)</td><td>15711-22</td><td></td></tr><tr><td>Altın Kolloid (15 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, Kaliforniya, ABD)</td><td>15704-20</td><td></td></tr><tr><td>Altın Kolloid (20 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, Kaliforniya, ABD)</td><td>15705-20</td><td></td></tr><tr><td>Altın Kolloid (30 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, Kaliforniya, ABD)</td><td>15706-21</td><td></td></tr><tr><td>Altın Kolloid (40 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, Kaliforniya, ABD)</td><td>15707-21</td><td></td></tr><tr><td>Altın Kolloid (50 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, Kaliforniya, ABD)</td><td>15708-21</td><td></td></tr><tr><td>Altın Kolloid (60 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, Kaliforniya, ABD)</td><td>15709-22</td><td></td></tr><tr><td>Altın Kolloid (80 nm)</td><td>Ted Pella, Inc. (Redding, California, ABD)</td><td>15710-22</td><td></td></tr><tr><td>En Yüksek Sınıf V1AFM Mika Diskler 10 mm</td><td>Ted Pella Inc.</td><td># 50</td><td></td></tr><tr><td>Hidroklorik Asit Standart Çözelti, 1.0 N</td><td>Fluka</td><td>Lot# SHBB4705V&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 318949-2L</td><td></td></tr><tr><td>Makro kuvars quvette Işık Yolu 10 mm</td><td>Ateş Böceği Bilimi&nbsp;</td><td>Type1-MC-Path10mm</td><td></td></tr><tr><td>Mikro pH elektrodu</td><td>HORIBA</td><td>Model 9618S (MFG No. 9Y8E0050)</td><td></td></tr><tr><td>Peak Fit Programı</td><td>Origin (Northampton, MA, ABD)</td><td>OriginPro2018b (64 bit) b9.5.5.409 (Akademik)</td><td></td></tr><tr><td>pH 4.00 Tampon çözeltisi&nbsp;</td><td>VWR</td><td>Cat No. 34170-127</td><td></td></tr><tr><td>pH 7.00 Tampon Çözeltisi&nbsp;</td><td>Fisher Chemical</td><td>SB107-4 Lot 191041</td><td></td></tr><tr><td>pH metre</td><td>HORIBA</td><td>Model F-72G (MFG No. B27M0017)</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Uçları &nbsp; Maxi İpuçları 1&ndash; 5 mL</td><td>Fisher&nbsp; &nbsp;</td><td>02-707-467</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Uçları 10 mL</td><td>Fisher</td><td>02-717-135</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Uçları 1000 mL</td><td>Fisher</td><td>02-717-156</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Uçları 1&ndash; 200 mL</td><td>Fisher</td><td>02-717-143</td><td></td></tr><tr><td>Pipetleyici Fisher Marka Elit 0.5&ndash; 5 mL</td><td>Fisher</td><td>QU05317</td><td></td></tr><tr><td>Pipetleyici Fisher Marka Elite 100&ndash; 1000 mL</td><td>Fisher</td><td>QU01672</td><td></td></tr><tr><td>Pipetleyici Fisher Marka Elite 10&ndash; 100 mL</td><td>Fisher</td><td>MU10985</td><td></td></tr><tr><td>Pipetleyici Fisher Marka Elite 1&ndash; 10 mL</td><td>Fisher</td><td>MU08178</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Hidroksit Çözeltisi 1.0 M</td><td>Fluka</td><td>Lot # 05096BPV&nbsp; &nbsp; 319511-2L</td><td></td></tr><tr><td>TEM</td><td>FEI Co</td><td>Morgagni model 268&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>TempAssure PCR Tüpleri, Düz Kapaklar, Doğal&nbsp;</td><td>ABD Bilimsel</td><td></td><td>polipropilen. 0,2 mL ayrı ince duvarlı tüpler, takılı buzlu düz kapaklar</td></tr><tr><td>UV-Vis-NIR Spektrofotometre</td><td>Varian</td><td>CARY 5000 UV1106M074</td><td></td></tr><tr><td>WI Tec alpha300R Konfokal Raman Mikroskobu</td><td>WITec-Oxford Instrument</td><td>XMB3000-3001</td><td></td></tr></tbody></table>

amiloid beta 1-40 kaplı altın kolloidlerin ph'a bağlı tersinir kendi kendine montajının karakterizasyonu

Characterization of pH-Dependent Reversible Self-Assembly of Amyloid Beta 1-40-Coated Gold Colloids

Aβ 1-40'ın altın nano-kolloidal parçacıklar yüzeyine bağlanmasıyla, 530 nm absorpsiyon maksimumu etrafındaki SPR bandı, çözelti daha asidik hale getirildiğinde (pH 4) ~ 650 nm tepe konumuna önemli ölçüde kırmızıya kaymıştır.35. TEM görüntüleri ile birlikte, pH 4'te gözlemlenen spektroskopik özelliklerin, makul bir şekilde katlanmamış konformasyona sahip altın kolloid agregalarının oluşumuna karşılık geldiğini ve altın yüzey30 üzerinde adsorbe edilen çevredeki katlanmamış Aβ 1-40 monomerleri ile ağ oluşturduğunu belirledik. Aβ 1-40 monomerlerinin, bazik (pH 10) koşullar altında katlanmış konformasyona geri döndüğünü ve bunun da agregaların yarı tersinir bir şekilde deformasyonuna neden olduğunu gözlemledik. Bu yarı-tersinir süreç, daha kısa ve daha uzun bir dalga boyu arasında değişen ortalama bant tepesinin (<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;">(n)) değişiminden ve TEM görüntülerinde bazik (pH = 10) ve asidik (pH = 4) koşullar arasındaki dağınık ve agrega morfolojisinden belirgindi. Daha önce, Aβ 1-40 monomerinin bir kısmının, çözelti temel koşullara36 geri döndürüldükten sonra bile açılmamış kaldığı gözlemlenmişti. Video 1, Aβ 1-40 ve 20 nm çıplak altın kolloidin pH'a bağlı renk değişimini göstermektedir.
Bir karşılaştırma olarak, 20 nm çıplak altın kolloidin pH hop araştırması yapıldı (Şekil 5C ve D). PH değiştirme işlemi ilerledikçe, SPR bant shoft, TEM görüntüleri ve beyaz ışık görüntülerinde altın kolloidlerin kümelenmesinin büyümesini gösterdi. Oldukça ilginç bir şekilde, n tek ve nçifte bağlı olarak birkaç SERS spektral çizgisi vardı. Örneğin, nçiftinde (pH ~ 4), Aun (n = 5, 6, 12, 16, 20, 58)37 veya Au-Clligand38 modu ile ilişkili mod olarak atanan 275 cm-1'deki çizgi yoğun bir şekilde gözlendi. Öte yandan, n içinbile, 1008 cm'de 1-1 C-N str39 ve CH2 wag39, CH2 deformasyonu40, 1291 cm-1'de yoğun olarak gözlendi.
Beyaz ışık görüntüleme ile gözlemlenen net pH'a bağlı ve tersinir toplama morfolojisinin aksine, SERS spektrumundaki spektral özelliklerde ntek ve nçift arasında nispeten ince farklılıklar vardı. İlk yaklaşım olarak, 250 cm-1 ile 1750 cm-1 arasındaki bölgedeki spektral çizgi yoğunluğu, n tek için nçiftten daha yüksekti. Parmak izi bölgesindeki spektral çizgiler, 1250 cm-1 ve 1750 cm-1 (Amid I, II ve III bantları) ntuhaf için, daha az çözülmüş spektral özellikler gösterdi, bu da spektral yoğunluklarda bir genişleme veya artış anlamına geliyordu. Şekil 6'da, Şekil 5B'de (Şekil 6B) verilen bir izohips haritası, sırasıyla n tek ve nçiftteki vurguları temsil eden 761 cm-1 (kırmızı) ve 1395 cm-1 (mavi) SERS sinyalleri ile düzenlenmiştir (Şekil 6C). ntek ve nçift için temsili bir SERS spektrumu olarak, n = 7 (kırmızı) ve n = 4 (mavi) SERS spektrumu üstte gösterilmiştir (Şekil 6A). Aβ1-40 kaplamalı 20 nm altın için SPR bant kaymasına karşılık gelen değeri göstermek için Şekil 3'teki bant kayması grafiği yanda gösterilmiştir (Şekil 6D).
Gözlemlenen SERS spektrumunun tam ataması hakkında ön verilere sahip olsak da, burada birkaç dikkate değer Raman kayması özelliğine dikkat çekiyoruz. Nodd'da geliştirilmiş spektral çizgiler ve (makul atamalar) esas olarak 1000 cm-1'den daha düşük bölgededir: 394 cm-1 (Trp)41,42,43, 761 cm-1 (His, Ala)39,44,45,46,47, 875 cm-1 (indol NH yer değiştirmesi, Met'in CC gerilmesi)39, 974 cm-1 (Glu, C-COO- Asp'nin gerilmesi, sitrat ile ilişkili mod)39,48,49. N'de artan Raman kayması, parmak izi bölgesinde (Amid I, II ve III) önemli spektroskopik özellikler gösterdi: 1166 cm-1 (N-H+ Tyr deformasyonu)39,41, 1227 cm-1 (Ala-Pro-Gly, Amid III)39,50,51, 1395 cm-1 (COO- simetrik germe veya CH2- CH3- Glu'nun makaslanması)39,48, 1585 cm-1 (Phe'nin halka CC gerilmesi, karboksilat -Au'nun asimetrik gerilmesi, COO- sitratın gerilmesi, benzen halkasının deformasyonu)39,41,45,46,47,49,52, 1592 cm-1 (Phe, Tyr, Tyr'ın C=C gerilmesi, Phe'de halkanın CC gerilmesi, benzen halkasının gerilmesi ve COO- Phe ve Tyr'de gerilme ve OH'nin asimetrik gerilmesi)39,41,48,50,51 ve 1628 cm-1 (Moleküller arası β-tabaka yapıları için ayırt edici olan amid I alt tepe noktası 53, C=O ve paralel β-levha tipi yapılardan kaynaklanan protein omurgasının birleştirilmiş CN/NH titreşim modları, agrega Aβ54 birikimi, rastgele bobinler, β dönüşler, β saç tokaları48. ntek veya nçift için görünen diziler Şekil 7'de gösterilmiştir. Genel olarak, Aβ 1-40'ın tersinir agregasyonuna veya katlanmamış konformasyonuna karşılık gelen n için,benzen halkası içeren Phe/Tyr, COO-'nun simetrik gerilmesi, Glu'nun CH2- CH3- makaslama modu ve Tyr'nin -NH+ deformasyonu, peptitin konformasyonel değişiminde önemli ölçüde rol oynamıştır. Peptitler, nodd'da öne çıkan modlara karşılık gelen katlanmış konformasyonu benimsediğinde gözlemlenen agregasyonun sökülmesi sırasında, Glu, Asp, Met, His ve Ala'nın dahil olduğu ortaya çıktı.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig01.jpg"> 
Şekil 1: pH'a bağlı absorbans ve morfoloji. Aβ 1-40 kaplamalı altın nanopartiküller (20 nm) için pH 4 (A) ve pH10 (B)'deki absorpsiyon spektrumu ve karşılık gelen TEM görüntüleri, agregasyon/dağılmış partiküllerin eskizleri ve şişelerdeki çözeltilerin resimleri gösterilmektedir. A, asidik koşullar altında Aβ 1-40 monomerlerinin katlanmamış konformasyonudur ve B, bazik koşullar altında katlanmış konformasyondur. Her konformasyon ve agregasyon/dağılma morfolojilerindeki Aβ 1-40 monomerlerinin diyagramları TEM görüntülerinin yanında gösterilmiştir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig02.jpg"> 
Şekil 2: Nano boyuta bağlı kendi kendine montaj tersinirliği. Test edilen tüm altın kolloid parçacık boyutları için işlem numarasının bir fonksiyonu olarak SPR bandının <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;">ortalama tepe konumunun kayması, n. Şekil 1'de gösterilen agregaların yaklaşık pH değerleri ve karşılık gelen aşaması da verilmiştir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig03v2.jpg"> 
Şekil 3: <img alt="Equation 5" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq05.jpg" style="margin: auto;"> ve her işlem numarasında TEM/beyaz ışık görüntüleri. İşlem <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/67856/67856eq02.jpg" style="margin: auto;"> numarasının bir fonksiyonu olarak, n, Aβ 1-40 kaplı 20 nm altın (kapalı daireler) ve 20 nm altın kolloid (açık daireler) için birlikte çizildi ve temsili TEM (A ve C)/beyaz ışık görüntüleri (B ve D) ile gösterilir Aβ 1-40 kaplı 20 nm altın (A ve B) ve 20 nm altın kolloid (C için) seçilen işlem numaralarında (n = 1, 2, 3, 7 ve 8 kodu çözülmüş oklarla işaretlenmiştir) ve D). Siyah yazı tipi pH 7'yi, mavi yazı tipi pH 4'ü ve kırmızı yazı tipi pH 10'u gösterir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig04.jpg"> 
Şekil 4: Temsili beyaz ışık ve Raman görüntüsü. (A) n = 2 ve (B) n = 3 için beyaz ışık görüntüsü, Raman görüntüsü ve SERS spektrumu; i) geniş bir görüş alanında beyaz ışık görüntüsü, ii) Raman görüntüsünün toplandığı alandaki beyaz ışık görüntüsü (i'de kırmızı bir kare ile etiketlenmiştir), iii) iki bileşenin birleştirildiği Raman görüntüsü, iv) bileşen 1'in Raman görüntüsü ve v) SERS spektrumu iv), vi) Bileşen 2'nin Raman görüntüsü, ve vii) SERS spektrumu vi). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig05.jpg"> 
Şekil 5: ntek, nçift ve ntümü için SERS Spektrumunun kontur haritası. (A) Aβ1-40 için n'nin bir fonksiyonu olarak 250 cm-1 ve 1750 cm-1 bölgesindeki SERS spektrumunun üç boyutlu haritası, üstte (B)'de gösterilen bir kontur haritası ile kaplanmış 20 nm altın. (C) 250 cm-1 ve 1750 cm-1 bölgesindeki SERS spektrumunun üç boyutlu haritası, üstte (D) ile gösterilen bir kontur haritası ile 20 nm altın için n'nin bir fonksiyonu olarak. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig05large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig06v2.jpg"> 
Şekil 6: SERS Spektrumunun izohips haritası. n'nin (1-10) bir fonksiyonu olarak SERS spektrumunun kontur haritası. (A) 1395 cm-1 (mavi) ve 761 cm-1 (kırmızı) emicilik. (B-D) Alt panel SERS spektrumunu gösterir ve sağ panel her n'de SERS sinyallerinin sinyal yoğunluğu değişiminin genliğini gösterir. Bu <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig06largev2.jpg" target="_blank">rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67856/67856fig07v3.jpg"> 
Şekil 7: Aβ1-40'ın kayda değer dizileri. Ntekte (katlanmış konformasyon oluşumuna karşılık gelen) önemli katılıma sahip olmak üzere atanan diziler aşağı doğru kırmızı oklarla gösterilir ve nçiftte önemli katılıma sahip olmak üzere atananlar (katlanmamış konformasyonun oluşumuna karşılık gelir) mavi oklarla gösterilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/67856fig07largev3.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Video 1: Aβ1-40 ve 20 nm çıplak altın kolloidin pH'a bağlı renk değişimi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67856/Movie%20Abeta-Gold%20Color%20Change.wmv" target="_blank">Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Amiloid Beta 1-40 Kaplı Altın Kolloidlerin pH'a Bağlı Tersinir Kendi Kendine Montajının Karakterizasyonu

The characterization of A&#946;1-40 coated over the nano-gold colloidal particle surfaces was conducted using surface plasmon resonance (SPR) spectroscopy ...

characterization-ph-dependent-reversible-self-assembly-amyloid-beta-1

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Foto-bağlı çapraz bağlama değiştirilmemiş proteinleri (PICUP) metastabil protein karışımları oligomer boyutu dağılımı karakterizasyonu sağlar. Biz üç temsilci amiloidojenik peptidler 40 PICUP uygulama göstermektedir - ve 42-amiloid β-protein ve kalsitonin kalıntı formları ve kontrol peptid büyüme hormonu salgılatıcı faktör.

Fotoğraf Bağlı Çapraz Bağlanma Değiştirilmemiş Proteinler (PICUP) amiloidojenik Peptitler Uygulanan

Amiloid beta-Protein, Alzheimer hastalığının etkeni Aptamers Seçimi

APP hücre içi etki alanı (AICD) büyük ölçekli arıtma için bir yöntem tarif edilmektedir. Ayrıca teşvik etmek için yöntemler...

Amiloid prekürsör protein intrasellüler Domain saflaştırılması ve toplama

Proteinler ya doğal bir yapıyı benimseyebilir ya da çözünmeyen amiloid'e yanlış katlanabilir. Yanlış katlanma yolunu destekleyen koşullar, farklı tipte amiloid fibrillerin oluşumuna yol açar. Burada açıklanan yöntemler, doğal proteinlerin in vitro olarak amiloid'e hızlı bir şekilde dönüştürülmesine izin verir.

İn vitro Yerli Proteinlerden Hızlı Amiloid Üretimi

Bu yazıda oligomer oluşturabilen yüksek saflıkta amiloid beta 42 (Aβ42) ve amiloid beta 40 (Aβ40) peptidler, veren bir özel HPLC arıtma protokolü sunduk. Amiloid P Alzheimer hastalığında rol yüksek çekiş eğilimli hidrofobik peptittir. peptid amiloidojenik doğası onun saflaştırma bir meydan okuma yapar.

Bir Ismarlama HPLC Arıtma Protokolü That Oligomer Formasyonu Yetenekli Verim Yüksek saflıkta Amiloid Beta 42 ve Amiloid Beta 40 peptidler,

Bu iletişim kuralı bir sentetik peptid vitro üzerinden Aβ reaksiyonlar hazırlamak için ve göreli Aβ oligomer miktarda analiz kurutma bir nokta tarafından değerlendirmek için açıklar.

A11-pozitif β-amiloid Oligomer hazırlama ve değerlendirme sistemini kullanarak Dot Blot Analizi

1,2-dithiolane sentezi için bir protokol peptid ve peptid kendinden montajlı kaynaklanan supramolecular yapıları karakterizasyonu değiştiren.

1,2-Dithiolane malzemelerin ve kendi kendine montaj peptidler değiştirilme tarihi

Burada sunulan tek tek veya birlikte fibrin pıhtısı yapısı üzerinde beta-amiloid etkisini analiz için kullanılan iki yöntem vardır. Vitro fibrin pıhtısı oluşturma takip için pıhtı bulanıklık ve Tarama elektron mikroskobu ile yöntemleri dahil bir protokoldür.

β-amiloid-indüklenen anormallikler Fibrin pıhtısı yapısına spektroskopisi ve elektron mikroskobu tarama Analizi

Kütle spektrometrisine dayalı proteomik analiz ile bu biyokimyasal saflaştırma yöntemi, Alzheimer hastalığını önleme hedeflerinin belirlenmesini hızlandırabilecek amiloid fibril çekirdeklerinin sağlam karakterizasyonunu kolaylaştırır.

Beyinden Amiloid Fibril Çekirdeklerinin Biyokimyasal Saflaştırılması ve Proteomik Karakterizasyonu

Amiloid fibriller çok sayıda proteinden oluşur ve ortaya çıkan fibriller "çapraz β tabaka" yapısını paylaşır. Burada, amiloid fibril örneklerin X-ışını lifi kırınımı için nasıl hazırlanabileceğini ve desenlerin nasıl analiz edilebileceğini açıklıyoruz.

Amiloid ve Çapraz Beta Mimarisi

Keşfedin, altın nanopartiküller üzerindeki amiloid beta 1-40'ın pH'a bağlı tersinir kendi kendine montajını SERS ve UV-Vis spektroskopisi ile. Bu yöntem, protein katlanma dinamiklerini ve Alzheimer araştırmaları için kritik oligomer oluşumunu aydınlatır.

Amiloid Beta 1-40 Kaplı Altın Kolloidlerin pH'a Bağlı Tersinir Kendi Kendine Montajının Karakterizasyonu

Daha fazla video keşfet