Name: Bozulmamış Murin Nöral Retinasında Glikoz Analogu, 6-(N-(7-Nitrobenz-2-Oksa-1,3-Diazol-4-il)Amino)-6-Deoksiglukozun Alımının Ölçülmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 4 s
Description: Keşfedin, 6-NBDG floresan glikoz analoğu kullanarak bozulmamış murin nöral retinada glikoz alımını ölçme yöntemini. Bu protokol, yaşlanma ve nörodejeneratif hastalıklarda metabolik değişiklikleri incelemek için hızlı ve uygun maliyetli bir yaklaşım sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Casson, R. J., Chidlow, G., Crowston, J. G., Williams, P. A., Wood, J. P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+energy+metabolism+in+health+and+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal energy metabolism in health and glaucoma.</a> Prog Retin Eye Res. 81, 100881(2021).</li>
<li>Daniele, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+uptake+by+GLUT1+in+photoreceptors+is+essential+for+outer+segment+renewal+and+rod+photoreceptor+survival%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Glucose uptake by GLUT1 in photoreceptors is essential for outer segment renewal and rod photoreceptor survival.</a> FASEB J. 36 (8), e22428(2022).</li>
<li>Fernandes, R., Hosoya, K. -I., Pereira, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+oxygen+species+downregulate+glucose+transport+system+in+retinal+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Reactive oxygen species downregulate glucose transport system in retinal endothelial cells.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 300 (4), C927-C936 (2011).</li>
<li>Badr, G. A., Tang, J., Ismail-Beigi, F., Kern, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+downregulates+GLUT1+expression+in+the+retina+and+its+microvessels+but+not+in+the+cerebral+cortex+or+its+microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Diabetes downregulates GLUT1 expression in the retina and its microvessels but not in the cerebral cortex or its microvessels.</a> Diabetes. 49 (6), 1016-1021 (2000).</li>
<li>Kumagai, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+transport+in+brain+and+retina%3A+implications+in+the+management+and+complications+of+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Metab+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Glucose transport in brain and retina: implications in the management and complications of diabetes.</a> Diabetes Metab Res Rev. 15 (4), 261-273 (1999).</li>
<li>Winkler, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GLUT1+reductions+exacerbate+Alzheimer%27s+disease+vasculo-neuronal+dysfunction+and+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">GLUT1 reductions exacerbate Alzheimer's disease vasculo-neuronal dysfunction and degeneration.</a> Nat Neurosci. 18 (4), 521-530 (2015).</li>
<li>Mosconi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypometabolism+exceeds+atrophy+in+presymptomatic+early-onset+familial+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Hypometabolism exceeds atrophy in presymptomatic early-onset familial Alzheimer's disease.</a> J Nucl Med. 47 (11), 1778-1786 (2006).</li>
<li>Moreno, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+morphometric+changes+in+rat+optic+nerve+microvessels+in+a+glaucoma+experimental+model%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Soc+Esp+Oftalmol%22%5BJournal%5D)">Morphological and morphometric changes in rat optic nerve microvessels in a glaucoma experimental model.</a> Arch Soc Esp Oftalmol. 89 (12), 471-476 (2014).</li>
<li>Barros, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+validation+of+6-NBDG+as+a+probe+for+the+glucose+transporter+GLUT1+in+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Kinetic validation of 6-NBDG as a probe for the glucose transporter GLUT1 in astrocytes.</a> J Neurochem. 109 (s1), 94-100 (2009).</li>
<li>Hamilton, K. E., Bouwer, M. F., Louters, L. L., Looyenga, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+binding+and+uptake+of+fluorescent+glucose+analogs+2-NBDG+and+6-NBDG+occurs+independent+of+membrane+glucose+transporters%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimie%22%5BJournal%5D)">Cellular binding and uptake of fluorescent glucose analogs 2-NBDG and 6-NBDG occurs independent of membrane glucose transporters.</a> Biochimie. 190, 1-11 (2021).</li>
<li>Feigenspan, A., Babai, N. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+horizontal+slices+of+adult+mouse+retina+for+electrophysiological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of horizontal slices of adult mouse retina for electrophysiological studies.</a> J Vis Exp. 119, e55173(2017).</li>
<li>Lundgaard, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+neuronal+glucose+uptake+heralds+activity-dependent+increases+in+cerebral+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Direct neuronal glucose uptake heralds activity-dependent increases in cerebral metabolism.</a> Nat Commun. 6 (1), 6807(2015).</li>
<li>Zou, C., Wang, Y., Shen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2-NBDG+as+a+fluorescent+indicator+for+direct+glucose+uptake+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biochem+Biophys+Methods%22%5BJournal%5D)">2-NBDG as a fluorescent indicator for direct glucose uptake measurement.</a> J Biochem Biophys Methods. 64 (3), 207-215 (2005).</li>
<li>Wareham, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Solving+neurodegeneration%3A+common+mechanisms+and+strategies+for+new+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Solving neurodegeneration: common mechanisms and strategies for new treatments.</a> Mol Neurodegener. 17 (1), 23(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td># 5 forseps</td><td>Katena</td><td>K5-6550</td><td>Retina diseksiyonu için kullanılır</td></tr><tr><td>1.5 mL mikrosantrifüj tüpleri</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>26 G x 5/8" iğne</td><td>sol-M</td><td>112658</td><td>Diseksiyon sırasında korneayı delmek için kullanılır</td></tr><tr><td>5 mL tüpler</td><td>MTC bio</td><td>c2540</td><td></td></tr><tr><td>50 mL tüpler</td><td>Avantor VWR</td><td>89039-656</td> <td>tarafından</td></tr><tr><td>6-NBDG</td><td>Invitrogen</td><td>N23106</td><td>Floresan gukoz analog</td></tr><tr><td>96 kuyulu plakalar şeffaf tabanlı siyah</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>265301</td><td></td></tr><tr><td>Anestezik Kömür Filtresi Cannister</td><td>ReFresh</td><td>EZ-258</td><td>Anestezi kurulumunda kullanılır</td></tr><tr><td>BAY-876</td><td>Millipore Sigma</td><td>SML1774</td><td>GLUT1'in inhibisyonu için.</td></tr><tr><td>4 ° C'de santrifüj; C</td><td>Eppendorf</td><td>EPP-5424</td><td></td></tr><tr><td>Sıkıştırılmış gaz (%5 karbondioksit, %95 oksijen)</td><td>Airgas</td><td>UN3156</td><td>Anestezide kullanılır</td></tr>, <tr><td>kavisli forseps</td> kurar <td>Roboz cerrahi alet</td><td>RS-5137</td><td>Retina diseksiyonu için kullanılır</td></tr><tr><td>DDH2O</td><td>Elga LabWater</td><td>Elga PureLab Ultra</td><td>Etanolden sonra numuneler</td></tr> <tr><td>arasındaki sonikatörü temizlemek için kullanılırDiseksiyon mikroskobu</td><td>Olympus</td><td>szX12</td><td>Retina diseksiyonu için kullanılır</td></tr><tr><td>Etanol 200 kanıt</td><td>Decon laboratuvarları</td><td>2701</td><td>Numuneler arasındaki sonikatörü temizlemek için kullanılacak</td></tr><tr><td>Köpük yüzer tüp rafı</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>36-099-2328</td><td>Su banyosu adımlarında inkübasyon sırasında tüpler için</td></tr><tr><td>Genel makas</td><td>Roboz cerrahi alet</td><td>RS-680</td><td>Retina için kullanılır diseksiyon</td></tr><tr><td>Isofluran 250 mL şişe</td><td>Piramal yoğun bakım</td><td>NDC & nbsp; 6679401725</td><td>Anestezi</td></tr><tr><td>İzofluran ekipmanı</td> VWR <td>89012-492</td><td>tarafından satılan Vetequip</td><td>Ötenazi öncesi anestezi yapmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Kim mendil</td><td>VWR</td><td>82003-820</td><td></td></tr><tr><td>Mikroplaka okuyucu</td><td>Moleküler cihazlar</td><td>SpectraMax M2 mikroplaka okuyucu</td><td>Örnek</td></tr><tr><td>Neurobazal- A ortamı</td> okumak için kullanılır <td>Gibco</td><td>12349-015</td><td></td></tr><tr><td>Burun konisi (düşük profil anestezi maskesi)</td><td>Kent Scientific</td><td>SOMNO-0801</td><td>Ansetezi vermek için kullanılır</td></tr><tr><td>Diseksiyon mikroskobunun amacı</td><td>Olympus</td><td>DF plapo 1x pf</td><td>Retina diseksiyonu için kullanılır</td></tr><tr><td>Petri kabı</td><td>VWR</td><td>25384-088</td><td>Retina diseksiyonu sırasında kullanılır</td></tr><tr><td>Pierce tahlil reaktifi</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>1861426</td><td></td></tr><tr><td>Pipet uçları P20</td><td>Olympus Plastikler</td><td>26-404</td><td></td></tr><tr><td>Pipet uçları P200, P1000, P10 XL</td><td>VWR</td><td>76322-150, 76322-154, 76322-132</td><td></td></tr><tr><td>Pipetteman pipetleri P200, P1000, P20, P10</td><td>VWR</td><td>F144055M, F144056M, F144058M F144059M</td><td></td></tr><tr><td>Bilgisayarda SoftMax Pro yazılımı</td><td>Moleküler cihazlar</td><td>SoftMax Pro 7 yazılımı</td><td>Örnek okumak için kullanılan yazılım</td></tr><tr><td>Sonic ayrıştırıcı</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>FB50110</td><td>Sonikat örneği (retina)</td></tr><tr><td>Transfer pipetleri</td><td>Fisherbrand</td><td>13-711-9AM</td><td>Retinayı bir tüpten diğerine aktarmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Vannas yaylı makas</td><td>Katena</td><td>K4-5000</td><td>Retina diseksiyonu için kullanılır</td></tr><tr><td>Su banyosu 37 dereceye ayarlanmış; C</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Kuluçka için kullanılır</td></tr></tbody></table>

bozulmamış murin nöral retinasında glikoz analogu, 6-(n-(7-nitrobenz-2-oksa-1,3-diazol-4-il)amino)-6-deoksiglukozun alımının Ölçülmesi

Measuring Uptake of the Glucose Analog, 6-(N-(7-Nitrobenz-2-Oxa-1,3-Diazol-4-yl)Amino)-6-Deoxyglucose, in Intact Murine Neural Retina

Şekil 4, farklı süreler boyunca 6-NBDG ile inkübe edilmiş WT fare retinasından temsili glikoz floresan ölçümlerini göstermektedir. 30 dakikalık inkübasyondan sonra, 6-NBDG seviyeleri ortalama 336 ± 27.91 AU iken, 60 dakika sonra 6-NBDG seviyeleri ortalama 616.3 ± 8.38 AU'ya yükseldi. 30 dakikalık başka bir inkübasyon, 6-NBDG (506.4 ± 5.3 AU) seviyesinin düşmesine neden oldu. 60 dakikada, sonuçlardaki değişkenlik minimumdu ve bu nedenle retinanın 6-NBDG ile inkübasyonu için en uygun zaman ola...

Bozulmamış Murin Nöral Retinasında Glikoz Analogu, 6-(N-(7-Nitrobenz-2-Oksa-1,3-Diazol-4-il)Amino)-6-Deoksiglukozun Alımının Ölçülmesi

The retina is a highly metabolic tissue with multiple cell types requiring glucose and its derivatives to produce energy in the form of ATP. Retinal ...

measuring-uptake-glucose-analog-6-n-7-nitrobenz-2-oxa-13-diazol-4-yl

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Retinal nöronlar arasındaki boşluk kavşak tracer kaplin kapsamını belirlemek için kolay ve kullanışlı bir yöntem açıklanmıştır. Bu teknik, bir gece ve gündüz farklı zamanlarda farklı aydınlatma koşulları altında ve sağlam retina nöronlar arasındaki elektriksel sinaps işlevini incelemek için olanak sağlar.

Cut-yükleme: Retina Nöronlar arasında Gap Junction Tracer Kaplin Kapsamı incelenmesi için yararlı bir araçtır

Bu videoda, hasat edilmiş fare organlarında hücre dışı glikoz analog tükenmesini ölçmek için ex vivo bir teknik gösteriyoruz. Fare dokusunun, hücreler tarafından alınan floresan etiketli deoksiglukoz içeren bir çözelti içinde inkübe edilmesini içerir. Glikoz analog alımı, inkübe edilmiş ortamın floresansının ölçülmesiyle dolaylı olarak belirlenebilir.

Hücre Dışı Floresan Glikoz Analog Tükenmesinin Ölçümü: Ex vivo Fare Organlarında Glikoz Alımını Değerlendirmek İçin Vekil Bir Ölçüm Tekniği

Bu video, fare beyinlerinden toplanan sinaptozomlarda dopamin alımının değerlendirmesini göstermektedir. Dopamin taşıyıcıları aracılığıyla dopamin alımı için sinaptozomları hazırlamak, bunları değişen konsantrasyonlarda radyoaktif işaretli dopamin ile tedavi etmek, sinaptozomları izole etmek ve dopamin alımını ölçmek için radyoaktiviteyi ölçmek için adımları ana hatlarıyla belirtir.

Radyo İşaretli Dopamin Kullanarak Fare Beyin Sinaptozomlarında Dopamin Alımının Ölçülmesi

Yetişkin-yaşlı farelerin tek nöronların aktivitesi belirli beyin bölgelerinde nöronları dissociating ve floresan membran potansiyeli boya görüntüleme kullanılarak incelenebilir. Glikoz değişikliklere test yanıtlar olarak, bu teknik, yetişkin ventromedial hipotalamus nöronları glikoz duyarlılığını belirlemek için kullanılabilir.

Membran Yetişkin farelerin ventromedial Hipotalamus Nöronlar Potansiyel Boya Görüntüleme Glikoz Algılama Çalışması için

Vizyon tehdit eden birçok oküler hastalıklar işlevsel olmayan retina yüzdeki ile ilişkilidir. Bu nedenle, retina arteriyol yanıt ölçümü temel patofizyolojik mekanizmaları araştırmak önemlidir. Bu makalede fare retina arteriyol yalıtım ve damar çapı vazoaktif maddelerin etkilerini değerlendirmek için hazırlık için detaylı bir iletişim kuralı.

Fare retina arteriyoller Ex Vivo reaktivite ölçümü için hazırlık adımları

Bu teknik oksijen tüketimi ve ekstraselüler asitleştirme oranları explanted fare Retina dokularında bir hücre dışı akı çözümleyicisini kullanarak gerçek zamanlı kayıt açıklar.

Explanted Retina doku hücre dışı akı analizi ile enerji metabolizmasında ölçümü

TAR DNA bağlayıcı protein (TDP-43) proteinopatisi tarafından etkilenen Drosophila motor nöronlarında, FRET tabanlı, genetik olarak kodlanmış bir glikoz sensörü tarafından belirtildiği gibi glikoz alımı artar.

TDP-43 Proteinopatisinin Drosophila Modellerinde Glikoz Alımının Ölçülmesi

Fare retinal damar sistemi, vasküler patern oluşumunun mekanizmalarını anlamada özellikle ilgi çekicidir. Bu protokol, optik diskten sabit bir mesafede floresan anjiyografi fundus görüntülerinden fare retina damarlarının çapını otomatik olarak ölçer.

Fare Floresan Anjiyografi Görüntülerinden Retina Damar Çapının Ölçülmesi

Biz sürekli fare mikroglia görselleştirme ve dolaşımdaki monositler için bir yöntem...

Kronik İki foton için İnce kafatası Pencere Tekniği In vivo</emNöro-inflamasyon Modelleri murin mikroglia> Görüntüleme

Bu makale, tek tek hücrelerin sağlam fare retinada floresan etiketli nöron popülasyonları kayıt gösteriyor. Iki foton kızılötesi uyarma kullanarak transgenetically etiketli hücreleri ışık tepkileri, açık alan özellikleri, ve morfoloji çalışması için patch-klemp kayıt için hedef alındı.

Bozulmamış Retina Elektrofizyolojik Karakterizasyonu GFP-ifade eden hücre popülasyonlarının

Keşfedin, 6-NBDG floresan glikoz analoğu kullanarak bozulmamış murin nöral retinada glikoz alımını ölçme yöntemini. Bu protokol, yaşlanma ve nörodejeneratif hastalıklarda metabolik değişiklikleri incelemek için hızlı ve uygun maliyetli bir yaklaşım sunar.

Bozulmamış Murin Nöral Retinasında Glikoz Analogu, 6-(N-(7-Nitrobenz-2-Oksa-1,3-Diazol-4-il)Amino)-6-Deoksiglukozun Alımının Ölçülmesi (Video) | JoVE Journal

Bozulmamış Murin Nöral Retinasında Glikoz Analogu, 6-(N-(7-Nitrobenz-2-Oksa-1,3-Diazol-4-il)Amino)-6-Deoksiglukozun Alımının Ölçülmesi

Daha fazla video keşfet