Name: Mikropsuz Farelere İnsan Dışkı Nakli için Biyodışlama İzoPozitif Kafes Deneyinin Hazırlanması ve Sürdürülmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-28T14:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Keşfedin, mikropsuz farelere insan dışkı nakli için ISO pozitif kafes sistemi kullanarak kanser araştırmalarında mikrobiyomun rolünü inceleyin. Bu yöntem nedensel ilişkileri doğrulamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Park, J. C., Im, S. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+men+in+mice%3A+the+development+and+application+of+a+humanized+gnotobiotic+mouse+model+for+microbiome+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Of men in mice: the development and application of a humanized gnotobiotic mouse model for microbiome therapeutics.</a> Exp Mol Med. 52 (9), 1383-1396 (2020).</li>
<li>Li, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiome+remodelling+leads+to+inhibition+of+intestinal+farnesoid+X+receptor+signalling+and+decreased+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Microbiome remodelling leads to inhibition of intestinal farnesoid X receptor signalling and decreased obesity.</a> Nat Commun. 4, 2384(2013).</li>
<li>Schwabe, R. F., Jobin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microbiome+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">The microbiome and cancer.</a> Nat Rev Cancer. 13 (11), 800-812 (2013).</li>
<li>Wen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+immunity+and+intestinal+microbiota+in+the+development+of+Type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Innate immunity and intestinal microbiota in the development of Type 1 diabetes.</a> Nature. 455 (7216), 1109-1113 (2008).</li>
<li>Gray, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+adaptation+of+human+inflammatory+bowel+diseases+microbiota+enhances+colonization+efficiency+and+alters+microbiome+aggressiveness+depending+on+recipient+colonic+inflammatory+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiome%22%5BJournal%5D)">Mouse adaptation of human inflammatory bowel diseases microbiota enhances colonization efficiency and alters microbiome aggressiveness depending on recipient colonic inflammatory environment.</a> Microbiome. 12 (1), 147(2024).</li>
<li>Gopalakrishnan, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbiome+modulates+response+to+anti-PD-1+immunotherapy+in+melanoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Gut microbiome modulates response to anti-PD-1 immunotherapy in melanoma patients.</a> Science. 359 (6371), 97-103 (2018).</li>
<li>Matson, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+commensal+microbiome+is+associated+with+anti-PD-1+efficacy+in+metastatic+melanoma+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The commensal microbiome is associated with anti-PD-1 efficacy in metastatic melanoma patients.</a> Science. 359 (6371), 104-108 (2018).</li>
<li>Routy, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbiome+influences+efficacy+of+PD-1-based+immunotherapy+against+epithelial+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Gut microbiome influences efficacy of PD-1-based immunotherapy against epithelial tumors.</a> Science. 359 (6371), 91-97 (2018).</li>
<li>Paik, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+for+using+a+hermetically-sealed%2C+positive-pressured+isocage+system+for+studies+involving+germ-free+mice+outside+a+flexible-film+isolator%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">Potential for using a hermetically-sealed, positive-pressured isocage system for studies involving germ-free mice outside a flexible-film isolator.</a> Gut Microbes. 6 (4), 255-265 (2015).</li>
<li>Hecht, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+cage-autonomous+method+for+the+maintenance+of+the+barrier+status+of+germ-free+mice+during+experimentation%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">A simple cage-autonomous method for the maintenance of the barrier status of germ-free mice during experimentation.</a> Lab Anim. 48 (4), 292-297 (2014).</li>
<li>Dremova, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sterility+testing+of+germ-free+mouse+colonies%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Sterility testing of germ-free mouse colonies.</a> Front Immunol. 14, 1275109(2023).</li>
<li>Newsome, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+bacterial+genera+associated+with+therapeutic+response+to+immune+checkpoint+PD-1+blockade+in+a+United+States+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Med%22%5BJournal%5D)">Interaction of bacterial genera associated with therapeutic response to immune checkpoint PD-1 blockade in a United States cohort.</a> Genome Med. 14 (1), 35(2022).</li>
<li>Le Roy, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+evaluation+of+microbiota+engraftment+following+fecal+microbiota+transfer+in+mice+models%3A+age%2C+kinetic+and+microbial+status+matter%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Comparative evaluation of microbiota engraftment following fecal microbiota transfer in mice models: age, kinetic and microbial status matter.</a> Front Microbiol. 9, 3289(2018).</li>
<li>Lebeuf, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contaminants+and+where+to+find+them%3A+microbiological+quality+control+in+axenic+animal+facilities%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Contaminants and where to find them: microbiological quality control in axenic animal facilities.</a> Front Microbiol. 12, (2021).</li>
<li>He, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Campylobacter+jejuni+promotes+colorectal+tumorigenesis+through+the+action+of+cytolethal+distending+toxin%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Campylobacter jejuni promotes colorectal tumorigenesis through the action of cytolethal distending toxin.</a> Gut. 68 (2), 289-300 (2019).</li>
<li>Wu, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linking+long-term+dietary+patterns+with+gut+microbial+enterotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Linking long-term dietary patterns with gut microbial enterotypes.</a> Science. 334 (6052), 105-108 (2011).</li>
<li>Ross, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interplay+between+diet+and+the+gut+microbiome%3A+implications+for+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The interplay between diet and the gut microbiome: implications for health and disease.</a> Nat Rev Microbiol. 22 (11), 671-686 (2024).</li>
<li>Maier, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extensive+impact+of+non-antibiotic+drugs+on+human+gut+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Extensive impact of non-antibiotic drugs on human gut bacteria.</a> Nature. 555 (7698), 623-628 (2018).</li>
<li>Walter, J., Armet, A. M., Finlay, B. B., Shanahan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+or+exaggerating+causality+for+the+gut+microbiome%3A+Lessons+from+human+microbiota-associated+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Establishing or exaggerating causality for the gut microbiome: Lessons from human microbiota-associated rodents.</a> Cell. 180 (2), 221-232 (2020).</li>
<li>Berland, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+engraftment+capacity+of+frozen+ready-to-use+human+fecal+microbiota+transplants+assessed+in+germ-free+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">High engraftment capacity of frozen ready-to-use human fecal microbiota transplants assessed in germ-free mice.</a> Sci Rep. 11 (1), 4365(2021).</li>
<li>Choo, J. M., Rogers, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+murine+gut+microbiota+in+gnotobiotic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Establishment of murine gut microbiota in gnotobiotic mice.</a> iScience. 24 (2), 102049(2021).</li>
<li>Bokoliya, S. C., Dorsett, Y., Panier, H., Zhou, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procedures+for+fecal+microbiota+transplantation+in+murine+microbiome+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Procedures for fecal microbiota transplantation in murine microbiome studies.</a> Front Cell Infect Microbiol. 11, 711055(2021).</li>
<li>Li, Y., Cao, W., Gao, N. L., Zhao, X. -M., Chen, W. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consistent+alterations+of+human+fecal+microbes+after+transplantation+into+germ-free+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Genomics+Proteomics+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">Consistent alterations of human fecal microbes after transplantation into germ-free mice.</a> Genomics Proteomics Bioinformatics. 20 (2), 382-393 (2022).</li>
<li>Turnbaugh, P. J., Ridaura, V. K., Faith, J. J., Rey, F. E., Knight, R., Gordon, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+diet+on+the+human+gut+microbiome%3A+a+metagenomic+analysis+in+humanized+gnotobiotic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">The effect of diet on the human gut microbiome: a metagenomic analysis in humanized gnotobiotic mice.</a> Sci Transl Med. 1 (6), 6ra14(2009).</li>
<li>Staley, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+engraftment+of+human+microbiota+into+mice+with+a+single+oral+gavage+following+antibiotic+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiome%22%5BJournal%5D)">Stable engraftment of human microbiota into mice with a single oral gavage following antibiotic conditioning.</a> Microbiome. 5 (1), 87(2017).</li>
<li>Lebeuf, M., Turgeon, N., Faubert, C., Robillard, J., Paradis, É, Duchaine, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Managing+the+bacterial+contamination+risk+in+an+axenic+mice+animal+facility%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Managing the bacterial contamination risk in an axenic mice animal facility.</a> Can J Microbiol. 67 (9), 657-666 (2021).</li>
<li>Basic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+and+contamination+incidence+of+gnotobiotic+experiments+performed+in+microisolator+cages%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Monitoring and contamination incidence of gnotobiotic experiments performed in microisolator cages.</a> Int J Med Microbiol. 311 (3), 151482(2021).</li>
<li>Amorim, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Refining+a+protocol+for+faecal+microbiota+engraftment+in+animal+models+after+successful+antibiotic-induced+gut+decontamination%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Med%22%5BJournal%5D)">Refining a protocol for faecal microbiota engraftment in animal models after successful antibiotic-induced gut decontamination.</a> Front Med. 9, 770017(2022).</li>
</ol>

Mikropsuz fareler, mikrobiyom araştırmacılarının repertuarında önemli bir araçtır ve mikrobiyotanın konakçı sağlığı ve hastalık durumlarındaki katkısını incelemeye izin verir. Mikropsuz fareler tamamen steril doğarlar ve tüm yaşamları boyunca aksenik kalırlar1. Mikropsuz farelerin spesifik bakteri suşları ile kolonizasyonu, bu taksonlar ile metabolik, bağışıklık veya diğer konakçı fonksiyonları arasında nedensel çalışmalara olanak tanır 2,3,4,5. Özellikle avantajlı olan, insan donörlerinden elde edilen dışkıları naklederek mikropsuz fareleri mikrobiyota düzeyinde "insanlaştırma" ve bariyer koşullarında barındırıldığında murin kaynaklı mikroorganizmalardan kontaminasyonu önleme yeteneğidir1. Bu yaklaşım, mikrobiyom alanında birçok önemli keşfi mümkün kılmıştır, örneğin, insan bağırsak mikrobiyomunun kanser immünoterapi yanıtıüzerindeki etkisi 6,7,8.
Bununla birlikte, insanlaştırılmış mikropsuz fareler, mikrobiyom alanındaki araştırma çabaları için paha biçilmez olsa da, bu yaklaşımın daha geniş adaptasyonunu engelleyen birçok sınırlama vardır. Mikropsuz fareler, yarı sert veya esnek film büyük izolatörlerde yetiştirilir ve korunur, ancak işlevsel deneyler, birkaç kafesi barındıran ancak yalnızca bir deney koşulu altında olan bir mini izolatör ile ayrı mini izolatörlerin kurulmasını gerektirir. Bu mini izolatör yaklaşımı, bir deneyde araştırılabilecek deney koşullarının sayısını ve paralel olarak çalıştırılabilecek deney sayısını ciddi şekilde sınırlarken, alan ayak izini ve maliyetini artırır. Umut verici bir çözüm, ISOcage P Biyodışlama Sistemi (burada izokafes sistemi olarak anılacaktır) adı verilen bireysel, modüler bir kafes sistemi kullanmaktır9,10. İzokafes sistemi, mikropsuz farelerin bireysel, hava geçirmez şekilde kapatılmış, pozitif basınçlı izolatör kafeslerinde deneysel olarak manipüle edilmesine izin vererek, her bir mini izolatör yerine her kafes arasında ayrı deneysel koşullar sağlar. Uygun aseptik teknikle, hayvanlar mikropsuz koşullar altında 12 haftaya kadar izokafeslerde barındırılabilir veya herhangi bir uyumlu deneysel yaklaşımda kullanılmak üzere insan dışkı nakli ile insanlaştırılabilir (yani, aseptik koşullar altında gerçekleştirilebilir). İzokafes sistemi kullanılarak birden fazla bağımsız deney paralel olarak yürütülebilir ve alan ayak izi ve maliyeti, mini izolatörler arasında birden fazla deney yapmaktan önemli ölçüde daha düşüktür.
Mikropsuz farelerin esnek film ıslah izolatörlerinde yetiştirilmesinin amacı, aksenik durumu dikkatli bir şekilde korumaktır11. Mikropsuz durumu izlemek için kullanılan teknikler arasında, fare vücut yüzeylerinin ve ağız boşluklarının rutin sürüntülerinin yanı sıra, PCR bazlı ticari tahlillerle hem kültürlenen hem de test edilen dışkı örneklerinin aseptik toplanması yer alır. Bu numunelerin bakteriyel, serolojik ve mantar testlerinin tümü, mikropsuz durumu belirlemek için gereklidir11. Mikropsuz fareler, deneysel kullanım için üreme izolatörlerinden izokafeslere aktarıldığında, fareler sürüntü alınır ve transfer sırasında mikropsuz durumlarını doğrulamak için test edilir. İzokafes sterilite kontrolleri, daha sonra bakteriyel, viral ve fungal kontaminantların tespiti için kültürlenen dışkı örneklerinin aseptik olarak toplanması yoluyla gerçekleştirilir. Bu sterilite kontrollerinin sonuçlarının doğumdan deneysel bir protokolün sonuna kadar dikkatli bir şekilde toplanması ve kaydedilmesi, bu farelerin mikropsuz durumunu doğrulamak için gereklidir.
İzokafes sistemi, ayrı ayrı kafeslerden (Şekil 1), üreme izolatörlerinden taşınmak üzere transfer disklerinden (Şekil 1) ve kafesleri barındıran izokafes rafından (Şekil 2) oluşur. Her izokafes, besleme havası girişine monte edilmiş kafes düzeyinde yüksek verimli partikül hava (HEPA) filtresi ve kapatıldığında hava geçirmez bir sızdırmazlık sağlayan ve kafese hava yoluyla hiçbir kirletici maddenin girmemesini sağlayan bir silikon conta içerir (Şekil 1A). Bu kafes kapağı, sterilize edilmiş bir biyogüvenlik kabini içinde baş aşağı yerleştirildiğinde steril bir çalışma yüzeyi olarak kullanılabilir (Şekil 1A). Kafes içindeki bir tel ızgara yiyecek ve su şişesini tutar (Şekil 1B). Kafes içinde otoklavlanmış forsepsler, iç kafes yüzeyleri ile temas gerektiren tüm manipülasyonlar için kullanılır. Kafesin kendisinde, dışarıdaki hayvanları tanımlamak için çıkarılabilir bir kafes kartı tutucusu için çentikler ve izokafes rafına kenetlenen hava girişi ve dışa aktarma nozulları bulunur (Şekil 1C-E). Güvenli kapatma kelepçeleri ve kapaktaki bir tırnak kilidi, raf sistemine yeniden yerleştirilmeye hazır olduğunda kafesi kapatır (Şekil 1F). Önerilen yatak takımı Alpha-dri'dir ve otoklavlanabilir bir zenginleştirme kulübesi de önerilir (Şekil 1F). Transfer diskleri, mikropsuz fareleri üreme izolatörlerinden izokafeslere taşımak için kullanılır ve hayvanların manipülasyonuna izin vermek için üçgen bir açıklığa sahip dönebilen bir bölme kapağı içerir (Şekil 1G-H). Diskler, her ikisi de sekiz fare kapasitesine sahip küçük (21,6 cm çap) ve büyük (28 cm çap) boyutlarda gelir. Otoklavlanmış bant, sterilant ile ıslatılmadan ve sterilantla ıslatılmış bir torbada taşınmadan önce gerçekleştirilen diskin çevresi ve hava delikleri üzerinde hava geçirmez contalar oluşturmak için kullanılır (Şekil 1I). Raf sisteminin kendisi, sistemin dahil olan özellikleri olan hava üfleyicileri, raf düzeyinde HEPA filtre durumunu ve raf için acil durum pil gücünü izlemek için bir ekrana sahiptir (Şekil 2A). Kapalı bir Magnehelic göstergesi, kafes sistemi tarafından sağlanan pozitif basıncı gösterir ve otomatik bir görsel yanaşma göstergesi, kafeslerin kenetlenme durumunu gösterir (sarı sekme çıkışı, kafesin yerleştirilmediği veya yerleştirmenin başarısız olduğu anlamına gelir) (Şekil 2B-D). İzokafeslerin manipülasyonu için de gerekli olan standart sertifikalı bir biyogüvenlik kabinidir.
Burada sunulan protokol, mikropsuz farelerin aseptik koşullar altında üreme izolatörlerinden izokafeslere başarılı bir şekilde aktarılması için uygun yöntemleri açıklarken, mikropsuz durumu korurken, mikropsuz farelerin insan donörü dışkı bulamacı ile insanlaştırılması ve izokafeste barındırılan farelerden dışkı toplanması ya mikropsuz durumun doğrulanması ya da daha ileri fonksiyonel çalışmalar için canlılığın korunması için. Bu örnekte, mikropsuz fareler, akciğer kanseri için immünoterapi ile tedavi edilen insan deneklerden toplanan dışkı örnekleri ile insanlaştırılır ve tedaviye yanıt veren veya yanıt vermeyen olarak ikiye ayrılır. Bu durumda, immünoterapi yanıtına yanıt fenotipi, bağırsak mikrobiyotası hümanizasyonu ile alıcı farelere aktarıldı, bu fareler daha sonra tümör hücreleri ile daha fazla aşılanabilir ve immünoterapi ile tedavi edilebilir. İnsan dışkı bulamaç protokolü, herhangi bir insan donör dışkısına veya araştırmacının istediği herhangi bir hastalık preklinik modeline kolayca uyarlanabilir. Bu protokolü kullanarak, herhangi bir insan dışkı donör mikrobiyotasını mikropsuz konakçıya aktarmak mümkündür, bu da mikrobiyotanın sağlık ve hastalıktaki rolünün daha fazla araştırılmasını sağlar.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68029/68029fig01.jpg"> 
Şekil 1: İzokafes ve transfer disklerinin şematik diyagramı. (A) Kafes kapağının alt tarafının yukarıdan aşağıya görünümü, dahili kafes seviyesi HEPA filtresinin ve silikon conta contasının konumunu gösteren etiketlerle birlikte. (B) Kafesin iç kısmının yukarıdan aşağıya görünümü, tel çubuk kapağını, iç su şişesini ve musluğu ve otoklavlanabilir yemeği tutmak için tel raftaki konumu gösteren etiketlerle. (C) Kafes kartı sahibi için çentikler gösteren kafesin önden görünümü. (D) HEPA filtresinin hava giriş ağzına nasıl takıldığını gösteren, kapağı üstte olan dolu bir kafesin yukarıdan aşağıya görünümü. (E). İzokafes raf sistemine kenetlenen hava girişi ve dışa aktarma nozullarını gösteren kafesin arkadan görünümü. (F) Kapağı üstte olan dolu bir kafesin yandan görünümü, açık konumda güvenli kapatma kelepçelerini gösteren etiketler, her bir kelepçede onları yerine kilitleyen beyaz tırnaklar bulunur. Kafesin iç kısmı, altta katmanlı Alpha-dri yatak takımını ve yatak takımına yerleştirilmiş önerilen zenginleştirme kulübesini gösterir. (G) Üstte kapaklı transfer disklerinin yukarıdan aşağıya görünümü. (H) Hayvanların manipülasyonuna izin vermek için üçgen bir açıklığa sahip dönebilir bölme kapağını gösteren, transfer diskinin iç kısmının yukarıdan aşağıya görünümü. (I) Üreme izolatöründen izokafeye transfer sırasında hava geçirmez bir sızdırmazlık oluşturan otoklavlanmış bandın yerleştirilmesini gösteren tamamen monte edilmiş transfer diskinin yandan görünümü. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68029/68029fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68029/68029fig02.jpg"> 
Şekil 2: İzokafes raf sisteminin şematik diyagramı. (A) Kafesler yerleştirilmiş ve hava üfleyici durumu, HEPA filtre durumu ve acil durum bataryası için izleme ekranını gösteren bir etiket ile komple izokafes rafı. Rafın sol alt tarafında, raf düzeyinde HEPA filtresi yuvası bulunur. (B) Raf tarafından sağlanan pozitif basıncı gösteren kapalı Magnehelic göstergesi. (C) Raf ile hava nozulları arasında başarılı bir bağlantı olduğunu gösteren, görünür sarı yanaşma göstergesi olmayan kenetlenmiş bir izokafes. (D) Rafta, rafın yerinde olmadığını ve hava nozullarının bir izokafes ile bağlantısı olmadığını gösteren görünür bir otomatik kenetlenme göstergesi ile boş bir yuva. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68029/68029fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

<table><tbody><tr><td>1 mL BD Slip Tip Şırınga steril, tek kullanımlık</td><td>Fisher Scientific</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>2.0 mL Vidalı Kapaklı Tüp, NonKnurl, Etekli, Doğal, E-Beam Steril tüp, ekli kapaklı</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-755-228</td><td></td></tr><tr><td>36 x 32 x 48 "3 Mil Körüklü Poli Çanta</td><td>Uline</td><td>S-13455</td><td></td></tr><tr><td>5 galonluk Exspor klor dioksit sterilant aktivatörü tankı&nbsp;</td><td>Ecolab</td><td>6301680</td><td></td></tr><tr><td>5 galonluk Exspor klor dioksit sterilant taban tankı&nbsp;</td><td>Ecolab</td><td>6301194</td><td></td></tr><tr><td>600 mL polipropilen beherler</td><td>Fisher Scientific</td><td>S01914</td><td></td></tr><tr><td>ALPHA-dri yatak takımı</td><td>Çoban Özel Kağıtları</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anaerobik oda</td><td>Coy Lab Ürünleri</td><td>B Tipi</td><td></td></tr><tr><td>Biyogüvenlik kabini sınıf 2</td><td>Nuaire</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sertifikalı IsoCage otoklavlanabilir HEPA filtre XT Aşırı Sıcaklık</td><td>Tecniplast</td><td>1245ISOFHXT</td><td></td></tr><tr><td>Şeffaf Lens LPX IQuity İş Güvenliği Gözlükleri&nbsp;</td><td>Fastenal</td><td>922205455</td><td></td></tr><tr><td>DuPont&nbsp; Tyvek&nbsp; Kılıf - 18"</td><td>Uline</td><td>S-13893E</td><td></td></tr><tr><td>DWK Yaşam Bilimleri DURAN 45 mm Push-on Doğal Kauçuk Kapak</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-258-107</td><td>1 L oklav şişeleri için lastik kapak</td></tr><tr><td>Dynalon Quick Mist HDPE Püskürtücü Şişeler</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-438-12B</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbran Polipropilen Dereceli Silindirler</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-007-44</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbran&nbsp; Diseksiyon Künt Uçlu Forseps</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-887</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Anında Sızdırmazlık Sterilizasyon Torbaları</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-812-51</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Düz Geniş Güçlü Uç Genel Uygulama Forseps&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>16-100-107</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand&nbsp; Kurşunsuz Otoklav Bandı</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-901-110</td><td></td></tr><tr><td>Gavage iğnesi, yeniden kullanılabilir paslanmaz çelik. Düz. 22 gauge iğne, uç çapı 1,25 mm, uzunluk 38 mm veya 1,5 inç (doz)</td><td>Braintree Scientific</td><td>N-PK 020</td><td></td></tr><tr><td>H-B Instrument Durac Timer</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-202-015</td><td></td></tr><tr><td>IsoPositive Kafesler ve Raf (yani izokafesler)</td><td>Tecniplast&nbsp; &nbsp;</td><td>ISO30P</td><td>30 kafes (6 w x 5 h), tek taraflı</td></tr><tr><td>Nitril Kimyasallara Dayanıklı Eldiven Boyut S (7), M (8) veya L (9) 18" uzunluğunda, 22 mil, Ansell</td><td>Grainger</td><td>4T426</td><td></td></tr><tr><td>Nitril Muayene Eldivenleri, Orta, Steril Olmayan, Pudrasız</td><td>MedSupply Partners</td><td>KG-1101M</td><td></td></tr><tr><td>Zeytin / Eflatun Bayonet Gaz & Buhar Kartuşları / Partikül Filtresi 2Ct&nbsp;</td><td>&nbsp; Fareler için 3M/Fastenal</td><td>50051138541878</td><td></td></tr><tr><td>Polikarbonat RadDisk Mini 8-75 x 4</td><td>Braintree</td><td>Scientific IRD-P M</td><td></td></tr><tr><td>Polipropilen Kabarık Kapaklar - 24", Mavi</td><td></td><td>Uline S-10480BLU</td><td></td></tr><tr><td>Puritan Cary-Blair Medium, 5 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-029-646</td><td></td></tr><tr><td>S, M ve L Mavi Silikon Çift Modlu Kafa Kayışı Yarım Yüz Maskesi&nbsp;</td><td>&nbsp; 3M/Fastenal</td><td>50051131370826</td><td></td></tr><tr><td>Sgpf Serisi Steril Pudrasız Lateks Eldiven, CT International, Kalınlık = 6,5 mm, Uzunluk = 30,5 cm (12), Eldiven Boyutu = 8,5, Eldiven Rengi = Beyaz</td><td>Fisher Scientific</td><td>18-999-102F</td><td></td></tr><tr><td>Kaymaz Ayakkabı Kılıfı</td><td>Uline</td><td>&nbsp; S-25639</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi Önlük, Havlu, Steril, Büyük, 32/cs</td><td>Thomas Scientific</td><td>KIM 95111</td><td></td></tr><tr><td>Teklad Global %18 protein ekstrüde kemirgen diyeti (sterilize edilebilir)&nbsp;</td><td>Inotiv</td><td>2018SX</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Scientific Nalgene Kapaklı Ağır Hizmet Tipi Dikdörtgen LLDPE Tankı (20 L hacim)</td><td>Thermo Scientific</td><td>14-831-330J</td><td></td></tr><tr><td>VERIFY Çift Tür Bağımsız Biyolojik Göstergeler</td><td>Steris Healthcare</td><td>S3061</td><td></td></tr><tr><td>WypAll L40 1&frasl; 4 Katlı Silecekler</td><td>Uline</td><td>S-8490</td><td></td></tr></tbody></table>

mikropsuz farelere İnsan dışkı nakli için biyodışlama İzopozitif kafes deneyinin hazırlanması ve sürdürülmesi

Preparation and Maintenance of Bioexclusion IsoPositive Cage Experiment for Human Fecal Transplantation into Germ-Free Mice

ICI yanıtlayıcı ve yanıt vermeyen fenotip (daha önce protokolde açıklanmıştır) tarafından toplanan insan dışkı örnekleri, grup başına 3 izokafeste barındırılan karışık cinsiyetli GF-WT farelerine gavaged edildi (n = 1-2 fare / kafes, n = 6 yanıtlayıcı için ve n = 5 yanıt vermeyenler için). Farelerin transferden sonra 1 hafta boyunca alışmalarına izin verildi. Daha sonra bu farelerden dışkı örnekleri toplandı (mikropsuz koşullar). Fareler daha sonra 1 × 107 CFU yanıtlayıcı veya yanıtlayıcı olmayan havuzlanmış i...

Mikropsuz Farelere İnsan Dışkı Nakli için Biyodışlama İzoPozitif Kafes Deneyinin Hazırlanması ve Sürdürülmesi

Germ-free mice are an important investigation tool for understanding the contribution of microorganisms in host health and disease, enabling assessment of ...

preparation-maintenance-bioexclusion-isopositive-cage-experiment-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu video, işlevsel bir insan bağışıklık sistemine ve stabil bir aşılanmış insan benzeri bağırsak mikrobiyomuna sahip çift insanlaştırılmış kemik BLT (kemik iliği, karaciğer ve timus) faresi oluşturma yöntemini gösterir.

Çift İnsanlaştırılmış BLT (Kemik İliği, Karaciğer, Timus) Fare Modeli Oluşturma

Bu video, kolon iltihabı olan interlökin-10 eksikliği olan bir farede dışkı mikrobiyotası nakli prosedürünü göstermektedir. Bağırsaktaki kolonize dışkı mikropları ikincil metabolitleri serbest bırakarak anti-inflamatuar sitokin salınımını ortaya çıkarır ve kolon iltihabını azaltır.

İnterlökin-10 Eksikliği Olan Bir Farede Fekal Mikrobiyota Transplantasyonunun Etkilerinin Değerlendirilmesi

Bağırsak lenfositlerinin kantitatif karakterizasyonuna, bu hücrelerin çeşitli bağırsak ve sistemik hastalıklarda kritik bir rol oynadığının giderek daha fazla tanınması nedeniyle artan bir ilgi vardır. Bu protokolde, sonraki akış sitometrik karakterizasyonu için tek hücreli popülasyonların farklı ince bağırsak bölmelerinden nasıl izole edileceğini açıklıyoruz.

Fare Küçük Bağırsak Lenfositler izolasyonu ve Akım Sitometrisi Karakterizasyonu

Biz fonksiyonel bir insan bağışıklık sistemi ve istikrarlı bir engrafted insan benzeri bağırsak mikrobiyomu özelliği çift insanlaşmış BLT-fareler üretmek için yeni bir yöntem açıklar. Bu protokol mikropsuz fareler veya gnotobiyotik tesisler için gerek kalmadan takip edilebilir.

A Double Humanized BLT-fareler Modeli Kararlı Bir İnsan-Benzeri Gut Mikrobiyom ve İnsan Bağışıklık Sistemi featuring

Genetik duyarlılık, mukozal bağışıklık ve intestinal mikroekolojik ortamın etkileşimi, inflamatuar barsak hastalığının (İBH) patogenezinde rol oynar. Bu çalışmada, IL-10 eksikliği olan farelere fekal mikrobiyota transplantasyonu uygulanmış ve kolonik inflamasyon ve kalp fonksiyonu üzerine etkisi araştırılmıştır.

Fekal Mikrobiyota Transplantasyonunun İnterlökin 10 Eksikliği Olan Fare Modelinde Terapötik Değerlendirmesi

Buradaki amaç, kardiyovasküler hastalıklarda dysbiosis mekanizmalarını araştırmak için bir protokolün ana hatlarını çizmektir. Bu yazıda, murin dışkı örneklerinin aseptik olarak nasıl toplanacağı ve nakledileceği, bağırsakların nasıl izole edileceği ve "Swiss-roll" yönteminin nasıl kullanılacağı, ardından gastrointestinal sistemdeki değişiklikleri sorgulamak için immün boyama teknikleri tartışılmaktadır.

Murin Fekal İzolasyonu ve Mikrobiyota Transplantasyonu

Burada, örnek olarak immünofenotipleme için kan örneklemesini kullanarak "Yabani fareler" için bir tesisin mikrobiyal muhafaza önlemleri de dahil olmak üzere yapısını ve işletme prosedürlerini açıklıyoruz.

Doğal Mikrobiyomlu Laboratuvar Fareleri için Bir Tesisin İşletilmesi ve Biyolojik Muhafaza Prosedürleri: İmmünofenotipleme Prosedürü

Bu protokol, anaerobik koşullar altında karmaşık dışkı topluluklarının sürekli akış kültürü için kullanılacak mini biyoreaktör dizilerinin montajını detaylandırır. Daha fazla analiz için reaktörlerin montajı, aşılanması ve numune alınması yöntemlerini de tartışıyoruz.

Karmaşık dışkı topluluklarının sürekli kültürü için biyoreaktör düzeneği

Bu protokol, pks+ Escherichia coli farelerinin inflamatuar olmayan koşullarda kolonileşmesi için gerekli adımları, ayrıca kolonizasyonun doğrulanması ve dışkıda pks+ E. coli genişlemesinin değerlendirilmesi için invaziv olmayan yöntemleri tanımlar.

Murine pks+ Escherichia coli ile İltihap Olmayan Koşullarda Kolonizasyon

Lyme hastalığı araştırma çalışmaları, genellikle bir süreç genellikle birkaç hafta sürer patojen Borrelia burgdorferi ile enfekte kenelerin nesil gerektirir. Burada saat içinde yapılabilir mikroenjeksiyon tabanlı bir kene enfeksiyonu prosedürü göstermektedir. Ayrıca keneler içinde B. burgdorferi in situ lokalizasyonu için immünofloresan yöntemi göstermektedir.

Hızlı Aktarım ve Lyme Hastalığı Patojenler lokalizasyonu için işaretleyin Gut içinde Yöntemleri

Keşfedin, mikropsuz farelere insan dışkı nakli için ISO pozitif kafes sistemi kullanarak kanser araştırmalarında mikrobiyomun rolünü inceleyin. Bu yöntem nedensel ilişkileri doğrulamaya yardımcı olur.

Mikropsuz Farelere İnsan Dışkı Nakli için Biyodışlama İzoPozitif Kafes Deneyinin Hazırlanması ve Sürdürülmesi

Daha fazla video keşfet