Karasal Amfibilerin Derisinden Bakteri Suşlarının İzolasyonu ve Tanımlanması

Bu araştırma, vahşi karasal amfibilerden deri mikrobiyotasının toplanması için etkili bir protokol geliştirmeyi ve depolama ve taşıma sırasında mikrobiyal bütünlüğü sağlamayı amaçlamıştır.

Temel zorluklar arasında numune kontaminasyonunun önlenmesi, depolama sırasında mikrobiyal canlılığın korunması ve amfibi cilt mikrobiyota çeşitliliğinin tam olarak değerlendirilmesi için yavaş büyümenin kültürlenmesi yer alır.

Gliserol ile zenginleştirilmiş salinin, depolama ve taşıma sırasında amfibi cilt mikrobiyota bütünlüğünü koruduğu, tutarlı bakteri kültürü ve ekolojik ve biyoteknolojik araştırmalar için mikrobiyal koruma stratejilerinin iyileştirildiği tespit edilmiştir.

Bu protokol, standartlaştırılmış örnekleme yöntemlerinin eksikliğini giderir, kültürlenebilir amfibi deri bakterilerini korur ve işler ve topluluk bütünlüğünü sağlar.

[Ekran Okuyucusu] Başlamak için, 15 ila 30 dakika boyunca 121 ila 134 santigrat derecede otoklavlayarak ortamı sterilize edin. Otoklavlamadan sonra, agar ortamının yaklaşık 45 ila 50 santigrat dereceye kadar soğumasını bekleyin. Önceden sterilize edilmiş bir laminer akış başlığı altında, soğutulmuş ortamı steril Petri kaplarına dökün. Agar katılaştıktan sonra, Petri kaplarını orta tip ve hazırlama tarihi ile etiketleyin. Tüpü sıkarken swabı tüp duvarlarına doğru iterek ve swabı saat yönünde 10 kez ve saat yönünün tersine 10 kez döndürerek tarladan elde edilen numuneyi solüsyonla karıştırın. İşlemeden önce mikrobiyolojik numuneyi iyice karıştırın. Kutanöz numunenin 10 ila -1 ila 10 ila -6 gücü arasında değişen tuzlu su çözeltisi ile seri seyreltmesini hazırlayın. Seyreltilmemiş numunenin 100 mikrolitresini aşılayın ve hazırlanan agar plakalarına seri seyreltin. Steril L şeklinde bir halka kullanarak, numuneyi agar ortamının yüzeyi boyunca çizgi halinde geçirin ve aşırı basınç uygulamadan eşit dağılım sağlayın. Aşılanmış plakaları ters çevirin ve amfibi derisinde mezofilik ve psikotropik bakterilerin büyümesini desteklemek için üç ila beş gün boyunca 20 ila 25 santigrat dereceye ayarlanmış bir inkübatörün içine yerleştirin. İnkübasyondan sonra, daha fazla analiz için farklı morfolojilere sahip bakteri kolonilerini seçin. Kolonilerin iyi bir şekilde izole edildiğinden ve renk, boyut, şekil, kenar, yüzey veya dokudaki farklılıklar gibi farklı görünümler sergilediğinden emin olun. Seçilen kolonileri alt kültürlemek için, aseptik koşullar altında bir aşılama döngüsü kullanarak iyi izole edilmiş bir koloniyi orijinal agar plakasından taze bir agar plakasına aktarın. Koloniyi izole etmek için çizgilendirin. Ve sonra uygun şekilde inkübe edin. Bir speleomantes italicus bireyinin tarla ortamında steril aletler kullanılarak koordineli örnekleme prosedürü burada gösterilmektedir. Örnekleme, amfibi üzerindeki stresi en aza indirmek ve kullanım sırasında hassasiyeti sağlamak için steril eldivenler ve swablar kullanan iki operatör tarafından gerçekleştirildi. Swab, laboratuvara taşınması sırasında mikrobiyal bütünlüğü korumak için hemen %20 gliserol içeren bir salin solüsyonuna aktarıldı. Gliserol ilavesi ile ve gliserol ilavesi olmadan tuzlu su çözeltisinde tutulan mikrobiyal topluluk yoğunluğunun bir karşılaştırması burada gösterilmiştir. Gliserol içermeyen tuzlu su deposundaki bakteri yükü, kontrol ve gliserollü salinden önemli ölçüde daha düşüktü. Gliserol ile tuzlu suda depolanan mikrobiyal topluluk, kontrole benzer bir bakteri yükü gösterdi ve bu da mikrobiyal bütünlüğün korunduğunu gösterdi. Mikrobiyal topluluğun en iyi korunması, zaman içinde en kararlı bakteri yükünü gösteren dört santigrat derecede depolanan gliserol ile tuzlu suda gözlendi. Oda sıcaklığında tek başına tuzlu suda depolama, mikrobiyal kontaminasyonu veya belirli bakteri gruplarının seçici teşvikini gösteren en yüksek bakteri büyümesine neden oldu. Eksi 20 santigrat derecede donma, bakteri yükünü azalttı, bu da düşük sıcaklıkların mikrobiyal sağkalımı olumsuz etkilediğini düşündürdü.