Name: Memeli embriyolarının vitrifikasyonu için spatula Montevideo cihazı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-06T15:10:00.000+00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: Öğrenin, fare ve koyun pre-implantasyon embriyolarını Spatula Montevideo yöntemiyle vitrifiye etme tekniğini. Bu maliyet etkin protokol, araştırmacılara üreme biyolojisinde yüksek canlılık oranları sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Fare embriyoları elde etmek için kullanılan hayvanlar, ulusal yasa 18.611 ve uluslararası hayvan bakım yönergelerinegöre barındırıldı ve ele alındı 11. Deney protokolü (izin numarası #007-18) Institut Pasteur de Montevideo Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından uygun bir şekilde onaylandı (yazılı izin verildi). Koyun oositleri/embriyoları için deneysel protokoller, Kurumsal Hayvan Bakım Komitesi Fundación IRAUy (protokol #001-2017) tarafından ARRIVE yönergelerine12 uygun olarak onaylanmıştır ve uluslararası hayvan bakımı yönergelerine11 uygun olarak gerçekleştirilmiştir.
1. Vitrifikasyon (Şekil 2)
<ol>
	<li>Spatula MVD hazırlama<ol>
		<li>İlk 10 mm'yi ve uç konisini keserek jel yükleyici ucunu kısaltın ( Malzeme Tablosuna bakın). NOT: Bu, 0.5 mL pipetle son sızdırmazlığı kolaylaştıran daha kısa, düz bir uç oluşturur (bkz. Malzeme Tablosu).</li>
		<li>Jel yükleyici ucunun ucunu saatçinin #5 forsepsiyle ( Malzeme Tablosuna bakın) uçtan yaklaşık 1.0 cm uzakta tutun. Ucu yavaşça bir Bunsen brülörünün alevine yerleştirin ( Malzeme Tablosuna bakın) ve yaklaşık 1 mm2'lik taç yaprağı benzeri bir platform oluşturmak için 8-10 saniye tutun.</li>
		<li>Alevden çıkarın ve forseps ile 5 saniye sıkıca tutun.</li>
		<li>Bir stereomikroskop kullanarak (bkz . Malzeme Tablosu), taç yaprağı benzeri platformun (~ 1 mm2) oluştuğunu ve distal kenarın kapatıldığını kontrol edin. NOT: Vitrifikasyon sırasında LN2 sızmasını önlemek için platform distal uçta kapatılmalıdır. Platformun temiz olduğundan ve plastik iplik içermediğinden emin olun. Çok küçükse veya dişleri varsa, ucu kesin ve işlemi tekrarlayın.</li>
		<li>Gerekli sayıda spatula hazırlamak için 1.1.1-1.1.4 adımlarını tekrarlayın (1 spatula = 40 fare embriyosuna kadar).</li>
		<li>Spatulaları ultraviyole (UV) ışınları veya etilen oksit kullanarak sterilize edin ve steril bir tüp veya kutuda saklayın.</li>
		<li>Vitrifikasyon gününde, spatulaları platformun diğer ucundan tutarak alın. Her spatulaya bir tanımlama çubuğu ( Malzeme Tablosuna bakın) yerleştirin ve bunları stereomikroskop tabanına yerleştirin. Çubuğu kalıcı bir işaretleyici veya sıvı nitrojene dayanıklı etiket etiketi ile etiketleyin. NOT: Spatulaları tutarken daima platforma dokunmaktan kaçının. Komple cihazın toplam uzunluğu (spatula + 0,5 mL saman + tanımlama çubuğu) kadehin uzunluğunun 1 cm'den fazla olmamalıdır.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Vitrifikasyon solüsyonlarının hazırlanması<ol>
		<li>FS çözeltisini hazırlayın: 1.5 g yoğunluk gradyan ortamını (Malzeme Tablosuna bakınız) ve 0.85 g sakarozu (Malzeme Tablosuna bakınız) 5 mL fosfat tamponlu salin (PBS; Malzeme Tablosuna bakınız) içinde çözün. Tamamen eriyene kadar kaynar su banyosunda ısıtın, ardından 0,22 μm'lik bir filtre kullanarak sterilize edin (Malzeme Tablosuna bakınız). NOT: Bu çözelti 4 °C'de 6 aya kadar saklanabilir.</li>
		<li>Ön vitrifikasyon solüsyonunu (PV) hazırlayın: Vitrifikasyon gününde, etilen glikol (Malzeme Tablosuna bakınız), dimetil sülfoksit (Malzeme Tablosuna</li><li></ol></li><li><ol><li> </li><li></li><li><li> </li><li><li> </li><li><li></li></ol></li></ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68176/68176fig02.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68176/68176fig02large.jpg" target="_blank"></a><ol><li><ol><li> </li><li><li></li></ol></li><li><ol><li></ol></li><li> <ol><li></li><li><li><li> </li><li><li></ol></li></ol><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68176/68176fig03.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68176/68176fig03large.jpg" target="_blank"></a>

<ol><li>Crispo, M., Meikle, M. N., Rülicke, T. Cryopreservation of Valuable Mouse and Rat Lines. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCrispo%2C+M+%22Rodent+Quality+Control%3A+Genes+and+Bugs.+Laboratory+Animal+Science+and+Medicine%22">Rodent Quality Control: Genes and Bugs. Laboratory Animal Science and Medicine</a>. , Springer. Cham. (2024).</li>
<li>Lloyd, K., Franklin, C., Lutz, C., Magnuson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproducibility%3A+use+mouse+biobanks+or+lose+them%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Reproducibility: use mouse biobanks or lose them.</a> Nature. 522 (7555), 151-153 (2015).</li>
<li>Hart-Johnson, S., Mankelow, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Archiving+genetically+altered+animals%3A+a+review+of+cryopreservation+and+recovery+methods+for+genome-edited+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Archiving genetically altered animals: a review of cryopreservation and recovery methods for genome-edited animals.</a> Lab Anim. 56 (1), 26-34 (2022).</li>
<li>Shaw, J. M., Jones, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Terminology+associated+with+vitrification+and+other+cryopreservation+procedures+for+oocytes+and+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod+Update%22%5BJournal%5D)">Terminology associated with vitrification and other cryopreservation procedures for oocytes and embryos.</a> Hum Reprod Update. 9 (6), 583-605 (2003).</li>
<li>Arav, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryopreservation+of+oocytes+and+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Cryopreservation of oocytes and embryos.</a> Theriogenology. 81 (1), 96-102 (2014).</li>
<li>dos Santos Neto, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryotolerance+of+Day+2+or+Day+6+in+vitro+produced+ovine+embryos+after+vitrification+by+Cryotop+or+Spatula+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Cryotolerance of Day 2 or Day 6 in vitro produced ovine embryos after vitrification by Cryotop or Spatula methods.</a> Cryobiology. 70 (1), 17-22 (2015).</li>
<li>Renard, J. P., Babinet, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+survival+of+mouse+embryos+after+rapid+freezing+and+thawing+inside+plastic+straws+with+1-2+propanediol+as+cryoprotectant%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Zool%22%5BJournal%5D)">High survival of mouse embryos after rapid freezing and thawing inside plastic straws with 1-2 propanediol as cryoprotectant.</a> J Exp Zool. 230 (3), 443-448 (1984).</li>
<li>Tsang, W. H., Chow, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+embryo+cryopreservation+utilizing+a+novel+high-capacity+vitrification+spatula%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Mouse embryo cryopreservation utilizing a novel high-capacity vitrification spatula.</a> Biotechniques. 46 (7), 550-552 (2009).</li>
<li>Kuwayama, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+vitrification+for+cryopreservation+of+human+oocytes+and+embryos%3A+the+Cryotop+method%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Highly efficient vitrification for cryopreservation of human oocytes and embryos: the Cryotop method.</a> Theriogenology. 67 (1), 73-80 (2007).</li>
<li>Nakao, K., Nakagata, N., Katsuki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+efficient+vitrification+procedure+for+cryopreservation+of+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Anim%22%5BJournal%5D)">Simple and efficient vitrification procedure for cryopreservation of mouse embryos.</a> Exp Anim. 46 (3), 231-234 (1997).</li>
<li>National Research Council. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+for+the+Care+and+Use+of+Laboratory+Animals%22">Guide for the Care and Use of Laboratory Animals</a>. , National Academies Press. Washington, DC. (1996).</li>
<li>du Sert, N. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ARRIVE+guidelines+2.0%3A+Updated+guidelines+for+reporting+animal+research%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">The ARRIVE guidelines 2.0: Updated guidelines for reporting animal research.</a> PLoS Biol. 18 (7), e3000410(2020).</li>
<li>Meikle, M. N., Schlapp, G., Menchaca, A., Crispo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimum+volume+Spatula+MVD+vitrification+method+improves+embryo+survival+compared+to+traditional+slow+freezing%2C+both+for+in+vivo+and+in+vitro+produced+mice+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Minimum volume Spatula MVD vitrification method improves embryo survival compared to traditional slow freezing, both for in vivo and in vitro produced mice embryos.</a> Cryobiology. 84, 77-81 (2018).</li>
<li>Momozawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+vitrification+of+mouse+embryos+using+the+Kitasato+Vitrification+System+as+a+novel+vitrification+device%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Biol+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Efficient vitrification of mouse embryos using the Kitasato Vitrification System as a novel vitrification device.</a> Reprod Biol Endocrinol. 15 (1), 29(2017).</li>
<li>Stringfellow, D. A., Givens, M. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aStringfellow%2C+DA+%22Manual+of+the+International+Embryo+Transfer+Society%3A+A+Procedural+Guide+and+General+Information+for+the+use+of+Embryo+Transfer+Technology+Emphasizing+Sanitary+Procedures%22">Manual of the International Embryo Transfer Society: A Procedural Guide and General Information for the use of Embryo Transfer Technology Emphasizing Sanitary Procedures</a>. , International Embryo Transfer Society. (2010).</li>
<li>Dos Santos-Neto, P. C., Cuadro, F., Barrera, N., Crispo, M., Menchaca, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryo+survival+and+birth+rate+after+minimum+volume+vitrification+or+slow+freezing+of+in+vivo+and+in+vitro+produced+ovine+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Embryo survival and birth rate after minimum volume vitrification or slow freezing of in vivo and in vitro produced ovine embryos.</a> Cryobiology. 78, 8-14 (2017).</li>
<li>Schlapp, G., Meikle, M. N., Pórfido, J. L., Menchaca, A., Crispo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zygote+cryobanking+applied+to+CRISPR%2FCas9+microinjection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Zygote cryobanking applied to CRISPR/Cas9 microinjection in mice.</a> PLoS One. 19 (7), e0306617(2024).</li>
<li>Kamoshita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+of+oocyte%2Fembryo+vitrification+in+mammals+from+rodents+and+large+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Anim+Sci+J%22%5BJournal%5D)">Recent advances of oocyte/embryo vitrification in mammals from rodents and large animals.</a> Anim Sci J. 95 (1), e13931(2024).</li>
<li>Qiu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Equilibrium+vitrification+of+mouse+embryos+using+low+concentrations+of+cryoprotectants%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Equilibrium vitrification of mouse embryos using low concentrations of cryoprotectants.</a> Cryobiology. 98, 127-133 (2021).</li>
<li>Tsang, W. H., Chow, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryopreservation+of+mammalian+embryos%3A+Advancement+of+putting+life+on+hold%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Res+C+Embryo+Today%22%5BJournal%5D)">Cryopreservation of mammalian embryos: Advancement of putting life on hold.</a> Birth Defects Res C Embryo Today. 90 (3), 163-175 (2010).</li>
</ol>

Genetiği değiştirilmiş (GM) hayvan üretiminin etkinliği, endonükleaz bazlı yöntemlerin, özellikle CRISPR/Cas9'un geliştirilmesi nedeniyle önemli ölçüde artmıştır. Dünya çapında birçok laboratuvar, genetik sürüklenmeyi önlemek ve orijinal fenotip1'in bütünlüğünü korumak için dondurularak saklanması gereken çeşitli GM fare ve sıçan hatları üretir. Ek olarak, arşivleme, genellikle aşırı hayvan sayısıyla sonuçlanan sürekli üreme ihtiyacını ortadan kaldırır. Bazı laboratuvarlar, GM fare hatlarını dondurularak saklanmış embriyolar veya spermler olarak uluslararası depolara göndererek, canlı hayvanların taşınmasını önlerken bu modellerin değişimini kolaylaştırır. Bu, aynı GM hayvan modellerinin tekrar tekrar üretilmesi olmadan hatlara erişilebilirlik sağlar2. Bu nedenlerden dolayı, embriyo ve sperm kriyoprezervasyonu, herhangi bir GM hayvan tesisinde çok önemlidir. Genel olarak, embriyo kriyoprezervasyonu, GM hatlarının saklanması için tercih edilir, çünkü embriyolar modifikasyonlarla birlikte tam diploid genomu içerir ve embriyo transferi yoluyla kolayca geri kazanılabilir.
Vitrifikasyon, hücreye giren su ile etrafında hücre dışı kristaller oluşturan su arasındaki dengesizlik ile karakterize edilen dengesiz bir süreçtir. Bu yöntem, hücre içi buz kristallerinin oluşumunu önler ve onu yavaş dondurma yönteminden (SLF)3 ayırır (bkz. Şekil 1). Yüksek kriyoprotektan konsantrasyonu ve sıvı nitrojen (LN2) ile doğrudan temas, ultra hızlı soğutmaya (~40 °C/s) olanak tanıyarak numunelerin saniyeler içinde camsı bir duruma ulaşmasını sağlar. Ayrıca, vitrifikasyon yavaş dondurmadan daha hızlı, daha kolay ve daha ucuzdur4. Minimum LN2 gerektirir ve tipik olarak ticari olarak satın alınabilen veya ev yapımı5 olabilen basit ekipman kullanır (bkz. Şekil 1).
Ek olarak, ısınma süreci genellikle hızlı ve tekrarlanabilir. Kriyoprotektan toksisitesini önlemek ve vitreus durumunu korumak için hızlı bir şekilde yapılmalıdır3. Embriyoları dondururken, birçok laboratuvar taşıyıcı cihazın rahatlığını, güvenilirliğini, sağlamlığını, tutma kapasitesini ve maliyetlerini göz önünde bulundurur.
Koyun ve fare embriyolarının rutin dondurularak saklanması için Spatula Montevideo (MVD) cihazı6 kullanılarak minimum hacimli spatula vitrifikasyon yöntemini tercih ediyoruz. Başlangıçta, yavaş dondurma yöntemi7'yi kullandık, ancak hızlı bir şekilde vitrifikasyona geçtik. LN2 dewar için daha basit ve daha az yer kaplayan bir cihaz oluşturmak için, 0,5 mL'lik bir pipetle kapatılmış Spatula MVD'yi geliştirmek için bir kriyotüpe takılı olan Tsang ve Chow'un (2009)8 ev yapımı spatulasını değiştirdik (bkz. Spatula, ucun ince forsepslerle hafifçe eritilerek yaklaşık 1 mm²'lik bir platformun oluşturulduğu ve embriyoları yüklemek için taç yaprağı benzeri bir plaka oluşturduğu bir jel yükleyici uca (Malzeme Tablosuna bakınız) sahiptir. Bu platform, küçük bir vitrifikasyon damlasında 40'a kadar fare embriyosunu barındırabilir. Jel yükleyici ucunun açık ucuna bir tanımlama tapası çubuğu ( Malzeme Tablosuna bakın) yerleştirilmiştir.
Bu yöntemin amacı, embriyoları basit, hızlı ve ucuz bir yöntemle vitrifiye etmektir, ayrıca nitrojen dewarında yer tasarrufu sağlar. Bu sistem uzun yıllardır başarıyla kullanılmaktadır ve özellikle fare embriyolarında mükemmel embriyo sağkalım oranları (~% 97) ve üreme sonuçları sağlamıştır. Spatula MVD laboratuvarda hazırlandığı için ticari cihazlara göre düşük maliyetli bir yöntemdir9. Ayrıca, kriyotüplerin 8,10 kullanımına kıyasla nitrojen dewar'da yerden tasarruf sağlar.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68176/68176fig01.jpg"> 
Şekil 1: Embriyo kriyoprezervasyonu için kullanılan ana iki tekniğin karşılaştırılması. Bu rakam Crispo ve ark.1'in izniyle değiştirilmiştir. BioRender.com yılında oluşturuldu. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68176/68176fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

<table><tbody><tr><td>0.22 &mikro; m filtre&nbsp;</td><td>Sartorius</td><td>16534</td><td>Minisart şırınga filtresi 0.2 &micro; L</td></tr><tr><td>0.5 mL saman&nbsp;</td><td>Mini tüp</td><td>13408/0044</td><td>Fransız tipi orta boy payet</td></tr><tr><td>Aspiratör tüp montajı&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>A5177 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Bunsen brülörü&nbsp;</td><td>Indulab</td><td>7000134</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>D2650 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Etilen glikol&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>102466</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll PM70&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>F2878 Serisi</td><td>Yoğunluk gradyan ortamı</td></tr><tr><td>Jel yükleyici ucu</td><td>Eppendorf&nbsp;</td><td>10411193</td><td></td></tr><tr><td>Cam kılcal damar&nbsp;</td><td>Marienfeld'in</td><td>2900000</td><td>Mikrohematokrit kılcal tüp</td></tr><tr><td>LN2 taşıma için eldivenler&nbsp;</td><td>Sıcaklık kalkanı</td><td>MS0338</td><td>Kriyo Eldivenler</td></tr><tr><td>Taslar</td><td>Mini tüp</td><td>16913/1133</td><td></td></tr><tr><td>LN2 için Gözlükler&nbsp; &nbsp;</td><td>3 milyon</td><td>&nbsp; 40661-00000-10</td><td>Buğu önleyici, çizilmez kaplama</td></tr><tr><td>Sıcak plaka</td><td>Labec</td><td>LA-SH-II-5B</td><td>Dijital model</td></tr><tr><td>Tanımlama çubuğu&nbsp;</td><td>IMV teknolojileri</td><td>6326</td><td>Steril olmayan LG48 mm</td></tr><tr><td>Yalıtımlı strafor kap</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LN2 depolama dewar</td><td>Taylor-Wharton Hakkında</td><td>XT21-Yapay Zeka</td><td>Kriyobilim</td></tr><tr><td>Uzun paslanmaz çelik cımbızlar</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11000-25</td><td></td></tr><tr><td>M2&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>M7167 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>PBS&nbsp;</td><td>Ev yapımı</td><td></td><td>Fosfat Tamponlu salin. Genellikle 1 L konsantre 5x tampon hazırlanır ve daha sonra 1x'e seyreltilir. Yemek tarifi: 40 gr sodyum klorür, 1 gr potasyum klorür, 7,2 gr susuz disodyum fosfat, 1,2 gr monopotasyum fosfat. Damıtılmış su ekleyin ve otoklav ile sterilize edin.</td></tr><tr><td>Plastik Petri kabı&nbsp;</td><td>Doğan</td><td>&nbsp; &nbsp; 351029</td><td>TC ile işlem görmemiş Bakteriyolojik Petri Kabı</td></tr><tr><td>Stereomikroskop&nbsp;</td><td>Olympus</td><td>SZ2-LGB</td><td></td></tr><tr><td>Sukroz&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S1888</td><td></td></tr><tr><td>Saatçi' s #5 forseps&nbsp;</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11254-20</td><td></td></tr></tbody></table>

memeli embriyolarının vitrifikasyonu için spatula montevideo cihazı

Spatula Montevideo Device for the Vitrification of Mammalian Embryos

Memeli embriyolarının vitrifikasyonu için spatula Montevideo cihazı

This study describes an efficient and cost-effective vitrification method for mouse and sheep embryo cryopreservation known as the Spatula Montevideo ...

Genetiği değiştirilmiş fare modelleri oluşturmak ve ardından çizgileri yedek olarak dondurarak saklamak. Bunun için embriyoları vitrifiye etmek için kolay, düşük maliyetli, verimli ve tekrarlanabilir bir yönteme ihtiyacımız var. CRISPR-Cas9'un mikroenjeksiyonu veya elektroporasyonu, vitrifiye edilmiş, ısınma faresi ve çiftlik hayvanı zigotlarında yapılabilir, bu da daha esnek bir programla sonuçlanır ve kullanımdaki hayvanları azaltır.Embriyo vitrifikasyonu, buz kristali oluşumunu önlemek ve hücresel bütünlüğü korumak için ultra hızlı soğutma kullanır. Bu teknik, kriyobiyoloji araştırmalarını ilerleterek embriyo canlılığı, genetik stabilite ve uzun vadeli saklama sonuçları üzerine çalışmalara olanak sağlar. Hem spatula MVD hem de solüsyonlar ev yapımıdır. Spatula 0,5 mililitrelik bir pipetle kapatılmıştır ve sıvı nitrojen Dewar'da minimum yer kaplar.[Eğitmen] Başlamak için, jel yükleyici ucunun ilk 10 milimetresini ve uç konisini kesin. Saatçinin beş numaralı forsepsini kullanarak, jel yükleyici ucunun ucunu uçtan yaklaşık bir santimetre uzakta tutun ve kürek benzeri bir platform oluşturmak için 8 ila 10 saniye boyunca yavaşça Bunsen brülör alevine yerleştirin. Şimdi ucu alevden çı

spatula-montevideo-device-for-the-vitrification-of-mammalian-embryos

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Civciv chorioallantoic membran (CAM), anjiyogenez ve tümörogenez çalışmak için eşsiz bir doğal bağışık yetmezliği olan, destekleyici bir kültür ortamı. Bu video makale piliç farklı adımları gösteriyor.

Civciv Ex ovo Kültür ve Ex ovo CAM Testi: Gerçekten Nasıl Çalışır?

Bu video, lentiviral vektörlerin döllenmiş bir fare embriyosunun perivitellin boşluğuna pronükleer enjeksiyonunu açıklar. Lentivirüs, döllenmiş embriyonun genomuna dahil edilen ve sonunda transgenik farelere yol açan transgeni içerir.

Lentiviral Vektör Bazlı Perivitellin Enjeksiyonu: İlgilenilen Geni Döllenmiş Tek Hücreli Fare Oositlerine Dönüştürmek İçin Bir Yöntem

Utero-Tüp embriyo transferi rahim transferinin gerçekleştirilmesi oluşabilecek embriyo akışını önlemek için bir bariyer olarak utero-tubal kavşak kullanır. Vasektomize erkek embriyo transferi için yalancı alıcıları almaları gerekmektedir. Her iki teknikler tartışılacaktır.

Fare Modelinde utero-tubal Embriyo Transferi ve Vazektomi

Nöral progenitör mitoz nöron kritik bir parametredir. Nöral progenitör mitoz anlayışımızın çok sabit doku analizine dayanmaktadır. Embriyonik beyin dilimleri Canlı görüntüleme, kontrollü bir ortamda, yüksek zamansal ve mekansal çözünürlük ile mitoz değerlendirmek için çok yönlü bir tekniktir.

Gelişmekte Fare Embriyonik Cortex mitoz Canlı Görüntüleme

MicroSecure Vitrifikasyon, FDA iyi üretim ve doku işleme uygulamalarıyla uyumlu, ticari olmayan, aseptik kapalı bir vitrifikasyon cihazı sistemi olarak geliştirilmiştir. Hidrofobik tıkalı embriyo pipetlerinin endüstriden çekilmesi nedeniyle, vitrifikasyon prosedürü, standart iç pamuk tapadan önce bir iç conta içerecek şekilde değiştirildi.

Modifiye MicroSecure Vitrifikasyon: İnsan Blastosistlerinin A, Güvenli Basit ve Etkili Kryoprezervasyon Prosedürü

Destekli üreme teknikleri (ARTs) sonuçları geliştirmek ve ilişkili riskleri azaltmak için sürekli değerlendirme içindedir. Bu yazıda, tavşanların insan üreme açısından ideal bir hayvan modeli olarak kullanımına izin veren, verimli bir ağoprezervasyon protokolüyle minimal invaziv bir embriyo transfer prosedürü açıklanmaktadır.

En düşük Invaziv embriyo transferi ve tavşan modelinde optimum embriyo aşamasında embriyo vitrifikasyon

Burada blastosist büzülme ve re-Genleşme yoğunluğunu previtrification müdahaleler sonrası ısınma kurtarma sırasında takip etmek ve hızlandırılmış xarakteristikaları iletişim kuralı mevcut. Uygulama Protokolü'nün in vitro fertilizasyon Laboratuvarları ile hızlandırılmış mikroskoplar donatılmış mümkündür ve bir en iyi blastosist vitrifikasyon yöntemi gelişiminde önerilir.

Blastosist davranış objektif değerlendirme Vitrifiye ve ısınma adımları sırasında için xarakteristikaları Protokolü

Preimplantasyon Genetik testlerini verimli bir şekilde yürütmek için blastosist biyopsisi ve vitrifikasyon gereklidir. Zona pellucida ve 7-8 troectoderm hücrelerinin alma gün 5-7 Post-döllenme sıralı açılışı gerektiren bir yaklaşım, hem gerekli manipülasyonlar sayısını ve alt optimum çevresel koşullara embriyonun maruz kalma sınırlar.

İnsan blastosist biyopsisi ve vitrifikasyon

Burada, vitrifiye insan blastosistlerinin ısınması, in vitro implantasyon dönemi boyunca ekinde, tek hücrelere sindirilmesi ve daha fazla araştırma için erken trofenlast hücrelerinin toplanması için bir yöntem tanımlıyoruz.

Peri-implantasyon Aşamasında Trophoblast Hücrelerinin Tek Hücre Li Hücre Koleksiyonu İnsan Embriyoları

Burada, IVF gözlem sürecini hızlandırmak, granüloza hücresinin çıkarılması için gereken süreyi azaltmak, dış elementlere oosit maruziyetini en aza indirmek ve embriyo gelişimini engellememek için yumurta alımını takiben kümülüs-oosit komplekslerinin bir kısmının derhal çıkarılması için optimize edilmiş bir yöntem sunuyoruz.

Kümülüs-Oosit Komplekslerinin Hemen Kısmi Uzaklaştırılması: İn Vitro Fertilizasyonun Hızlı Gözlemi İçin Rafine Bir Yaklaşım

Öğrenin, fare ve koyun pre-implantasyon embriyolarını Spatula Montevideo yöntemiyle vitrifiye etme tekniğini. Bu maliyet etkin protokol, araştırmacılara üreme biyolojisinde yüksek canlılık oranları sağlar.

Memeli embriyolarının vitrifikasyonu için spatula Montevideo cihazı

Daha fazla video keşfet