Name: AAV2nin Subaraknoid Enjeksiyonu ile Fare Neokortikal Nöronlarının Yaygın Transdüksiyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T14:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 40 s
Description: Öğrenin fare neokorteksinde subaraknoid AAV2 enjeksiyonu ile yaygın nöronal transdüksiyon yöntemini. Bu teknik, beşinci tabaka piramidal nöronlarda seçici gen ifadesi sağlayarak büyük ölçekli viral dağılımı mümkün kılar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td><güçlü>Ekipman</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 &mikro; L Gaz Geçirmez Şırınga Model 1701 RN (5 uL 75 RN Hamilton mikro şırınga)</td><td>Hamilton Şirketi</td><td>Parça/REF # 7634-01, Hamilton veya cat no. HAM7634-01, Merck</td><td></td></tr><tr><td>33 G RN iğne, sivri uçlu 3</td><td>Hamilton Şirketi</td><td>Parça/REF # 7803-05, Hamilton</td><td></td></tr><tr><td>Binoküler Mikroskop</td><td>Nikon veya Micromed</td><td>MC-4 ZOOM modeli</td><td></td></tr><tr><td>Cerna tabanlı lazer taramalı konfokal mikroskop</td><td>ThorLaboratuvarları</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soğuk ışık kaynağı</td><td>Geri sar</td><td>Ürün Kodu: 76312</td><td></td></tr><tr><td>Leica VT1000 S Titreşimli bıçak mikrotomu</td><td>Leica Biyosistemleri</td><td>76001-014</td><td></td></tr><tr><td>Başlangıç kitli Düşük Akışlı Anestezi Sistemi</td><td>Kent Bilimsel Şirketi</td><td>13-005-111 (Model SomnoSuite)</td><td></td></tr><tr><td>Mekanik Pipet 0.1 &ndash; 2.5 &mikro; L Eppendorf Araştırma artı</td><td>Eppendorf Belediyesi</td><td>3123000012</td><td></td></tr><tr><td>Mekanik Pipet 10 &ndash; 100 &mikro; L Eppendorf Araştırma artı</td><td>Eppendorf Belediyesi</td><td>3123000047</td><td></td></tr><tr><td>Fare Tıraş Makinesi</td><td>Geri sar</td><td>CP-5200 Modeli</td><td></td></tr><tr><td>Matkap uçlu mikro matkap (0,5 mm, yuvarlak)</td><td>Geri sar</td><td>78001, 78040</td><td></td></tr><tr><td>veya Desctop Dijital Stereotaksik Alet, Fare anestezi Maskesi, Fare kulak çubukları (60 Derece)</td><td>Geri sar</td><td>68027, 68665, 68306 Modelleri</td><td></td></tr><tr><td>Hava kompresörü</td><td>Bambi</td><td>BB8</td><td></td></tr><tr><td>Tek Kanallı Manuel Pipet 0.5-10 &micro; L</td><td>YAĞMUR</td><td>17008649</td><td></td></tr><tr><td>Küçük Hayvan Stereotaksik Enstrümanı</td><td>KOPF</td><td>962 Modeli</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaksik Enjektör</td><td>Çalmak</td><td>10-000-004</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Cerrahi Aletler (Aletler)</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>30 G diş iğnesi (Ni-pro)</td><td>Biodent Ltd. Şti.</td><td></td><td>Dura'yı kesmek için</td></tr><tr><td>Kemik kazıyıcı</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>10075-16</td><td></td></tr><tr><td>Kemik pensesi</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>16025-14</td><td>Kafatası kemiğini çıkarmak için</td></tr><tr><td>Kavisli spatula</td><td>Mozhaisk Tıbbi Malzeme Fabrikası</td><td></td><td>Beyni kafatası kasasından çıkarmak için</td></tr><tr><td>Diş frezi</td><td>DRENDEL + ZWEILING</td><td></td><td>Kraniyotomi için; Şekil: armut biçimli/yuvarlak uçlu silindir/yuvarlak; Uç Çapı: 0,55-0,8 mm çap</td></tr><tr><td>İğne tutucu (Halsey Mikro İğne Tutucu)</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>Polipropilen Cerrahi Sütür veya Cerrahi Sütür Vicryl (5-0, emilebilir)</td><td>Walter Ürünleri (Ethicon)</td><td>S139044 (W9442)</td><td></td></tr><tr><td>Neşter bıçaklı neşter sapı (#3) (#11)</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>10003-12, 10011-00</td><td></td></tr><tr><td>Makas (Ekstra Dar Makas)</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>14088-10</td><td>cildi kesmek için</td></tr><tr><td>Makas (İnce Makas)</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>14094-11</td><td>dikişi kesmek için</td></tr><tr><td>Cerrahi sütür PROLENE (Poliproptlen)</td><td>Ethicon (Johnson & Johnson)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cımbız (Forseps #5)</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>Cımbız (Cilalı Inox Forseps)</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11210-20</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Tek kullanımlık</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 mL insülin şırıngası</td><td>SİTE BÖLÜMÜ</td><td></td><td>Vazelin yağını bir mikro şırıngaya yüklemek, ilaç vermek için</td></tr><tr><td>Hücre Kültürü Plakası</td><td>SPL Yaşam Bilimleri</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pamuklu çubuklar</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kapak Camları</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>12-545E</td><td></td></tr><tr><td>İnsülin şırınga iğnesi (27 G)</td><td>SİTE BÖLÜMÜ</td><td></td><td>Debrileri bir delikten çıkarmak için (kraniyotomi)</td></tr><tr><td>Tüy bırakmayan mendiller CLEANWIPER</td><td>Ağ Bağlantısı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop Slaytları</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>Kağıt havlular</td><td>Parlak tarama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>İstatistik Laboratuvarı</td><td>STLPM996</td><td></td></tr><tr><td>Steril Cerrahi Eldivenler</td><td>Dermagrip</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steril Şırınga Filtresi (0.2 &mu; m)</td><td>Corning</td><td>431229</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>İlaçlar/Kimyasallar (Reaktifler)</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>%10 tamponlu formalin veya %4 paraformaldehit</td><td>Thermo Scientific Kimyasallar</td><td>J61899. AK</td><td></td></tr><tr><td>İyotun alkol çözeltisi (%5))</td><td>Yenileme</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Antibiyotik merhem Baneocin (basitrasin + neomisin)</td><td>Sandoz</td><td></td><td>Harici kullanım için antibakteriyel ajan</td></tr><tr><td>Aqua Çoklu Montaj</td><td>Çoklu bilimler</td><td>18606-20</td><td></td></tr><tr><td>Carbomer Göz Jeli Vidisic (Oftalmik jel)</td><td>BAUSCH+LOMB (Santen)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Karboksilatla Modifiye FluoSphere Mikroküreler (kırmızı)</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>F-8801 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Deksametazon (4 mg/mL)</td><td>Ellara (KRKA)</td><td></td><td>Sentetik glukokortikoid</td></tr><tr><td>Damıtılmış H2O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etanol (%70)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fleksoprofen %2,5 (Ketoprofen)</td><td>VİC</td><td></td><td>Steroid Olmayan Antienflamatuar İlaçlar (NSAID'ler)</td></tr><tr><td>Glikoz çözeltisi %5</td><td>Solopharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Keçi anti-Tavşan IgG (H+L) Çapraz Adsorbe Edilmiş, Alexa Fluor 546</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>A-11010</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Karizoo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lidokain çözeltisi (%2 / %4)</td><td>Solopharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Normal Keçi Serumu (NGS)</td><td>Abcam</td><td>AB7481</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Salin (PBS)</td><td>Eko-servis</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tavşan Anti-Parvalbümin Antikoru</td><td>Merck Millipore</td><td>AB15736</td><td></td></tr><tr><td>Tavşan Rekombinant Monoklonal anti-Calbindin antikoru</td><td>Abcam</td><td>AB108404</td><td></td></tr><tr><td>Salin (H2O'da %0,9 NaCl)</td><td>Solopharm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>50-178-1844</td><td></td></tr><tr><td>Vazelin yağı</td><td>Genel</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

aav2'nin subaraknoid enjeksiyonu ile fare neokortikal nöronlarının yaygın transdüksiyonu

Widespread Transduction of Mouse Neocortical Neurons by Subarachnoid Injection of AAV2

Bir pilot deney serisinde, CaMKII promotörü altında EGFP floresan proteini ile kaynaşmış hızlı channelrhodopsin (oChIEF) genini taşıyan AAV2 ile fare neokorteksindeki beşinci katman piramidal nöronları dönüştürmek için geleneksel intrakortikal enjeksiyon yöntemini kullandık. AAV212'nin karakteristik özelliği ile tutarlı olarak, genişliği 1 mm'yi geçmeyen nispeten küçük bir enfeksiyon alanı elde ettik (Şekil 1A). Bununla birlikte, bazı deneylerde, bazı durumla...

AAV2'nin Subaraknoid Enjeksiyonu ile Fare Neokortikal Nöronlarının Yaygın Transdüksiyonu

Recombinant adeno-associated viruses are a flexible and powerful tool for the delivery and expression of various genes of interest in many areas of ...

widespread-transduction-mouse-neocortical-neurons-subarachnoid

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Burada görsel korteks nöronlar ve glia floresan etiketlenmesi için AAV vektörleri intrakranial enjeksiyon sunuyoruz.

Adeno-ilişkili Viral Vektörler İntrakranial Enjeksiyon

Kaynak: Li, D., et al. Yetişkin Farelerde Rekombinant Adeno İlişkili Virüslerin Doğrudan İntratekal Enjeksiyonu. J. Vis. Uzm. (2019)Bu video, adeno-ilişkili virüslerin (AAV) uyanık bir farenin beyin omurilik sıvısına (BOS) intratekal enjeksiyonu için şırınga hazırlığı, omurga hizalaması ve hassas iğne yerleştirmeyi kapsayan prosedürü göstermektedir. Bu yöntem, CNS tedavileri için potansiyelini destekleyerek hedeflenen gen iletimini doğrular.

Merkezi Sinir Sistemi Hastalıklarının Tedavisi için Bir Fare Modelinde Virüslerin İntratekal Verilmesi

Viral vektörler hedefli gen manipülasyonu için izin verir. Bu arka boynuzu içine, bir viral vektör stereotaksik enjeksiyon, birincil somatosensoriyel afferentleri ve merkezi sinir sistemi nöronları arasındaki sinaptik bir temas önemli yer kullanılarak, koşullu gen ekspresyonu ya da fare omurilik ablasyonu için bir yöntem göstermektedir.

Fare Omurilik Koşullu Gen Manipülasyon için bir Viral Vector Stereotaksik Enjeksiyon

Son 15 yılda, köpek adenovirüsü tip 2 (CAV2) türevi vektörler, in vitro ve in vivo hücreleri dönüştürme etkinliklerini kanıtlamıştır ve aşılama ve gen tedavisi için yaygın olarak kullanılmaktadır. Burada, yüksek titreli viral süspansiyonlara yol açan CAV2 vektörlerini oluşturmak, üretmek ve saflaştırmak için bir prosedür açıklıyoruz.

Non Replikatif Kanin adenovirüs tip 2 türetilmiş vektörler üretimi ve saflaştırılması

Burada, adeno-ilişkili virüsün yenidoğan fare beynine intraventriküler enjeksiyonu ile yaygın nöronal transdüksiyon için bir teknik gösteriyoruz.  Bu yöntem, viral olarak verilen transgenlerin yaşam boyu ekspresyonunu elde etmek için hızlı ve kolay bir yol sağlar.

Kalıcı ve yaygın Nöronal İletim için Yenidoğan Fare Beyin intraserooroventriküler Viral Enjeksiyon

Bu video, Thy1-GFP transgenik hattında in vivo iki foton mikroskobu kullanılarak fare retrosplenial korteksindeki nöronların kronik olarak görüntülenmesine izin veren kraniyotomi prosedürünü göstermektedir. Bu yaklaşım, mCherry eksprese eden adeno ilişkili virüsün dorsal hipokampusa enjeksiyonu ile birleştirilir. Bu teknikler, RSC'de deneyime bağlı yapısal plastisitenin uzun süreli izlenmesine izin verir.

Eşzamanlı İki foton<em&gt; İn Vivo</em&gt; Fare Retrosplenial kortekste sinaptik Girişlerin Görüntüleme ve postsinaptik Hedefler

Bu çalışmanın amacı yetişkin farelerde yeni bir subpial gen dağıtım tekniği kullanarak spinal adeno-ilişkili virüs 9 (AAV9) aracılı gen dağıtımının potensi ve güvenliğini geliştirmek ve doğrulamaktı.

Yetişkin Farelerde Subpial Adeno-ilişkili Virüs 9 (AAV9) Vektör Teslimatı

Recombinase bağımlı rekombinant adeno ilişkili virüs (rAAV) kesici enjeksiyon herhangi bir genetik olarak etiketli hücre tipi spinal kord işlemek için kullanılabilir. Burada biz lomber spinal kord dorsal boynuz nöronlarda transduce anlatan. Bu teknik işlenmiş nöron alt türündeki fonksiyonel sorgulama sağlar.

Omurilik genetik olarak tanımlanmış nöronlar Adeno ilişkili virüs-aracılı Transgene ifade

Burada %1 lidokain hidroklorür viral bir çözümde küçük hayvanlar için verimli adeno ilişkili virüs teslim edilmesini sağlamak ve iletim verimliliği merkezi tahmin etmek için bir skorlama sistemi kurmak için bir doğrudan intratekal enjeksiyon tekniği mevcut sinir sistemi geçici zayıflık lidokain tarafından indüklenen derecesine göre.

Rekombinant Adeno ilişkili virüs yetişkin farelerde doğrudan intratekal enjeksiyon

Bu protokol, doğum sonrası yaşlarda yenidoğan sıçanlarda hücrelerin alt popülasyonlarına somatomotor kortekse anterograd kemogenetik modifiye edici ve servikal omuriliğe retrograd taşınabilir bir Cre rekombinaz enjekte ederek gen terapileri uygulamak için yeni bir yöntem göstermektedir.

Yenidoğan Sıçanlarında Kortikospinal Sistemin Kombine Beyin ve Omurga Cerrahisi Kullanılarak Çift Viral Vektörle Hedeflenmesi

Bu protokol, kortikal iskemik inmeyi takiben Neurod1'in viral aracılı ektopik ekspresyonunu tanımlar. Neurod1, (1) inme sonrası subakut faz sırasında (7 gün) vahşi tip farelerde Cre-Flex AAV sistemi kullanılarak ve (2) inme sonrası kronik faz sırasında (21 gün) koşullu raportör farelerde tek bir AAV vektörü kullanılarak verilir.

İskemik İnme Sonrası Subakut ve Kronik Zamanlarda Transdüksiyonlu Hücrelerde Nörod1'in Ektopik Ekspresyonunun Araştırılması için AAV Sistemleri ve Fare Modelleri

Öğrenin fare neokorteksinde subaraknoid AAV2 enjeksiyonu ile yaygın nöronal transdüksiyon yöntemini. Bu teknik, beşinci tabaka piramidal nöronlarda seçici gen ifadesi sağlayarak büyük ölçekli viral dağılımı mümkün kılar.

AAV2'nin Subaraknoid Enjeksiyonu ile Fare Neokortikal Nöronlarının Yaygın Transdüksiyonu

Daha fazla video keşfet