Name: Apikal Out İntestinal Organoidlerin Oluşumu ve EdU-Etiketleme Kullanılarak Organoid Proliferasyon Hızının Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T14:57:00.000+00:00
Duration: 5 min 38 s
Description: Keşfedin apikal-out bağırsak organoidleri oluşturma ve EdU etiketleme ile proliferasyon hızını değerlendirme yöntemini. Bu protokol, köpek yetişkin kök hücrelerinden türetilmiş organoidlerde polarite tersini kolaylaştırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459, 262-265 (2009).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BMP+suppresses+Wnt+signaling+via+the+Bcl11b-regulated+NuRD+complex+to+maintain+intestinal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">BMP suppresses Wnt signaling via the Bcl11b-regulated NuRD complex to maintain intestinal stem cells.</a> EMBO J. 43 (23), 6032-6051 (2024).</li>
<li>Gaowa, A., Leangpanich, S., Park, E. J., Kawamoto, E., Shimaoka, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Irisin+promotes+intestinal+epithelial+cell+proliferation+via+Wnt%2F%CE%B2-catenin+and+focal+adhesion+kinase+signaling+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Irisin promotes intestinal epithelial cell proliferation via Wnt/β-catenin and focal adhesion kinase signaling pathways.</a> Sci Rep. 14, 25702(2024).</li>
<li>Basak, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+quiescence+of+Lgr5%2B+stem+cells+in+intestinal+organoids+enables+differentiation+of+hormone-producing+enteroendocrine+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Induced quiescence of Lgr5+ stem cells in intestinal organoids enables differentiation of hormone-producing enteroendocrine cells.</a> Cell Stem Cell. 20 (2), 177-190 (2017).</li>
<li>Ludikhuize, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+define+intestinal+stem+cell+differentiation+downstream+of+a+FOXO%2FNotch+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Mitochondria define intestinal stem cell differentiation downstream of a FOXO/Notch axis.</a> Cell Metab. 32 (5), 889-900.e7 (2020).</li>
<li>Ettayebi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication+of+human+noroviruses+in+stem+cell-derived+human+enteroids%5BTitle%5D)+AND+%22Science+%281979%29%22%5BJournal%5D)">Replication of human noroviruses in stem cell-derived human enteroids.</a> Science (1979). 353 (6306), 1387-1393 (2016).</li>
<li>Zhou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infection+of+bat+and+human+intestinal+organoids+by+SARS-CoV-2%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Infection of bat and human intestinal organoids by SARS-CoV-2.</a> Nat Med. 26 (7), 1077-1083 (2020).</li>
<li>Joo, S. -S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+intestinal+apical-out+organoid+model+for+gut+function+study%5BTitle%5D)+AND+%22Animals%22%5BJournal%5D)">Porcine intestinal apical-out organoid model for gut function study.</a> Animals. 12 (3), 372(2022).</li>
<li>Co, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlling+epithelial+polarity%3A+A+human+enteroid+model+for+host-pathogen+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Controlling epithelial polarity: A human enteroid model for host-pathogen interactions.</a> Cell Rep. 26, 2509-2520.e4 (2019).</li>
<li>Sasaki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+scalable+coculture+system+for+gut+anaerobes+and+human+colon+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Development of a scalable coculture system for gut anaerobes and human colon epithelium.</a> Gastroenterology. 159 (1), 388-390.e5 (2020).</li>
<li>Mayorgas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+strategy+to+study+the+invasive+capability+of+adherent-invasive+escherichia+coli+by+using+human+primary+organoid-derived+epithelial+monolayers%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">A novel strategy to study the invasive capability of adherent-invasive escherichia coli by using human primary organoid-derived epithelial monolayers.</a> Front Immunol. 12, 646906(2021).</li>
<li>Csukovich, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutralising+effects+of+different+antibodies+on+clostridioides+difficile+toxins+TcdA+and+TcdB+in+a+translational+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Neutralising effects of different antibodies on clostridioides difficile toxins TcdA and TcdB in a translational approach.</a> Int J Mol Sci. 24 (4), 3867(2023).</li>
<li>Csukovich, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarity+reversal+of+canine+intestinal+organoids+reduces+proliferation+and+increases+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Prolif%22%5BJournal%5D)">Polarity reversal of canine intestinal organoids reduces proliferation and increases cell death.</a> Cell Prolif. 57 (2), e13544(2023).</li>
<li>Kramer, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+differentiating+and+long-living+intestinal+organoids+reflecting+the+cellular+diversity+of+canine+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Generation of differentiating and long-living intestinal organoids reflecting the cellular diversity of canine intestine.</a> Cells. 9 (4), 822(2020).</li>
<li>Pleguezuelos-Manzano, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+culture+of+human+intestinal+organoids+derived+from+adult+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">Establishment and culture of human intestinal organoids derived from adult stem cells.</a> Curr Protoc Immunol. 130 (1), e106(2020).</li>
<li>Dutta, D., Heo, I., O'Connor, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studying+infection+in+3D+tissue-derived+human+organoid+culture+systems+by+microinjection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Studying infection in 3D tissue-derived human organoid culture systems by microinjection.</a> J Vis Exp. (151), e59610(2019).</li>
<li>Kumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+SLC26A3+expression+and+function+in+intestinal+epithelial+cells+in+response+to+Cryptosporidium+parvum+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Decreased SLC26A3 expression and function in intestinal epithelial cells in response to Cryptosporidium parvum infection.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 317 (6), C1205-C1212 (2019).</li>
<li>Dutta, D., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+culture+systems+to+study+host-pathogen+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Organoid culture systems to study host-pathogen interactions.</a> Curr Opin Immunol. 48, 15-22 (2017).</li>
<li>Csukovich, G., Pratscher, B., Burgener, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+world+of+organoids%3A+Gastrointestinal+disease+modelling+in+the+age+of+3R+and+one+health+with+specific+relevance+to+dogs+and+cats%5BTitle%5D)+AND+%22Animals%22%5BJournal%5D)">The world of organoids: Gastrointestinal disease modelling in the age of 3R and one health with specific relevance to dogs and cats.</a> Animals. 12 (18), 2461(2022).</li>
<li>Han, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creating+a+more+perfect+union%3A+Modeling+intestinal+bacteria-epithelial+interactions+using+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Creating a more perfect union: Modeling intestinal bacteria-epithelial interactions using organoids.</a> Cell Mol Gastroenterol Hepatol. 12 (2), 769-782 (2021).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Next-generation+porcine+intestinal+organoids%3A+an+apical-out+organoid+model+for+swine+enteric+virus+infection+and+immune+response+investigations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Next-generation porcine intestinal organoids: an apical-out organoid model for swine enteric virus infection and immune response investigations.</a> J Virol. 94 (21), e01006-e01020 (2020).</li>
<li>Smith, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+ovine+gastric+and+intestinal+organoids+for+studying+ruminant+host-pathogen+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The development of ovine gastric and intestinal organoids for studying ruminant host-pathogen interactions.</a> Front Cell Infect Microbiol. 11, 733811(2021).</li>
<li>Nash, T. J., Morris, K. M., Mabbott, N. A., Vervelde, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inside-out+chicken+enteroids+with+leukocyte+component+as+a+model+to+study+host-pathogen+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Inside-out chicken enteroids with leukocyte component as a model to study host-pathogen interactions.</a> Commun Biol. 4 (1), 377(2021).</li>
<li>Hanson, K. I., Weiss, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+tissue+response+to+Shiga+toxin+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Intestinal tissue response to Shiga toxin exposure.</a> mBio. 15 (9), e0123224(2024).</li>
<li>Hovhannisyan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infection+of+human+organoids+supports+an+intestinal+niche+for+Chlamydia+trachomatis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Infection of human organoids supports an intestinal niche for Chlamydia trachomatis.</a> PLoS Pathog. 20 (8), e1012144(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>24 kuyucuklu plakalar</td><td>Biologix</td><td>07-6024</td><td></td></tr><tr><td>[Leu15]-Gastrin I insan, &ge; %95 (HPLC)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-9145</td><td></td></tr><tr><td>&micro;-Slide 18 Kuyucuklu Cam Tabanlı</td><td>ibidi</td><td>81817</td><td></td></tr><tr><td>100X Penisilin-Streptomisin takviyesi Media</td><td>Gibco/Thermo</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>A 83-01&nbsp;</td><td>Tocris Bioscience</td><td>2939/10&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Yapışma Durulama Çözeltisi</td><td>StemCell Technologies</td><td>7010</td><td></td></tr><tr><td>arivis Pro&nbsp;</td><td>Zeiss</td><td>Sürüm 4.2.2</td><td></td></tr><tr><td>B27 SerumFree Takviye (50X), sıvı</td><td>Gibco/Thermo</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>Bisbenzimid H 33342 (Hoechst 33342)</td><td>Abcam</td><td>ab145597</td><td></td></tr><tr><td>Sığır Serum Albümini</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7906-100G</td><td></td></tr><tr><td>Görüntüleme için Click-iT EdU Hücre Proliferasyon Kiti, Alexa Fluor 647 boya</td><td>Thermo Scientific</td><td>C10340</td><td></td></tr><tr><td>DMEM-F12</td><td>Gibco/Thermo</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>Geltrex</td><td>Gibco/Thermo</td><td>A1413202</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX Takviyesi&nbsp;</td><td>Gibco/Thermo</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>HEPES Tampon Çözeltisi 1 M, sıvı</td><td>Gibco/Thermo</td><td>15630056</td><td></td></tr><tr><td>İnsan FGF-basic</td><td>PeproTech</td><td>100-18B-100&micro; G</td><td></td></tr><tr><td>İnsan HGF&nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>100-39-100&micro; G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>İnsan IGF-I&nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>100-11-100&micro; G</td><td></td></tr><tr><td>İnsan NOGGIN (Memeli)&nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>120-10C-200&micro; G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>N-Asetil-L-sistein, hücre kültürü test edildi, BioReagent&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9165-5G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Organoid Hasat Çözeltisi</td><td>Thermo</td><td>C10340</td><td></td></tr><tr><td>Triton(TM) X-100, moleküler biyoloji için</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787-250ML</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA (%0,05), fenol kırmızısı</td><td>Gibco/Thermo</td><td>25300054</td><td></td></tr></tbody></table>

apikal out İntestinal organoidlerin oluşumu ve edu-etiketleme kullanılarak organoid proliferasyon hızının değerlendirilmesi

Generation of Apical-Out Intestinal Organoids and Assessment of Organoid Proliferation Rate Using EdU-Labeling

Tripsinizasyondan sonra 3 gün boyunca yetiştirilen organoidler, Şekil 2A'da gösterildiği gibi ideal olarak 50-250 μm arasında olmalıdır. Bundan önemli ölçüde daha büyük olan organoidler, polaritelerini verimli bir şekilde tersine çeviremeyebilir. Daha büyük organoidler de tomurcuklanmaya başlayabilir ve bu organoidlerin de verimli polaritenin tersine çevrilmesiyle ilgili sorunları olabileceğini fark ettik. Bazal ve apikal out organoidler, parlak alan görüntülemede zaten ...

Apikal Out İntestinal Organoidlerin Oluşumu ve EdU-Etiketleme Kullanılarak Organoid Proliferasyon Hızının Değerlendirilmesi

Here, we describe the generation of floating cultures of apical-out intestinal organoids from hydrogel-embedded intestinal organoid cultures. ...

generation-apical-out-intestinal-organoids-assessment-organoid

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Primer fare kolon tümörü organoid kurmak için basit bir yöntem açıklanmıştır. Bu yöntem kolon tümör hücreleri hayatta kalmak ve epitel normal bir kolon yok ise, sınırlı büyüme faktörleri içeren ortamlarda organoids içine büyümeye bu özelliği kullanır.

Birincil Fare Colon Tümörler in vitro organoid Kültür

Burada, hasat korumak ve patojen ilişkili moleküler modelleri (PAMPS) ve Listeria monocytogenes fare ince bağırsak organoids tedavisi için bir protokol da gen ifadesi ve protein için uygun normalizasyon ağırlıklı olarak, tarif edilmektedir.

<em&gt; Ex Vivo</emFare Bağırsak Organoids ve&gt; Kültür ve Desen Tanıma Reseptör Uyarım

Bağırsak organoid kültürler tüm kriptalarının kurulur ve kendini yenileme ve farklılaşma analizi bir hücre özgü biçimde izin vermez. Bu iletişim kuralı sulandırma sıralanmış kök (Lgr5+) açıklar ve neden olmaktadır organoids için onların önceki biyokimyasal ve genetik modifikasyon ve fonksiyonel analiz etkinleştirilirken (Paneth) hücreleri niş.

Fonksiyonel analiz bağırsak kök ve niş hücre Organoid sulandırma tahlil (ORA)

Meme bezi, dış miyoepitelyal ve iç luminal epitel hücrelerinden oluşan çift katmanlı bir yapıdır. Sunulan diferansiyel trippsinizasyon kullanarak organoidler hazırlamak için bir protokoldür. Bu verimli yöntem araştırmacılar ayrı ayrı meme bezi formu ve fonksiyonu rollerini ile ilgili soruları keşfetmek için bu iki hücre türleri işlemek için izin verir.

Diferansiyel Tripsinizasyon a göre Mozaik Meme Organoidlerinin Üretimi

Bu protokol, insan pluripotent hücrelerinin bağırsak organoidlerine farklılaşmasına izin verir. Protokol, hücreleri kesin endoderm, arka bağırsak endodermi ve ardından bağırsak epiteli popülasyonuna farklılaştırarak normal insan gelişimini taklit eder. Bu, protokolü hem bağırsak gelişimini hem de hastalık modelleme uygulamalarını incelemek için uygun hale getirir.

Gelişimsel ve Hastalık Modelleme Uygulamaları için hiPSC Kaynaklı Bağırsak Organoidlerinin Üretilmesi

Burada, bağırsak bariyer fonksiyonunu, geçirgenliğini ve taşınmasını incelemek için insan organoid türevi bağırsak epitel monokatmanlarının hazırlanmasını açıklıyoruz. Organoidler dış uyaranlara karşı orijinal epitel dokusu yanıtını temsil ettiğinden, bu modeller hücre hatlarının genişletilebilirliğinin avantajlarını ve birincil dokunun alaka düzeyini ve karmaşıklığını birleştirir.

Organoid Kaynaklı Epitel Tek Katmanlı: Bağırsak Bariyer Fonksiyonu için Klinik Olarak İlgili Bir In Vitro Model

Burada bağırsak apikal spesifik etkileşimlerin modellenmesine izin veren iki protokol sunuyoruz. Organoid türevli bağırsak monolayerleri ve Hava-Sıvı Arayüzü (ALI) kültürleri, hem aydınlık hem de bazolateral taraflardan erişilebilen iyi ayırt edilmiş epitellerin üretilmesini kolaylaştırırken, polarite ters bağırsak organoidleri apikal yanlarını ortaya çıkarır ve yüksek verim testlerine uygundur.

Bağırsak Organoid Modellerini Kullanarak Apikal Spesifik Etkileşimleri İncelemek için Kültür Yöntemleri

Burada, sıçan bağırsak organoidleri üretmek ve bunları birkaç aşağı akış uygulamasında kullanmak için bir protokol sunuyoruz. Sıçanlar genellikle tercih edilen bir klinik öncesi modeldir ve sağlam bağırsak organoid sistemi, in vivo çalışmalara eşlik edecek bir in vitro sistem ihtiyacını karşılar.

Sıçan Bağırsak Organoidlerinin Üretimi ve Manipülasyonu

Bu çalışma, ince ve kalın bağırsaklardan türetilen 2D tek katmanlı domuz organoidleri oluşturmak için bir protokolün ana hatlarını çizmektedir. Bu tek tabakaların büyümesi, sağlam epitel bütünlüğünü gösteren artan TEER değerleri ile işaretlenir. Ek olarak, bu tek tabakalar, forskolin uygulamasını takiben Ussing odası deneylerinde fizyolojik salgı tepkileri sergiler.

Doğal Bağırsağın Fizyolojik Özelliklerini Yansıtan İki Boyutlu Domuz Bağırsak Organoidleri

Bu protokol ana Lgr5-pozitif yer alan organoid kültür ve Retroviral transdüksiyonun müteakip bir uygulama açıklanmaktadır. Bu in vitro olarak Organotipik bir roman içinde gerçekleştirilebilir fonksiyonel çalışmalar teslim transjenin uyarımlı Cre aşırı ekspresyonunu veya demonte sağlar ve sağlar   model sistem.

İlköğretim Bağırsak organoid Kültür Retrovirütik Enfeksiyon Bir Video Protokolü

Keşfedin apikal-out bağırsak organoidleri oluşturma ve EdU etiketleme ile proliferasyon hızını değerlendirme yöntemini. Bu protokol, köpek yetişkin kök hücrelerinden türetilmiş organoidlerde polarite tersini kolaylaştırır.

Apikal Out İntestinal Organoidlerin Oluşumu ve EdU-Etiketleme Kullanılarak Organoid Proliferasyon Hızının Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet