Name: Demir Oksit hESC ve hMSCs Etiketleme MR Görüntüleme in vivo Takip Non-Invasive Nanopartiküller (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-03-31T21:32:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: Keşfedin demir oksit nanopartiküllerle hESC ve hMSCs etiketleme yöntemini MR görüntüleme için. Bu teknik, enjekte edilen kök hücrelerin invivo takibini sağlar ve yeni tedavilerin değerlendirilmesine yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu proje için California Rejeneratif Tıp Enstitüsü bir Leon J. Thal TOHUM hibe ile desteklendi. Tobias Henning, Alman Araştırma Birliği (DFG, HE 4578/1-2) nakit Araştırma tarafından finanse edildi. Biz insan embriyonik kök hücre kültürü onun tavsiye Juanito Meneses minnetle kabul etmek istiyorum.

Ferucarbotran ile hMSC Etiketleme Bu Ferucarbotran, MR görüntüleme için demir oksit bazlı kontrast madde ile insan mezenkimal kök hücreleri etiketlenmesi için tekniği: <ol><li> Başlamak için, plaka hücreleri 18-24 saat önce,% 80 bir izdiham T75 matara etiketleme prosedürü. Farklı bir kültürü çanak kullanıyorsanız, bu cm 2 başına yaklaşık 10000 hücrelere eşit. </li><li> Ertesi gün, 8 ml serum serbest medya Resovist 30 ul ekleyerek etiketleme medya hazırlanması ile başlar. Bu bir konsantrasyon 100 mg Fe / ml medya karşılık gelen,% 80 confluency az bir T75 şişesi etiketi olacak. </li><li> Kültür ortamı çıkarın ve hücreler PBS veya serum ücretsiz medya ile bir kez yıkayın. Bu, artık serum proteinleri ve diğer bileşenleri, kontrast madde ve etkisi etiketleme verimliliği bağlamak medya kurtulmak için yapılır. </li><li> Erlene etiketleme Medya ekle ve inkübatör şişeyi geri koymak. </li><li> 2 saat sonra,% 20 FCS nihai bir konsantrasyon elde edilir böylece FCS 2 ml ekleyin. Bu hücrelerin ayırt etmek için uyaran almazlar sağlamak için yapılabilir, ancak yerine aşina oldukları bir ortamda büyümek. </li><li> Hücreler 18 saat boyunca inkübe edin. Bu en iyi gece yapılır. </li><li> Ertesi gün, hücreler PBS ile yıkayın, sonra onları her zamanki gibi trypsinize. </li><li> Tripsinize sonra, hücre süspansiyonu medyada kalan, ücretsiz kontrast madde kurtulmak için 3 kez yıkanması gerekmektedir. Bu PBS 5 dakika boyunca 400 RCF hücreler santrifüj ile yapılır. </li><li> Son hücre pelet yeniden bekletildi ve daha fazla deneyler için hazır olabilir. </li><li> Önceki yıkama adımları sırasında kaybolmuş olabilir gibi, şimdi hücreleri saymak. Ayrıca, bu noktada Tripan mavi dışlama tahlil kullanarak canlılığı testi gerçekleştirmek ve etiketleme etkinliğini ölçmek için spektrometrik analizi için bazı örnekler. </li></ol> Ferumoxides insan embriyonik kök hücreleri Etiketleme <ol><li> Başlamak için, plaka hESC 10cm yemekler, her zamanki gibi. Bu yemekler jelatin ile kaplı ön ve onlara ışınlanmış besleyici hücreler var. Siz de besleyici ücretsiz kültürler için bu protokolü kullanabilirsiniz. </li><li> Orta büyüklükte koloniler oluştururlar, böylece hESC takın ve yaklaşık 3-4 gün için büyümek. Bu süre zarfında büyük koloniler, daha sonra break up için daha zor gibi, koloniler büyük büyümek olmadığını sağlamak. </li><li> Farklılaşmış hücrelerin kolonilerin temizlik bağlı olarak, bu kültürlerin kirletebilir, diseksiyon farklılaşmış kültürler kurtulmak için olabilir. </li><li> 100μg/ml ve tam hESC medya bir konsantrasyon Ferumoxides oluşan etiketleme ortam hazırlayın. Bunun için, biz 89μl Ferumoxides ve 10 ml tam büyüme ortamı karıştırın. </li><li> Eksiksiz bir medya çanak ile bir kez yıkayın. </li><li> Medya etiketleme çanak ortalama 10 ml ekleyin ve 4 saat boyunca hücreler kuluçkaya yatmaktadır. </li><li> Şimdi, etiketleme tamamlandı. Bir sonraki adımda, bu hücrelerin yıkayın ve daha sonra kullanmak için tek bir hücre süspansiyonu elde etmek için gerekli. Bunun için, ilk önce tabak PBS ile yıkayın. </li><li> Sonra,% 0.25 tripsin, 5ml ile PBS değiştirin ve 5 dakika inkübatör inkübe veya hücreleri ayırmak kadar. Çanak sık sık dokunun yardımcı olur. </li><li> Hücreler artık müstakil var. Çanak içerdiği Büyük koloniler halinde kalan bazı kümeleri olabileceğini aklınızdan çıkarmayın. </li><li> Bu yığınlara kurtulmak için, bir serolojik bir pipet kullanarak kez tüm süspansiyon karıştırın, daha sonra başka bir 2 dakika boyunca bekletin. </li><li> Biz, ince ucu ile, hücre zarlarının zarar verebilir hücrelerin tekrarlanan emme Eppendorf pipet kullanmak yok. </li><li> Artık kümeleri varsa, bir hücre süspansiyonu 40μm hücre süzgecinden çalıştırabilirsiniz. </li><li> Eğer her şeyi doğru bir şekilde çalıştı, tek bir hücre süspansiyonu, ESC-matrix ve ölü hücreleri jelatin kaplama kaynaklanan, enkaz çok karışık olduğunu var. Bu kurtulmak için, iki kez, 5 dakika boyunca 400 RCF onları aşağı iplik hücrelerin yıkayın ve tam medya onları tekrar süspansiyon haline getirin. </li><li> Şimdi, ESC ışınlanmış besleyici hücreler izole edilmesi gerekiyor. Bu verimli bir jelatin kaplı çanak hücre süspansiyonu kaplama yapılabilir. </li><li> Çanak manipüle değilse, tüm hücreleri tortu aşağı, ama besleyiciler ESC daha hızlı eklenecektir. </li><li> Yani, besleyiciler, özellikle çanak bağlı olmalıdır süpernatantı 45 dakika sonra alınırsa, bu, özellikle ESC içermelidir. </li><li> Bu şekilde, başka deneyler için kullanılan manyetik etiketli insan embriyonik kök hücreleri tek bir hücre süspansiyonu elde edilir. </li><li> Önceki protokolünde olduğu gibi, bu noktada, hücrelerin sayısı ve canlılığı değerlendirmesi ve etiketleme verimliliğini ölçmek için numune almak gerekir. </li></ol>

<ol><li>Daldrup-Link, H. E., Rudelius, M., Oostendorp, R. A. J., Settles, M., Piontek, G., Metz, S., Heinzmann, U., Rummeny, E. J., Schlegel, J., Link, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+of+Hematopoietic+Progenitor+Cells+with+MR+Contrast+Agents%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Targeting of Hematopoietic Progenitor Cells with MR Contrast Agents.</a> 228, 760-767 (2003).</li>
<li>Daldrup-Link, H. E., Rudelius, M., Piontek, G., Metz, S., Brauer, R., Debus, G., Corot, C., Schlegel, J., Link, T. M., Peschel, C., Rummeny, E. J., Oostendorp, R. A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Migration+of+iron+oxide+labeled+human+hematopoietic+progenitor+cells+in+a+xenotransplant+model%3A+in+vivo+monitoring+using+clinical+magnetic+resonance+imaging+equipment%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%22%5BJournal%5D)">Migration of iron oxide labeled human hematopoietic progenitor cells in a xenotransplant model: in vivo monitoring using clinical magnetic resonance imaging equipment.</a> Radiology. 234, 197-205 (2005).</li>
<li>Henning, T. D., Saborowski, O., Golovko, D., Boddington, S., Bauer, J. S., Fu, Y., Meier, R., Pietsch, H., Sennino, B., McDonald, D. M., Daldrup-Link, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+labeling+with+the+positive+MR+contrast+agent%5BTitle%5D)+AND+%22Gadofluorine+M.+Eur+Radiol%22%5BJournal%5D)">Cell labeling with the positive MR contrast agent.</a> Gadofluorine M. Eur Radiol. 17, 1226-1234 (2007).</li>
</ol>

Kök hücre non-invaziv bir tasviri hemen hemen her türlü kök hücre tabanlı tedavi izlenmesi için çok önemlidir. Etiketli kök hücrelerin in vivo kinetiği daha iyi bir anlayış, MR görüntüleri görüntülendi, rasyonel bir şekilde ve kök hücre bazlı tedavilerin daha etkin kullanımı neden olabilir. Klinik olarak uygulanabilen kontrast ajanlar ve görüntüleme tekniklerinin kullanılması sebebiyle, sunulan protokolleri hastalarda uygulamalara kolayca çevrilebilir olmalıdır. Yöntemlerden potansiyel klinik uygulamaları karşılaştırmalı araştırmalar, çeşit...

<table><tbody><tr><td>D-MEM High Glucose</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5648</td><td></td></tr><tr><td>Gelatin</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1890</td><td>Gelatin'i PBS içinde 0.1 % nihai konsantrasyona kadar seyreltin</td></tr><tr><td>PBS (Ca++ Mg++ içermeyen)</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA 0.05%</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td>25300-120</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA 0.25%</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td>25200-114</td><td></td></tr><tr><td>Karakterize FBS</td><td>Reaktif</td><td>Hyclone</td><td>SH30071.03</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Süzgeci (40 &amp;mu;m Naylon)</td><td>Araç</td><td>BD Biosciences</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Knockout DMEM</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>10829018</td><td></td></tr><tr><td>Knockout Serum Replacer</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>10828028</td><td></td></tr><tr><td>b-Merkapto&amp;#8211;etanol</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>7522</td><td></td></tr><tr><td>Esansiyel olmayan amino asitler</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>FGF-2</td><td>Reaktif</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>233-FB-025</td><td></td></tr><tr><td>Glutamin</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin/Streptomisin</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Ferumoksitler (Endorem)</td><td>Reaktif</td><td>Guerbet</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ferukarbotran (Resovist&amp;#174;)</td><td>Reaktif</td><td>Bayer AG</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

demir oksit hesc ve hmscs etiketleme mr görüntüleme in vivo takip non-invasive nanopartiküller

Labeling hESCs and hMSCs with Iron Oxide Nanoparticles for Non-Invasive in vivo Tracking with MR Imaging

Son yıllarda, kök hücre araştırmaları, gelişim biyolojisi, çeşitli hastalıklar ve rejeneratif tıp üzerindeki potansiyel etkilerini daha iyi anlaşılmasına yol açmıştır. In vivo olarak nakledilen kök hücreler tekrar tekrar izlemek için bir non-invaziv yöntem büyük ölçüde mekanizmaları anlamak için yeteneğimizi artıracak, kontrol kök hücre ölümü ve kök hücre engraftman artırmak trofik faktörleri ve sinyal yolları belirlemek. MR görüntüleme yakın mikroskobik anatomik çözünürlük ile kök hücreleri in vivo tasviri için etkili bir araç olduğu kanıtlanmıştır. MR ile kök hücreleri algılamak için, hücrelerin hücre spesifik MR kontrast ajanlar ile etiketlenmiş olması gerekir. Bu amaçla, süperparamanyetik demir oksit parçacıkları (SPIO) gibi demir oksit nano, çünkü hücre algılama ve mükemmel biyouyumluluk için yüksek hassasiyet, uygulanır. SPIO parçacıklar demir oksit çekirdek ve yerel alan homojen olmayan düzensizlikleri, T2 ağırlıklı MR görüntülerinde bir azalma sinyali neden oluşturarak, dekstran, carboxydextran veya nişasta mont, ve fonksiyon oluşmaktadır. Bu sunum, MR görüntüleme ile işaretli hücrelerin in vivo izleme sonraki non-invaziv klinik olarak uygulanabilen MR kontrast ajanlar ile kök hücre etiketleme teknikleri gösterecektir.

Değerlendirilmesi için yeni kök hücre tedavileri ile enjekte edilen hücrelerin in vivo takip non-invaziv önemlidir. Bu video demir oksit bazlı kontrast ajanlar ile insan mezenkimal ve embriyonik kök hücreleri, in vivo sonraki MR, in vivo olarak nasıl etiketlemek için size gösterecektir.

Demir Oksit hESC ve hMSCs Etiketleme MR Görüntüleme in vivo Takip Non-Invasive Nanopartiküller

Son yıllarda, kök hücre araştırmaları gelişimsel biyolojinin ve çeşitli hastalıkların daha iyi anlaşılmasını sağlamış ve rejeneratif tıp üzerindeki potansiyel etkilerini...

Dr. Haiku Dal Link'in laboratuvarına hoş geldiniz. Yeni kök hücre tedavilerinin değerlendirilmesine yönelik bu projeyi finanse eden California Rejeneratif Tıp Enstitüsü'ne teşekkür ederiz. Enjekte edilen hücrelerin in vivo olarak non-invaziv yöntemlerle takip edilmesi önemlidir.Bu, hücrelerin in vitro ortamda MR görüntüleme veya optik görüntüleme için spesifik veya çok fonksiyonlu kontrast ajanlarla etiketlenmesiyle mümkündür. Bu video, sonraki in vivo görüntüleme işlemleri için insan mezenkimal ve insan embriyonik kök hücrelerinin nasıl etiketleneceğini gösterecektir. Merhaba, ben California San Francisco Üniversitesi Radyoloji Bölümü'ndeki Moleküler ve Fonksiyonel Görüntüleme Merkezi'nden Kontrast Ajan Araştırma Grubu'ndan Tobias Henning.Bugün size insan mezenkimal kök hücrelerinin perik, karone ve insan embriyonik kök hücrelerinin phem oksitler ile in vitro etiketleme prosedürlerini göstereceğim. Bu teknik, enjekte edilen hücrelerin in vivo lokalizasyonunu sağlamak veya fonksiyonel durumları hakkında bilgi edinmek için kullanışlıdır. MRI kontrast maddesi ile hücre etiketleme prosedürleri embriyonik ve mezenkimal kök hücreler için farklılık gösterir; ancak her iki teknik de şu ad

labeling-hescs-hmscs-with-iron-oxide-nanoparticles-for-non-invasive

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video floresan boya ile insan embriyonik kök hücreler ve mezenkimal kök hücreler etiketleme teknikleri gösterir. Bu teknik, in vivo olarak bir optik görüntüleme ile nakledilen kök hücrelerin izleme ve floresan mikroskobu ile histopatolojik korelasyon kullanılabilir.

Optik Görüntüleme ile non-invaziv Algılama için Floresan Boyalar Kök Hücreler Etiketleme

Bu video, manganez klorür ile insan embriyonik kök hücreleri (hESC) (MnCl etiket nasıl...

İnsan Embriyonik Kök Hücreleri Manyetik Rezonans Görüntüleme için in vitro Etiketleme

Sunumun Amaç, kıkırdak defektleri, MR görüntüleme ile görüntülendi olabilir matris ilişkili kök hücre implantları üretmek için son derece tekrarlanabilir bir yöntem göstermektir. Kök hücreler, agaroz ile karışık FDA onaylı Ferumoxides, kıkırdak hasarlarının içine implante edilerek 7T MR tarayıcı ile görüntülü olarak etiketlenir.

Ferumoxides implantasyonu Kıkırdak Kusur İnsan Mezenkimal Kök Hücreler Etiketli

Nanoparçacıkların hücre biodistribution değerlendirmek için kullanılan bio-görüntüleme yöntemleri, nanoformulated bileşikler tedavi ve teşhis izleme için geçerlidir. Burada açıklanan yöntemler, histolojik coregistration tarafından değerlendirilir, hassas ve özeldir. Metodolojileri kemirgen insan uygulamaları bir translasyonel yol sağlar.

Teşhis ve Tedavi İzleme Nanomalzemelerin Kayıtlı bio

Biz, FDA onaylı, süperparamanyetik demir oksit (SPIO), ferumoxytol (Feraheme) ile kök hücre etiketleme ve izleme için kullanılan bir tekniktir açıklar. Hücresel görüntüleme tekniği, manyetik rezonans görüntüleme (MR) görüntüleme için kullanır Bu, başarılı ya da başarısız hastalarda kök hücre engraftments uzun vadeli izleme ve teşhis için kolay erişilebilir.

Kök Hücreler Ferumoxytol, FDA Onaylı Demir Oksit Nanopartikül Etiketleme

In vivo biyolüminesans ve manyetik rezonans görüntüleme (i) ve (ii) post mortem histolojik analiz: Bu makale ile kemirgen beyinde hücresel greft multimodal görüntüleme için optimize edilmiş olaylar dizisi anlatılmaktadır. Tek bir hayvan bu görüntüleme yöntemleri birleştirerek, yüksek çözünürlüklü, duyarlılık ve özgüllük ile hücresel greft değerlendirilmesine olanak tanımaktadır.

Fareler ve Merkezi Sinir Sisteminde Kök Hücre İmplantasyonu Multimodal Görüntüleme

MRI kullanarak hücrelerin Takip geçmiş yıllarda kayda değer bir ilgi kazanmıştır. Bu protokol, flor ile dendritik hücrelerin etiketlenmesi açıklanmaktadır...

Kullanarak İzleme Dendritik Hücre Göç<sup&gt; 19</sup&gt; F /<sup&gt; 1</sup&gt; H Manyetik Rezonans Görüntüleme

Protokol bilgilerini, ikinci harmonik üreten nanopartiküller ile in vitro etiketleme insan embriyonik kök hücreleri için temin edilmiştir. Çoklu foton mikroskopi ve kalp kümeler halinde kendi farklılaşma ile HESC soruşturma için metodolojiler de sunulmuştur.

Rejeneratif Araştırma harmonik nanopartiküller

Hematopoetik kök hücrelerin işaretleme Kombinatoryel 5 floresan proteinleri rejenerasyon sırasında kemik iliği hematopoetik mimarisi içine anlayışlar, confocal ve iki foton mikroskopi ile in vivo klonal izleme sağlar. Bu yöntem nakli aşağıdaki kapsamlı bir süre için sağlam dokularda spektral kodlu HSPCs kökenli hücrelerin non-invaziv kader haritalama sağlar.

Eşodaklı ve multiphoton Mikroskopi kullanarak beş Floresan Proteinleri ile işaretlenmiş Hematopoetik kök hücrelerin in vivo klonal Takip

Hedeflenen hücre iletimi, çeşitli biyomedikal uygulamalarda yararlıdır.  Bu protokolün amacı, hücreleri etiketlemek için süperparamanyetik demir oksit nanopartikülleri (SPION) kullanmak ve böylece hücre iletimi ve lokalizasyonu üzerinde yüksek derecede kontrol için manyetik hücre hedefleme yaklaşımlarını mümkün kılmaktır.

Hücre Etiketleme ve Süperparamanyetik Demir Oksit Nanopartiküller ile Hedefleme

Burada sunulan non-invaziv mezenkimal kök hücre için bir protokol (MSC) teslim ve travmatik beyin hasarı bir fare modeli nde izleme. Süperparamanyetik demir oksit nano partikülleri, msc etiketlemesi için manyetik rezonans görüntüleme (MRG) prob ve gerçek zamanlı MRG kullanılarak intranazal doğumdan sonra invaziv in vivo izleme için non-invaziv in vivo izleme olarak kullanılır.

Travmatik Beyin Hasarı Murine Modelinde İntranazal Doğum sonrası MRG kullanarak Süperparamanyetik Demir Oksit etiketli Mezenkimal Kök Hücrelerin Takibi

Keşfedin demir oksit nanopartiküllerle hESC ve hMSCs etiketleme yöntemini MR görüntüleme için. Bu teknik, enjekte edilen kök hücrelerin invivo takibini sağlar ve yeni tedavilerin değerlendirilmesine yardımcı olur.

Demir Oksit hESC ve hMSCs Etiketleme MR Görüntüleme in vivo Takip Non-Invasive Nanopartiküller

Daha fazla video keşfet