Name: İzole Pankreas Adacık Tedavisi ve Apoptoz Ölçümü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-02T13:50:00.000+00:00
Duration: 9 min 36 s
Description: Öğrenin, fare pankreas adacıklarında çoklu floresan boyama ve konfokal mikroskopi kullanarak sitokin kaynaklı β-hücre ölüm mekanizmalarını. Bu yöntem tip 1 diyabet tedavileri için yeni terapötik stratejiler geliştirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Da Silva Xavier, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cells+of+the+islets+of+Langerhans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clinical+medicine%22%5BJournal%5D)">The cells of the islets of Langerhans.</a> J Clinical medicine. 7 (3), 54(2018).</li>
<li>Grunnet, L. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proinflammatory+cytokines+activate+the+intrinsic+apoptotic+pathway+in+%CE%B2-cells%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Proinflammatory cytokines activate the intrinsic apoptotic pathway in β-cells.</a> Diabetes. 58 (8), 1807-1815 (2009).</li>
<li>Delaney, C. A., Pavlovic, D., Hoorens, A., Pipeleers, D. G., Eizirik, D. cL. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytokines+induce+deoxyribonucleic+acid+strand+breaks+and+apoptosis+in+human+pancreatic+islet+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Cytokines induce deoxyribonucleic acid strand breaks and apoptosis in human pancreatic islet cells.</a> Endocrinology. 138 (6), 2610-2614 (1997).</li>
<li>Farnsworth, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+gap+junction+coupling+within+the+islet+of+langerhans+during+the+development+of+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Modulation of gap junction coupling within the islet of langerhans during the development of type 1 diabetes.</a> Front Physiol. 13, 913611(2022).</li>
<li>Collins, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleavage+of+protein+kinase+c+%CE%B4+by+caspase-3+mediates+proinflammatory+cytokine-induced+apoptosis+in+pancreatic+islets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Cleavage of protein kinase c δ by caspase-3 mediates proinflammatory cytokine-induced apoptosis in pancreatic islets.</a> J Biol Chem. 300 (9), 107611(2024).</li>
<li>Farnsworth, N. L., Walter, R., Piscopio, R. A., Schleicher, W. E., Benninger, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exendin-4+overcomes+cytokine-induced+decreases+in+gap+junction+coupling+via+protein+kinase+A+and+Epac2+in+mouse+and+human+islets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Exendin-4 overcomes cytokine-induced decreases in gap junction coupling via protein kinase A and Epac2 in mouse and human islets.</a> J Physiol. 597 (2), 431-447 (2019).</li>
<li>NIH CIT Consortium Chemistry Manufacturing Controls Monitoring Committee. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purified+human+pancreatic+islet-viability+estimation+of+islet+using+fluorescent+dyes+%28FDA%2FPI%29%3A+Standard+operating+procedure+of+the+NIH+clinical+islet+transplantation+consortium%5BTitle%5D)+AND+%22CellR4+Repair+Replace+Regen+Reprogram%22%5BJournal%5D)">Purified human pancreatic islet-viability estimation of islet using fluorescent dyes (FDA/PI): Standard operating procedure of the NIH clinical islet transplantation consortium.</a> CellR4 Repair Replace Regen Reprogram. 3 (1), e1378(2015).</li>
<li>Vermes, I., Haanen, C., Steffens-Nakken, H., Reutellingsperger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+assay+for+apoptosis+flow+cytometric+detection+of+phosphatidylserine+expression+on+early+apoptotic+cells+using+fluorescein+labelled+annexin+V%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Meth%22%5BJournal%5D)">A novel assay for apoptosis flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on early apoptotic cells using fluorescein labelled annexin V.</a> J Immunol Meth. 184 (1), 39-51 (1995).</li>
<li>Rieger, A. M., Nelson, K. L., Konowalchuk, J. D., Barreda, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+annexin+V%2Fpropidium+iodide+apoptosis+assay+for+accurate+assessment+of+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Modified annexin V/propidium iodide apoptosis assay for accurate assessment of cell death.</a> J Vis Exp. (50), e2597(2011).</li>
<li>Emdin, S., Dodson, G., Cutfield, J., Cutfield, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+zinc+in+insulin+biosynthesis%3A+some+possible+zinc-insulin+interactions+in+the+pancreatic+B-cell%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Role of zinc in insulin biosynthesis: some possible zinc-insulin interactions in the pancreatic B-cell.</a> Diabetologia. 19, 174-182 (1980).</li>
<li>ZA, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+of+staining+fresh+and+cultured+islets%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A simple method of staining fresh and cultured islets.</a> Transplantation. 45 (4), 827-830 (1988).</li>
<li>Zalewski, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Video+image+analysis+of+labile+zinc+in+viable+pancreatic+islet+cells+using+a+specific+fluorescent+probe+for+zinc%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Video image analysis of labile zinc in viable pancreatic islet cells using a specific fluorescent probe for zinc.</a> J Histochem Cytochem. 42 (7), 877-884 (1994).</li>
<li>Jindal, R. M., Taylor, R. P., Gray, D. W., Esmeraldo, R., Morris, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+method+for+quantification+of+islets+by+measurement+of+zinc+content%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">A new method for quantification of islets by measurement of zinc content.</a> Diabetes. 41 (9), 1056-1062 (1992).</li>
<li>Jayaraman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+the+detection+of+viable+human+pancreatic+beta+cells+by+flow+cytometry+using+fluorophores+that+selectively+detect+labile+zinc%2C+mitochondrial+membrane+potential+and+protein+thiols%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">A novel method for the detection of viable human pancreatic beta cells by flow cytometry using fluorophores that selectively detect labile zinc, mitochondrial membrane potential and protein thiols.</a> Cytometry A. 73 (7), 615-625 (2008).</li>
<li>Lukowiak, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+purification+of+functional+human+%CE%B2-cells+by+a+new+specific+zinc-fluorescent+probe%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Identification and purification of functional human β-cells by a new specific zinc-fluorescent probe.</a> J Histochem Cytochem. 49 (4), 519-527 (2001).</li>
<li>Gee, K. R., Zhou, Z. L., Qian, W. J., Kennedy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+and+imaging+of+zinc+secretion+from+pancreatic+%CE%B2-cells+using+a+new+fluorescent+zinc+indicator%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Chem+Soc%22%5BJournal%5D)">Detection and imaging of zinc secretion from pancreatic β-cells using a new fluorescent zinc indicator.</a> J Am Chem Soc. 124 (5), 776-778 (2002).</li>
<li>Gyulkhandanyan, A. V., Lee, S. C., Bikopoulos, G., Dai, F., Wheeler, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Zn2%2B-transporting+pathways+in+pancreatic+%CE%B2-cells%3A+a+role+for+the+L-type+voltage-gated+Ca2%2B+channel%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The Zn2+-transporting pathways in pancreatic β-cells: a role for the L-type voltage-gated Ca2+ channel.</a> J Biol Chem. 281 (14), 9361-9372 (2006).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+pancreatic+islet+cell-based+screening+for+diabetogenic+environmental+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A murine pancreatic islet cell-based screening for diabetogenic environmental chemicals.</a> J Vis Exp. (136), e57327(2018).</li>
<li>Farnsworth, N. L., Walter, R. L., Hemmati, A., Westacott, M. J., Benninger, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+level+pro-inflammatory+cytokines+decrease+connexin36+gap+junction+coupling+in+mouse+and+human+islets+through+nitric+oxide-mediated+protein+kinase+C%CE%B4%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Low level pro-inflammatory cytokines decrease connexin36 gap junction coupling in mouse and human islets through nitric oxide-mediated protein kinase Cδ.</a> J Biol Chem. 291 (7), 3184-3196 (2016).</li>
<li>Dalle, S., Abderrahmani, A., Renard, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+inhibitors+of+%CE%B2-cell+dysfunction+and+death+as+therapeutics+for+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Pharmacological inhibitors of β-cell dysfunction and death as therapeutics for diabetes.</a> Front Endocrinol. 14, 1076343(2023).</li>
<li>Collins, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptide-coated+polycaprolactone-Benzalkonium+chloride+nanocapsules+for+targeted+drug+delivery+to+the+pancreatic+%CE%B2-Cell%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Appl+Bio+Mater%22%5BJournal%5D)">Peptide-coated polycaprolactone-Benzalkonium chloride nanocapsules for targeted drug delivery to the pancreatic β-Cell.</a> ACS Appl Bio Mater. 7 (10), 6451-6466 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>14 mm cam tabanlı Petri kabı</td><td>Mattek</td><td>P35G-1.5-14-C</td><td></td></tr><tr><td>1640 RPMI</td><td>Corning</td><td>10-041-CV</td><td></td></tr><tr><td>35 mm Petri kabı</td><td>Celltreat</td><td>229638</td><td></td></tr><tr><td>7 mm cam tabanlı Petri kabı</td><td>Mattek</td><td>P35G-1.5-7-C</td><td></td></tr><tr><td>Annexin V, Alexa Un 488</td><td>Thermo Fisher (Invitrogen)</td><td>A13201</td><td>ex488/em515</td></tr><tr><td>Kalsiyum Klorür Dihidrat</td><td>Fisher</td><td>C79</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil Sülfoksit Susuz</td><td>Sigma</td><td>276855</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu</td><td>Thermo Fisher (Gibco)</td><td>26140079</td><td></td></tr><tr><td>Flouzin-3,</td><td>Thermo Fisher (Invitrogen)</td> <td>F24195</td><td>ex488 / em516</td></tr><tr><td>Floresein Diasetat (FDA)</td> <td>Thermo Fisher (Invitrogen)</td> <td>F1303</td><td>ex488 / em520</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>54457</td><td></td></tr><tr><td>Görüntü işleme yazılımı</td><td>NIH</td><td>ImageJ</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum Klorür</td><td>Sigma</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>NucBlue Live ReadyProbes Reaktifi (Hoechst 33342)</td> <td>Thermo Fisher (Invitrogen)</td> <td>R37605</td><td>ex360 / em460</td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin</td><td>Thermo Fisher (Gibco)</td> <td>15-140-122&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Tuzlu Su Tabletleri</td><td>Fisher</td><td>BP2944-100</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum Klorür, Granül</td><td>Macron</td><td>6858-04</td><td></td></tr><tr><td>Propidium iyodür</td><td>Thermo Fisher (Invitrogen)</td><td>P1304MP</td><td>ex535/em620</td></tr><tr><td>Protein Rekombinant Fare IFN-gama Proteini R</td><td>& D Systems</td><td>485-MI-100 / CF</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant Fare IL-1 beta / IL-1F2 &nbsp;</td><td>Ar-Ge D Systems</td><td>401-ML-100/CF</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant Fare TNF-alfa (aa 80-235) Protein</td><td>R& D Systems</td><td>410-MT-100 / CF</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Klorür, Kristal</td><td>Macron</td><td>7581-12</td><td></td></tr><tr><td>Stellaris Konfokal mikrocope spektral dedektörler</td><td>ile Leica</td><td>DMI-8</td><td>&nbsp; 40x suya daldırma hedefi.</td></tr><tr><td>Yopro-1 İyodür Termo</td><td>Fisher (Canlandırıcı)</td> <td>Y3603</td><td>ex488 / em509</td></tr></tbody></table>

İzole pankreas adacık tedavisi ve apoptoz Ölçümü

Isolated Pancreatic Islet Treatment and Apoptosis Measurement

Sitokinlerle muamele edilen adacıkların canlılığını değerlendirmek için FDA ve PI ile ikili boyama kullanıldı. Tüm deneyler üç nüsha (n = 3) halinde gerçekleştirildi ve veriler, tedavi edilen ve edilmeyen adacıklar arasında tekrarlanabilirlik ve istatistiksel karşılaştırma sağlamak için her biri 5 veya 6 adacıktan ortalama veri içeren 10 μm aralıklı çoklu z-yığını görüntüsünden üretildi. Şekil 1A , FDA'nın enzimatik olarak aktif hücreler tarafından floreseine dönüştürülmesi nedeniyle farklı ...

İzole Pankreas Adacık Tedavisi ve Apoptoz Ölçümü

This study investigates the effect of pro-inflammatory cytokines on pancreatic islets, particularly insulin-producing &#946;-cells, using a combination of ...

isolated-pancreatic-islet-treatment-and-apoptosis-measurement

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

, Yüksek kalite ve insan adacıklar uygun miktarda sağlamak başarılı bir adacık nakli için önemli önkoşullar biridir. Bu video, adım adım tarif insan pankreas adacık izolasyonu (Bölüm II: insan adacıklar arıtma ve kültür) için prosedürleri değiştirilmiş bir otomatik yöntemi kullanarak.

İnsan Pankreas Adacık İzolasyonu: Bölüm II: İnsan Islets saflaştırılması ve Kültür

Araştırma için tip 2 diyabetik adacık kaynağı yetersiz. Burada kısmi pankreatektomi geçiren hastalardan izole adacıklar için protokol paylaşın. Bu yaklaşım, tip 2 diyabetik adacıklar elde etmek için eşsiz bir mekan temsil eder ve temel ve klinik çalışmalar için yeterli sayıda non-diyabetik hastalarda klinik olarak uyumlu.

Kısmen Pancreatectomized hastalar İnsan Islets izolasyonu

Langerhans Adacıkları olarak da adlandırılan pankreas adacıkları, glikoz regülasyonu ve diğer önemli biyolojik işlevler için hormonlar üreten bir endokrin hücre kümesidir. Bu protokol, ekzokrin pankreas dokusunu sindirmek için önce Ampulla of Vater yoluyla kollajenaz perfüze ederek pankreas adacıklarını izole etmek için bir yöntemi ve adacıkları farelerden saflaştırmak için basitleştirilmiş bir yoğunluk gradyan santrifüjünü açıklar.

Kollajenaz Perfüzyonu ile Pankreas Adacıkları İzolasyonu: Pankreas Adacığı Hücrelerini İzole Etmek İçin Enzimatik Bir Yöntem

Langerhans adacıkları izole edilmiş fare kullanılarak in vitro β-hücre fonksiyonu denenmesi diyabet patofizyolojisi ve terapötik çalışmada önemli bir bileşenidir. Çok sayıda alt-uygulama mevcut olmakla birlikte, bu protokol, spesifik olarak β-hücresi fonksiyonunu belirleyen önemli bir parametre olarak hücre içi siklik adenozin monofosfat (cAMP) ölçümünü açıklamaktadır.

Fare Pankreas Adacık İzolasyonu ve hücre içi cAMP Belirlenmesi için Bir Yöntem

diyabet araştırma alanı için kritik zorluklar adacık β-hücre çoğalmasını düzenleyen ve β-hücre yenilenmesini teşvik etmek için yöntemler geliştirmek moleküler mekanizmalarını anlamak için vardır. Burada yüksek içeriği tarama yöntemi belirlemek ve küçük moleküllerin β-hücresi replikasyon teşvik aktivitesi sunulmuştur değerlendirmek.

Bir Yüksek içerik<em&gt; İn Vitro</em&gt; Pankreas Adacık β-hücre çoğaltma Keşif Platformu

Bu protokol, özellikle primer insan Islet örneklerinden Beta hücrelerinde mitofagoy protein kompleksi oluşumunun nicel analizi için bir yöntem özetliyor. Bu teknik, değerli insan pankreatik beta hücre örneklerinde önemli olan sınırlı biyolojik materyalden mitophaginin analizini sağlar.

Yakınlık ligasyon assay kullanarak ınsan pankreatik Beta hücrelerinde situ Içinde endojen Mitophagy kompleksleri görselleştirme

Burada, bir damlacık bazlı mikrofluidik tek hücreli RNA sıralama teknolojisini kullanarak izole insan pankreatik izletden tek hücrelerin yüksek kaliteli, büyük ölçekli transkriptom veri oluşturmak için bir protokol sunuyoruz.

Insan pankreatik Izletinin tek hücreli RNA sıralaması ve Analizi

Bu protokol, adacık izolasyonu ve saflaştırılması için bir domuz pankreasının satın alınması için adım adım bir kılavuz sağlar.

Adacık izolasyonu için domuz pankreasının cerrahi perfüzyonu ve izolasyonu

Burada, olası karışıklıkların azaltılması ile endokrin pankreas fonksiyonunu değerlendirmek için ek bir teknik olarak, sağlam bir pankreas ile fare damar sistemi yoluyla perfüzyon yoluyla glikoz ile uyarılan insülin sekresyonu (GSIS) gerçekleştirme hakkında ayrıntılar sunuyoruz.

Sağlam Bir Pankreas ile Farelerin Damar Sisteminden Perfüzyon Yoluyla Glikozla Uyarılan İnsülin Sekresyonu

Bu protokol, Lewis sıçan pankreas adacıqlarının cerrahi hasamı, enzimatik sindirim ve yoğunluk gradyanlı arındırması için standartlaştırılmış bir yöntemi tanımlar; böylece doğrudan nakil veya in vitro çalışmalarda kullanılmak üzere yüksek verimli, yüksek saflıkta preparatlar sağlanır.

Lewis Farelerinden Pankreas Adacığı İzolyasyonu ve Arındırma, Enzimatik Sindirim ve Yoğunluk-Gradient Ayrımı Kullanılarak

Öğrenin, fare pankreas adacıklarında çoklu floresan boyama ve konfokal mikroskopi kullanarak sitokin kaynaklı β-hücre ölüm mekanizmalarını. Bu yöntem tip 1 diyabet tedavileri için yeni terapötik stratejiler geliştirmeye yardımcı olur.

İzole Pankreas Adacık Tedavisi ve Apoptoz Ölçümü

Daha fazla video keşfet