Escherichia coli'den Toksik Bir Nükleazın Aşırı İfade Edilmesi ve Saflaştırılması

Laboratuvarımız, evrimsel bir model geliştirmek ve terapötik hedefler için bir temel sağlamak amacıyla, koronavirüsler de dahil olmak üzere nidovirüslerde bulunan korunmuş bir endonükleazı yapısal ve biyokimyasal olarak karakterize etmeyi amaçlamaktadır. Hücresel DNA veya RNA üzerindeki enzimatik aktivite nedeniyle nükleazların E coli sistemlerinde eksprese edilmesi zor olabilir, bu da yavaş büyümeye ve zayıf protein verimine neden olabilir. Bulgumuz, daha ileri biyokimyasal ve yapısal çalışmalar için toksik nükleazları diğer nidovirüslerden saflaştırmamıza izin verecektir.

Başlamak için, her litre kültür için bir adet 50 mililitrelik sterilize edilmiş Erlenmeyer şişesi kullanın ve başlangıç kültürleri olarak iki ila üç ek şişe hazırlayın. Şişeler arasında görsel bir fark olmadığı sürece, ölçümleri tüm büyümeyi temsil edeceğinden, optik yoğunluk kontrolleri için şişelerden birini bir yıldızla etiketleyin. Dereceli bir silindir kullanarak, eksi 20 santigrat dereceden çözülmüş 60 mililitre 2X TY ortamı ve 60 mikrolitre ampisilin stok çözeltisini birleştirerek bir ana karışım hazırlayın.