Name: In vivo (İn canlı) Anestezi Uygulanmamış Drosophila Yetişkin Sineklerde Nöral Aktivitenin Görüntülenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-20T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 15 s
Description: Keşfedin anestezisiz canlı görüntüleme yöntemiyle Drosophila yetişkin sineklerde nöral aktiviteyi ve bellek unutma süreçlerini. Bu protokol, kalsiyum görüntüleme ile bellek oluşumunun sinirsel temellerini açıklar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Nakai, J., Ohkura, M., Imoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high+signal-to-noise+Ca2%2B+probe+composed+of+a+single+green+fluorescent+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A high signal-to-noise Ca2+ probe composed of a single green fluorescent protein.</a> Nat Biotechnol. 19 (2), 137-141 (2001).</li>
<li>Chen, T. W., Wardill, T. J., Sun, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasensitive+fluorescent+proteins+for+imaging+neuronal+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ultrasensitive fluorescent proteins for imaging neuronal activity.</a> Nature. 499 (7458), 295-300 (2013).</li>
<li>Tian, L., Hires, S. A., Mao, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+neural+activity+in+worms%2C+flies+and+mice+with+improved+GCaMP+calcium+indicators%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Imaging neural activity in worms, flies and mice with improved GCaMP calcium indicators.</a> Nat Methods. 6 (12), 875-881 (2009).</li>
<li>Akerboom, J., Chen, T. W., Wardill, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+a+GCaMP+calcium+indicator+for+neural+activity+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Optimization of a GCaMP calcium indicator for neural activity imaging.</a> J Neurosci. 32 (40), 13819-13840 (2012).</li>
<li>Zhao, Y., Araki, S., Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+expanded+palette+of+genetically+encoded+Ca2%2B+indicators%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">An expanded palette of genetically encoded Ca2+ indicators.</a> Science. 333 (6051), 1888-1891 (2011).</li>
<li>Sun, F., Zeng, J., Jing, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetically+encoded+fluorescent+sensor+enables+rapid+and+specific+detection+of+dopamine+in+flies%2C+fish%2C+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A genetically encoded fluorescent sensor enables rapid and specific detection of dopamine in flies, fish, and mice.</a> Cell. 174 (2), 481-496 (2018).</li>
<li>Li, Y., Tsien, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((pHTomato%2C+a+red%2C+genetically+encoded+indicator+that+enables+multiplex+interrogation+of+synaptic+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">pHTomato, a red, genetically encoded indicator that enables multiplex interrogation of synaptic activity.</a> Nat Neurosci. 15 (7), 1047-1053 (2012).</li>
<li>Wang, L., Wu, C., Peng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-performance+genetically+encoded+fluorescent+indicator+for+in+vivo+cAMP+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A high-performance genetically encoded fluorescent indicator for in vivo cAMP imaging.</a> Nat Commun. 13 (1), 5363(2022).</li>
<li>Jing, M., Zhang, P., Wang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetically+encoded+fluorescent+acetylcholine+indicator+for+in+vitro+and+in+vivo+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A genetically encoded fluorescent acetylcholine indicator for in vitro and in vivo studies.</a> Nat Biotechnol. 36 (8), 723-737 (2018).</li>
<li>Yu, D., Akalal, D. B. G. B., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+alpha%2Fbeta+mushroom+body+neurons+form+a+branch-specific%2C+long-term+cellular+memory+trace+after+spaced+olfactory+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Drosophila alpha/beta mushroom body neurons form a branch-specific, long-term cellular memory trace after spaced olfactory conditioning.</a> Neuron. 52 (5), 845-855 (2006).</li>
<li>Hige, T., Aso, Y., Modi, M. N., Rubin, G. M., Turner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterosynaptic+plasticity+underlies+aversive+olfactory+learning+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Heterosynaptic plasticity underlies aversive olfactory learning in Drosophila.</a> Neuron. 88 (5), 985-998 (2015).</li>
<li>Berry, J. A., Phan, A., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+neurons+mediate+learning+and+forgetting+through+bidirectional+modulation+of+a+memory+trace%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Dopamine neurons mediate learning and forgetting through bidirectional modulation of a memory trace.</a> Cell Rep. 25 (3), 651-662 (2018).</li>
<li>Cervantes-Sandoval, I., Davis, R. L., Berry, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rac1+impairs+forgetting-induced+cellular+plasticity+in+mushroom+body+output+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rac1 impairs forgetting-induced cellular plasticity in mushroom body output neurons.</a> Front Cell Neurosci. 14, 258(2020).</li>
<li>Martinez-Cervantes, J., Shah, P., Phan, A., Cervantes-Sandoval, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+order+unimodal+olfactory+sensory+preconditioning+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">High order unimodal olfactory sensory preconditioning in Drosophila.</a> Elife. 11, 79107(2022).</li>
<li>Faber, T., Joerges, J., Menzel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associative+learning+modifies+neural+representations+of+odors+in+the+insect+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Associative learning modifies neural representations of odors in the insect brain.</a> Nat Neurosci. 2 (1), 74-78 (1999).</li>
<li>Yu, D., Baird, G. S., Tsien, R. Y., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+calcium+transients+in+Drosophila+mushroom+body+neurons+with+camgaroo+reporters%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Detection of calcium transients in Drosophila mushroom body neurons with camgaroo reporters.</a> J Neurosci. 23 (1), 64-72 (2003).</li>
<li>Yu, D., Keene, A. C., Srivatsan, A., Waddell, S., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+DPM+neurons+form+a+delayed+and+branch-specific+memory+trace+after+olfactory+classical+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Drosophila DPM neurons form a delayed and branch-specific memory trace after olfactory classical conditioning.</a> Cell. 123 (5), 945-957 (2005).</li>
<li>Yu, D., Ponomarev, A., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+representation+of+the+spatial+code+for+odors+after+olfactory+classical+conditioning%3A+Memory+trace+formation+by+synaptic+recruitment%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Altered representation of the spatial code for odors after olfactory classical conditioning: Memory trace formation by synaptic recruitment.</a> Neuron. 42 (3), 437-449 (2004).</li>
<li>Tully, T., Quinn, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Classical+conditioning+and+retention+in+normal+and+mutant+Drosophilamelanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+A%22%5BJournal%5D)">Classical conditioning and retention in normal and mutant Drosophilamelanogaster.</a> J Comp Physiol A. 157 (2), 263-277 (1985).</li>
<li>Quinn, W. G., Harris, W. A., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditioned+behavior+in+Drosophilamelanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Conditioned behavior in Drosophilamelanogaster.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 71 (3), 708-712 (1974).</li>
<li>Quinn, W. G., Dudai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+phases+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Memory phases in Drosophila.</a> Nature. 262 (5569), 576-577 (1976).</li>
<li>Tempel, B. L., Bonini, N., Dawson, D. R., Quinn, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reward+learning+in+normal+and+mutant+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Reward learning in normal and mutant Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 80 (5), 1482-1486 (1983).</li>
<li>Turner, G. C., Bazhenov, M., Laurent, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+representations+by+Drosophila+mushroom+body+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Olfactory representations by Drosophila mushroom body neurons.</a> J Neurophysiol. 99 (2), 734-746 (2008).</li>
<li>de Belle, J. S., Heisenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Associative+odor+learning+in+Drosophila+abolished+by+chemical+ablation+of+mushroom+bodies%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Associative odor learning in Drosophila abolished by chemical ablation of mushroom bodies.</a> Science. 263 (5147), 692-695 (1979).</li>
<li>Schwaerzel, M., Monastirioti, M., Scholz, H., Friggi-Grelin, F., Birman, S., Heisenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+and+octopamine+differentiate+between+aversive+and+appetitive+olfactory+memories+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Dopamine and octopamine differentiate between aversive and appetitive olfactory memories in Drosophila.</a> J Neurosci. 23 (33), 10495-10502 (2003).</li>
<li>Kim, Y. C., Lee, H. G., Han, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((D1+dopamine+receptor+dDA1+is+required+in+the+mushroom+body+neurons+for+aversive+and+appetitive+learning+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">D1 dopamine receptor dDA1 is required in the mushroom body neurons for aversive and appetitive learning in Drosophila.</a> J Neurosci. 27 (29), 7640-7647 (2007).</li>
<li>Riemensperger, T., Völler, T., Stock, P., Buchner, E., Fiala, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Punishment+prediction+by+dopaminergic+neurons+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Punishment prediction by dopaminergic neurons in Drosophila.</a> Curr Biol. 15 (21), 1953-1960 (2005).</li>
<li>Mao, Z., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eight+different+types+of+dopaminergic+neurons+innervate+the+Drosophila+mushroom+body+neuropil%3A+Anatomical+and+physiological+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neural+Circuits%22%5BJournal%5D)">Eight different types of dopaminergic neurons innervate the Drosophila mushroom body neuropil: Anatomical and physiological heterogeneity.</a> Front Neural Circuits. 3 (5), 1-17 (2009).</li>
<li>Liu, C., Plaçais, P. Y., Yamagata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+subset+of+dopamine+neurons+signals+reward+for+odour+memory+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A subset of dopamine neurons signals reward for odour memory in Drosophila.</a> Nature. 488 (7412), 512-516 (2012).</li>
<li>Burke, C. J., Huetteroth, W., Owald, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Layered+reward+signaling+through+octopamine+and+dopamine+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Layered reward signaling through octopamine and dopamine in Drosophila.</a> Nature. 492 (7429), 433-437 (2012).</li>
<li>Tomchik, S. M., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+learning-related+cAMP+signaling+and+stimulus+integration+in+the+Drosophila+olfactory+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Dynamics of learning-related cAMP signaling and stimulus integration in the Drosophila olfactory pathway.</a> Neuron. 64 (4), 510-521 (2009).</li>
<li>Gervasi, N., Tchenio, P., Preat, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKA+dynamics+in+a+Drosophila+learning+center%3A+Coincidence+detection+by+rutabaga+adenylyl+cyclase+and+spatial+regulation+by+dunce+phosphodiesterase%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">PKA dynamics in a Drosophila learning center: Coincidence detection by rutabaga adenylyl cyclase and spatial regulation by dunce phosphodiesterase.</a> Neuron. 65 (4), 516-529 (2010).</li>
<li>Séjourné, J., Plaçais, P. Y., Aso, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mushroom+body+efferent+neurons+responsible+for+aversive+olfactory+memory+retrieval+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mushroom body efferent neurons responsible for aversive olfactory memory retrieval in Drosophila.</a> Nat Neurosci. 14 (7), 903-910 (2011).</li>
<li>Aso, Y., Sitaraman, D., Ichinose, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mushroom+body+output+neurons+encode+valence+and+guide+memory-based+action+selection+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Mushroom body output neurons encode valence and guide memory-based action selection in Drosophila.</a> Elife. 3, 04580(2014).</li>
<li>Pai, T. P., Chen, C. C., Lin, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+ORB+protein+in+two+mushroom+body+output+neurons+is+necessary+for+long-term+memory+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Drosophila ORB protein in two mushroom body output neurons is necessary for long-term memory formation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (19), 7898-7903 (2013).</li>
<li>Owald, D., Felsenberg, J., Talbot, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+defined+mushroom+body+output+neurons+underlies+learned+olfactory+behavior+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Activity of defined mushroom body output neurons underlies learned olfactory behavior in Drosophila.</a> Neuron. 86 (2), 417-427 (2015).</li>
<li>Perisse, E., Owald, D., Barnstedt, O., Talbot, C. B., Huetteroth, W., Waddell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aversive+learning+and+appetitive+motivation+toggle+feed-forward+inhibition+in+the+Drosophila+mushroom+body%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Aversive learning and appetitive motivation toggle feed-forward inhibition in the Drosophila mushroom body.</a> Neuron. 90 (5), 1086-1099 (2016).</li>
<li>Aso, Y., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopaminergic+neurons+write+and+update+memories+with+cell-type-specific+rules%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Dopaminergic neurons write and update memories with cell-type-specific rules.</a> Elife. 5, 16135(2016).</li>
<li>Hige, T., Aso, Y., Rubin, G. M., Turner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasticity-driven+individualization+of+olfactory+coding+in+mushroom+body+output+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Plasticity-driven individualization of olfactory coding in mushroom body output neurons.</a> Nature. 526 (7572), 258-262 (2015).</li>
<li>MacMillan, H. A., Nørgård, M., MacLean, H. J., Overgaard, J., Williams, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+test+of+Drosophila+anaesthetics%3A+Isoflurane+and+sevoflurane+are+benign+alternatives+to+cold+and+CO2%5BTitle%5D)+AND+%22J+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">A critical test of Drosophila anaesthetics: Isoflurane and sevoflurane are benign alternatives to cold and CO2.</a> J Insect Physiol. 101, 97-106 (2017).</li>
<li>Margulies, C., Tully, T., Dubnau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deconstructing+memory+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Deconstructing memory in Drosophila.</a> Curr Biol. 15 (17), R700-R713 (2005).</li>
<li>Amiri, A., Karvandian, K., Ramezani, N., Amiri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short-term+memory+impairment+in+patients+undergoing+general+anesthesia+and+its+contributing+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Saudi+J+Anaesth%22%5BJournal%5D)">Short-term memory impairment in patients undergoing general anesthesia and its contributing factors.</a> Saudi J Anaesth. 14 (4), 454-458 (2020).</li>
<li>Wang, R., Zhang, L., Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+activity+pattern+of+mouse+hippocampal+CA1+and+dentate+gyrus+under+isoflurane+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological activity pattern of mouse hippocampal CA1 and dentate gyrus under isoflurane anesthesia.</a> Front Cell Neurosci. , 18(2024).</li>
<li>Berry, J. A., Cervantes-Sandoval, I., Chakraborty, M., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+facilitates+memory+by+blocking+dopamine+neuron-mediated+forgetting%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Sleep facilitates memory by blocking dopamine neuron-mediated forgetting.</a> Cell. 161, 1656-1667 (2015).</li>
<li>Delestro, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+large-scale+analysis+of+Drosophila+neuronal+calcium+traces+by+automated+tracking+of+single+somata%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">In vivo large-scale analysis of Drosophila neuronal calcium traces by automated tracking of single somata.</a> Sci Rep. 10, 1-15 (2020).</li>
<li>Moore, R. J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FicTrac%3A+A+visual+method+for+tracking+spherical+motion+and+generating+fictive+animal+paths%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">FicTrac: A visual method for tracking spherical motion and generating fictive animal paths.</a> J Neurosci Methods. 225, 106-119 (2014).</li>
<li>Seelig, J. D., Chiappe, M. E., Lott, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+calcium+imaging+from+head-fixed+Drosophila+during+optomotor+walking+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Two-photon calcium imaging from head-fixed Drosophila during optomotor walking behavior.</a> Nat Methods. 7 (7), 535-540 (2010).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.102 mm Platin tel</td><td>Surepure Chemetals</td><td>2690</td><td></td></tr><tr><td>0.25 OD, 0.125 ID, platinle kürlenmiş silikon boru</td><td>VWR</td><td>89068-474</td><td></td></tr><tr><td>0.3 mm ID Silikon boru&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-189-14</td><td></td></tr><tr><td>Muz fişleri</td><td>Hassas</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Marka</td><td>44250</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum Klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>746495</td><td></td></tr><tr><td>Bakır şok ızgarası</td><td>için özel yapılmış</td> DC güç kaynağı Platin direnç için özel yapılmış <td></td><td></td></tr><tr><td>DC güç kaynağı</td><td>Fisher Scientific</td><td>S35740</td><td></td></tr><tr><td>Dremel aleti 3000-1</td><td>Dremel</td><td>3000-N/18</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila melanogaster / ;; uas-tdtom</td><td>BDSC</td><td>36328</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila melanogaster / ; uas-gcamp6f;</td><td>BDSC</td><td>42747</td><td>Bu uas hattı ;; uas-td-tom her iki eki de içeren bir stok oluşturmak için</td></tr><tr><td>Drosophila melanogaster/ ;; MB077C-gal4</td><td>BDSC</td><td>68287</td><td></td></tr><tr><td>Epoksi yapıştırıcı&nbsp;</td><td>Gorilla</td><td>4200102</td><td></td></tr><tr><td>Gaz akış ölçer 1.5 LPM</td><td>Amazon</td><td>B01N0UWZ2T</td><td></td></tr><tr><td>Cam 1 mL serolojik pipet&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-232-9516</td><td></td></tr><tr><td>Cam Kaydıraklar</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>12-550-A3</td><td></td></tr><tr><td>Glikoz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7528</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H4034</td><td></td></tr><tr><td>Hipodermik 12TW ölçer boru</td><td>Mikro grup</td><td>316H12TW</td><td></td></tr><tr><td>Hipodermik 22X ölçer boru</td><td>Mikro grup</td><td>304H22X</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum Klorür Heksahidrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9272</td><td></td></tr><tr><td>Miristik Asit</td><td>Acros Organics</td><td>156961000</td><td></td></tr><tr><td>Neodimyum Mıknatıslar 3X2 mm</td><td>Amazon</td><td>B0CXSQ387M</td><td></td></tr><tr><td>P1000 uçları</td><td>Genesee Scientific&nbsp;</td><td>23-165RL</td><td></td></tr><tr><td>P200 ipuçları</td><td>Genesee Scientific&nbsp;</td><td>23-150RL</td><td></td></tr><tr><td>Pnömatik itme konektörü 6mm OD</td><td>Amazon</td><td>B07ZHG8Y1Y</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum Klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>PTFE boru 6mm OD</td><td>Amazon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tıraş Bıçağı ve nbsp;</td><td>Amazon</td><td>B08LYD6645</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Bikarbonat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Klorür</td><td>Fisher Scientific</td><td>S271-500</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Fosfat Dibazik</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0876</td><td></td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9378</td><td></td></tr><tr><td>Trehaloz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T0167</td><td></td></tr></tbody></table>

in vivo (İn canlı) anestezi uygulanmamış drosophila yetişkin sineklerde nöral aktivitenin görüntülenmesi

In Vivo Imaging of Neural Activity in Unanesthetized Drosophila Adult Flies

Burada, yetişkin Drosophila'nın anestezi olmadan in vivo görüntülemesi, iyi karakterize edilmiş bir Mantar Vücut Çıkışı nöronunda (MBON γ2α'1)12 plastisiteye neden olan caydırıcı koku alma koşullanmasını araştırmak için kullanılır. Kalsiyum indikatörü GCaMP6f2, kırmızı floresan proteini TdTom ile birlikte, dendritleri MB γ ve α' loblarının bölmesini innerve eden ve genetik olarak bölünmüş Gal4 hattı MB077C34 kullanılarak MBON γ2α'1'i hedefleyen bir MB çıkış nöronunda eksprese edilir (Şekil 2A,B).
Caydırıcı koku alma koşullandırması sonrası plastisiteyi gözlemlemek için, sinek, karnı ve bacakları şok ızgarasının ortasına hizalanmış ve koku verme pipeti sineğin antenine doğru bakacak şekilde konfokal mikroskobun altına yerleştirilir. İlk olarak, kalsiyum kokusu tepkileri 5 s'lik bir 4-metil sikloheksanol (MCH) darbesine ve ardından 30 s'lik bir uyaranlar arası aralıkla ayrılmış 5 s'lik bir 3-oktanol (OCT) darbesine kaydedildi. Beş dakika sonra, sinekler, 12, 90 V şoklarla birlikte 1 dakikalık bir OCT (CS+) darbesinin eşzamanlı sunumu ile eğitildi. Bu çağrışımsal koşullandırma programı, sağlam davranışsal caydırıcı bellek üretir. Son olarak, kondisyondan 5 dakika ve 15 dakika sonra, MCH ve OCT'ye kalsiyum yanıtları antrenman öncesi olarak kaydedildi. MBON γ2α'1, koşullandırmadan önce hem MCH hem de OCT'ye kalsiyum geçişleri ile sağlam bir şekilde yanıt verir (Şekil 2D-F). Bununla birlikte, önceki bulgularlaeşleşen 12, 5 dakika sonra CS+'ya (OCT) koşullandırma sonrası kalsiyum yanıtları tamamen baskılanmıştır (Şekil 2D-F). Ek olarak, CS-'ye (MCH) verilen yanıtlar önemli ölçüde güçlendirildi. Eğitimden on beş dakika sonra, CS+'ya kalsiyum yanıtı önemli ölçüde baskılandığı ve CS- güçlendiği için benzer sonuçlar gösterdi. Bu sonuçlar, her iki kokuda gözlenen hafıza izinin en az 15 dakika sürdüğünü göstermektedir (Şekil 2D-F). Bu tepkiler, 5 s'lik nabız sırasındaki ortalama koku tepkisi kullanılarak ölçüldü ve sinek içinde karşılaştırıldı. Koku tepkilerindeki bu değişiklikler, GCaMP6 floresan öncesi ve sonrası caydırıcı eğitimdeki değişikliğin sahte renkli bir temsili ile de görselleştirilebilir (Şekil 2E). Buna karşılık, hazırlık sırasında sineğin uyuşturulması, hem CS + hem de CS-'ye indirgenmiş plastisite gösterir. Anestezi uygulanmış hayvanlarda sadece CS+'ya kısmi depresyon gözlenir, çünkü eğitim sonrası tepkiler hala mevcuttur. Ek olarak, CS- yanıtları eğitimden sonra önemli ölçüde farklı değildir (Şekil 2G, H). Bunu daha iyi gözlemlemek için, indüklenen plastisiteyi CS+/CS- oranı olarak hesapladık ve anestezi uygulanmamış sineklerin anestezi uygulanmış hayvanlara kıyasla önemli ölçüde artmış plastisite gösterdiğini gösterdik (Şekil 2I). Bu temsili sonuçlar, bu protokolün mikroskop altında öğrenme ve hafızayı incelemek için uygun olduğunu ve nöronlardan görüntüleme sırasında sineğin sağlığını uzun süre sağladığını göstermektedir. Bu protokol yeterince çok yönlüdür ve diğer in vivo görüntüleme türlerine ve diğer ilgilenilen nöronlara uygulanabilir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68332/68332fig01.jpg"> 
Şekil 1: Anestezi kullanılmadan Drosophila'nın in vivo görüntüleme hazırlığı. (A) Üst panel: Aspiratör hazırlığında yer alan adımları gösteren diyagram. Alt panel: Sinek konumlandırma sırasında bir mikromanipülatörde tutulan odayı gösteren diyagram. Sineğin hortumu, bir aspiratör kullanılarak 500 mL/dk'da bir vakuma bağlı metal borunun açıklığına yerleştirilir. Hazne daha sonra sineğin üzerine yerleştirilir. (B) Gözlerin ve göğsün kenarları, özel yapım bir platin direnç kullanılarak miristik asit ile yapıştırılır. (C) Sineğin hortumu metal borudan çıkarılır ve hortumun yerine yapıştırılmasına izin vermek için hazne ters çevrilir, böylece kayıtlar sırasında hareket en aza indirilir. (D) Hazne bir cam sürgü tabanına tutturulmuştur. Salinin sızmasını önlemek için odanın üst kısmına, antenleri kaplayan ve arka tarafa bant uygulanır. (E) Kütikül boyunca bileşik gözlerin yakınında iki dikey kesi yapılır, ardından göğüsün yakınındaki kütikül boyunca üçüncü bir kesi yapılır ve beyne bir "pencere" oluşturulur. (F) 100-200 μL arasında salin, kesilen yerde sineğin başına eklenir. (G) Kütikül penceresi, beyni açığa çıkarmak için keskin, ince forseps kullanılarak kaldırılır, çekilir ve çıkarılır. (H) Beyin hücrelerinin mikroskop altında net bir şekilde görüntülenmesini sağlamak için yağ ve trakeal doku çıkarılır. (I) Hazırlanan sinek mikroskobun altına yerleştirilir ve gövdesi şok ızgarasının üzerine hizalanacak şekilde konumlandırılır. (J) MBON γ2α′1'in ifade modelini gösteren sahte renkli görüntü. İlgilenilen bölge, dendritik çardağı çevreleyen kesikli bir çizgi ile özetlenmiştir. Ölçek çubuğu: 50 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/68332fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68332/68332fig02.jpg"> 
Şekil 2: Caydırıcı koku alma koşullanmasını takiben MBON γ2α'1'de öğrenmeye bağlı plastisite. (A) MB077C-splitGal4 sürücüsünün GCaMP'yi ifade eden ifade modeli. Beyinler diseke edildi ve anti-GFP ile boyandı ve anti-nc82 ile karşı boyandı. Ölçek çubuğu: 50 μm. (B) MBON γ2α′1'in hücre gövdesini, uzatma sürecini ve dendritik çardağı vurgulayan sahte renkli görüntüsü. Dendritik bölge, kalsiyum yanıtlarının toplandığı alanı temsil eder. Ölçek çubuğu: 50 μm. (C) Caydırıcı eğitim protokolünün şeması. Sinekler, aralarında 30 s temiz hava ile 5 sn MCH ve OCT darbelerine maruz bırakıldı. 5 dakikalık bir aradan sonra, sinekler OCT'yi on iki adet 90 V elektrik şoku ile ilişkilendirmek için eğitildi. MCH ve OCT'ye kalsiyum yanıtlarının kayıtları antrenmandan 5 dakika ve 15 dakika sonra yapıldı. (D) MCH (üst panel) ve OCT'ye (alt panel) yönelik koku tepkisi izleri, eğitim öncesi ve eğitim sonrası 5 dakika ve 15 dakika sonra gösterilir. Kalın siyah çubuklar koku sunumunun zamanlamasını gösterir. (E) Hem MCH hem de OCT'ye yanıt olarak MBON γ2α'1 antrenman öncesi ve antrenman sonrası 5 dk ve 15 dk sonrası dendritik çardak görüntüleri. CS- (MCH) için floresan güçlenmesi gözlenirken, CS+ (OCT) için floresan kaldırılmıştır. Ölçek çubuğu: 20 μm. (F) MCH'ye ortalama koku tepkisi, antrenmandan 5 dakika ve 15 dakika sonra önemli ölçüde güçlenirken, OCT'ye (CS+) verilen yanıtlar önemli ölçüde bastırılır. Parametrik olmayan Wilcoxon eşleştirilmiş testi, N = 12. (G) Anestezi uygulanmış sinekler için antrenman öncesi ve 5 dakika sonrası MCH (üst panel) ve OCT'ye (alt panel) koku tepkisi izleri gösterilir. Kalın siyah çubuklar koku iletimini gösterir. (H) Anestezi uygulanmış hayvanlarda, MCH'ye ortalama koku tepkileri, eğitim sonrası önemli bir güçlenme göstermez ve OCT'ye verilen yanıtlar, anestezi uygulanmamış hayvanlara kıyasla sadece kısmi baskılanma gösterir. (I) CS+/CS- oranı olarak hesaplanan eğitime bağlı plastisite, anestezi uygulanmadan hazırlananlara kıyasla anestezi uygulanmış sineklerde önemli ölçüde daha düşüktür. Parametrik olmayan Wilcoxon eşleştirilmiş testi, N = 8-12. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/68332fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Dosya 1: Grid_holder (STL). Elektrik şebekesini tutmak için kullanılan özel olarak tasarlanmış bileşenin STL dosyası. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Grid_Holder.stl" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Dosya 2: Grid_holder (OBJ). Elektrik şebekesini tutmak için kullanılan özel olarak tasarlanmış bileşenin OBJ dosyası. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Grid_holder.obj" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Dosya 3: Chamber_LaserCut. Hem erkek hem de dişi sinekler için kayıt odalarının üst bileşenini lazerle kesmek için kullanılan Adobe Illustrator dosyası. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Chamber_laserCut.ai" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Dosya 4: Recording_chamber (STL). Özel olarak tasarlanmış kayıt odasının STL dosyası. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Recording_chamber.stl" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Dosya 5: Recording_chamber (OBJ). Özel olarak tasarlanmış kayıt odasının OBJ dosyası. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Recording_chamber.obj" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Dosya 6: Recording_chamber_animation. Monte edilmiş kayıt odasının animasyonunu gösteren MP4 videosu. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68332/Recordig_chamber_animation.mp4" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

In vivo (İn canlı) Anestezi Uygulanmamış Drosophila Yetişkin Sineklerde Nöral Aktivitenin Görüntülenmesi

In vivo imaging is crucial for studying neurobiology in Drosophila as it allows real-time visualization of neuronal activity, development, and plasticity ...

in-vivo-imaging-neural-activity-unanesthetized-drosophila-adult

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu protokol, bozulmamış anesthetization ve görüntüleme için güvenilir bir yöntem...

Alt hücresel Çözünürlük bozulmamış Drosophila Larva in vivo Görüntüleme

Bu videoda, GCaMP kullanılarak Drosophila nöronlarında in vivo kalsiyum görüntüleme açıklanmaktadır. Öne çıkan protokol klibi, bir koku alma koşullandırma deneyi sırasında mantar vücut nöronlarından GCaMP floresansındaki değişikliklerin nasıl kaydedileceğini gösterir.

Drosophila In Vivo Kalsiyum Görüntüleme: Nöronal Aktivitenin Fonksiyonel Görüntülenmesi İçin Bir Yöntem

Bu videoda, sineklerde sinaptik olarak lokalize kalsiyum sensörleri kullanılarak in vivo kalsiyum görüntüleme yöntemi gösterilmektedir. Sinekleri mikroskopi için hazırlamak, koku alma koşullandırması yapmak ve koku kaynaklı kalsiyum akışını görselleştirmek için adımları ana hatlarıyla belirtir.

In vivo (İn canlı) Drosophila melanogaster'de Sinaptik Lokalize Kalsiyum Sensörleri Kullanılarak Kalsiyum Görüntüleme

Bu protokol, dokunulmamış larva beyin bağlamında canlı hücre görüntüleme yapmak için kullanılan akıcı bir yöntem göstermektedir. Canlı hücre görüntüleme yaklaşımları sürekli daha önce gözardı mekanizmaları ortaya çıkarılması, asimetrik nöral kök hücre bölünmeleri çalışmanın yanı sıra diğer nörolojik ve gelişimsel süreçleri için paha biçilmezdir.

Canlı Görüntüleme<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva nöroblastomun

Burada bir biyolüminesens muhabir kullanarak yaklaşım -imaging bir roman Ca 2 + sunuyoruz. Bu yaklaşım, Ca2 + bağlanan ve hafif uyarılması için ihtiyacı ortadan kaldırarak, ışık yayan bir kaynaşık konstrukt GFP Aequorini kullanır. Anlamlı bu yöntem derin beyin yapıları ve yüksek temporal çözünürlük uzun sürekli görüntüleme, erişime izin verir.

Bioluminescent Kalsiyum Göstergesi GFP-aequorin dayanarak Vivo Fonksiyonel Beyin Görüntüleme Yaklaşım

Burada biz göstermek tek molekül fotoğraf-harekete geçirmek yerelleştirme mikroskobu canlı Drosophila melanogaster motor sinir terminal üzerinde yürütülen olabilir nasıl üçüncü larva biçim.

Vivo Tek molekül Drosophila Presynaptic Motor sinir Terminal izleme

Bu kağıt için ex vivo kalsiyum düşsel Drosophila beyin protokolünü açıklar. Bu yöntemde, doğal veya sentetik bileşikler beyindeki belli nöronlar etkinleştirmek için yeteneklerini test için tampon uygulanabilir.

Ex Vivo Endokrin Drosophila içinde sinyal beyin yanıt-e doğru görüntülenmesi için kalsiyum görüntüleme

Burada drosophila öğrenme ve bellek bağlamında pre-ve/ veya postsinaptik kalsiyum görselleştirilebilen bir protokol sayılmaktadır. Sinapti lokalize kalsiyum sensörleri kullanılarak yapılan in vivo kalsiyum görüntüleme, bu tür bir assosiyatif öğrenmenin altında yatan sinaptik plastisitenin belirlenebileceği klasik koku alma koşullandırma paradigması ile birleştirilir.

Drosophila melanogaster Öğrenme Kaynaklı Sinaptik Plastisite Vivo Optik Kalsiyum Görüntüleme

Davranış sırasında ve uyaranlara yanıt olarak yetişkin Drosophila'nın tüm beynini imgelemek için özel olarak uyarlanmış bir yöntem sunuyoruz. Baş, tüm beyne optik erişime izin vermek için konumlandırılırken, sinek bacaklarını ve antenleri, hortumun ucunu hareket ettirebilir ve gözler duyusal uyaranları alabilir.

Davranış ve Uyaran Yanıtları Sırasında Yetişkin Drosophila melanogaster'ı Tüm Beyin Görüntülemeye Hazırlama

Burada, epileptiform aktiviteleri izlemek için GCaMP6 eksprese eden yetişkin Drosophila'da ex vivo kalsiyum görüntüleme için bir protokol sunuyoruz. Protokol, ex vivo kalsiyum görüntüleme yoluyla yetişkin Drosophila'daki iktal olayları araştırmak için değerli bir araç sağlar ve hücresel seviyelerde epilepsinin potansiyel mekanizmalarının araştırılmasına olanak tanır.

Ex Vivo (Canlı Canlı) Drosophila Epilepsi Modeli için Kalsiyum Görüntüleme

İmmobilizasyon için topikal bir doku yapıştırıcısı kullanarak bir Drosophila larva koku alma nöronu için kalsiyum görüntüleme protokolleri sunuyoruz. Bu yöntem stabiliteyi artırarak güvenilir in-vivo ve ex-vivo deneyleri kolaylaştırır. Özel R komut dosyaları kalsiyum sinyallerini analiz ederek ayrıntılı nörofizyolojik araştırmalar için etkili bir platform sağlar.

Üçüncü Dönem Drosophila melanogaster Larvasında Bir Koku Alma Devresi Nöronunun İn-vivo ve Ex-vivo Kalsiyum Görüntülemesi

Keşfedin anestezisiz canlı görüntüleme yöntemiyle Drosophila yetişkin sineklerde nöral aktiviteyi ve bellek unutma süreçlerini. Bu protokol, kalsiyum görüntüleme ile bellek oluşumunun sinirsel temellerini açıklar.

In vivo (İn canlı) Anestezi Uygulanmamış Drosophila Yetişkin Sineklerde Nöral Aktivitenin Görüntülenmesi

Daha fazla video keşfet