Name: Laboratuvar ortamında Fazla Ayrılmış Dev Unilamellar Veziküller (GUVler) İçindeki Hücre İskeleti Ağlarının Sulandırılması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-20T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 34 s
Description: Öğrenin, faz ayrışmalı dev unilamellar veziküller içinde hücre iskeleti ağlarını yeniden oluşturma yöntemini. Bu teknik, FtsZ ve aktin gibi proteinlerin kapsüllenmesini sağlayarak sentetik hücre sistemlerinde sitoskelet dinamiklerini incelemeye olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Rideau, E., Dimova, R., Schwille, P., Wurm, F. R., Landfester, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposomes+and+polymersomes%3A+a+comparative+review+towards+cell+mimicking%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Soc+Rev%22%5BJournal%5D)">Liposomes and polymersomes: a comparative review towards cell mimicking.</a> Chem Soc Rev. 47 (23), 8572-8610 (2018).</li>
<li>Imai, M., Walde, P. Giant unilamellar vesicles: From protocell models to the construction of minimal cells. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aImai%2C+M+%22The+Giant+Vesicle+Book%22">The Giant Vesicle Book</a>. , (2019).</li>
<li>Akbarzadeh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposome%3A+classification%2C+preparation%2C+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale+Res+Lett%22%5BJournal%5D)">Liposome: classification, preparation, and applications.</a> Nanoscale Res Lett. 8 (1), 102(2013).</li>
<li>Litschel, T., Schwille, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+Reconstitution+Inside+Giant+Unilamellar+Vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Biophys%22%5BJournal%5D)">Protein Reconstitution Inside Giant Unilamellar Vesicles.</a> Annu Rev Biophys. 50 (1), 100620-114132 (2021).</li>
<li>Dimova, R., Aranda, S., Bezlyepkina, N., Nikolov, V., Riske, K. A., Lipowsky, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+guide+to+giant+vesicles.+Probing+the+membrane+nanoregime+via+optical+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Phys+Condens+Matter%22%5BJournal%5D)">A practical guide to giant vesicles. Probing the membrane nanoregime via optical microscopy.</a> J Phys Condens Matter. 18 (28), S1151-S1176 (2006).</li>
<li>Angelova, M. I., Dimitrov, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposome+electroformation%5BTitle%5D)+AND+%22Faraday+Discuss+Chem+Soc%22%5BJournal%5D)">Liposome electroformation.</a> Faraday Discuss Chem Soc. 81 (0), 303-311 (1986).</li>
<li>Abkarian, M., Loiseau, E., Massiera, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+droplet+interface+crossing+encapsulation+%28cDICE%29+for+high+throughput+monodisperse+vesicle+design%5BTitle%5D)+AND+%22Soft+Matter%22%5BJournal%5D)">Continuous droplet interface crossing encapsulation (cDICE) for high throughput monodisperse vesicle design.</a> Soft Matter. 7 (10), 4610-4614 (2011).</li>
<li>Dürre, K., Bausch, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+phase+separated+vesicles+by+double+layer+cDICE%5BTitle%5D)+AND+%22Soft+Matter%22%5BJournal%5D)">Formation of phase separated vesicles by double layer cDICE.</a> Soft Matter. 15 (47), 9676-9681 (2019).</li>
<li>Pautot, S., Frisken, B. J., Weitz, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+Unilamellar+Vesicles+Using+an+Inverted+Emulsion%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Production of Unilamellar Vesicles Using an Inverted Emulsion.</a> Langmuir. 19 (7), 2870-2879 (2003).</li>
<li>Deshpande, S., Caspi, Y., Meijering, A. E. C., Dekker, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Octanol-assisted+liposome+assembly+on+chip%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Octanol-assisted liposome assembly on chip.</a> Nat Commun. 7 (1), 10447(2016).</li>
<li>Walde, P., Cosentino, K., Engel, H., Stano, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Giant+Vesicles%3A+Preparations+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22ChemBioChem%22%5BJournal%5D)">Giant Vesicles: Preparations and applications.</a> ChemBioChem. 11 (7), 848-865 (2010).</li>
<li>Moga, A., Yandrapalli, N., Dimova, R., Robinson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+Inverted+Emulsion+Method+for+High-Yield+Production+of+Biomimetic+Giant+Unilamellar+Vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22ChemBioChem%22%5BJournal%5D)">Optimization of the Inverted Emulsion Method for High-Yield Production of Biomimetic Giant Unilamellar Vesicles.</a> ChemBioChem. 20 (20), 2674-2682 (2019).</li>
<li>Liu, A. P., Fletcher, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin+polymerization+serves+as+a+membrane+domain+switch+in+model+lipid+bilayers%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Actin polymerization serves as a membrane domain switch in model lipid bilayers.</a> Biophys J. 91 (11), 4064-4070 (2006).</li>
<li>Lopes dos Santos, R., Malo, M., Campillo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+Control+of+Arp2%2F3-Induced+Actin+Polymerization+on+Phase-Separated+Giant+Unilamellar+Vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Synth+Biol%22%5BJournal%5D)">Spatial Control of Arp2/3-Induced Actin Polymerization on Phase-Separated Giant Unilamellar Vesicles.</a> ACS Synth Biol. 12 (11), 3267-3274 (2023).</li>
<li>Sun, Q., Fu, Y., Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature+effects+on+hydrophobic+interactions%3A+Implications+for+protein+unfolding%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Phys%22%5BJournal%5D)">Temperature effects on hydrophobic interactions: Implications for protein unfolding.</a> Chem. Phys. 559, 111550(2022).</li>
<li>Zimmerle, C. T., Frieden, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+temperature+on+the+mechanism+of+actin+polymerization%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Effect of temperature on the mechanism of actin polymerization.</a> Biochemistry. 25 (21), 6432-6438 (1986).</li>
<li>Concha-Marambio, L., Maldonado, P., Lagos, R., Monasterio, O., Montecinos-Franjola, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermal+adaptation+of+mesophilic+and+thermophilic+FtsZ+assembly+by+modulation+of+the+critical+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Thermal adaptation of mesophilic and thermophilic FtsZ assembly by modulation of the critical concentration.</a> PLoS One. 12 (10), e0185707(2017).</li>
<li>Kanwa, N., Kohyama, S., Fröhlich, L., Desai, A., Schwille, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutual+dependence+between+membrane+phase+separation+and+bacterial+division+protein+dynamics+in+synthetic+cell+models%5BTitle%5D)+AND+%22Angew+Chem+Int+Ed+Engl%22%5BJournal%5D)">Mutual dependence between membrane phase separation and bacterial division protein dynamics in synthetic cell models.</a> Angew Chem Int Ed Engl. 64 (6), e202417800(2025).</li>
<li>Reverte-López, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-organized+spatial+targeting+of+contractile+actomyosin+rings+for+synthetic+cell+division%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Self-organized spatial targeting of contractile actomyosin rings for synthetic cell division.</a> Nat Commun. 15 (1), 10415(2024).</li>
<li>dos Santos, R. L., Campillo, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studying+actin-induced+cell+shape+changes+using+Giant+Unilamellar+Vesicles+and+reconstituted+actin+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Soc+Trans%22%5BJournal%5D)">Studying actin-induced cell shape changes using Giant Unilamellar Vesicles and reconstituted actin networks.</a> Biochem Soc Trans. 50 (5), 1527(2022).</li>
<li>Staufer, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+production+and+characterization+of+biofunctionalized+giant+unilamellar+vesicles+for+targeted+intracellular+cargo+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Microfluidic production and characterization of biofunctionalized giant unilamellar vesicles for targeted intracellular cargo delivery.</a> Biomaterials. 264, 120203(2021).</li>
<li>Lopes, D., Jakobtorweihen, S., Nunes, C., Sarmento, B., Reis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shedding+light+on+the+puzzle+of+drug-membrane+interactions%3A+Experimental+techniques+and+molecular+dynamics+simulations%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Shedding light on the puzzle of drug-membrane interactions: Experimental techniques and molecular dynamics simulations.</a> Prog Lipid Res. 65, 24-44 (2017).</li>
<li>Peetla, C., Stine, A., Labhasetwar, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biophysical+interactions+with+model+lipid+membranes%3A+applications+in+drug+discovery+and+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">Biophysical interactions with model lipid membranes: applications in drug discovery and drug delivery.</a> Mol Pharm. 6 (5), 1264-1276 (2009).</li>
<li>Schulz, M., Werner, S., Bacia, K., Binder, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlling+Molecular+Recognition+with+Lipid%2FPolymer+Domains+in+Vesicle+Membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Angew+Chem+Int+Ed+Engl%22%5BJournal%5D)">Controlling Molecular Recognition with Lipid/Polymer Domains in Vesicle Membranes.</a> Angew Chem Int Ed Engl. 52 (6), 1829-1833 (2013).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1,2-dioleoil-sn-glisero-3-fosfo-(1'-rak-gliserol) (sodyum tuzu) (DOPG)</td><td>Avanti Polar lipidler</td><td>840475</td><td>Kloroformda</td></tr><tr><td>1,2-dioleoil-sn-glisero-3-fosfokolin (DOPC)</td><td>Avanti Polar lipidler</td><td>850375</td><td>Kloroformda</td></tr><tr><td>1,2-dioleoil-sn-glisero-3-fosfoetanolamin-N-(kap biyotinil) (sodyum tuzu) (18:1 Biotinyl Cap PE)</td><td>Avanti Polar lipidler</td><td>870273</td><td>In kloroform</td></tr><tr><td>1,2-dipalmitoil-sn-glisero-3-fosfo-(1'-rak-gliserol) (sodyum tuzu) (DPPG)</td><td>Avanti Polar lipidler</td><td>840455</td><td>Kloroformda</td></tr><tr><td>1,2-dipalmitoil-sn-glisero-3-fosfokolin (DPPC)</td><td>Avanti Polar lipidler</td><td>850355</td><td>kloroformda</td></tr><tr><td>96-Kuyulu Düz Tabanlı Mikroplaka (SensoPlate)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aktin (alfa-aktin iskelet kası, tavşan)</td><td>HYPERMOL</td><td>8101-01</td><td></td></tr><tr><td>Atto488-Aktin (alfa-aktin iskelet kası, tavşan)</td> <td>HYPERMOL</td><td>8153-01</td><td></td></tr><tr><td>Atto655-DOPE</td><td>ATTO-TEC</td><td>AD 655-16</td><td>Toz</td></tr><tr><td>Banyosu Sonikatör</td><td>Branson&nbsp;</td><td>1510R-MTH</td><td>Bransonic Ultrasonik Temizleyici</td></tr><tr><td>Biotin-Actin (alfa-aktin iskelet kası, tavşan)</td><td>HYPERMOL</td><td>8109-01</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A6003</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>5424R</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>5804 R</td><td></td></tr><tr><td>Kloroform</td><td>Sigma Aldrich</td><td>67-66-3</td><td></td></tr><tr><td>Kolesterol (sığır)</td><td>Avanti Polar lipidler</td><td>700000</td><td>Kloroform</td></tr><tr><td>Dekane'de</td><td>TCI Deutschland GmbH</td><td>D0011</td><td></td></tr><tr><td>Fascin (insan, rekombinant)</td><td>Cytoskeleton Inc (Tebubio GmbH)</td><td>CS-FSC01-A</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll70</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F2878</td><td></td></tr><tr><td>Iodixanol (OptiPrep)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D1556</td><td></td></tr><tr><td>LSM800 konfokal lazer tarama mikroskobu</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td>C-Apochromat 40&thinsp; &zamanlar; &thinsp;/1.2 suya daldırma hedefi. Diyot pompalı katı hal lazerleri: 488 & thinsp; nm ve 640 & ince; Nm.</td></tr><tr><td>Mineral yağ</td><td>Sigma Aldrich</td><td>8042-47-5</td><td></td></tr><tr><td>Miyozin II (tavşan iskelet kası)</td><td>Hücre iskeleti Inc (Tebubio GmbH)</td><td>MY02-A</td><td></td></tr><tr><td>Neutravidin</td><td>Thermo Fisher Scientific Inc.</td><td>31000</td><td></td></tr><tr><td>Ozmometre</td><td>Fiske Associates</td><td></td><td>Fiske Mikro-Ozmometre modeli 120</td></tr><tr><td>Greiner Bio-One</td><td>&nbsp; GmbH</td><td>07-000-109</td><td></td></tr></tbody></table>

laboratuvar ortamında fazla ayrılmış dev unilamellar veziküller (guv'ler) İçindeki hücre İskeleti ağlarının sulandırılması

In vitro Reconstitution of Cytoskeletal Networks inside Phase Separated Giant Unilamellar Vesicles (GUVs)

İlk adım olarak, modifiye edilmiş bir ters emülsiyon yaklaşımı izlenerek membran faz ayrımlı GUV'ler üretilmiştir (Şekil 1A). Bu, Ld alanı üzerindeki Atto 655-DOPE etiketi ve etiketlenmemiş L o alanlarına karşılık gelen koyu bölgeler ile temsil edildiği gibi, Ld ve Lo alanlarına karışmış bir zar sergileyen yüksek birGUV verimi ile sonuçlanır (Şekil 1B). Bu yöntem, yüksek sıcaklıklarda (tüm adımlar 37 °C'de gerçekleştirilir ve RT'de görüntülenir) 5-30 μm arasında değişen boyutlarda fazla ayrılmış GUV'ler verir (Şekil 1C). Ayrıca, santrifüjleme hızları, orijinal bileşen lipidlerinin GUV'lara dahil edilmesini sağlamak ve aşırı aşırı popülasyonu önlemek için ayarlandı.
Ayrıca, mevcut protokolde açıklanan emülsiyon yöntemi kullanılarak biyomoleküllerin başarılı bir şekilde kapsüllendiğini göstermek için, hem FtsZ hem de aktin ağları bireysel deneylerde yeniden oluşturuldu. FtsZ ağları, 2.5 mM GTP ve 50 g/L Ficoll70 (Şekil 2'de gösterildiği gibi) varlığında membran hedefleme dizileri (MTS) aracılığıyla tercihenLD alanlarına bağlanan filamentler olarak ortaya çıkan GUV'ların içinde özetlenir. Ağlar, kapsülleme adımından yaklaşık 1 saat sonra gözlemlendi. Bununla birlikte, aktomiyosin ağları, GUV'ler içinde sulandırıldıktan sonra ince demetler (kalın FtsZ ağlarının aksine) olarak ortaya çıkar (Şekil 3). Biyotinile lipidlerin, aktomiyosin ağlarının GUV'lerin zarına bağlanmasında çok önemli bir rol oynadığına dikkat edilmelidir. Biyotinile lipidler olmadan, aktomiyosin demetleri kavisli bir konfigürasyon benimseyemez ve uzun demetlerden oluşan dolaşık bir ağ olarak zara yapışmak yerine lümende düz, kısa ve sert demetler halinde kalamaz (Şekil 4).
Modifiye edilmiş emülsiyon protokolünde, santrifüjleme hızı, daha önce belirtildiği gibi, fazla ayrılmış GUV'lar elde etmek için ayarlanır. Gerçekten de, aktomiyosin ağları içeren numunelerle (15 dakika boyunca 600 x g ) daha yüksek santrifüjleme hızları, veziküllerin üretim kuyusu içinde doku benzeri bir konfigürasyonda toplanmasına neden olur. Bu nedenle, aktomiyosin ağlarının tüm standart sulandırma deneylerinde, toplanmamış GUV'ler elde etmek için optimum santrifüjleme hızı 200 x g'ye ayarlanmıştır (Şekil 5).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68530/68530fig1.jpg"> 
Şekil 1: Çift emülsiyon transfer yöntemini kullanan faz ayrılmış GUV'lerin tek hazneli üretimi. (A) Çift emülsiyon transferi yoluyla faz ayrılmış veziküllerin tek hazne üretimindeki temel adımların deneysel şeması. (B) A'da açıklanan yöntem izlenerek oluşturulan sonuçta elde edilen GUV'lerin konfokal Z-projeksiyon görüntüsü. Ölçek çubuğu 50 μm'dir. (C) Çaplarına göre oluşturulan faz ayrılmış GUV'lerin fraksiyonu ile çubuk grafik. Yapılan deneyler n = 3, deney başına analiz edilen toplam GUV sayısı = 100. Ortalama değerler olarak gösterilen veriler, bireysel veri noktaları üç bağımsız deneydir. Hata çubukları, üç deneyin standart sapmasını temsil eder. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68530/68530fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68530/68530fig2.jpg"> 
Şekil 2: Kapsüllenmiş FtsZ ağlarına sahip faz ayrılmış veziküller. (A) Bir FtsZ ağı içeren fazla ayrılmış bir GUV'nin tamamen elde edilmiş bir z-yığını üzerinde gerçekleştirilen konfokal 3D projeksiyon görüntüleri. (B) Vezikülün sadece üst yarısında gerçekleştirilen konfokal Z-projeksiyon görüntüleri. GUV yüzeyi üzerindeki alanların heterojen oluşumu nedeniyle, elde edilen konfokal dilimlerin 3D rekonstrüksiyonu, vezikülün üst ve alt bölgelerinden lipit alanlarının örtüşmesini gösterir. Çakışmayı önlemek ve etki alanlarının görsel incelemesini kolaylaştırmak için, alınan z-yığınlarının alt yarısı dosyadan kaldırılır. Elde edilen üst yarısı daha sonra standart sapma yoluyla 3D projeksiyonu için kullanılır. Ölçek çubuklarının her ikisi de 20 μm'dir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68530/68530fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68530/68530fig3.jpg"> 
Şekil 3: Kapsüllenmiş aktomiyosin ağlarına sahip faz ayrılmış veziküller. (A) Vezikül üretiminden sonra kuyunun uzaklaştırılmış görünümü ile elde edilen tüm bir yığının konfokal Z-projeksiyon görüntüleri. Elde edilen yüksek vezikül verimi, veziküller içindeki farklı aktomiyosin yapılarının incelenmesine izin verir. Ölçek çubuğu 50 μm'dir. (B) Bir vezikülün üst yarısında gerçekleştirilen konfokal Z-projeksiyon görüntüleri. Lipid alanlarının görsel analizini kolaylaştırmak için, 3D projeksiyon gerçekleştirmek için görüntü dilimlerinin yalnızca üst yarısı kullanılır. Ölçek çubuğu 10 μm'dir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68530/68530fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68530/68530fig4.jpg"> 
Şekil 4: Fazla ayrılmış veziküller içinde zara bağlı aktomiyosin ağlarının oluşumu için biyotinile lipidlerin önemi. Bağlı olmayan aktomiyosin ağları ile faz ayrılmış vezikülleri gösteren konfokal 3D projeksiyonlar. Biyotinile lipidler karışıma dahil edilmezse, aktomiyosin yapıları lümende oluşur ve veziküllerin iç broşüründe kavisli bir konfigürasyon elde etmez (sağ panel, Atto488 ile etiketlenmiş aktin). Ölçek çubuğu 50 μm'dir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68530/68530fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68530/68530fig5.jpg"> 
Şekil 5: Santrifüjleme hızının emülsiyon transferi yoluyla faz ayrılmış veziküllerin üretimi üzerindeki etkisi. 15 dakika boyunca 600 x g'lık bir santrifüj kuvveti kullanılarak oluşturulan bir GUV örneğini gösteren konfokal 2D görüntüler. Kullanılan santrifüj hızı, optimize edilmiş 200 x g'den daha yüksek, veziküllerin kuyu içinde doku benzeri bir konfigürasyonda toplanmasına neden olur. Ölçek çubuğu 100 μm'dir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68530/68530fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Laboratuvar ortamında Fazla Ayrılmış Dev Unilamellar Veziküller (GUV'ler) İçindeki Hücre İskeleti Ağlarının Sulandırılması

Biomimetic lipid membranes in the form of giant unilamellar vesicles (GUVs) are commonly used to mimic cellular membrane behavior because of the ease of ...

in-vitro-reconstitution-cytoskeletal-networks-inside-phase-separated

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

electroformation ve jel destekli şişme - dev tek tabakalı veziküller (GUVs) içine transmembran protein, KvAP, şifreden iki dehidrasyon-rehidrasyon yöntemleri için gösterilmiştir. Her iki yöntemde de, protein içeren küçük tek lamelli kesecikler, sonra, flüoresans mikroskopisi ve yama klempi elektrofizyoloji ile incelenebilir GUVs oluşturmak üzere bir araya birleştirilir.

Bir transmembran proteinin yeniden oluşturulması, Mikroskop ve yama kelepçe Çalışmaları Dev tek-katmanlı keseler içine Voltaj kapılı iyon kanalı, KvAP,

Yüksek oranda paketlenmiş mikrometre boyutunda bileşenler içeren dev kesecikler kullanışlı hücre modelleridir. Yağda su emülsiyonu santrifüjleme yöntemi, kapsüllenmiş malzemelerle dev veziküllerin hazırlanması için basit ve güçlü bir araçtır.

bir su-içinde-yağ emülsiyonu santrifüj Dev veziküller Kapsüllenen Mikrokürelerin hazırlanması

Ayrılmış faz dev unilamellar veziküller (GUVs) üzerinde deneyler sık fizyolojik çözüm koşulları ihmal. Bu çalışma yüksek tuzluluk arabellek etkisi ücret uygulamasının GUVs trans-membran çözüm asimetri ve sıcaklık sıvı-sıvı faz ayrılmaya bir fonksiyonu olarak çalışmaya yaklaşımlar sunar.

Şarj edilmiş veziküller Floresans mikroskobu ile izlenen simetrik ve asimetrik çözüm koşullarda davranışını faz

Çoğu protein hücredeki hissediyorum ve membran eğriliği neden. Membran nanotüpler lipid veziküller eğri membranlar içinde vitroetkileşim proteinler veya herhangi bir eğrilik aktif molekül çalışmaya üzerinden çekmek için bir yöntem açıklanmaktadır.

Membran nanotüpler dev Unilamellar veziküller çekerek

Biz bir teknik veziküller, temassız embriyolardan için yerelleştirilmiş kalsiyum iyon degradeler kullanarak mevcut. Bir dev lipid vezikül, çevresinde bir kalsiyum iyon eriyik mikroenjeksiyon membran borulu çıkıntılar üretiminde kaynaklanan lipit membran yeni model için kullanılmaktadır.

Yanıt olarak lokalize kalsiyum iyon degradeler dev veziküller membran Remodeling

Bu makalede, kapsüllenmiş sitoiskelet proteinleri ile dev unilamellar veziküllerin hızlı üretimi için basit bir yöntem tanıtılmaktadır. Yöntemin, hapsetmede ve sitoiskelet-membran etkileşimlerinde sitoiskelet yapılarının aşağıdan yukarıya doğru resulaştırılmasında yararlı olduğu kanıtlanmıştır.

Yeniden Yapılandırılmış Hücre İskeletinin Dev Unilameller Veziküller İçinde Hızlı Kapsüllenmesi

Septinler sitoiskelet proteinleridir. Lipid membranlarla etkileşime girerler ve mikron ölçeğinde membran eğriliğini algılayabilir ancak aynı zamanda üretebilirler. Bu protokolde membran deformasyonlarını, eğriliğe duyarlı septin bağlanmasını ve septin filament ultrayapısını analiz etmek için aşağıdan yukarıya in vitro metodolojileri tanımladık.

Septinlerin Ultrayapısal Organizasyonunu, Membran Yeniden Şekillendirmesini ve Eğrilik Duyarlılığı Davranışını Analiz Etmek için Aşağıdan Yukarıya In Vitro Yöntemler

Bu yazıda, F-aktin sitoiskeletini dev unilamellar lipid veziküllerine (lipozomlar olarak da adlandırılır) kapsüllemek için deneysel teknikleri ve lipozom zarının iç broşüründe korteks-biyomimik yapan bir F-aktin tabakası oluşturma yöntemini göstereceğiz.

İn Vitro Aktin Hücre İskeletinin Dev Unilameller Veziküller İçinde Yeniden Sulandırılması

Membran proteinlerinin yeniden yapılandırılması ve enzimlerin ve diğer suda çözünür bileşenlerin mikrometre altı ve mikrometre boyutundaki lipid veziküllerinde kapsüllenmesi için bir protokol sunuyoruz.

Nano ve Mikrometre Boyutlu Veziküllerde Denge Dışı Metabolik Ağların İnşası

Bu makale, iç, halka ve dış bölgelerde özelleştirilmiş elektriksel iletkenliğe sahip, vezikül içinde vezikül yapısına sahip bileşik Dev Unilamellar Veziküllerin (cGUV'ler) hazırlanması için bir yöntem sunar. Elektroformasyon, ozmotik şok yoluyla stomatositlere ve cGUV'lara dönüştürülen basit GUV'leri sentezler ve çekirdekli hücrelerin biyofiziğini incelemek için değerli bir model sağlar.

Bileşik Dev Unilamellar Veziküllerin Sentezi: Çekirdek Hücrelerin Biyomimetik Bir Modeli

Öğrenin, faz ayrışmalı dev unilamellar veziküller içinde hücre iskeleti ağlarını yeniden oluşturma yöntemini. Bu teknik, FtsZ ve aktin gibi proteinlerin kapsüllenmesini sağlayarak sentetik hücre sistemlerinde sitoskelet dinamiklerini incelemeye olanak tanır.

Laboratuvar ortamında Fazla Ayrılmış Dev Unilamellar Veziküller (GUV'ler) İçindeki Hücre İskeleti Ağlarının Sulandırılması

Daha fazla video keşfet