Name: Dev tek katmanlı vezikülleri güvenilir bir şekilde hazırlamak için damlacık transfer yöntemini kullanma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-19T12:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Öğrenin, damlacık transfer yöntemiyle dev tek katmanlı veziküllerin güvenilir hazırlanmasını. Bu protokol, sentetik biyoloji ve mikrorobotik alanlarında yüksek kapsülleme verimliliği sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Träuble, H., Grell, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carriers+and+specificity+in+membranes.+IV.+Model+vesicles+and+membranes.+The+formation+of+asymmetrical+spherical+lecithin+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Res+Program+Bull%22%5BJournal%5D)">Carriers and specificity in membranes. IV. Model vesicles and membranes. The formation of asymmetrical spherical lecithin vesicles.</a> Neurosci Res Program Bull. 9 (3), 373-380 (1971).</li>
<li>Pautot, S., Frisken, B. J., Weitz, D. A. <a target="_blank" href="https://pubs.acs.org/doi/10.1021/la026100v">Production of unilamellar vesicles using an inverted emulsion.</a> Langmuir. 19 (7), 2870-2879 (2003).</li>
<li>Noireaux, V., Libchaber, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+vesicle+bioreactor+as+a+step+toward+an+artificial+cell+assembly%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">A vesicle bioreactor as a step toward an artificial cell assembly.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 101 (51), 17669-17674 (2004).</li>
<li>Walde, P., Cosentino, K., Engel, H., Stano, P. <a target="_blank" href="https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20336703/">Giant vesicles: preparations and applications.</a> ChemBioChem. 11, 848-865 (2010).</li>
<li>Ernits, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+production%2C+stability+and+loading+of+synthetic+giant+unilamellar+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Microfluidic production, stability and loading of synthetic giant unilamellar vesicles.</a> Sci Rep. 14 (1), 14071(2024).</li>
<li>Bao, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+giant+unilamellar+vesicles+and+encapsulation+of+lyotropic+nematic+liquid+crystals%5BTitle%5D)+AND+%22Soft+Matter%22%5BJournal%5D)">Production of giant unilamellar vesicles and encapsulation of lyotropic nematic liquid crystals.</a> Soft Matter. 17 (8), 2234-2241 (2021).</li>
<li>Abkarian, M., Loiseau, E., Massiera, G. <a target="_blank" href="https://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2011/sm/c1sm05239j">Continuous droplet interface crossing encapsulation (cDICE) for high throughput monodisperse vesicle design.</a> Soft Matter. 7 (10), (2011).</li>
<li>Elani, Y., Law, R. V., Ces, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vesicle-based+artificial+cells+as+chemical+microreactors+with+spatially+segregated+reaction+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Vesicle-based artificial cells as chemical microreactors with spatially segregated reaction pathways.</a> Nat Commun. 5 (1), 5305(2014).</li>
<li>Heili, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+exchange+of+protein+and+nucleic+acid+signals+from+and+between+synthetic+minimal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Syst%22%5BJournal%5D)">Controlled exchange of protein and nucleic acid signals from and between synthetic minimal cells.</a> Cell Syst. 15 (1), 49-62.e4 (2024).</li>
<li>Shimane, Y., Kuruma, Y. <a target="_blank" href="https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35464723/">Rapid and facile preparation of giant vesicles by the droplet transfer method for artificial cell construction.</a> Front Bioeng Biotechnol. 10, 873854(2022).</li>
<li>Sato, Y., Hiratsuka, Y., Kawamata, I., Murata, S., Nomura, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micrometer-sized+molecular+robot+changes+its+shape+in+response+to+signal+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Robot%22%5BJournal%5D)">Micrometer-sized molecular robot changes its shape in response to signal molecules.</a> Sci Robot. 2 (4), eaal3735(2017).</li>
<li>De Remigis, E., et al. <a target="_blank" href="https://ieeexplore.ieee.org/document/10768195">Infiltration of cell-inspired ultra-deformable magnetic microrobots in restrictive environments.</a> IEEE Trans Med Robot Bionics. 7 (1), 123-129 (2024).</li>
<li>Moga, A., Yandrapalli, N., Dimova, R., Robinson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+inverted+emulsion+method+for+high-yield+production+of+biomimetic+giant+unilamellar+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22ChemBioChem%22%5BJournal%5D)">Optimization of the inverted emulsion method for high-yield production of biomimetic giant unilamellar vesicles.</a> ChemBioChem. 20 (20), 2674-2682 (2019).</li>
<li>Zhang, Y., Obuchi, H., Toyota, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+guide+to+preparation+and+applications+of+giant+unilamellar+vesicles+formed+via+centrifugation+of+water-in-oil+emulsion+droplets%5BTitle%5D)+AND+%22Membranes%22%5BJournal%5D)">A practical guide to preparation and applications of giant unilamellar vesicles formed via centrifugation of water-in-oil emulsion droplets.</a> Membranes. 13 (4), 440(2023).</li>
<li>Pautot, S., Frisken, B. J., Weitz, D. A. <a target="_blank" href="https://www.pnas.org/doi/10.1073/pnas.1931005100">Engineering asymmetric vesicles.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 100 (19), 10718-10721 (2003).</li>
<li>Palagi, S. <a target="_blank" href="https://github.com/microrobotlab/GUV-dimensional-analysis/tree/v1.0">GUV-dimensional-analysis</a>. , https://github.com/microrobotlab/GUV-dimensional-analysis/tree/v1.0 (2025).</li>
<li>De Remigis, E., et al. Optimisation of encapsulation technique for confining microparticles in lipid membranes. <a target="_blank" href="https://zenodo.org/records/8069820">Zenodo</a>. 2023, DOI: 10.5281/zenodo.8069819 (2023).</li>
<li>Dimova, R., Stano, P., Marques, C. M., Walde, P. <a target="_blank" href="https://www.taylorfrancis.com/chapters/edit/10.1201/9781315152516-1/preparation-methods-giant-unilamellar-vesicles-rumiana-dimova-pasquale-stano-carlos-marques-peter-walde?context=ubx&refId=bca4cc2f-16fd-4222-8c37-3bacb6c1e469">Preparation methods for giant unilamellar vesicles.</a> Giant Vesicle Book. , 3-20 (2019).</li>
<li>Tyler, A. I. I., Greenfield, J. L., Seddon, J. M., Brooks, N. J., Purushothaman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coupling+phase+behavior+of+fatty+acid+containing+membranes+to+membrane+bio-mechanics%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Coupling phase behavior of fatty acid containing membranes to membrane bio-mechanics.</a> Front Cell Dev Biol. 7, (2019).</li>
<li>Hamada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Giant+vesicles+functionally+expressing+membrane+receptors+for+an+insect+pheromone%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Commun%22%5BJournal%5D)">Giant vesicles functionally expressing membrane receptors for an insect pheromone.</a> Chem Commun. 50 (22), 2958(2014).</li>
<li>Roberti, E., Petrocelli, E. L., Cecchi, D., Palagi, S. <a target="_blank" href="https://open-research-europe.ec.europa.eu/articles/5-77">Dimensions, stability, and deformability of DOPC-cholesterol giant unilamellar vesicles formed by droplet transfer.</a> Open Res Eur. 5 (77), (2025).</li>
<li>Weakly, H. M. J. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0006349524005666">Several common methods of making vesicles (except an emulsion method) capture intended lipid ratios.</a> Biophys J. 123 (19), 3452-3462 (2024).</li>
<li>Ito, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamical+formation+of+lipid+bilayer+vesicles+from+lipid-coated+droplets+across+a+planar+monolayer+at+an+oil%2Fwater+interface%5BTitle%5D)+AND+%22Soft+Matter%22%5BJournal%5D)">Dynamical formation of lipid bilayer vesicles from lipid-coated droplets across a planar monolayer at an oil/water interface.</a> Soft Matter. 9 (40), 9539-9547 (2013).</li>
<li>Reis, A., Spickett, C. M. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0005273612000387">Chemistry of phospholipid oxidation.</a> Biochim Biophys Acta BBA Biomembr. 1818 (10), 2374-2387 (2012).</li>
<li>Storage and handling of lipids. , 
 <a target="_blank" href="https://avantiresearch.com/tech-support/storage-handling-of-lipids">https://avantiresearch.com/tech-support/storage-handling-of-lipids</a> (2025).</li>
<li>Van de Cauter, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+cDICE+for+efficient+reconstitution+of+biological+systems+in+giant+unilamellar+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">Optimized cDICE for efficient reconstitution of biological systems in giant unilamellar vesicles.</a> ACS Synth Biol. 10 (7), 1690-1702 (2021).</li>
<li>Faizi, H. A., Tsui, A., Dimova, R., Vlahovska, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bending+rigidity%2C+capacitance%2C+and+shear+viscosity+of+giant+vesicle+membranes+prepared+by+spontaneous+swelling%2C+electroformation%2C+gel-assisted%2C+and+phase+transfer+methods%3A+a+comparative+study%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Bending rigidity, capacitance, and shear viscosity of giant vesicle membranes prepared by spontaneous swelling, electroformation, gel-assisted, and phase transfer methods: a comparative study.</a> Langmuir. 38 (34), 10548-10557 (2022).</li>
<li>Lehtinen, O. -P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+temperature%2C+water+content+and+free+fatty+acid+on+reverse+micelle+formation+of+phospholipids+in+vegetable+oil%5BTitle%5D)+AND+%22Colloids+Surf+B+Biointerfaces%22%5BJournal%5D)">Effect of temperature, water content and free fatty acid on reverse micelle formation of phospholipids in vegetable oil.</a> Colloids Surf B Biointerfaces. 160, 355-363 (2017).</li>
<li>Takahashi, H., Ogawa, A. <a target="_blank" href="https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acssynbio.0c00173">Preparation of a millimeter-sized supergiant liposome that allows for efficient, eukaryotic cell-free translation in the interior by spontaneous emulsion transfer.</a> ACS Synth Biol. 9 (7), 1608-1614 (2020).</li>
<li>Whittenton, J., Harendra, S., Pitchumani, R., Mohanty, K., Vipulanandan, C., Thevananther, S. <a target="_blank" href="https://pubs.acs.org/doi/10.1021/la801133j">Evaluation of asymmetric liposomal nanoparticles for encapsulation of polynucleotides.</a> Langmuir. 24 (16), 8533-8540 (2008).</li>
<li>Hamada, T., Miura, Y., Komatsu, Y., Kishimoto, Y., Vestergaard, M., Takagi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+of+asymmetric+cell-sized+lipid+vesicles+from+lipid-coated+water-in-oil+microdroplets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Phys+Chem+B%22%5BJournal%5D)">Construction of asymmetric cell-sized lipid vesicles from lipid-coated water-in-oil microdroplets.</a> J Phys Chem B. 112 (47), 14678-14681 (2008).</li>
<li>Natsume, Y., Toyota, T. <a target="_blank" href="https://academic.oup.com/chemlett/article-abstract/42/3/295/7389144?redirectedFrom=fulltext&login=true">Giant vesicles containing microspheres with high volume fraction prepared by water-in-oil emulsion centrifugation.</a> Chem Lett. 42 (3), 295-297 (2013).</li>
<li>Hadorn, M., Boenzli, E., Hotz, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+analytical+method+to+test+for+salt+effects+on+giant+unilamellar+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A quantitative analytical method to test for salt effects on giant unilamellar vesicles.</a> Sci Rep. 1 (1), 168(2011).</li>
<li>Toparlak, ÖD., et al. <a target="_blank" href="https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32948587/">Artificial cells drive neural differentiation.</a> Sci Adv. 6 (38), eabb4920(2020).</li>
<li>Fujii, S., Matsuura, T., Sunami, T., Nishikawa, T., Kazuta, Y., Yomo, T. <a target="_blank" href="https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24901741/">Liposome display for in vitro selection and evolution of membrane proteins.</a> Nat Protoc. 9 (7), 1578-1591 (2014).</li>
<li>Matsushita-Ishiodori, Y., Hanczyc, M. M., Wang, A., Szostak, J. W., Yomo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+imaging+flow+cytometry+to+quantify+and+optimize+giant+vesicle+production+by+water-in-oil+emulsion+transfer+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Using imaging flow cytometry to quantify and optimize giant vesicle production by water-in-oil emulsion transfer methods.</a> Langmuir. 35 (6), 2375-2382 (2019).</li>
<li>Caliari, A., Hanczyc, M. M., Imai, M., Xu, J., Yomo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+giant+unilamellar+vesicle+fusion+products+by+high-throughput+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Quantification of giant unilamellar vesicle fusion products by high-throughput image analysis.</a> Int J Mol Sci. 24 (9), 8241(2023).</li>
<li>van Buren, L., Koenderink, G. H., Martinez-Torres, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DisGUVery%3A+a+versatile+open-source+software+for+high-throughput+image+analysis+of+giant+unilamellar+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">DisGUVery: a versatile open-source software for high-throughput image analysis of giant unilamellar vesicles.</a> ACS Synth Biol. 12 (1), 120-135 (2023).</li>
<li>Pazzi, J., Subramaniam, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoscale+curvature+promotes+high+yield+spontaneous+formation+of+cell-mimetic+giant+vesicles+on+nanocellulose+paper%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Appl+Mater+Interfaces%22%5BJournal%5D)">Nanoscale curvature promotes high yield spontaneous formation of cell-mimetic giant vesicles on nanocellulose paper.</a> ACS Appl Mater Interfaces. 12 (50), 56549-56561 (2020).</li>
<li>Ekosso, C., Liu, H., Glagovich, A., Nguyen, D., Maurer, S., Schrier, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerating+the+discovery+of+abiotic+vesicles+with+AI-guided+automated+experimentation%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Accelerating the discovery of abiotic vesicles with AI-guided automated experimentation.</a> Langmuir. 41 (1), 858-867 (2025).</li>
<li>Lee, I. -H., Passaro, S., Ozturk, S., Ureña, J., Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intelligent+fluorescence+image+analysis+of+giant+unilamellar+vesicles+using+convolutional+neural+network%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">Intelligent fluorescence image analysis of giant unilamellar vesicles using convolutional neural network.</a> BMC Bioinformatics. 23 (1), 48(2022).</li>
</ol>

Lipozomlar1 üretmek için daha önce tarif edilen bir tekniği uygulayan Pautot ve ark. çapı0,1 ila 1 μm arasında değişen çaplara sahip lipid veziküller üretmek için bir protokol oluşturmuştur 2. Damlacık transfer yönteminin, daha da büyük veziküllerin (1 μm'yi aşan çaplar)3 üretiminde etkili olduğu hızla kanıtlanmıştır ve uygulama kolaylığı ve yüksek kapsülleme verimliliği nedeniyle giderek daha fazla popülerlik kazanmaktadır. Gerçekten de, şişirme yöntemleriyle (jel şişirme veya elektroformasyon gibi) karşılaştırıldığında, bu protokol, karşılaştırılabilir sayıda vezikül ve ilgili atık oluşturmak için gereken kargo çözeltisinin hacmini azaltır4. GUV'lar, karşılaştırılabilir kapsülleme verimliliğine sahip alternatif yöntemlerle akışkan arayüzlerinden monte edilebilir. Bununla birlikte, mikroakışkan çipler 5,6 veya sürekli damlacık arayüzü geçiş kapsüllemesi (cDICE)7 tabanlı olanlarla karşılaştırıldığında, damlacık transferi, temel ekipmana sahip herhangi bir laboratuvarda uygun fiyatlı en basit kurulumu sunar. Ayrıca, mikroakışkan yöntemler, membranda istenmeyen yağ kalıntıları olan GUV'lara yol açabilir. Bu nedenlerden dolayı damlacık transferi, yapay hücreler 3,8,9,10 ve son zamanlarda mikrorobotik 11,12 alanlarında GUV'lara değerli kargoların yüklenmesi için tercih edilen yöntem olmuştur.
Yöntem, fosfolipidlerin aracılık ettiği su/yağ arayüzlerinin stabilizasyonu yoluyla membran yaprakçıklarının oluşumuna dayanmaktadır. İlk olarak, fosfolipidler bir yağda (lipid çözeltisi, LS) çözülür, daha sonra yağlı LS'de istenen GUV kargosunu (iç çözelti, IS) içeren sulu çözelti ile bir yağ içinde su emülsiyonu hazırlanır. Emülsiyon daha sonra başka bir sulu çözeltinin (dış çözelti, OS olarak adlandırılır) bir su-yağ arayüzü oluşturmak üzere daha önce LS ile dengelendiği bir tüpe aktarılır. GUV'ler, su damlacıkları santrifüjleme yoluyla bu OS/LS arayüzünü geçmeye zorlandığında oluşur: GUV'ların iç broşürü IS damlacıklarının yüzeyinde oluşurken, dış broşür OS ve LS arasında oluşur (Şekil 1).
Birçok protokol varyantı, koşullu deneysel ihtiyaçlara göre ayarlanmış parametrelerle tanımlanmıştır. Süreci optimize etmeye yönelik ilk kapsamlı girişim Moga ve ark.13 tarafından tanımlanırken, Zhang ve ark. ilgili örneklerin çoğunu yakın tarihli bir incelemede14 topladı. Protokolü etkileyen açıklanan birçok parametreye rağmen, yeni bir GUV formülasyonu için bir optimizasyon sürecinin nasıl yürütülebileceğine veya üretimden sonra GUV geri kazanımı ve manipülasyonu için en iyi uygulamalara dair hiçbir gösterge yoktur. Mevcut bilimsel literatüre ve doğrudan deneyimlerimize dayanarak, burada temel ilkeleri tartışırken GUV'ları üretmek için genel bir protokol sunuyoruz. Bunu yaparak, yeni GUV formülasyonlarının optimizasyonu için yararlı endikasyonlar ve protokol için her zaman geçerli olan iki önlem sağlıyoruz: LS'nin kontrollü bir ortamda hazırlanması ve temiz bir GUV numunesinin geri kazanılması için üst yağ fazının kolayca çıkarılmasına yönelik bir yöntem. İki örnek seçtik: biri IS olarak 240 mM sükroz ve LS olarak silikon yağı AR20'de 0,2 mM DOPC (koşul E [boş], bkz. Tablo 1) ve diğeri IS olarak 240 mM sükroz içinde %0,2 1,1 μm polistiren mikropartiküllerden ve LS olarak mineral yağda 3,18 mM DOPC'den oluşur (koşul P [parçacıklarla], Tablo 1'e bakınız). Her iki numune de OS olarak 240 mM glikoz ile üretildi. Bu ozmolariteyi, fizyolojik koşullarda gevşemiş bir lipid zarına (düşük zar gerilimi) sahip GUV'lar elde etmek için seçtik.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig1v5.jpg"> 
Şekil 1: Damlacık transfer yönteminin şematik gösterimi. (A) Ayrı şişelerde üç çözelti hazırlanır: bir lipit çözeltisi oluşturmak için yağdaki fosfolipidler (sarı faz), iç çözelti olarak sakaroz içeren bir çözelti (camgöbeği içinde) ve dış çözelti olarak bir eşosmolar glikoz çözeltisi (beyaz). (B) LS daha sonra kararlı bir emülsiyon oluşturmak için IS ile karıştırılır, daha sonra (C) (D) emülsiyon üzerine dökülmeden önce OS ve LS arasındaki bir arayüzün dengelenmesine izin verilir. (E) Su damlacıkları, (F) GUV'ların oluşumuna izin vermek için merkezkaç kuvveti ile LS/OS arayüzünü geçmeye zorlanır. Şekil ölçekli değildir ve yalnızca yöntemin bir şemasını sağlamayı amaçlamaktadır. Kısaltmalar: LS = lipid çözeltisi; IS = iç çözüm; OS = dış çözüm; GUV = dev tek katmanlı vezikül. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

<table><tbody><tr><td>0.22 &mikro; m karışık selüloz esterleri membranı&nbsp; Şırınga filtreleri</td><td>Merck</td><td>SLGSVR255F</td><td></td></tr><tr><td>1,5 mL'lik tüpler</td><td>Biyosınıf</td><td>06.0279.00</td><td></td></tr><tr><td>100 &mu; L cam şırınga</td><td>Merck</td><td>20737</td><td></td></tr><tr><td>150 mL beher</td><td>Avantor&nbsp;</td><td>213-1123</td><td>En az 3</td></tr><tr><td>20 mL koyu cam şişeler ND24</td><td>Avantor&nbsp;</td><td>548-9001A</td><td></td></tr><tr><td>2 mL'lik tüpler</td><td>Biyosınıf</td><td>07.3534.99</td><td></td></tr><tr><td>50 mL silindir</td><td>Avantor&nbsp;</td><td>612-3843</td><td></td></tr><tr><td>500 &mu; L cam şırınga</td><td>Hamilton</td><td>549-1166</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Falcon tüpü</td><td>Merck</td><td>CLS352070</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Şırınga&nbsp;</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>8SS50L1</td><td></td></tr><tr><td>5 mL'lik tüpler</td><td>Greiner biyo-on</td><td>622201</td><td></td></tr><tr><td>600 mL beher</td><td>Avantor&nbsp;</td><td>213-1126</td><td></td></tr><tr><td>B&uuml; Chner Şişesi</td><td>Merck</td><td>Z740682</td><td></td></tr><tr><td>Yuvarlak tabanlı şişeler için mantar halkalar</td><td>Avantor&nbsp;</td><td>217-1000</td><td></td></tr><tr><td>Kristalleştirici</td><td>Dutscher</td><td>080474A</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Glikoz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Sükroz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9378 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Dijital termo-higrometre</td><td>Bohlender</td><td>V1863-07 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Görüntü Yönetmeni</td><td>Avanti Araştırma</td><td>850375C</td><td></td></tr><tr><td>Alıştırma</td><td>Dremel</td><td>4000</td><td></td></tr><tr><td>Erioglaucine disodyum tuzu (Brilliant Blue FCF)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>861146</td><td></td></tr><tr><td>G18 şırınga iğnesi</td><td>Terumo</td><td>AN1838R1</td><td></td></tr><tr><td>G21 şırınga iğnesi</td><td>Terumo</td><td>AN2138R1</td><td></td></tr><tr><td>Torpido gözü</td><td>Bel-Sanat</td><td>F50030-0000 Serisi</td><td>Varsa torpido gözü kullanılabilir ancak nem oranı düşük laboratuvarlarda gerekli olmayabilir</td></tr><tr><td>Sıcak plaka manyetik karıştırıcı</td><td>LLG Laboratuvar Gereçleri</td><td>6.263 448</td><td></td></tr><tr><td>Hafif mineral yağ</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>330779</td><td></td></tr><tr><td>Yeni kokin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>199737</td><td></td></tr><tr><td>Nitril Kauçuk O-Ring O-Ring, 8mm Delik, 12mm Dış Çap</td><td>RS</td><td>196-4863</td><td></td></tr><tr><td>Septum ND24 ile açık vidalı kapaklar</td><td>Avantor&nbsp;</td><td>548-0031A</td><td></td></tr><tr><td>P1000 mikropipet</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>12346132</td><td></td></tr><tr><td>P10000 mikropipet</td><td>Avantor&nbsp;</td><td>89079-978</td><td></td></tr><tr><td>P200 mikropipet</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>12326132</td><td></td></tr><tr><td>Kağıt havlular</td><td>Avantor&nbsp;</td><td>KIMB6657</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Avantor&nbsp;</td><td>291-1214</td><td></td></tr><tr><td>Pipet uçları (1000)</td><td>Eppendorf Belediyesi</td><td>0030000919</td><td></td></tr><tr><td>Pipet uçları (10000)</td><td>Eppendorf Belediyesi</td><td>0030000765</td><td></td></tr><tr><td>Pipet uçları (200)</td><td>Eppendorf Belediyesi</td><td>0030000870</td><td></td></tr><tr><td>Polistiren parçacıklar, 1.1 &micro; m</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>LB11-1ML</td><td></td></tr><tr><td>Kauçuk kapak</td><td>Biyosınıf S.r.l.</td><td>12.2300.05</td><td></td></tr><tr><td>Kauçuk konik conta</td><td>Avantor&nbsp;</td><td>217-0211</td><td></td></tr><tr><td>Vida kapakları&nbsp; ND24</td><td>Avantor&nbsp;</td><td>548-0161A</td><td></td></tr><tr><td>Silikon yağı AR20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10836</td><td></td></tr><tr><td>Silikon boru (iç çap 1,6 mm, dış çap 3 mm)</td><td>RS</td><td>667-8441</td><td></td></tr><tr><td>Silikon boru (iç çap 6 mm, dış çap 12 mm)</td><td>RS</td><td>273-2541</td><td>En az 6 m</td></tr><tr><td>Üç kavşak</td><td>RS</td><td>795-405</td><td></td></tr><tr><td>İki yönlü kavşak</td><td>RS</td><td>419-7287</td><td></td></tr><tr><td>İki vana</td><td>Şakacı</td><td>91280</td><td></td></tr><tr><td>Ultra saf su</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>22934</td><td>Mevcut olduğunda, bu ürün Milli-Q sistemleri aracılığıyla arıtılmış su ile değiştirilebilir</td></tr><tr><td>Üniversal Makas</td><td>Bochem</td><td>4154</td><td></td></tr></tbody></table>

dev tek katmanlı vezikülleri güvenilir bir şekilde hazırlamak için damlacık transfer yöntemini kullanma

Using the Droplet Transfer Method to Reliably Prepare Giant Unilamellar Vesicles

Optimal bir GUV hazırlığı, berrak bir yağ fazı ve farklı bir pelet oluşumu ile karakterize edilir (Şekil 4A). Su damlacıklarının GUV'lara dönüşemediği durumlarda, tipik olarak çökerler ve OS/LS arayüzünde fosfolipid kalıntıları bırakırlar (Şekil 4C). Bu etki büyük olasılıkla, su/yağ arayüzünde fosfolipidlerin yetersiz dengelenmesinden kaynaklanan, fosfolipidlerin ve diğer moleküllerin yağ fazından toplanmasından kaynaklanır. Bununla birlikte, görünür bir topak olmamasına veya arayüzde döküntü bulunmasına rağmen, GUV'lar hala oluşabilir ve bu da sürecin devam etmesine izin verir. Yıkama adımları tüm fosfolipid kalıntılarının giderilmesinde tamamen etkili olmasa da, yağ damlacıklarının ortadan kaldırılmasına önemli ölçüde yardımcı olarak genel numune kalitesini artırır ( Şekil 6A ve Şekil 6B'yi karşılaştırın).
Yüksek nem koşullarında hazırlanan eski LS veya LS'nin kullanımı, genellikle daha düşük verim ve büyük olasılıkla fosfolipidler ve yağ fazından diğer moleküller tarafından oluşturulan daha yüksek düzensiz agrega içeriği ile azaltılmış GUV dispersiyonları ile sonuçlanır (Şekil 6C). Yüksek nem koşullarında hazırlanan LS için, GUV üretiminde (çok az GUV içeren numunelerle) 0,8'in üzerinde varyasyon katsayıları gözlemledik, modifiye edilmiş eldiven haznesinde hazırlanan LS için ise varyasyon katsayısı 0,5'in altındaydı.
Farklı santrifüjleme koşulları GUV verimini ve kalitesini etkileyebilir. Kalitatif bir analizden, 3.300 × g'da 20 dakika, sakaroz yüklü GUV'ler için iyi bir koşul olarak tanımlandı (örnek E). Hızın düşürülmesi (500 × g'da 45 dakika) verimin düşmesine neden olurken, bir artış (16.600 × g'da 5 dakika) daha yüksek düzensiz fosfolipid agregatlarının oluşumuna yol açtı. Zayıf bir merkezkaç kuvveti, birçok damlacığın OS/LS arayüzünü geçmesini engelleyebilir, dolayısıyla verim azalırken, güçlü bir kuvvet, arayüz geçişi sırasında dış broşür üzerindeki fosfolipidlerin organizasyonu için yeterli zaman sağlamayabilir (Şekil 7). Mikropartiküllerin kapsüllenmesi, mikropartiküllerin kütle yoğunluğunun kabaca IS'ninkiyle eşleşmesi koşuluyla, santrifüjleme parametrelerinde yapılan ayarlamalarla da optimize edilebilir. Bu amaçla, santrifüjleme ivmesinin düşürülmesi (ve dolayısıyla santrifüjleme süresinin arttırılması), katı parçacıkların uyguladığı kuvvet nedeniyle fosfolipidik membranın kırılmasını önleyerek parçacıkların daha homojen bir şekilde kapsüllenmesine olanak tanır (iyi bir kapsülleme örneği, optimal santrifüjleme parametrelerinin araştırılması halen devam ederken Şekil 6D'de gösterilmektedir17).
Fosfolipidlerin difüzyonu yağ fazından etkilenebileceğinden, emülsiyonun stabilitesini değerlendirmek için basit bir kalitatif test yapılabilir (Şekil 5). Görselleştirmeyi iyileştirmek için IS'de çözünmüş bir renklendirici boya (Brilliant Blue FCF) yardımıyla, farklı su/yağ oranlarına sahip emülsiyonlar hazırlanabilir ve zaman içinde gözlemlenebilir. Stabilitedeki kayıp, su damlacıklarının toplanması ve bunun sonucunda yağ fazından ayrılması ile görselleştirilebilir. Büyük damlacıkların (çıplak gözle görülebilen) GUV'lara dönüşme olasılığı daha düşük olduğundan, en az faz ayrımı sağlayan emülsiyon koşulunu kullanmanızı öneririz.
Protokoldeki varyasyonların etkisi, protokol bölüm 4'te açıklandığı gibi bir boyut dağılım analizi ile doğrulanabilir: GUV'ların çapları, faz kontrastlı mikroskop görüntülerinden ImageJ kullanılarak ölçülebilir ve boyut dağılımı, GitHub16'da bulunan bir komut dosyası ile analiz edilebilir. Bu protokolü takiben, örneğin, silikon yağı AR20 yerine mineral yağ seçildiğinde daha büyük çaplı GUV'larda bir artış gözlemlemek mümkün olmuştur (Şekil 8).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig2v5.jpg"> 
Şekil 2: Torpido gözü kurulumu. Bu şekil, lipid çözeltisi hazırlama için torpido gözündeki ana değişiklikleri göstermektedir. (A) Azot ve vakum ile giriş bağlantısı; (B) torpido gözü ile giriş bağlantısı; (C) çıkış valfi; (D) solvent buharlaştırması için iğne taşıyan kapak; (E) solvent buharlaşması için ince borular; (F) nemi emmek için silika parçacıkları; (G) torpido gözüne yerleştirilecek öğeler: dijital termo-higrometre (1), organik çözücü içinde lipit çözeltisi (2), mantar halka tutucu (3), cam şırınga (4), septum ve iğneli açık kapak (5), yağ çözeltisi (6), kapaklı açık koyu renkli flakon (7), 10 mL uçlar (8), P10000 pipet (9); (H) çıkış borusu ucu suya batırılmış; (I) giriş ve çıkışa bağlı iğneli kapakla kapatılmış şişe; (J) modifiye edilmiş eldiven odasının şemaları. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig3v5.jpg"> 
Şekil 3: Yağın kolayca çıkarılmasını sağlayan kap. Protokol bölüm 2.1'e göre yağın kolayca çıkarılması için GUV'ların bir kapta hazırlanmasındaki ana adımlar. (A) Bir P1000 ucunun sığmasına izin vermek için 5 mL'lik bir tüp kapağında bir delik açılır; daha sonra (B) kapak, ucu bir O-ring aracılığıyla deliğe sokulacak şekilde 5 mL'lik boş bir tüpe yerleştirilir. (C) Çözeltiler, protokol bölümleri 2.2 ve 2.3'e göre tüpe yerleştirilir, uç kapatılır ve tüp 50 mL'lik bir tüpün içine yerleştirilir. Silikon yağında 0,2 mM DOPC'den hazırlanan GUV'lar, görselleştirmeyi geliştirmek için 230,7 mM sükroz ve 3,1 mM Brilliant Blue FCF ile yüklendi. (D) Santrifüjlemeden sonra, üst yağ fazı, GUV tamponunun bir kısmı ile birlikte ucun içinde tutulur (damlacıkların bir kısmının GUV'lara dönüşememesi ve boyayı işletim sisteminde serbest bırakması nedeniyle camgöbeği görünür). Kauçuk kapak sayesinde uç, sıvı içeriğiyle birlikte 5 mL'lik tüpten kolayca çıkarılabilir, böylece tüm yağ fazının hızlı ve kolay bir şekilde çıkarılmasına olanak tanır. (E) GUV peleti, faz kontrast mikroskobu ile doğrulandığı (F) gibi, belirgin bir yağ kirliliği olmaksızın, berrak bir dispersiyon halinde bir tüpün dibinden kolayca toplanabilir. Ölçek çubuğu = 20 μm. Kısaltmalar: LS = lipid çözeltisi; IS = iç çözüm; OS = dış çözüm; GUV = dev tek katmanlı vezikül; DOPC = 1,2-dioleoil-sn-glisero-3-fosfokolin. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig4v5.jpg"> 
Şekil 4: GUV oluşumu. (A) OS/LS arayüzü, (B) berrak bir yağ fazına sahip temiz bir GUV peleti ve (C) OS/LS arayüzünde döküntü bulunan bir GUV peleti örnekleri (bu GUV popülasyonunun IS'si görselleştirmeyi geliştirmek için 1.65 mM Yeni Kok boyası ile desteklendiği için döküntü ve pelet kırmızımsı görünür). Kısaltmalar: LS = lipid çözeltisi; IS = iç çözüm; OS = dış çözüm; GUV = dev tek katmanlı vezikül. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig6v5.jpg"> 
Şekil 5: Farklı yağ ve yağ içinde su oranlarında emülsiyon stabilitesi. Şekil, yağın türüne ve kullanılan su/yağ (w/o) oranına bağlı olarak emülsiyonların zaman içindeki stabilitesini göstermektedir. IS, emülsiyonların görselleştirilmesini geliştirmek için 230.7 mM sükroz ve 3.1 mM Brilliant Blue FCF'den oluşuyordu. Mineral yağ ile hazırlanan emülsiyonlar, AR20 silikon yağı ile yapılan muadillerine göre daha az kararlıdır. Bu etki, artan w/o oranlarıyla daha da güçlendirilir. Silikon yağı AR20'deki emülsiyonlar önemli ölçüde daha kararlı olmasına rağmen, emülsifikasyondan hemen sonra görülebilen faz ayrımı ile w/o oranı arttıkça stabiliteleri de azalır ('da silikon yağı AR20). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig5v5.jpg"> 
Şekil 6: GUV'ların faz kontrast mikroskobu ile gözlemlenmesi. Mineral yağda 3,18 mM DOPC'den oluşan bir LS'den hazırlanan sakaroz yüklü GUV'ların 20x büyütmesi. (A) Yağın çıkarılmasından sonra geri kazanılan numune; (B) yıkama adımlarından sonra geri kazanılan numune; (C) düzenlenmemiş oksijen ve nem içeren ortamlarda hazırlanan bir LS'den elde edilen zayıf GUV verimi; (D) mikropartikül yüklü GUV'lar. Ölçek çubuğu = 10 μm; Yağ damlaları daire içine alınır ve düzensiz fosfolipid ve yağ molekülleri kümelerinin örnekleri bir okla gösterilir. Kısaltmalar: LS = lipid çözeltisi; GUV'lar = dev tek katmanlı veziküller. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig7v5.jpg"> 
Şekil 7: Farklı santrifüj koşullarının GUV oluşumu üzerindeki etkisi. AR20 silikon yağı içinde 0,2 mM DOPC'den oluşan bir LS ile hazırlanan sakaroz yüklü GUV'ların faz kontrastlı görüntüleri. Şekil, (A) 5 dakika boyunca 16.600 × g , (B) 20 dakika boyunca 3.300 × g ve (C) 45 dakika boyunca 500 × g'da GUV'ların kalitatif bir karşılaştırmasını göstermektedir. Yüksek santrifüjleme hızı, fosfolipid agregalarının daha yüksek varlığına neden olurken, düşük santrifüjleme hızı, verimin düşmesine neden olur. Ölçek çubuğu = 50 μm. Kısaltmalar: LS = lipid çözeltisi; GUV = dev tek katmanlı vezikül; DOPC = 1,2-dioleoil-sn-glisero-3-fosfokolin. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig7large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68340/68340fig8v5.jpg"> 
Şekil 8: Boyut dağılımı analizi. Mineral yağda (A) 0,2 mM DOPC ve (B) silikon yağı AR20'de 0,2 mM DOPC'den elde edilen iki sakaroz yüklü GUV numunesinin karşılaştırılması (*numune, faz kontrast mikroskobu altında GUV'ların net bir şekilde ayırt edilmesini sağlamak için 10 kat seyreltildi). Protokol bölüm 4'ü takiben gerçekleştirilen analiz, silikon yağı AR20 numunelerine göre mineral yağ numunesi için daha yüksek çaplara doğru kaymış bir boyut dağılımını göstermektedir. Bununla birlikte, silikon numunesinin verimi neredeyse 20 kat daha yüksektir. Kısaltmalar: GUV = dev tek katmanlı vezikül; DOPC = 1,2-dioleoil-sn-glisero-3-fosfokolin. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68340/68340fig8large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adım</td>
			<td>Durum E</td>
			<td>Durum P</td>
			<td>Açıklama</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.1.1</td>
			<td>4,11 gr</td>
			<td>17,11 gr</td>
			<td>Sükroz kütlesi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.1.1</td>
			<td>2,16 gr</td>
			<td>2,16 gr</td>
			<td>Glikoz kütlesi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.1.2</td>
			<td>240 milyon</td>
			<td>1000 milyon</td>
			<td>Sükroz konsantrasyonu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.1.2</td>
			<td>240 milyon</td>
			<td>240 milyon</td>
			<td>Glikoz konsantrasyonu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.3.2</td>
			<td>Silikon yağı</td>
			<td>Mineral yağ</td>
			<td>LS için yağ fazı</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.3.2</td>
			<td>0,1 mL cam şırınga</td>
			<td>0,5 mL cam şırınga</td>
			<td>DOPC'yi kloroform çözeltilerinde aktarmak için cam şırınga</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.3.10</td>
			<td>63 μL</td>
			<td>500 μL</td>
			<td>Kloroform çözeltisindeki DOPC hacmi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.3.16</td>
			<td>10 milyon L</td>
			<td>5 milyon litre</td>
			<td>Yağ hacmi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.4.1</td>
			<td>3300 gr 20 dakika</td>
			<td>500 gr 45 dakika</td>
			<td>Santrifüj koşulu</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tablo 1: Protokoldeki varyasyonlar. Tablo, iki farklı GUV popülasyonu hazırlamak için protokolün çeşitli adımları (ilk sütunda belirtilmiştir) için varyasyonları bildirmektedir: sakaroz yüklü GUV'ler (koşul E) ve mikropartikül yüklü GUV'ler (koşul P).
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>KİMLİĞİ</td>
			<td>İlgili adımlar</td>
			<td>İç çap (mm)</td>
			<td>Dış çap (mm)</td>
			<td>Uzunluk (mm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1</td>
			<td>1.2.1; 1.2.3</td>
			<td>7</td>
			<td>13</td>
			<td>50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2</td>
			<td>1.2.1; 1.2.4; 1.3.5</td>
			<td>7</td>
			<td>13</td>
			<td>50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3</td>
			<td>1.2.1; 1.2.4; 1.3.5</td>
			<td>7</td>
			<td>13</td>
			<td>100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4</td>
			<td>1.2.1; 1.2.4; 1.2.5</td>
			<td>7</td>
			<td>13</td>
			<td>2000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5</td>
			<td>1.2.1; 1.2.6; 1.3.13</td>
			<td>7</td>
			<td>13</td>
			<td>2000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6</td>
			<td>1.2.2; 1.2.7; 1.3.11</td>
			<td>3</td>
			<td>7</td>
			<td>50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7</td>
			<td>1.2.2; 1.2.7; 1.3.11</td>
			<td>3</td>
			<td>7</td>
			<td>50</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8</td>
			<td>1.2.2; 1.2.9; 1.3.11; 1.3.15</td>
			<td>3</td>
			<td>7</td>
			<td>200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9</td>
			<td>1.2.2; 1.2.9; 1.3.11; 1.3.15</td>
			<td>3</td>
			<td>7</td>
			<td>200</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tablo 2: Torpido gözündeki gaz ve vakum bağlantıları için borular. Tablo, torpido gözünü nitrojen ve vakum hatlarına bağlamak için kullanılan silikon boruların boyutlarını listeler. Montaj sürecini kolaylaştırmak için referans kimlikleri sağlanır.

Dev tek katmanlı vezikülleri güvenilir bir şekilde hazırlamak için damlacık transfer yöntemini kullanma

Over the past two decades, the droplet transfer method, also known as inverted emulsion, double emulsion, phase transfer, or emulsion transfer, has proven ...

using-droplet-transfer-method-to-reliably-prepare-giant-unilamellar

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Bu protokol, homojen bir yüksek derecede mikronaltı boyutlarda lipid kesecikler hazırlanması için bir çekme yöntemi açıklar. Bu yöntem, lipozom preparatı için kontrollü bir nitrojen akışı hızları ile bir basınç kontrol sistemi kullanır. Lipid...

Nano ölçekli Lipid Vesiküller Hazırlanması için Sabit Basınç kontrollü Ekstrüzyon Yöntemi

Desteklenen ikili lipid tabakalarıdır ve doğal zar parçacıkları hücre zarlarının özelliklerini yaklaşık ve analitik çeşitli stratejiler dahil edilmesi uygun sistemlerdir. Burada destekli lipid iki katmanlı kaplı SiO 2 boncuklar, fosfolipid vezikülleri ya da doğal zar parçacıklarının oluşan mikrodizileri hazırlanması için bir yöntemi göstermektedir.

Bir Çekçek tabanlı Meclisi Yöntemi ile Biomembrane Mikroarray&#39;ler oluşumu

Bir damlacık arayüz lipid ikili tabakasına karşı mikroakışkan jeti zar asimetri, zar proteinlerinin dahil edilmesi, ve malzeme kapsülleme üzerinde kontrol ve veziküllerin üretilmesi için güvenilir bir yöntem sağlar. Bu teknik, bölümlere biyomoleküllerin istenen biyolojik sistemlerin çeşitli çalışma uygulanabilir.

Mikroakışkan jeti kullanarak çift katlı lipid Vesikül Üretimi

Yüksek oranda paketlenmiş mikrometre boyutunda bileşenler içeren dev kesecikler kullanışlı hücre modelleridir. Yağda su emülsiyonu santrifüjleme yöntemi, kapsüllenmiş malzemelerle dev veziküllerin hazırlanması için basit ve güçlü bir araçtır.

bir su-içinde-yağ emülsiyonu santrifüj Dev veziküller Kapsüllenen Mikrokürelerin hazırlanması

Biz bir teknik veziküller, temassız embriyolardan için yerelleştirilmiş kalsiyum iyon degradeler kullanarak mevcut. Bir dev lipid vezikül, çevresinde bir kalsiyum iyon eriyik mikroenjeksiyon membran borulu çıkıntılar üretiminde kaynaklanan lipit membran yeni model için kullanılmaktadır.

Yanıt olarak lokalize kalsiyum iyon degradeler dev veziküller membran Remodeling

Biz dev veziküller (GVs) içinde bakteri tek hücreli kültürü göstermektedir. Bakteriyel hücreler içeren GVs damlacık transfer yöntemi ile hazırlanmıştır ve bakteriyel büyüme doğrudan gözlem için bir cam substrat üzerinde desteklenen bir membran immobilize edildi. Bu yaklaşım, diğer hücrelere de uyarlanabilir.

Dev veziküller Içinde tek hücreli seviyede bakteriyel hücre kültürü

Protokolün amacı, dev veziküllerin membran mekanik özelliklerini mikropipet aspirasyonu ile güvenilir bir şekilde ölçmektir.

Dev Unilamellar Hibrid Veziküllerin Elektroformasyon ile Obtention ve Mikropipet Aspirasyon ile Mekanik Özelliklerinin Ölçümü

Bu makalede, kapsüllenmiş sitoiskelet proteinleri ile dev unilamellar veziküllerin hızlı üretimi için basit bir yöntem tanıtılmaktadır. Yöntemin, hapsetmede ve sitoiskelet-membran etkileşimlerinde sitoiskelet yapılarının aşağıdan yukarıya doğru resulaştırılmasında yararlı olduğu kanıtlanmıştır.

Yeniden Yapılandırılmış Hücre İskeletinin Dev Unilameller Veziküller İçinde Hızlı Kapsüllenmesi

Bu makale, iç, halka ve dış bölgelerde özelleştirilmiş elektriksel iletkenliğe sahip, vezikül içinde vezikül yapısına sahip bileşik Dev Unilamellar Veziküllerin (cGUV'ler) hazırlanması için bir yöntem sunar. Elektroformasyon, ozmotik şok yoluyla stomatositlere ve cGUV'lara dönüştürülen basit GUV'leri sentezler ve çekirdekli hücrelerin biyofiziğini incelemek için değerli bir model sağlar.

Bileşik Dev Unilamellar Veziküllerin Sentezi: Çekirdek Hücrelerin Biyomimetik Bir Modeli

Gramicidin A-doped damlacık arayüz çift katmanlarını bir yere toplamak, elektriksel olarak uyarmak ve analiz etmek için deneysel bir protokol sunulur. Lipid-protein yapı-fonksiyon ilişkileri, membran alanı, iyonik akı ve tek kanal iletkenliğindeki değişiklikler ölçülerek ve bu yanıtların, elektriksel sinapslardan ilham alan bir membran modelinde iyonik iletkenlikteki plastisite benzeri değişikliklerle ilişkilendirilmesiyle nicelendirilir.

Damlacık Arayüz Bilayerları Kullanarak Lipid-Protein Zar Yapı-Fonksiyon Karakterizasyonu

Öğrenin, damlacık transfer yöntemiyle dev tek katmanlı veziküllerin güvenilir hazırlanmasını. Bu protokol, sentetik biyoloji ve mikrorobotik alanlarında yüksek kapsülleme verimliliği sağlar.

Dev tek katmanlı vezikülleri güvenilir bir şekilde hazırlamak için damlacık transfer yöntemini kullanma

Daha fazla video keşfet