Name: İnsan ve hayvan serumlarında antikor yanıtının tespiti için pratik ve uyarlanabilir bir immünoassay platformu olarak hücresiz nokta lekesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T13:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 21 s
Description: Öğrenin, hücresiz nokta lekesi tekniğiyle insan ve hayvan serumlarında antikor yanıtını nasıl tespit edeceğinizi. Bu uygun maliyetli immünoassay platformu, düşük kaynaklı ortamlarda hızlı tanı testleri için uyarlanabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Tüm hamster deneyleri, Kanada Halk Sağlığı Kurumu'ndaki Ulusal Mikrobiyoloji Laboratuvarı'nda (NML) gerçekleştirildi, Kanada İnsan ve Hayvan Sağlığı Bilim Merkezi tarafından onaylandı ve Kanada Hayvan Bakımı Konseyi yönergelerine uygun olarak yapıldı. Tüm insan serumu/plazma numuneleri, kurum içi testler için ticari olarak elde edildi veya klinik işbirlikçiler tarafından NML'de bağımsız test için NML'ye sağlandı.
1. Antijen lineer ekspresyon şablonlarının (LET'ler) tasarımı ve hazırlanması
<ol>
	<li>Norouzi ve ark.7'deki talimatlara dayalı olarak ve Norouzi ve ark.5'te tarif edildiği gibi bir N/C-terminali SpyTag içeren hedef antijen için hücresiz ekspresyon LET'lerini tasarlayın. NOT: Burada SARS-CoV-2 Nükleokapsid Proteininin (NP, amino asitler 2-419) hazırlanması için ayrıntılar sunuyoruz.<ol>
		<li>SARS-CoV-2 NP için LET'in (Şekil 1 ve Ek Dosya 1), T5 promotöründen önce ve durdurma kodonundan sonra 3 baz çifti tampon dizisine sahip 50' ve 7' Ter bölgeleri içerdiğinden emin olun.</li>
		<li>N-terminalindeki NP proteinini 6-SpyTag-TEV ile etiketleyin.</li>
		<li>UniProt Veritabanından (Erişim Kodu P0DTC9) protein dizisini alın ve IDT kodon optimizasyon aracını8 kullanarak E. coli tabanlı ekspresyon için kodon optimize edin. Bu diziyi, 10 ng / μL'de suda yeniden süspanse edilmiş tek sarmallı bir DNA parçası olarak ticari sentez için sipariş edin. NOT: TEV proteaz bölünme bölgesi ve His6 etiketi, LET tasarımındaki temel özellikler değildir.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>PCR, DNA fragmanını evrensel Ter FW (GGCTCCGAATAAGTATGTTGTAACTAAAGTGCGGCC ile çoğaltır. ACGATGCGTCCGGCGTAGAGGATCG) ve ter RV (CCGAGGCAATAAGTATGTTGTAACTAAAGTGCTCAG CTTCCTTTCGGGCTTTGTTAGCAGCC) yüksek kaliteli DNA polimeraz kitini kullanan primerler ( Malzeme Tablosuna bakınız)<ol>
		<li>Aşağıdaki gibi 100 μL'lik bir reaksiyon ayarlayın: 75 μL nükleaz içermeyen su, 20 μL 5x DNA polimeraz tamponu, 2 μL 10 mM dNTP (nihai konsantrasyon 200 μM), 0.5 μL 100 μM Ter-FW primer, 0.5 μL 100 μM Ter-RV primer, 1 μL 10 ng/μL tek sarmallı LET, 1 μL(2U) DNA polimeraz.</li>
		<li>Aşağıdaki PCR ayarlarını kullanın: 30 saniye boyunca 98 °C'de ilk denatürasyon; 35 döngü: 6 sn için 98 °C, 15 sn için 60 °C, 90 sn için 72 °C; 4 °C'de tutun.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>PCR ürününü ticari bir PCR saflaştırma kiti kullanarak saflaştırın, %1'lik bir agaroz jeli üzerinde bir numune çalıştırarak kalitesini kontrol edin ve konsantrasyonunu bir UV-Vis spektrofotometresinde ölçün. NOT: Ham PCR ürünleri, hücresiz ifade için doğrudan da kullanılabilir. Bununla birlikte, saflaştırma daha standart bir prosedüre izin verir.</li>
</ol>
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67973/67973fig01.jpg"> 
Şekil 1: SARS-CoV-2-NP için doğrusal ifade şablonu. His-SpyTag-SARS-CoV-2 NP doğrusal DNA şablonunun özelliklerini temsil eden bir şema. Anahtar DNA şablon elemanları etiketlenmiştir. İlgilenilen protein için kodlama dizisi, burada NP, verimli ekspresyon için bir T7 promotörün transkripsiyonel kontrolü altına yerleştirilir. N-terminalinde, NP proteini, SpyCatcher2-Apex2 algılama reaktifi kullanılarak spesifik algılama için bir SpyTag ile eklenir. x6His-tag ve TEV proteaz bölgeleri, genel LET tasarımının bir parçası olarak dahil edilmesine rağmen, CFDB amaçları için vazgeçilebilir. Doğrusal DNA şablonunun uç noktasında, her biri ilgili 50 baz çifti tampon dizisinden önce gelen "yukarı akış" ve "aşağı" Ter bölgeleri, hücresiz lizatta ekzonükleolitik DNA bozulmasına karşı Tus aracılı koruma için dahil edilir. Kısaltmalar: NP = nükleokapsid proteini; LET = doğrusal ifade şablonu; TEV = tütün aşındırma virüsü; CFDB = hücresiz nokta lekesi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67973/67973fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
2. SpyCatcher2-Apex2 raportör proteininin saflaştırılması
<ol>
	<li>SpyCatcher2-Apex-2 raportör proteinini hazırlamak için orijinal olarak Norouzi ve ark.5'te ( Ek Dosya 2'de tam dizi ve Ek Şekil S1'de plazmit haritası) oluşturulan pET24b-SpyCatcher2-Apex2 plazmidini kullanın.</li>
	<li>50 μg/mL kanamisin içeren agar plakaları ve lizojen suyu (LB) hazırlayın. E. coli BL21 (DE3) hücrelerini pET24b-SpyCatcher2-Apex2 plazmidi ile dönüştürün. Tek bir koloniyi 15 mL'lik bir başlangıç LB kültürüne aşılayın ve 250 RPM'de çalkalayarak 37 ° C'de gece boyunca büyütün.</li>
	<li>Ertesi gün, 50 μg / mL kanamisin içeren 500 mL taze LB ortamına 10 mL başlangıç kültürü ekleyin. Kültür 600 nm'de 0.6-0.8 (~ 3 saat) optik yoğunluğa ulaşana kadar 250 RPM'de çalkalayarak 37 ° C'de inkübe edin.</li>
	<li>Kültürü 0.5 mM izopropil-β-D-1-tiyogalaktopiranosid ve 1 mM 5-aminolevulinik asit hidroklorür ile takviye ederek SpyCatcher2-Apex2 ekspresyonunu indükleyin. Büyüme sıcaklığını 30 ° C'ye düşürün ve kültürün 4 saat daha kuluçkaya yatmasına izin verin.</li>
	<li>Bakterileri 15 dakika boyunca 8.000 × g'da santrifüjleme ile hasat edin. Hücre lizisine devam edin veya alternatif olarak peleti kullanana kadar -80 °C'de saklayın.</li>
	<li>Pelet, 50 mM Tris-HCl (pH 7.8), 300 mM NaCl, 1 mg / mL lizozim, EDTA içermeyen proteaz inhibitör tableti ve 1 mM ditiyotreitol (DTT) içeren 20 mL lizis tamponunda yeniden süspanse edin. Hücreleri, toplam 3 dakikalık bir AÇIK süre boyunca 5 s AÇIK ve 10 s KAPALI aralıklarla% 50 genlikte sonikasyon ile parçalayın.</li>
	<li>Lizatı 4 ° C'de 1 saat boyunca 20.000 × g'da santrifüjleme ile arıtın. Süpernatanı 0,2 μm'lik bir şırınga filtresinden geçirin.</li>
	<li>Arıtılmış lizata 250 μM'lik bir nihai konsantrasyona hemin klorür ekleyin ve gece boyunca 4 ° C'de inkübe edin. Protein saflaştırmasına devam edin. NOT: Hemin klorür ile inkübasyon, optimal enzim aktivitesi için Apex-2 peroksidaza hem katılımını en üst düzeye çıkarır.</li>
	<li>Arıtılmış lizata 2,5 mL Ni reçinesi ekleyin ve 4 ° C'de 45 dakika hafifçe çalkalayarak inkübe edin. Karışımı bir yerçekimi akış kolonuna uygulayın ve reçineyi 50 mL Tris tamponu (50 mM Tris-HCl (pH 7.8), 300 mM NaCl ve 1 mM DTT) ile yıkayın.</li>
	<li>SpyCatcher2-Apex2 proteinini 400 mM imidazol içeren 25 mL Tris tamponunda elute edin. Konsantre ve tampon, 0.5-1.0 mL'lik bir nihai hacmi hedefleyen bir santrifüj filtre ünitesi kullanarak elüatı Tris tamponuna dönüştürür.</li>
	<li>Bir UV-Vis spektrofotometresinde protein konsantrasyonunu belirlemek için SpyCatcher2-Apex2'nin (27,390 M-1 cm-1) molar sönme katsayısını kullanın. @'lık bir nihai konsantrasyona gliserol ekleyin ve alikotları -20 °C'de saklayın. NOT: Bu protokolün, standart 96 örnekli bir leke boyutunda 400 CFDB çalışması için yeterli olan yaklaşık 40 mg yüksek saflıkta ve aktif SpyCatcher2-Apex2 vermesi beklenmektedir.</li>
	<li>Konvansiyonel western blot9 kullanarak SpyTagged proteinlerinin tespiti ve CFDB deneyleri için, zarları her zaman% 0.05 Tween-20 (TBST) içeren 1x Tris tamponlu tuzlu su içinde% 5 yağsız kuru sütte bloke edin. SpyCatcher2-Apex2 proteinini bloke edici çözeltide 10 μg / mL'lik bir nihai konsantrasyonda kullanın. NOT: SpyCatcher2-Apex2 raporlayıcısı, sinyal geliştirme için gelişmiş kemilüminesans (ECL) çözümü gerektirir. ECL çözeltisi ticari olarak elde edilebilir veya Mruk ve ark.10'daki talimatlara göre şirket içinde hazırlanabilir. Buradaki nihai ECL çözeltisi, 100 mM Tris-HCl'de (pH 8.6) 0.4 mM p-kumarik asit, 2.5 mM luminol ve %0.015H2O2'denoluşur.</li>
</ol>
3. Antijenlerin hücresiz üretimi ve kalite kontrolü
<ol>
	<li>Levine ve ark.11 ve Norouzi ve ark.5'teki talimatları izleyerek bir E. coli BL21 hücresiz ekspresyon lizat ve reaksiyon bileşenlerini hazırlayın ve birleştirin. Temsili bir 100 μL reaksiyon için son reaksiyon karışımını 5 μM Tus proteini ve 1.2 μM T7 RNA Polimeraz ile tamamlayın: 14.6 μL Çözelti A, 14 μL Çözelti B, 33.3 μL E. coli BL21 lizat, 2.5 μL 200 mM Tus proteini, 1.2 μL 100 mM T7 RNA polimeraz, 1 μL 1.5 μM lineer DNA şablonu, 33.4 μL nükleaz içermeyen su. NOT: Bir E. coli BL21 hücresiz lizat hazırlamaya ilişkin temel talimatlar için Ek Dosya 3'e ve Çözelti A ve B'nin ayrıntılı bir tarifi için Ek Tablo S1'e bakın. E. coli hücresiz ekspresyon sistemi, reaksiyon Tus ve T7 RNA Polimeraz ile desteklendiği sürece alternatif protokoller kullanılarak da hazırlanabilir veya ticari olarak elde edilebilir.</li>
	<li>Bir PCR tüpündeki hücresiz reaksiyona (h/h) ham PCR ürünü ekleyerek ilk 5 μL ölçekli ekspresyon testi gerçekleştirin. 30 °C'de 15 saat çalkalamadan inkübe edin.</li>
	<li>% 12 sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jel (SDS-PAGE) üzerine 1 μL hücre serbest reaksiyonu yükleyerek NP antijeninin ekspresyon kalitesini kontrol edin ve ardından adım 2.12'de tarif edildiği gibi western blot için bir nitroselüloz membrana aktarın. SpyTag aracılığıyla leke etiketleme için SpyCatcher2-Apex2 raportör proteinini ve isteğe bağlı olarak hedef antijene karşı spesifik bir ticari antikor (burada bir anti-SARS-CoV-2-NP) kullanın.</li>
	<li>CFDB testi için kullanılacak 15 nM saflaştırılmış LET ürünü ile 1 mL ölçekli hücresiz bir reaksiyonu birleştirin. Ekspresyon karışımını 15 mL'lik konik bir tüpte 80 RPM'de 30 ° C'de 15 saat çalkalayarak inkübe edin. Western blot kullanarak ifade kalitesini kontrol edin ve 50 μL'lik alikotları -20 °C'de saklayın.</li>
</ol>
4. Serum örnekleri
<ol>
	<li>İnsan / hayvan serumu (veya plazma) örneklerini ticari kaynaklardan veya klinik işbirlikçilerden veya standart prosedürleri kullanarak ve kurumsal insan araştırmaları etik komitesi veya hayvan bakımı ve kullanımı komitesinin yönergelerini izleyerek kurum içinde alın. Kontaminasyon risklerini azaltmak için uygun numune ön işlem önlemlerinin alındığından emin olun. NOT: Ön arıtma önlemleri, solvent-deterjan işlemini, ısı inaktivasyonunu ve kan yoluyla bulaşan virüs belirteçlerinin test edilmesini içerebilir. Tam kandan serum ve plazma izolasyonu için yararlı bir protokol mevcuttur12. Diğer immünoassay platformlarında olduğu gibi, ilk enfeksiyon veya hastalık başlangıcından erken (&lt;3 hafta) sonra toplanan serum örneklerinin yeterli düzeyde antikor yanıtı içermesi beklenmemektedir ve sonuçları dikkatle tedavi edilmelidir.</li>
	<li>SARS-CoV-2 NP CFDB reaktiflerinin kalite doğrulaması için, Ulusal Biyolojik Standartlar ve Kontrol Enstitüsü (NIBSC) Dünya Sağlık Örgütü'nün (WHO) anti-SARS-CoV-2 immünoglobulin için uluslararası referans panelini kullanın, değişen seviyelerde anti-NP immünoglobulinlere sahip x1 COVID-19 öncesi ve x4 SARS-CoV-2 pozitif numuneler13. Alternatif olarak, diğer kaynaklardan önceden karakterize edilmiş sağlıklı ve pozitif serum örneklerini kullanın.</li>
	<li>CFDB deneyleri için, doğruluğu artırmak ve sonuçların analizini ve yorumlanmasını kolaylaştırmak için birden fazla (&gt;3) sağlıklı serum örneğini bir araya getirerek bir negatif kontrol örneği alın veya hazırlayın.</li>
</ol>
5. Hücresiz Nokta Lekesi (CFDB) prosedürü
<ol>
	<li>Ana ızgara görüntü dosyasını indirin ve yazdırın (Ek Şekil S2). Ana ızgara, her biri 2 mm çapında 12 x 12 daire içeren 6 x 6 cm'lik bir desendir ve 96 oyuklu bir plakaya benzer bir tespit kapasitesi sağlar.</li>
	<li>Izgarayı iki kat yapışkan PCR plaka sızdırmazlık filmi arasına sıkıca sıkıştırın ve dış ızgara sınırları boyunca boyutuna göre kesin. İşaretli her daireyi oymak için 2 mm'lik bir biyopsi zımbası kullanın. NOT: Bu ana ızgara, p etanol ile silindikten sonra birden çok kez yeniden kullanılabilir.</li>
	<li>6.5 x 6.5 cm'lik bir nitroselüloz membran parçası kesin ve temiz bir yüzey üzerinde ana ızgaranın altına yerleştirin, kurulumu Şekil 2 ve Ek Şekil S3'te gösterildiği gibi yapışkan bant kullanarak sabitleyin. Numune lekelenmesinden sonra zarı kesmek için bir kılavuz olarak kullanılacak nitroselüloz membran üzerindeki en dıştaki daire konumlarını işaretlemek için bir işaretleyici kalem kullanın.</li>
	<li>Serum örneklerini 1/10 oranında 1x fosfat tamponlu salin (pH 7.4) içinde seyreltin. Her numunenin 0,4 μL hacmini önceden belirlenmiş ızgara konumlarında nitroselüloz membran üzerine üçlü olarak dağıtmak için bir mikropipet kullanın. Dağıtmak için nokta başına yaklaşık 15 s sürecektir. NOT: Sonuçların analizi için gerekli olacağından, her tahlilde hem negatif hem de pozitif kontrol numunelerini eklediğinizden emin olun.</li>
	<li>Benekli numunelerin bağlanması ve kuruması için ortam sıcaklığında 10 dakika bekleyin. Cımbız kullanarak nitroselüloz membranı dikkatlice alın ve işaretli dış daireler boyunca kesin.</li>
	<li>Membranı 10 cm'lik bir Petri kabında 10 mL bloke edici solüsyonda (TBST'de %5 yağsız kuru süt) oda sıcaklığında 30 dakika boyunca 100 RPM'de hafifçe çalkalayarak bloke edin.</li>
	<li>10 cm'lik bir Petri kabında 5 mL bloke edici çözeltiye hücre içermeyen antijen ekspresyon karışımının 50 μL'lik bir alikotunu çözün ve ekleyin. Membranı doğrudan bu antijen içeren çözeltiye aktarın ve 100 RPM'de çalkalayarak oda sıcaklığında 1 saat inkübe edin. NOT: Bu, SpyTagged antijeninin varsa antikor içeren nokta pozisyonlarına bağlanacağı birincil tespit adımı olacaktır.</li>
	<li>Membranı durulayın, 5 dakika yıkayın ve ikincil algılama adımına geçmeden önce TBST'de tekrar durulayın.</li>
	<li>Membranı, 100 RPM'de çalkalarken 1 saat boyunca 10 μg / mL saflaştırılmış SpyCatcher2-Apex2 proteini içeren 10 mL bloke edici tamponda inkübe edin.</li>
	<li>Membranı durulayın ve TBST'de 2 x 5 dakika yıkayın, TBS'de son bir durulama ile.</li>
	<li>Leke görüntüleme cihazına yakın temiz bir çalışma alanına bir parça parafilm yapıştırın ve sabitleyin. Zara cımbız kullanarak vurarak fazla sıvıyı çıkarın ve zarı parafilmin üzerine yerleştirin.</li>
	<li>Hemen membranın üzerine 3 mL (100 μL/cm2) ECL solüsyonu ekleyin ve oda sıcaklığında tam olarak 90 saniye inkübe edin.</li>
	<li>Membranı hemen muslukla kurutun ve sonuçların görselleştirilmesi için kemilüminesans uyumlu bir görüntüleme cihazına aktarın. NOT: Optimum görüntüleme süresi farklı cihazlara göre değişebilir. Cihazın varsayılan otomatik çekim süresi ayarlarının kullanılması ve yoksa, görüntü alma süresini optimize etmek için önceden karakterize edilmiş serum örneklerinin kullanılması önerilir.</li>
	<li>Nitroselüloz membran üzerindeki üç boş (arka plan) konum dahil olmak üzere nokta yoğunlukları elde etmek için cihazın görüntü analizi işlevini kullanın; Nokta başına sabit bir ölçüm hacmini koruyun. Verileri bir elektronik tabloya aktarın ve her bir nokta konumunu doğru şekilde etiketlemeyi unutmayın.</li>
	<li>Üçlü spot yoğunluklarının Ortalama ve Standart Sapmasını (SD) hesaplayın. Ardından, nitroselüloz membran arka planını tüm numunelerden çıkarın.</li>
	<li>-/+ sonuçlarının yorumlanması için bir kesme değeri elde etmek için aşağıdaki denklemi kullanın: (Negatif kontrollerin ortalaması) + (negatif kontrollerin 3 x SD'si). Ortalama yoğunlukları kesme değerinin üzerine düşerse numuneleri pozitif, ortalama yoğunlukları kesme değerinin altına düşerse negatif olarak kabul edin. NOT: CFDB prosedürünün bir şeması Şekil 3'te verilmiştir.</li>
</ol>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67973/67973fig02.jpg"> 
Şekil 2: CFDB montajı. CFDB ana ızgarasının ve NC membran montaj kurulumunun bir şeması. Ana ızgara, serum numunelerinin lekelenmesi ve immobilizasyonu için düzenli, adreslenebilir bir model sağlamak üzere NC membranı üzerine yerleştirilmiştir. Kısaltmalar: CFDB = hücresiz nokta lekesi; NC = nitroselüloz. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67973/67973fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67973/67973fig03.jpg"> 
Şekil 3: CFDB iş akışının şematik bir gösterimi. Bir CFDB tahlilinde, küçük bir miktar (&lt;0.4 μL) 10x seyreltilmiş serum numunesi, ayrı, adreslenebilir konumlarda (orta panel) önceden kesilmiş bir nitroselüloz membran (sol panel) üzerine manuel olarak dağıtılır. Nokta başına bir serum örneğinin üçlü noktalara bırakılması ve serumun toplam antikor rezervuarı da dahil olmak üzere protein içeriğinin katı NC substratı (orta panelde bej lekeler) üzerinde hareketsiz hale getirilmesi. Bu örnekte, serum örneklerinde bulunan anti-NP antikorları ilk olarak CFDB birincil tespit reaktifi SpyTag-NP tarafından bağlanabilir ve son olarak CFDB ikincil tespit reaktifi SpyCatcher2-Apex2 (sağ panel büyütülmüş kabarcık) tarafından tespit edilebilir. Bu rakam Norouzi ve ark.5'ten alınmıştır. Kısaltmalar: CFDB = hücresiz nokta lekesi; NP = nükleokapsid proteini; LET = doğrusal ifade şablonu. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67973/67973fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

<ol><li>Carter, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assay+techniques+and+test+development+for+COVID-19+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Cent+Sci%22%5BJournal%5D)">Assay techniques and test development for COVID-19 diagnosis.</a> ACS Cent Sci. 6, 591-605 (2020).</li>
<li>Amanat, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+serological+assay+to+detect+SARS-CoV-2+seroconversion+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">A serological assay to detect SARS-CoV-2 seroconversion in humans.</a> Nat Med. 26 (7), 1033-1036 (2020).</li>
<li>Stadlbauer, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SARS-CoV-2+seroconversion+in+humans%3A+A+detailed+protocol+for+a+serological+assay%2C+antigen+production%2C+and+test+setup%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">SARS-CoV-2 seroconversion in humans: A detailed protocol for a serological assay, antigen production, and test setup.</a> Curr Protoc Microbiol. 57 (1), e100(2020).</li>
<li>Pardee, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Portable%2C+on-demand+biomolecular+manufacturing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Portable, on-demand biomolecular manufacturing.</a> Cell. 167 (1), 248-259.e12 (2016).</li>
<li>Norouzi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+dot+blot%3A+an+ultra-low-cost+and+practical+immunoassay+platform+for+detection+of+anti-SARS-CoV-2+antibodies+in+human+and+animal+sera%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Spectr%22%5BJournal%5D)">Cell-free dot blot: an ultra-low-cost and practical immunoassay platform for detection of anti-SARS-CoV-2 antibodies in human and animal sera.</a> Microbiol Spectr. 11 (2), e0245722(2023).</li>
<li>Lam, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+evolution+of+APEX2+for+electron+microscopy+and+proximity+labeling%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Directed evolution of APEX2 for electron microscopy and proximity labeling.</a> Nat Methods. 12 (1), 51-54 (2014).</li>
<li>Norouzi, M., Panfilov, S., Pardee, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-efficiency+protection+of+linear+DNA+in+cell-free+extracts+from+Escherichia+coli+and+Vibrio+natriegens%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">High-efficiency protection of linear DNA in cell-free extracts from Escherichia coli and Vibrio natriegens.</a> ACS Synth Biol. 10 (7), 1615-1624 (2021).</li>
<li>IDT codon optimization tool. , Integrated DNA Technologies. 
 <a target="_blank" href="https://www.idtdna.com/pages/tools/codon-optimization-tool">https://www.idtdna.com/pages/tools/codon-optimization-tool</a> (2025).</li>
<li>General protocol for western blotting. , Bio-Rad. 
 <a target="_blank" href="https://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/Bulletin_6376.pdf">https://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lsr/literature/Bulletin_6376.pdf</a> (2025).</li>
<li>Mruk, D. D., Cheng, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+chemiluminescence+%28ECL%29+for+routine+immunoblotting%5BTitle%5D)+AND+%22Spermatogenesis%22%5BJournal%5D)">Enhanced chemiluminescence (ECL) for routine immunoblotting.</a> Spermatogenesis. 1, 121-122 (2011).</li>
<li>Levine, M. Z., Gregorio, N. E., Jewett, M. C., Watts, K. R., Oza, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Escherichia+coli-based+cell-free+protein+synthesis%3A+Protocols+for+a+robust%2C+flexible%2C+and+accessible+platform+technology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Escherichia coli-based cell-free protein synthesis: Protocols for a robust, flexible, and accessible platform technology.</a> J Vis Exp. (144), (2019).</li>
<li>Plasma and serum preparation. , ThermoFisher Scientific. 
 <a target="_blank" href="https://www.thermofisher.com/ca/en/home/references/protocols/cell-and-tissue-analysis/elisa-protocol/elisa-sample-preparation-protocols/plasma-and-serum-preparation.html">https://www.thermofisher.com/ca/en/home/references/protocols/cell-and-tissue-analysis/elisa-protocol/elisa-sample-preparation-protocols/plasma-and-serum-preparation.html</a> (2025).</li>
<li>Mattiuzzo, G., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMattiuzzo%2C+G+%22WHO%2FBS.2020.2403+Establishment+of+the+WHO+International+Standard+and+Reference+Panel+for+anti-SARS-CoV-2+antibody%22">WHO/BS.2020.2403 Establishment of the WHO International Standard and Reference Panel for anti-SARS-CoV-2 antibody</a>. , (2020).</li>
<li>Gong, F., Wei, H., Li, Q., Liu, L., Li, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+and+comparison+of+serological+methods+for+COVID-19+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Biosci%22%5BJournal%5D)">Evaluation and comparison of serological methods for COVID-19 diagnosis.</a> Front Mol Biosci. 8, 682405(2021).</li>
<li>Peeling, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serology+testing+in+the+COVID-19+pandemic+response%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Serology testing in the COVID-19 pandemic response.</a> Lancet Infect Dis. 20 (9), e245-e249 (2020).</li>
<li>Smith, M. T., Berkheimer, S. D., Werner, C. J., Bundy, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lyophilized+Escherichia+coli-based+cell-free+systems+for+robust%2C+high-density%2C+long-term+storage%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Lyophilized Escherichia coli-based cell-free systems for robust, high-density, long-term storage.</a> Biotechniques. 56 (4), 186-193 (2014).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1 kb DNA merdiveni</td><td>NEB</td><td>N3232</td><td>Agaroz jelleri için boyut belirteci olarak kullanılır</td></tr><tr><td>20 Amino asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>LAA21-1KT</td><td>Hücre serbest reaksiyonun bir bileşeni Çözelti B</td></tr><tr><td>2 mm biyopsi punch&nbsp;</td><td>Integra Miltex&nbsp;</td><td>33-31-P/25</td><td>CFDB ana ızgarasının hazırlanması için</td></tr><tr><td>5-aminolevulinik asit hidroklorür&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3785</td><td>SpyCatcher2-Apex2 Agaroz tozunun indüksiyonu için Heme öncüsü</td></tr><tr><td></td><td>BioShop</td><td>AGA002</td> DNA Anti-SARS-CoV2-Nükleokapsid <td>antikorunun elektroforetik analizi için</td></tr><tr><td></td><td>Sinobiyolojik</td><td>40588-T62</td><td>Hücresiz üretilen NP antijeni</td></tr><tr><td>Bio-Rad ChemiDoc'un WB tespiti için; XRS+</td><td>Bio-Rad</td><td>N/A</td><td>Jel görüntüleyici cihazı</td></tr><tr><td>Santrifüj yoğunlaştırıcılar</td><td>Cytiva</td><td>28-9323-60</td><td>Proteinlerin konsantrasyonu ve tampon değişimi için</td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>EP022628257</td><td>Bakteri kültürü hasadı için</td></tr><tr><td>Koenzim&nbsp; Bir sodyum tuzu hidrat (CoA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3144</td><td>Hücresiz reaksiyonun bir bileşeni Çözelti A</td></tr>: <tr><td>Renkli, önceden boyanmış protein standardı (geniş aralık)</td><td>NEB</td><td>P7719</td><td>SDS-PAGE jelleri için bir boyut işaretleyici olarak kullanılır</td></tr><tr><td>Covid-19 serum paneli</td><td>RayBiotech</td><td>CoV-PosSet</td>: <td>CFDB reaktiflerinin/koşullarının</td></tr> <tr><td>doğrulanması ve optimizasyonu için önceden karakterize edilmiş serumlarD-(&eksi;)-3-Fosfogliserik asit disodyum tuzu (3-PGA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8877</td><td>Hücresiz reaksiyonun bir bileşeni Çözelti B</td></tr><tr><td>Ditiyotreitol (DTT)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10197777001</td><td>Tamponların bileşeni</td></tr><tr><td>E. coli 5-alfa</td><td>NEB</td><td>C2987&nbsp;</td><td>plazmit hazırlığı için</td></tr><tr><td>E. coli BL21 ve nbsp;</td><td>NEB</td><td>C2530 ve nbsp;</td><td>Hücresiz lizatların hazırlanması için</td></tr><tr><td>E. coli BL21 (DE3)</td> <td>NEB</td><td>C2527 ve nbsp;</td><td>SpyCatcher2-Apex2'nin ifadesi için</td></tr><tr><td>EDTA içermeyen proteaz inhibitör tablet</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11836153001</td><td>E. coli lizis tamponu</td></tr><tr><td>Eppendorf'un bir bileşeni; Yeni Brunswick&nbsp; Innova 43/43R İnkübatör Çalkalayıcı</td><td>Eppendorf</td><td>EPM1320</td><td>Protein ekspresyonu ve hücre içermeyen lizat hazırlama için E. coli hücrelerinin yetiştirilmesi için inkübatör</td></tr><tr><td>Folinik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>47612</td><td>Hücresiz reaksiyonun bir bileşeni Çözelti Bir</td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G9012</td><td>SpyCatcher2-Apex2 depolama tamponunun</td></tr> bileşeni <tr><td>Hemin klorür&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H9039&nbsp;</td><td>SpyCatcher2-Apex2'nin Heme takviyesi için</td></tr><tr><td>ECL reaktifi yapmak için</td> <td>hidrojen peroksit %30</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>H1009</td></tr><tr><td>Image Lab Yazılımı</td><td>ChemiDoc jel için</td><td>Bio-Rad</td><td>1709690</td> Yazılımı ve görüntüleme cihazı</tr><tr><td>İzopropil-BD-1-tiyogalaktopiranosid&nbsp;</td><td>Bioshop</td><td>IPT001</td><td>SpyCatcher2-Apex2 expressikon</td></tr><tr><td>Kanamisin Sülfat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>60615'in</td><td>indüksiyonu için SpyCatcher2-Apex2 bakteri kültürünün hazırlanması için</td></tr><tr><td>LB agar</td><td>BioShop</td><td>LBL406</td><td>E. coli büyümesi için</td></tr><tr><td>LB suyu BioShop</td><td></td><td>LBL407</td><td>E. coli büyümesi için</td></tr><tr><td>luminol&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4685</td><td>ECL reaktifi yapmak için</td></tr><tr><td>Lizozim</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L6876</td><td>Bakteri hücrelerinin parçalanması için</td></tr><tr><td>Magnezyum Asetat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5661</td><td>Hücresiz reaksiyonun bir bileşeni Çözelti B</td></tr><tr><td>NEBExpress Ni reçinesi&nbsp;</td><td>NEB</td><td>S1428S</td><td>SpyCatcher2-Apex2</td></tr><tr><td>Yağsız kuru sütün</td> saflaştırılması için <td>Bioshop</td><td>SKI400</td><td>WB ve CFDB membranlarının bloke edilmesi için</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>2099-1337410</td><td>CFDB lekelerinin ECL inkübasyonu için</td></tr><tr><td>p-kumarik asit ve nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C9008</td><td>ECL reaktifi yapmak için</td></tr><tr><td>pET24b-SpyCatcher2-Apex2 plazmid</td><td>Pardee Laboratuvarı</td><td>N/A</td><td>SpyCatcher2-Apex2 proteini</td></tr><tr><td>Petri kabının</td><td></td><td>ekspresyonu için kullanılır WB ve CFDB membran inkübasyonu için</td> <td>Fisherbrand</td> FB0875712 Kabı&nbsp;</tr><tr><td>Fosfat tamponlu tuzlu su %10BioShop</td><td></td> <td>PBS405</td><td>Tampon bileşeni</td></tr><tr><td>Potasyum Glutamat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1501</td><td>Hücresiz reaksiyonun bir bileşeni Çözelti B</td></tr><tr><td>Potasyum Oksalat Monohidrat (Oksalik asit)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>223425</td><td>Hücresiz reaksiyonun bir bileşeni Çözelti A</td></tr><tr><td>Prekast SDS-PAGE jel</td><td>BioRad</td><td>4561036EDU</td><td>Protein</td></tr><tr><td>Q5 yüksek kaliteli DNA polimerazın elektroforetik</td> analizi için;<td>NEB</td><td>M0491 ve nbsp;</td><td>LET'lerin PCR amplifikasyonu için</td></tr><tr><td>QIAquick PCR saflaştırma kiti&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>28106</td><td>LET'lerin saflaştırılması için</td></tr><tr><td>Ribonükleotid Çözelti Seti</td><td>NEB</td><td>N0450S</td><td>Hücresiz reaksiyonun bir bileşeni Çözelti A</td></tr><tr><td>Yağsız süt tozu</td><td>BioShop</td><td>SKI400</td><td>Western blot ve CFDB için bir bloke edici ajan olarak kullanılır</td></tr><tr><td>Sodyum Klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9625</td><td>Protein saflaştırma tamponlarının bir bileşeni</td></tr><tr><td>Sonicator</td><td>Qsonica</td><td>Q500</td><td>Bakteri hücrelerinin parçalanması için</td></tr><tr><td>Spermidin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2626</td><td>Hücresiz reaksiyonun bir bileşeni Çözelti A</td></tr><tr><td>, Şırınga filtresi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SLGSR33SS</td><td>Tamponların ve çözeltilerin sterilizasyonu için</td></tr><tr><td>Thermocycler</td><td>BioRad</td><td>T100</td><td>PCR reaksiyonlarını inkübe etmek için cihaz</td></tr><tr><td>Transfer RNA (tRNA)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>R8759</td><td>Hücresiz reaksiyonun bir bileşeni Çözelti A</td></tr><tr><td>, Tris tamponlu salin,</td><td>Thermo Scientific</td><td>J60764. K2</td><td>WB ve CFDB yıkama tamponu</td></tr><tr><td>bileşeni Trizma tabanı</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1503</td><td>Tris tamponu yapmak için</td></tr><tr><td>Tunair SS-5012 Yarım Bölme Çalkalama Şişesi, 2.5 L</td><td>Cole-Parmer</td><td>RK-01835-39</td><td>Protein ekspresyonu ve hücre serbest lizat hazırlama için E. coli hücrelerini büyütmek için kap</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>BioShop</td><td>TWN510</td><td>WB ve CFDB yıkama tamponu</td></tr> bileşeni <tr><td>Cımbız</td><td>Almedic</td><td>7728-A10-100</td><td>CFDB NC membran</td></tr><tr><td>UV-Vis spektrofotometresi</td> için <td>Thermo Scientific</td><td>13400518</td><td>Nükleik asit ve DNA konsantrasyonunun ve bakteri kültürünün ölçümü için kullanılır OD</td></tr><tr><td>DSÖ Anti-SARS-CoV-2 immünoglubulin için Uluslararası Referans Paneli</td><td>NISBC</td><td>20/268</td><td>CFDB reaktiflerinin/koşullarının</td></tr> <tr><td>doğrulanması ve optimizasyonu için önceden karakterize edilmiş serumlar&beta;-Nikotinamid adenin dinükleotid hidrat (NAD)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10127965001</td><td>Hücresiz reaksiyonun bir bileşeni Çözelti A</td></tr></tbody></table>

İnsan ve hayvan serumlarında antikor yanıtının tespiti için pratik ve uyarlanabilir bir immünoassay platformu olarak hücresiz nokta lekesi

Cell-Free Dot Blot as a Practical and Adaptable Immunoassay Platform for the Detection of Antibody Response in Human and Animal Sera

Hedef antijen için doğrusal ekspresyon şablonunun PCR amplifikasyonu SARS-CoV-2 NP LET'i PCR-amplifiye etmek için, protokol bölüm 1.2'de açıklandığı gibi evrensel Ter ileri ve geri primerler kullanıldı ve ürünün 1 μL'si bir agaroz jel üzerinde kontrol edildi (Şekil 4) PCR ürününün saflaştırılmasına geçmeden önce.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67973/67973fig04.jpg"> 
<str...

The string of global pathogenic outbreaks over the past two decades has highlighted the importance of serosurveillance strategies. Immunoassay platforms ...

cell-free-dot-blot-as-practical-adaptable-immunoassay-platform-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Luminex Corporation Xmap mikroküre teknolojisini kullanarak, çeşitli laboratuvar hayvanı türlerinin serosurveillance için Multiplexed Florometrik immunoassay (MFIA) geliştirdik. MFIA antijeni, doku kontrolü veya immünglobulin kovalent renk kodlu polistiren mikroküreler bağlantılı bir süspansiyon mikroarray olduğunu. MFIA test yöntemi hem de çeşitli giderme konularını ele almaktadır.

Multiplexed Florometrik immunoassay Test Metodolojisi ve Sorun Giderme

Bu videoda, bir serum örneğindeki çeşitli antikor izotiplerini aynı anda tespit etmek için farklı antijenlerle birleştirilmiş floresan manyetik boncuklar veya mikroküreler kullanan bir immünolojik test tekniği açıklanmaktadır. Test, bir enfeksiyon sırasında veya aşılama sonrası serokonversiyonun anlaşılmasında yardımcı olur.

Multianalit İmmünoboncuk Testi: İnsan Serum Numunesinde Çoklu Antikor Alt Tiplerinin Eşzamanlı Tespiti için Akış Tabanlı Bir İmmünoassay Tekniği

Bu protokol, deniz memelilerinin miyoglobine güçlü bir şekilde reaktif olan iki IgG sınıfı monoklonal antikorun (mAb) gelişimini açıklar. Bu mAb'ler, deniz memelilerinin Mb'sini fok ve diğer hayvanlardan ayırt etmek için sandviç formatına dayalı bir kolloidal altın immünokromatografik test şeridi üzerine uygulanır.

Deniz Memelileri Miyoglobin Tespiti için bir Kolloidal Altın merkezli İmmunokromatografik Testi Strip Gelişimi

İnsan periferik kanı, humoral immün yanıtın değerlendirilmesi için yaygın olarak kullanılır. Burada, insan B hücrelerini periferik kandan izole etme, insan B hücrelerini kültürde antikor (Ab) salgılayan B hücrelerine (ASC'ler) ayırma ve bir ELISpot testi ile toplam IgM ve IgG-ASC'leri numaralandırma yöntemleri açıklanmaktadır.

İzolasyon, Farklılaşma ve Niceleme İnsan Kanı B Hücreleri Antikor salgılayan: ELISPOT Hümoral Bağışıklık bir Fonksiyonel Göstergesi&#39;nin olarak

Biz sadece iki slayt şaklatarak çoğaltılmış sandviç çapraz-reactivity ücretsiz uzun gerçekleştirmek için bir ek çip teknolojisi göstermek. Bir ek aparatı reaktifler Mikroarray Mikroarray güvenilir bir şekilde aktarmak için kullanılır. Ek çip olmadan Çapraz bulaşma farklı reaktifler colocalization gerektiren herhangi bir biyokimyasal reaksiyonlar için kullanılabilir.

Çip için çapraz-reactivity ücretsiz ve gözcü-Alerjik çoğaltılmış sandviç uzun snap

Burada biz ayrıntılı işlem nicel dot blot Analizi (QDB) mutlak içerik hedefli bir proteinin belirlenerek aktin proteini, gelsolin gibi (CAPG), üç farklı fare dokularda kapatma göstermek. Biz yüksek üretilen iş, cep ve doku düzeyinde biyomarker doğrulama için uygun, nicel immunoblot tekniği göstermektedir.

Yüksek işlem hacmi, mutlak nicel nokta kullanarak doku düzeyleri, seçili bir Protein içeriği tayini Blot Analizi (QDB)

Bu yazıda, biz T-bağımlı ve T-bağımsız immünglobulin (Ig) izotip yanıt ELISA kullanarak farelerde karakterize için bir protokol tanımlamak. Bu yöntem tek başına veya kullanılabilir akış ile birlikte sitometresi araştırmacılar T-bağımlı ve bağımsız T antijen bağışıklama takip farelerde B hücre-aracılı Ig izotip yanıtlarında farkları belirlemek için izin verir.

Timus bağlı ve timus bağımsız immünglobulin izotip yanıt Immunosorbent Assay enzim bağlı kullanarak farelerde karakterizasyonu

Bu makalede, SARS-CoV-2 enfeksiyonuna veya aşılamasına karşı immün yanıttan kaynaklanan iki immünoglobulin izotipi (IgA, IgM veya IgG) için antikor titrelerindeki dinamik değişiklikleri izlemek için uygun bir yöntem açıklanmaktadır. Bu 'Multianalit Covid-19 İmmün Yanıt Paneli', 'çift kanallı' özelliğe sahip akış tabanlı bir multipleks okuyucu kullanılarak okunan kodlanmış mikrosferler üzerine inşa edilmiş üç dolaylı immünotahlil kullanır.

Covid-19 için Multianalit İmmünoboncuk Testi Kullanılarak Serokonversiyonun Dinamik İzlenmesi

Bu protokol, antijen tespiti için IgY antikorları kullanan tahliller için lateks boncukların hazırlanması için bir metodolojiyi açıklar.

Yumurta sarısı antikorlarına dayalı sitometrik boncuk testinin standardizasyonu

Tam kan bazlı immünolojik testler, tanı ve araştırma amaçları için antijene özgü bağışıklığı analiz etmek için kolay ve kaynak açısından verimli bir araç sağlar. Bu makale, pediatrik hastalar ve küçük hayvanlar için düşük hacimli bir versiyon da dahil olmak üzere, mantar ve viral patojenlere karşı konak bağışıklığının kapsamlı analizi için ikili ko-stimülasyonlu optimize edilmiş bir tam kan bazlı protokol sağlar.

Fungal ve Viral Patojenlere Karşı Konak Bağışıklığının Antijene Özgü Analizi için İkili Ko-stimülasyonlu Tam Kan Testi

Yeni anti-HER2 monoklonal antikorlar kullanılarak valide edilmiş bir sandviç ELISA testi sunuyoruz. Bu test, in vitro kültürlenmiş hücrelerden ve kan ve dokular dahil olmak üzere diğer örneklerden hücreye bağlı ve salınan HER2 proteininin hassas bir şekilde ölçülmesini sağlar.

Hücrelerden Salınan ve Hücrelere Bağlanan İnsan Epidermal Büyüme Faktörü Reseptörü 2'nin Kapsamlı Belirlenmesi için Doğrulanmış İmmünokimyasal Test

Öğrenin, hücresiz nokta lekesi tekniğiyle insan ve hayvan serumlarında antikor yanıtını nasıl tespit edeceğinizi. Bu uygun maliyetli immünoassay platformu, düşük kaynaklı ortamlarda hızlı tanı testleri için uyarlanabilir.

İnsan ve hayvan serumlarında antikor yanıtının tespiti için pratik ve uyarlanabilir bir immünoassay platformu olarak hücresiz nokta lekesi (Video) | JoVE Journal

İnsan ve hayvan serumlarında antikor yanıtının tespiti için pratik ve uyarlanabilir bir immünoassay platformu olarak hücresiz nokta lekesi

Daha fazla video keşfet