Davranışsal gözlem için zebra balığı larvalarına uçucu anesteziklerin uygulanması

Araştırmamız, anestezik yan etkilerin mekanizmalarının yanı sıra anestezik mekanizmalara da ilgi duyan anestezik farmakolojiye odaklanmaktadır. Larva zebra balığının anestezik farmakolojiyi incelemek için davranışsal bir model olarak kullanımı hızla genişlemektedir ve büyük ölçekli tarama deneylerinde kullanıma uygunlukları da dahil olmak üzere birçok avantaja sahiptir. Uçucu ve intravenöz anesteziklerin karşılaştırılması zor olmaya devam etmektedir, çünkü uçucu anesteziklerin suda yaşamayan hayvanlara uygulanması intravenöz anesteziklerden çok daha kolaydır.

Aksine, intravenöz anestezikler suda yaşayan hayvanlara uçucu anesteziklerden daha kolay uygulanır. Bu protokol, larva zebra balıklarında davranışsal deneyler yapmak için kapalı bir odada uçucu anesteziklerin uygulanması için nispeten ucuz ve erişilebilir bir yol sağlar. Bu nitelikteki diğer protokoller genellikle, bu tür bir ekipman oluşturma veya edinme imkânı olmayanlar için maliyetli olabilen veya kolayca erişilemeyen bir tür özelleştirilmiş aparat gerektirir.

Başlamak için, temiz ve düz bir yüzeye 0,5 milimetrelik bir silikon levha yerleştirin. Çarşaflarda herhangi bir kırışıklık olup olmadığını kontrol edin ve mümkün olduğunda bunlardan kaçının. Yağ veya kalıntıları temizlemek için çarşafları %70 alkolle temizleyin.

Tabaka tamamen kuruduğunda, silikon tabakaya ince, eşit bir kat yapışkan astar uygulamak için boya fırçası gibi bir aplikatör kullanın. Yapışkan astar uygulandıktan sonra, çift taraflı bandı, kağıt desteği yukarı bakacak şekilde silikon levha ile hizalayın. Yüzeyi düzleştirmek ve hava kabarcıklarını gidermek için bir rulo kullanarak bandı yavaş yavaş silikona uygulayın.

Astarı gerektiği gibi küçük bölümler halinde tekrar uygulayın ve astar bir ila beş saniye içinde kuruyana kadar bant uygulamasına devam edin. Hava kabarcıklarını görselleştirmeye ve gidermeye yardımcı olması için silikon tarafı yukarı bakacak şekilde silikon tabakayı ters çevirin. Ardından, yapışkan silikonu en az 10 milimetre genişliğinde şeritler halinde kesin.

Şeritlerin, kuyu plakasının en azından bir sırasının genişliğini kaplayacak kadar uzun olduğundan emin olun. Uçucu anestezikleri hazırlamak için, bir HPLC veya sintilasyon şişesine bir hacim uçucu olmayan çözücü ekleyin ve uçucu anestezikin son seyreltilmesi eklendikten sonra minimum üst boşluk sağlayın. Uçucu anestezik eklemek için Hamilton gaz geçirmez bir şırınga kullanın ve şişeyi hızlı bir şekilde kapatın.

Şişeleri gerektiği gibi girdap veya sonikasyon ile karıştırın. Zebra balığı tabakları hazırlarken bunları geçici olarak saklayın. Davranışsal deneyi kurmak için, döllenmeden beş gün sonra bir larva zebra balığını 96 oyuklu bir cam plakanın her bir sırasına aktarın.

E-üç çözeltisini her bir kuyucuktan dikkatlice çıkarın. Sıradaki her bir kuyucuğu deneysel çözelti ile doldurmak için bir transfer pipeti kullanın. Yapışkan silikon şeritleri kullanarak, kabarcık oluşumunu ve balıkların bitişik kuyucuklara taşmasını önlemek için şeridi hızlı bir şekilde aşağı doğru bastırın.

Ardından, her bir kuyucuğun sızdırmaz olduğundan emin olmak için plakanın üstüne sıkıca bastırın. Çözelti değiştirilene ve plakanın diğer her sırasındaki tüm kuyucuklar kapatılana kadar mühürleme işlemini tekrarlayın. Plakayı yavaşça ters çevirin ve hava kabarcıkları olup olmadığını kontrol edin.

Plakayı, silikon yapışkan tarafı aşağı bakacak şekilde davranış gözlem ünitesine yerleştirin ve davranış deneyini gerçekleştirin. Mühürlü kuyularda, sevofluran konsantrasyonu üç saat içinde minimum kayıp gösterdi ve izofluran konsantrasyonda% 4'lük bir azalma gösterdi. Her iki anestezik de ilk 30 ila 60 dakika boyunca önemli bir kayıp göstermedi.

Sevofluran için medyan etkili konsantrasyon, spontan hareket için 62 mikromolar ve ortaya çıkan hareket için 126 mikromolar idi ve merdiven daha önce bildirilen 240 mikromolardan önemli ölçüde daha düşüktü, bu da bu yöntemle gaz geçirmez sızdırmazlık oluşturmadaki iyileşmeye bağlı olabilir. Açık ve kapalı kuyular arasında spontan harekette önemli bir fark gözlendi, iki saat işaretinde, muhtemelen kuyudaki oksijenin tükenmesi nedeniyle ortaya çıktı ve bu tekniğin önemli bir sınırlaması.