Mikropsuz Farelere İnsan Dışkı Nakli için Biyodışlama İzoPozitif Kafes Deneyinin Hazırlanması ve Sürdürülmesi

Bakteriler ve konakçı arasındaki etkileşimi inceledik ve iç ve dış faktörümüz bu ilişkiyi sağlığı değiştirmek için değiştirdi. Özellikle, bakterilerin kanser gelişimi, ilerlemesi ve terapötiklerindeki rolünü anlamakla ilgileniyoruz. Biz ve diğer mikrobiyom laboratuvarı, istikrarlı ve uzun vadeli mikrobiyal topluluk oluşturmak için dışkı topluluğunu insan denekten bir alıcı murin konakçısına aktarmak için ISO pozitif kafes sistemini kullanıyoruz.

Bu teknoloji, ilgili klinik bakterilerin sağlık ve hastalıktaki rolü hakkında yeni bir keşif yapmamızı sağladı. Birçok prospektif klinik çalışma, spesifik mikroplar ile kanser gelişimi, ilerlemesi ve tedavi yanıtı arasında ilişkiler bulmuştur, ancak korelasyon nedensellik anlamına gelmez. Mikropsuz farelerin insan dışkı örnekleriyle insanlaştırılması, nedensel ilişkinin ilgili kanser modellerinde doğrulanmasını sağlar.

ISO pozitif kafes sistemini kullanarak, insan immünoterapisine yanıt veren, küçük hücreli dışı akciğer kanseri hastalarından elde edilen spesifik bacteroides suşlarının, ortotopik akciğer tümörleri taşıyan farelere yanıt verdiğini gösterdik. Başlamak için, klor dioksit sterilant dunk tankına 10 mendil koyun ve tamamen sabunlandıklarından emin olun. Ardından, dereceli bir silindir kullanarak, büyük bir plastik torbayı en az 100 mililitre klor dioksit sterilantı ile doldurun.

Tüm iç yüzeylerin ıslandığından emin olmak için torbayı sallayın ve bir kenara koyun. Raftan tek bir ISO kafesini çıkarın ve tam sıvı temasını sağlayarak klor dioksit sterilant dunk tankına yerleştirin. Tüm kafes yüzeylerini fırçalamak için ıslatılmış mendil kullanın.

Kafesi ıslattıktan sonra, bir asistanın ıslatılmış plastik torbayı açmasını sağlayın. Kafesi içine yerleştirin ve hemen açıklığı kapatın. Bir sprey şişesi kullanarak, torba açıklığına klor dioksit sterilantı püskürtün.

Tüm kafesler ve malzemeler paketlendikten sonra, kimyasallara dayanıklı eldivenleri klor dioksit sterilantına batırın. Bu esnada ıslatılmış mendilleri biyogüvenlik kabinine alın ve tüm yüzeyleri ıslatın. Korumasız yüzeyler için, mendilleri dokunmadan üzerlerine sıkın.

20 dakika sonra, sterilize edilmiş kimyasallara dayanıklı eldivenler kullanarak, her bir kafesi ve şişeyi sterilize edilmiş biyogüvenlik kabinine taşıyın. Hava geçirmez şekilde kapatılmış ISO kafesini açmak için, kapağın yanlarındaki iki kelepçedeki beyaz tırnakları kaldırın ve kapağın kilidini açmak için her bir kelepçeyi yanlara doğru çekin. Tel rafın üstündeki kafesin içindeki steril forsepsleri kullanarak boş su şişesini çıkarın ve kapağın iç kısmına yerleştirin.

Lastik contayı çıkarın ve doldurmak için şişeye su dökün. Steril forseps kullanarak, nozulu su şişesine yerleştirin ve kapatmak için sıkıca bastırın. Ardından, steril forsepslerle tel ızgarayı kaldırın ve kafesin dibine bir açıklık oluşturmak için birkaç inç geriye kaydırın.

Steril forsepsleri tel ızgara üzerine yerleştirin ve tutamakların kafes yüzeyleriyle temas etmediğinden emin olun. Aktarım diskini aldıktan sonra, asistanın plastik kapağı tutmasını ve kısmen açmasını sağlayın, böylece ıslatılmış yüzey açıkta kalır ancak dokunulmaz. Klor dioksit sterilantına batırılmış kimyasallara dayanıklı eldivenler giyerek, transfer diskini plastik ambalajdan çıkarın ve sterilize edilmiş biyogüvenlik kabininin içindeki düz bir yüzeye yerleştirin.

Aktarım diskini açmak için, disk çevresini kapatan bandı soyun ve ardından kapağı çıkarın. Daha sonra, daha önce tel rafa yerleştirilmiş steril forsepsleri kullanarak, açıklığı aktarılacak fare ile hizalamak için bölme kapağını manipüle edin. Steril forseps kullanarak, farenin kuyruğunun tabanını transfer diski kapağındaki açıklıktan kavrayın, fareyi kaldırın ve tel ızgara ile kafes arasındaki açıklıktan ISO kafesine aktarın.

Tüm fareler aktarıldıktan sonra, tel ızgarayı steril forseps ile değiştirin. Kafes kapağını kaldırın ve tekrar kafesin üzerine yerleştirin. Kafes kapağının her bir kelepçesini yukarı kaldırın ve kafesin yanlarına dikkatlice indirin.

Kafes kapağını güvenli bir şekilde kapatmak için beyaz tırnakları aşağı doğru itin. Şimdi, asistanın yerleştirme alanının her bir nozuluna kafes rafına klor dioksit sterilantı püskürtmesini sağlayın. Kafesi biyogüvenlik kabininden çıkarın ve kafes rafına yerleştirin.

Dawn kimyasallara dayanıklı eldivenler yerine yeni bir steril cerrahi önlük ve steril cerrahi eldivenler giyin. Gavaj iğnelerini hazırlamak için, her bir sterilizasyon poşetini açın ve poşetin içini kuru steril bir dinlenme yüzeyi olarak kullanın. Gavaj iğnesini şırıngaya bağlayın.

Dışkı bulamaç tüpünü açın ve her bir şırınganın içine 200 mikrolitre bulamaç çekin. Forseps kullanarak, fare kuyruğunun tabanını kavrayın ve tel rafın üzerine yerleştirin. Boynunun arkasındaki gevşek cildi sürterek fareyi nazikçe tutun.

Fareyi dik dikey konumda tutarken gavaj iğnesini sokun ve dışkı bulamacını nazikçe enjekte edin. Enjeksiyondan hemen sonra iğneyi çıkarın. Fareyi gözlem için doğrudan sterilize edilmiş kaplardan birine yerleştirin.

Tüm fareler gavajı aldıktan sonra, her fareyi kafes yatağına geri taşımak için forseps kullanın. İnsanlaştırılmış fare dışkı topluluğu yapısı, her üç zaman noktasında da yanıt fenotipleri arasında önemli ölçüde farklıydı. Yanıtlayıcı dışkı kolonize edilmiş fareler, bir ve ikinci haftalar ile iki ve dördüncü haftalar arasında mikrobiyal topluluk yapısında bir fark göstermedi.

Yanıt vermeyen dışkı kolonize fareler, bir ve ikinci haftalar arasında farklı bir mikrobiyal topluluk yapısı gösterirken, iki ve dördüncü haftalar arasında benzer bir yapı gösterdi. İnsan donör aşıları, Blautia, Eubacterium, ruminococcus ve streptococcus'un artan temsilini gösterirken, alıcı farelerde bakterioid, Lachnoclostridium, Marvinbryantia ve Parabecteroides'in nispi bolluğu artmıştır.