Name: Sığır Yumurtalığındaki Granüloza-Teka Hücre Etkileşimlerini Anlamak için Modifiye Edilmiş Bir Ko-Kültür Sistemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-19T13:25:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: Keşfedin sığır teka ve granüloza hücrelerinin ko-kültür modelini; parakrin sinyalleşme ve foliküler dinamikleri in vivo ortamda analiz edin. Bu yöntem üreme biyolojisi araştırmaları için değerli bir temel sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Adams, G. P., Jaiswal, R., Singh, J., Malhi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+understanding+ovarian+follicular+dynamics+in+cattle%5BTitle%5D)+AND+%22Theriogenology%22%5BJournal%5D)">Progress in understanding ovarian follicular dynamics in cattle.</a> Theriogenology. 69 (1), 72-80 (2008).</li>
<li>Forde, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oestrous+cycles+in+Bos+taurus+cattle%5BTitle%5D)+AND+%22Anim+Reprod+Sci%22%5BJournal%5D)">Oestrous cycles in Bos taurus cattle.</a> Anim Reprod Sci. 124 (3-4), 163-169 (2011).</li>
<li>Hennet, M. L., Combelles, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antral+follicle%3A+A+microenvironment+for+oocyte+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">The antral follicle: A microenvironment for oocyte differentiation.</a> Int J Dev Biol. 56 (10-12), 819-831 (2012).</li>
<li>Christenson, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+resource%3A+Preovulatory+LH+surge+effects+on+follicular+theca+and+granulosa+transcriptomes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Research resource: Preovulatory LH surge effects on follicular theca and granulosa transcriptomes.</a> Mol Endocrinol. 27 (7), 1153-1171 (2013).</li>
<li>Baufeld, A., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+cell+plating+density+mimics+an+early+post-LH+stage+in+cultured+bovine+granulosa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Increasing cell plating density mimics an early post-LH stage in cultured bovine granulosa cells.</a> Cell Tissue Res. 354, 869-880 (2013).</li>
<li>Baufeld, A., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Tissue+culture+model+of+estrogen-producing+primary+bovine+granulosa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Tissue culture model of estrogen-producing primary bovine granulosa cells.</a> J Vis Exp. (139), e58208(2018).</li>
<li>Gutierrez, C. G., Campbell, B. K., Webb, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+long-term+bovine+granulosa+cell+culture+system%3A+Induction+and+maintenance+of+estradiol+production%2C+response+to+follicle-+stimulating+hormone%2C+and+morphological+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Development of a long-term bovine granulosa cell culture system: Induction and maintenance of estradiol production, response to follicle- stimulating hormone, and morphological characteristics.</a> Biol Reprod. 56 (3), 608-616 (1997).</li>
<li>Hamel, M., Vanselow, J., Nicola, E. S., Price, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Androstenedione+increases+cytochrome+P450+aromatase+messenger+ribonucleic+acid+transcripts+in+non-luteinizing+bovine+granulosa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Androstenedione increases cytochrome P450 aromatase messenger ribonucleic acid transcripts in non-luteinizing bovine granulosa cells.</a> Mol Reprod Dev. 70, 175-183 (2005).</li>
<li>Chandrasekher, Y. A., Fortune, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+oxytocin+on+steroidogenesis+by+bovine+theca+and+granulosa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Effects of oxytocin on steroidogenesis by bovine theca and granulosa cells.</a> Endocrinology. 127 (2), 926-933 (1990).</li>
<li>Silva, J. M., Price, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+follicle-stimulating+hormone+on+steroid+secretion+and+messenger+ribonucleic+acids+encoding+cytochromes+P450+aromatase+and+cholesterol+side-chain+cleavage+in+bovine+granulosa+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Effect of follicle-stimulating hormone on steroid secretion and messenger ribonucleic acids encoding cytochromes P450 aromatase and cholesterol side-chain cleavage in bovine granulosa cells in vitro.</a> Biol Reprod. 62 (1), 186-191 (2000).</li>
<li>Gong, J. G., McBride, D., Bramley, T. A., Webb, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+recombinant+bovine+somatotrophin%2C+insulin-like+growth+factor-I+and+insulin+on+bovine+granulosa+cell+steroidogenesis+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Effects of recombinant bovine somatotrophin, insulin-like growth factor-I and insulin on bovine granulosa cell steroidogenesis in vitro.</a> J Endocrinol. 143 (1), 157-164 (1994).</li>
<li>Baufeld, A., Koczan, D., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L-lactate+induces+specific+genome-wide+alterations+of+gene+expression+in+cultured+bovine+granulosa+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">L-lactate induces specific genome-wide alterations of gene expression in cultured bovine granulosa cells.</a> BMC Genomics. 20 (1), 273(2019).</li>
<li>Baddela, V. S., Sharma, A., Plinski, C., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palmitic+acid+protects+granulosa+cells+from+oleic+acid+induced+steatosis+and+rescues+progesterone+production+via+cAMP+dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Mol+Cell+Biol+Lipids%22%5BJournal%5D)">Palmitic acid protects granulosa cells from oleic acid induced steatosis and rescues progesterone production via cAMP dependent mechanism.</a> Biochim Biophys Acta Mol Cell Biol Lipids. 1867 (8), 159159(2022).</li>
<li>Sharma, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+free+fatty+acids+affect+bovine+granulosa+cell+function%3A+a+molecular+cue+for+compromised+reproduction+during+negative+energy+balance%5BTitle%5D)+AND+%22Endocr+Connect%22%5BJournal%5D)">Elevated free fatty acids affect bovine granulosa cell function: a molecular cue for compromised reproduction during negative energy balance.</a> Endocr Connect. 8 (5), 493-505 (2019).</li>
<li>Hillier, S. G., Whitelaw, P. F., Smyth, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Follicular+oestrogen+synthesis+-+The+two-cell%2C+two-+gonadotrophin+model+revisited%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Follicular oestrogen synthesis - The two-cell, two- gonadotrophin model revisited.</a> Mol Cell Endocrinol. 100, 51-54 (1994).</li>
<li>Campen, K. A., Lavallee, M., Combelles, C. M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+bisphenol+S+on+bovine+granulosa+and+theca+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Domest+Anim%22%5BJournal%5D)">The impact of bisphenol S on bovine granulosa and theca cells.</a> Reprod Domest Anim. 53 (2), 450-457 (2018).</li>
<li>Glister, C., Richards, S. L., Knight, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+morphogenetic+proteins+%28BMP%29+-4%2C+-6%2C+and+-7+potently+suppress+basal+and+luteinizing+hormone-induced+androgen+production+by+bovine+theca+interna+cells+in+primary+culture%3A+could+ovarian+hyperandrogenic+dysfunction+be+caused+by+a+defect+in+thecal+BMP+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Bone morphogenetic proteins (BMP) -4, -6, and -7 potently suppress basal and luteinizing hormone-induced androgen production by bovine theca interna cells in primary culture: could ovarian hyperandrogenic dysfunction be caused by a defect in thecal BMP signaling.</a> Endocrinology. 146 (4), 1883-1892 (2005).</li>
<li>Wrathall, J. H., Knight, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+inhibin-related+peptides+and+oestradiol+on+androstenedione+and+progesterone+secretion+by+bovine+theca+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Effects of inhibin-related peptides and oestradiol on androstenedione and progesterone secretion by bovine theca cells in vitro.</a> J Endocrinol. 145 (3), 491-500 (1995).</li>
<li>Shores, E. M., Picton, H. M., Hunter, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+regulation+of+pig+theca+cell+steroidogenesis+by+LH%2C+insulin-like+growth+factor+I+and+granulosa+cells+in+serum-free+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Reprod+Fertil%22%5BJournal%5D)">Differential regulation of pig theca cell steroidogenesis by LH, insulin-like growth factor I and granulosa cells in serum-free culture.</a> J Reprod Fertil. 118 (2), 211-219 (2000).</li>
<li>Gregoraszczuk, E. L., Ptak, A., Karniewska, M., Ropstad, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Action+of+defined+mixtures+of+PCBs%2C+p%2Cp%27-DDT+and+its+metabolite+p%2Cp%27-DDE%2C+on+co-culture+of+porcine+theca+and+granulosa+cells%3A+steroid+secretion%2C+cell+proliferation+and+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Action of defined mixtures of PCBs, p,p'-DDT and its metabolite p,p'-DDE, on co-culture of porcine theca and granulosa cells: steroid secretion, cell proliferation and apoptosis.</a> Reprod Toxicol. 26 (2), 170-174 (2008).</li>
<li>Rak, A., Drwal, E., Wróbel, A., Gregoraszczuk, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resistin+is+a+survival+factor+for+porcine+ovarian+follicular+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Resistin is a survival factor for porcine ovarian follicular cells.</a> Reproduction. 150 (4), 343-355 (2015).</li>
<li>Kotsuji, F., Tominaga, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+granulosa+and+theca+cell+interactions+in+ovarian+structure+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">The role of granulosa and theca cell interactions in ovarian structure and function.</a> Microsc Res Tech. 27 (2), 97-107 (1994).</li>
<li>Orisaka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+ovarian+theca+cells+on+granulosa+cell+differentiation+during+gonadotropin-independent+follicular+growth+in+cattle%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Reprod+Dev%22%5BJournal%5D)">Effects of ovarian theca cells on granulosa cell differentiation during gonadotropin-independent follicular growth in cattle.</a> Mol Reprod Dev. 73 (6), 737-744 (2006).</li>
<li>Tajima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+granulosa+and+theca+cell+interactions+in+ovarian+follicular+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Res+Tech%22%5BJournal%5D)">Role of granulosa and theca cell interactions in ovarian follicular maturation.</a> Microsc Res Tech. 69 (6), 450-458 (2006).</li>
<li>Tajima, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+ovarian+theca+cells+on+apoptosis+and+proliferation+of+granulosa+cells%3A+changes+during+bovine+follicular+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Effects of ovarian theca cells on apoptosis and proliferation of granulosa cells: changes during bovine follicular maturation.</a> Biol Reprod. 66 (6), 1635-1639 (2002).</li>
<li>Allegrucci, C., Hunter, M. G., Webb, R., Luck, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+bovine+granulosa+and+theca+cells+in+a+novel+serum-free+co-culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Interaction of bovine granulosa and theca cells in a novel serum-free co-culture system.</a> Reproduction. 126 (4), 527-538 (2003).</li>
<li>Santaguida, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Side+by+side+comparison+between+dynamic+versus+static+models+of+blood-brain+barrier+in+vitro%3A+A+permeability+study%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Side by side comparison between dynamic versus static models of blood-brain barrier in vitro: A permeability study.</a> Brain Res. 1109 (1), 1-13 (2006).</li>
<li>Pardridge, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Isolated+Brain+Microvessel%3A+A+Versatile+Experimental+Model+of+the+Blood-Brain+Barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">The Isolated Brain Microvessel: A Versatile Experimental Model of the Blood-Brain Barrier.</a> Front Physiol. 11, 398(2020).</li>
<li>Schneider, F., Brüssow, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+a+preovulatory+administered+depot+gonadotrophin-releasing+hormone+agonist+on+reproductive+hormone+levels+and+pregnancy+outcome+in+gilts%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod+Fertil+Dev%22%5BJournal%5D)">Effects of a preovulatory administered depot gonadotrophin-releasing hormone agonist on reproductive hormone levels and pregnancy outcome in gilts.</a> Reprod Fertil Dev. 18 (8), 857-866 (2006).</li>
<li>Nimz, M., Spitschak, M., Schneider, F., Fürbass, R., Vanselow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Down-regulation+of+genes+encoding+steroidogenic+enzymes+and+hormone+receptors+in+late+preovulatory+follicles+of+the+cow+coincides+with+an+accumulation+of+intrafollicular+steroids%5BTitle%5D)+AND+%22Domest+Anim+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Down-regulation of genes encoding steroidogenic enzymes and hormone receptors in late preovulatory follicles of the cow coincides with an accumulation of intrafollicular steroids.</a> Domest Anim Endocrinol. 37, 45-54 (2009).</li>
<li>Amsterdam, A., May, J. V., Schomberg, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+effect+of+insulin+and+follicle-stimulating+hormone+on+biochemical+and+morphological+differentiation+of+porcine+granulosa+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Synergistic effect of insulin and follicle-stimulating hormone on biochemical and morphological differentiation of porcine granulosa cells in vitro.</a> Biol Reprod. 39 (2), 379-390 (1988).</li>
<li>Monga, R., Sharma, I., Datta, T. K., Singh, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+serum-free+buffalo+granulosa+cell+culture+and+analysis+of+genes+involved+in+terminal+differentiation+from+FSH-+to+LH-responsive+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Domest+Anim+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Characterization of serum-free buffalo granulosa cell culture and analysis of genes involved in terminal differentiation from FSH- to LH-responsive phenotype.</a> Domest Anim Endocrinol. 41 (4), 195-206 (2011).</li>
<li>Bao, B., Garverick, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+steroidogenic+enzyme+and+gonadotropin+receptor+genes+in+bovine+follicles+during+ovarian+follicular+waves%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Expression of steroidogenic enzyme and gonadotropin receptor genes in bovine follicles during ovarian follicular waves: A review.</a> J Anim Sci. 76 (7), 1903-1921 (1998).</li>
<li>Bao, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+messenger+ribonucleic+acid+encoding+luteinizing+hormone+receptor%2C+cytochrome+P450+side+chain+cleavage%2C+and+aromatase+are+associated+with+recruitment+and+selection+of+bovine+ovarian+follicles%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Changes in messenger ribonucleic acid encoding luteinizing hormone receptor, cytochrome P450 side chain cleavage, and aromatase are associated with recruitment and selection of bovine ovarian follicles.</a> Biol Reprod. 56 (5), 1158-1168 (1997).</li>
<li>Orisaka, M., Tajima, K., Tsang, B. K., Kotsuji, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte-granulosa-theca+cell+interactions+during+preantral+follicular+development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Ovarian.+Res%22%5BJournal%5D)">Oocyte-granulosa-theca cell interactions during preantral follicular development.</a> J. Ovarian. Res. 2 (1), 9(2009).</li>
<li>Gilbert, I., Robert, C., Dieleman, S., Blondin, P., Sirard, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+effect+of+the+LH+surge+in+bovine+granulosa+cells+during+the+peri-ovulation+period%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Transcriptional effect of the LH surge in bovine granulosa cells during the peri-ovulation period.</a> Reproduction. 141 (2), 193-205 (2011).</li>
<li>Kotsuji, F., Kamitani, N., Goto, K., Tominaga, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bovine+theca+and+granulosa+cell+interactions+modulate+their+growth%2C+morphology%2C+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">Bovine theca and granulosa cell interactions modulate their growth, morphology, and function.</a> Biol Reprod. 43 (5), 726-732 (1990).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10x Hank's Dengeli Tuz Çözeltisi HBSS (w Mg/Ca, Fenol Kırmızı)</td><td>Biyo& Satmak</td><td>BS. L201-10</td><td>ultra saf suda çözün; pH'ı sindirim solüsyonunun (HBSS ve HEPES) 7,4'üne ayarlayın ve kullanmadan önce steril filtrasyon yapın</td></tr><tr><td>18 G iğne, 40 mm, çap 1,2 mm</td><td>Roth</td><td>281T.1</td><td>tek kullanımlık iğne, kısa kesim</td></tr><tr><td>3 ml şırınga (Omnifix Luer)</td><td>Roth</td><td>LY22.1</td><td></td></tr><tr><td>Accutase</td><td>Merck</td><td>A6964 Serisi</td><td>şirket şubesi: Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>amfoterisin B (250 & mikro; g/ml)</td><td>Biyo& Satmak</td><td>BS. AB17.01050</td><td></td></tr><tr><td>androstenedione</td><td>Merck</td><td>46033</td><td>%100 etanol ile seyreltilmiş 10 mM'lik bir stok çözeltisi kullanıyoruz; şirket şubesi: Supelco</td></tr><tr><td>dürbün Carl Zeiss Technival2</td><td>Carl Zeiss Jena</td><td>uygulanamaz</td><td>gelen ışık Schott KL 1600 LED ile birlikte kullanılır</td></tr><tr><td>BSA (%5)</td><td>Merck</td><td>A3311 Serisi</td><td>şirket şubesi: Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>Hücre Süzgeci (100 &Micro; m gözenek boyutu)</td><td>Sarstedt</td><td>83.3945.100</td><td>50 ml santrifüj tüplerine montaj</td></tr><tr><td>kolajen R (%0,2)</td><td>Serva</td><td>47254</td><td></td></tr><tr><td>Kollajenaz NB8 (%10)</td><td>Kuzey işareti</td><td>S1745601</td><td></td></tr><tr><td>CoolCell LX hücre dondurma kabı&nbsp;</td><td>Merck</td><td>CLS432002</td><td>Corning'den ürün</td></tr><tr><td>Kriyo koruma şişeleri (2 ml)</td><td>TPP Faust</td><td>TPP89020</td><td></td></tr><tr><td>kültür kabı, 12 oyuklu, düz tabanlı</td><td>TPP Faust</td><td>TPP92112</td><td></td></tr><tr><td>kültür kabı, 24 oyuklu, düz tabanlı</td><td>TPP Faust</td><td>TPP92424</td><td></td></tr><tr><td>kültür kabı, 6 oyuklu, düz tabanlı</td><td>TPP Faust</td><td>TPP92006</td><td></td></tr><tr><td>DMSO'nun</td><td>Roth</td><td>4720.1</td><td></td></tr><tr><td>Ca2+, Mg2+ olmadan DPBS</td><td>Biyo& Satmak</td><td>BS. L182-10</td><td>Kullanmadan önce ultra saf suda ve otoklavda çözün</td></tr><tr><td>estradiol, 17b-[2,4,6,7-3H]</td><td>Hartmann Analitik</td><td>ART1555</td><td></td></tr><tr><td>fetal buzağı serumu (FBS Superior stabil)</td><td>Biyo& Satmak</td><td>FBS. S0615</td><td></td></tr><tr><td>FSH (~7.000 IU/mg; insan hipofizinden)</td><td>Merck</td><td>F4021 Serisi</td><td>2 &micro stok çözelti kullanmayı tercih ederiz; g/ml, %0,9 NaCl içinde seyreltilmiş; şirket şubesi: Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>asılı hücre kültürü ekleri (0.4 &micro; m gözenek boyutu)</td><td>cellQART</td><td>9320412</td><td>sipariş verirken kesici uçların farklı özelliklerinin farkında olun; faz kontrast mikroskobu için şeffaf bir PET membran tercih ediyoruz</td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Roth</td><td>9105.2</td><td>pH'ı sindirim solüsyonunun (HBSS ve HEPES) 7,4'üne ayarlayın ve kullanmadan önce steril filtrasyon yapın</td></tr><tr><td>Holo-transferrin (sığır)</td><td>Merck</td><td>T1283 Serisi</td><td>steril suda çözün; şirket şubesi: Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>innuPREP RNA Mini Kiti 2.0</td><td>IST innuscreen</td><td>845-KS-2040250</td><td></td></tr><tr><td>insülin (10 mg/ml; sığır pankreasından)</td><td>Merck</td><td>I0516</td><td>1x PBS içinde çözülür; şirket şubesi: Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>L-Glutamin (200 mM)</td><td>Biyo& Satmak</td><td>BS. K0283</td><td></td></tr><tr><td>LR3-IGF-1</td><td>Merck</td><td>I1146</td><td>200 &micro stok çözümü kullanıyoruz; g/ml, 10 mg/ml BSA ile 1 mM HCl ve 1x PBS içinde çözülmüş; şirket şubesi: Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>NanoDrop 1000 Spektrofotometre</td><td>Termo Bilimsel</td><td>uygulanamaz</td><td>RNA konsantrasyonu ölçümü</td></tr><tr><td>NEA (100x)</td><td>Biyo& Satmak</td><td>BS. K0293</td><td></td></tr><tr><td>penisilin / streptomisin (10.000 IU / 10 mg / ml)</td><td>Biyo& Satmak</td><td>BS. A2213</td><td></td></tr><tr><td>Hücre kültürüne uygun arıtılmış su</td><td>Merck</td><td>W3500 Serisi</td><td>şirket şubesi: Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>SensiFAST cDNA Sentez Kiti</td><td>Biyolin</td><td>BIO-65054 (İngilizce)</td><td>dağıtım ortağı BioCat aracılığıyla sağlanır</td></tr><tr><td>sodyum bikarbonat (%7,5)</td><td>Biyo& Satmak</td><td>BS. L1713 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>sodyum selenit</td><td>Merck</td><td>S9133 Serisi</td><td>steril suda çözün; şirket şubesi: Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>termoshaker TS-100C</td><td>Fischer Bilimsel</td><td>12357627</td><td>HC18 bloğu ile birlikte kullanılır (Kat.-No. 12337627)</td></tr><tr><td>&alpha;-MEM</td><td>Biyo& Satmak</td><td>BS. F0915 Serisi</td><td></td></tr></tbody></table>

sığır yumurtalığındaki granüloza-teka hücre etkileşimlerini anlamak için modifiye edilmiş bir ko-kültür sistemi

A Modified Co-Culture System for Understanding Granulosa-Theca Cell Interactions in the Bovine Ovary

TC'ler ve GC'ler, foliküler bölümlendirmeye dayalı köklü mekanik ayırma teknikleri kullanılarak izole edilmiş olsa da, çapraz kontaminasyon riskini ortadan kaldırmak için hücre tipine özgü genlerin CYP17A1 ve CYP19A1 ekspresyonu değerlendirildi. CYP17A1 sadece yeni izole edilmiş TC'lerde eksprese edilirken , CYP19A1 ağırlıklı olarak yeni izole edilmiş GC'lerde eksprese edildi (Şekil 2).
Ortak kültür sistemi, sığır teka ve granüloza hücrelerinin bir membran ekinin karşıt taraflarında bölümlere ayrılmasını sağlar, böylece in vivo uzamsal organizasyonu taklit eder. Kültürde üç gün sonra, TC'ler, kollajen kaplı ek membranın yüzeyine yayılırken düzleştirilmiş ve uzamış bir morfoloji sergilediler ve bu da başarılı bir bağlanmayı gösterdi (Şekil 3A). 9 günlük sürenin tamamı boyunca tek başına kültürlendiğinde, TC'ler çoğalmaya devam etti ve 9. günde birleşme noktasına ulaştı (Şekil 3B). Buna karşılık, kollajen kaplı ek membran üzerinde 6 gün boyunca tek başına kültürlenen GC'ler, in vitro GC'lerin karakteristiği olan fibroblast benzeri bir fenotip geliştirdi (Şekil 3C). Ek olarak, daha önce tarif edildiği gibi, GC'ler, kültür 5,7,31,32'deki bu hücrelerin tipik bir özelliği olan kümeler oluşturma eğilimindeydi. Ko-kültür sisteminde, ilgili zamanla eşleşen mono-kültürlerle karşılaştırıldığında ne TC'lerde ne de GC'lerde belirgin morfolojik farklılıklar gözlenmedi (Şekil 3D), bu da ekleme tabanlı ortamın normal hücresel davranışı koruduğunu gösterir. Bununla birlikte, teknik sınırlamalar nedeniyle, ko-kültürün mikroskobik değerlendirmesi, özellikle TC morfolojisini diğer hücrelerden bağımsız olarak ayırt etme ve değerlendirmede zor olmaya devam etmektedir. Bu sınırlamaların üstesinden gelmek için, immün boyama için hücreye özgü antikorların yokluğunda hücre tanımlaması için alternatif stratejilerin araştırılmasına uygun olarak hücre fiksasyonu için optimize edilmiş bir protokol şu anda ele alınmaktadır.
Ko-kültür sisteminin işlevselliği, hormon üretimi ve TC'ler ve GC'ler33,34 için anahtar işaretleyici genlerin ekspresyonu analiz edilerek değerlendirildi ve hücre tipine özgü steroidojenik roller doğrulandı. GC mono-kültürü ile ko-kültür modeli arasındaki bir karşılaştırma, in vitro üretilen benzer estradiol (E2) seviyelerini ortaya çıkardı. Bununla birlikte, beklendiği gibi, TC mono-kültürü, teka hücrelerinin E2'yi bağımsız olarak sentezleme yeteneğinden yoksun olduğunu belirten 2 hücreli 2-gonadotropin hipotezi (Şekil 4A)15 ile tutarlı olarak sadece ihmal edilebilir miktarlarda E2 üretti.
Kültür koşullarının fizyolojik uygunluğunu daha fazla değerlendirmek için, anahtar belirteç genlerinin33 ekspresyonu incelendi. 2 hücreli-2-gonadotropin hipotezine uygun olarak, CYP19A1 ağırlıklı olarak GC'lerde eksprese edilirken, CYP17A1 esas olarak hem mono hem de ko-kültür koşullarında gözlenen bir model olan TC'lerde tespit edildi (Şekil 4B, C). Özellikle, östradiol konsantrasyonlarında gözlenen hiçbir farklılık olmamasına rağmen, CYP19A1'nin transkript bolluğu, GC mono-kültürüne kıyasla ortak kültür sistemi içindeki GC'lerde daha yüksekti.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68589/68589fig1.jpg"> 
Şekil 1: Hücre kültürü kurulumunun şematik gösterimi. (A) İlk kültür periyodu boyunca ortam sızıntısını önlemek için ters çevrilmiş ek üzerinde kesik bir tüp kullanan özel yapım aşılama odasını gösteren bir diyagram. (B) Deneysel prosedürün zaman çizelgesi: TC'ler, bağlanmaya izin vermek için üç gün boyunca ters çevrilmiş ek üzerinde kültürlendi. Ek ters çevrildi ve GC'ler karşı tarafa ekildi, ardından altı günlük ek bir kültür yapıldı. Çalışma, TC-GC ortak kültür sistemiyle ayrı ayrı kültürlenen TC'leri ve GC'leri karşılaştırdı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68589/68589fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68589/68589fig2.jpg"> 
Şekil 2: Yeni izole edilmiş granüloza ve teka hücrelerinde hücre tipine özgü belirteçlerin gen ekspresyonu. (A) CYP17A1 yalnızca TC'lerde eksprese edilirken, (B) CYP19A1 ağırlıklı olarak GC'lerde tespit edildi ve kültürden önce izole edilmiş hücre popülasyonlarının özgüllüğünü ve başlangıç saflığını doğruladı. Veriler, referans genler RPLP0 ve TBP'nin geometrik ortalamasına normalize edilmiş nispi ekspresyon olarak sunulur. Ortalamalar ve ortalamaların standart hatası gösterilir, veriler normallik ve varyans açısından test edilir, yıldız işaretleri anlamlı farklılıkları gösterir (n=3, t-testi). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68589/68589fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68589/68589fig3.jpg"> 
Şekil 3: Kültürdeki teka ve granüloza hücrelerinin morfolojisi. (A) 3 gün boyunca kültürlenen TC'ler, kollajen kaplı ek membrana bağlandı. (B) TC'ler, mono-kültürdeki 9 günlük sürenin tamamından sonra birleşti. (C) GC'ler, kültürde 6 gün sonra tipik fibroblast benzeri fenotipi gösterir. (D) TC'lerin ve GC'lerin ortak kültürü, ilgili zamanla eşleşen mono-kültürlere kıyasla belirgin bir morfolojik fark göstermez. Bu görüntü, 6 günlük GC kültürü ve 9 günlük TC kültüründen sonra (ko-kültür deneyinin bitiş noktasında) çekildi. Ölçek çubukları 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68589/68589fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68589/68589fig4.jpg"> 
Şekil 4: Ko-kültür sistemindeki fonksiyonel belirteçlerin analizi. (A) Estradiol (E2) hormon konsantrasyonları, hücre kültürü sisteminin fizyolojik işlevselliğini doğrular. (B, C) TC belirteci CYP17A1 ve GC belirtecinin gen ekspresyonu analizi CYP19A1 her iki hücre popülasyonunun kimliğini ve işlevsel durumunu gösterir. Göreceli ifadeyi hesaplamak için referans genler RPLP0 ve TBP'nin geometrik ortalaması kullanıldı. Ortalamalar ve ortalamaların standart hatası gösterilir, veriler normallik ve varyans açısından test edilir, yıldız işaretleri anlamlı farklılıkları gösterir (n=3, tek yönlü ANOVA). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68589/68589fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Sığır Yumurtalığındaki Granüloza-Teka Hücre Etkileşimlerini Anlamak için Modifiye Edilmiş Bir Ko-Kültür Sistemi

A reliable co-culture of granulosa (GCs) and theca cells (TCs) has the potential to facilitate a more comprehensive understanding of the interactions, ...

a-modified-co-culture-system-for-understanding-granulosa-theca-cell

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu protokol yenidoğan farelerde ve prepubertal farelerden alınan bireysel yumurtalık folikülleri gelen yumurtalıklarını kullanarak, fare yumurtalık dokusunun primer kültür / ko-kültür açıklar. kültür teknikleri yumurtalık üzerindeki dışsal ajanların etkisi soruşturma olanak veren yüksek fizyolojik bir şekilde gelişimini desteklemek ve yumurtalık foliküllerinin arasındaki etkileşimlerin.

Kültür ve Co-Kültür Mouse Yumurtalıklar ve Yumurtalık Foliküller

Uzun vadeli bir kültür model sığır granulosa hücre serum-Alerjik koşullar altında açıklanmıştır. Araştırmacılar farklı kaplama yoğunlukları östrojen üretimi ve özellikleri olarak etkileri çeşitli faktörler ve koşulları incelemek bu modeli verir sığır granulosa hücreleri.

Birincil sığır Granulosa östrojen üreten bir doku kültürü Model hücreleri

Burada 3D kültür koşullarında domuz oositkapsülasyonu için iki protokol sunulmuştur. İlk olarak, kümülüs-oosit kompleksleri (COCs) fibrin-aljinat boncuklar kapsüllenir. İkincisi, florlu etilen propilen toz parçacıkları (mikrobiyoreaktörler) ile çevrilidir. Her iki sistem de 3B organizasyonlarını sürdürmek için en uygun koşulları sağlar.

Proteolytically Bozulmuş Aljinat Hidrojeller ve Porcine Oosit Kapsülleme için Hidrofobik Mikrobiyoreaktörler

Gelişimin erken aşamalarında yumurtalık foliküllerinden büyüyen yumurtaların izolasyonuna yönelik prosedürlerin yanı sıra büyümeyi ve farklılaşmayı tam olarak büyümüş aşamaya kadar desteklendirebilecek bir in vitro kültür sisteminin kurulumunu anlatıyoruz.

Sığırlarda Erken Antral Folikülden Oositler Için Tüp Bebek Kültür Stratejisi

Sığır yumurtalık korteksinin in vitro kültürü ve beslenme Merdiven adım diyetinin yumurtalık mikroçevrişi üzerindeki etkisi sunulmuştur. Yumurtalık korteks parçaları yedi gün boyunca kültürlendi ve steroidler, sitokinler ve folikül evreleri değerlendirildi. Merdiven-Adım diyet tedavisi, kültürde folikül ilerlemesine neden olan steroidogenezi artırmıştı.

Sığır Yumurtalık Korteks Doku Kültürü

Preantral folikülogenez çalışmasının ilerletilmesi, tek yumurtalıklardan folikül izolasyonu için etkili yöntemler gerektirir. Burada bir doku doğrayıcı ve homojenizatör kullanılarak sığır yumurtalıklarından folikül izolasyonu için modernize edilmiş, mekanik bir protokol sunulmaktadır. Bu yöntem, tek bir yumurtalıktan çok sayıda canlı preantral folikülün toplanmasına izin verir.

Küçük Preantral Foliküllerin Sığır Yumurtalıktan Parçalanma, Homojenizasyon ve Seri Filtrasyon Kombinasyonu Kullanılarak İzolasyonu

Burada, kuş preovulatuar foliküllerinde yumurta sarısı, granüloza hücreleri ve teka hücrelerini ayırmak için bir protokol açıklıyoruz. Bu hassas işleme, bu katmanların üreme işlevindeki rolüne ilişkin kritik araştırmalara olanak tanıyarak, gelişmiş tarımsal verim ve biyomedikal içgörüler için foliküler gelişim, hormonal düzenleme ve hastalık araştırmalarının anlaşılmasına yardımcı olur.

Aşağı Akış Uygulamaları için Kuş Preovulatuar Folikül Granüloza ve Teka Hücre Katmanlarının Ayrılması

Fare yumurtalık somatik hücrelerinin stroma ile zenginleştirilmiş bir yumurtalık fraksiyonundan izole edilmesi ve iskelesiz bir yaklaşımla fare yumurtalık somatik organoidleri üretme yöntemlerini açıklıyoruz.

Yumurtalık Mikro Ortamını İnceltmek: Fare Yumurtalık Somatik Hücrelerinin İzolasyon, 2D Kültür ve Organoid Kültürü Yöntemleri

Bu protokol, eşzamanlı ve lokalize epitel hücreleri ve bakteri kültürü için bir mikroakışkan ortak kültür modeli açıklamaktadır. Bu model, varsayılan probiyotik bakteri suşlarının etkinliğini patogenezinde farklı çözünür moleküler sinyallerin rolünü araştıran gibi ekran için kullanılabilir.

Çözünür Sinyal aracılı Etkileşimleri Araştırılması için Epitel Hücreleri ve Bakteriler mikroakışkan Co-kültür

mStrawberry OP9 hücreleri ko-kültür tüm ES-türetilen döl tam değerlendirme için izin verir.

Modifiye ES / OP9 Co-Kültür Protokolü Hematopoetik Döl Geliştirilmiş Karakterizasyonu sağlar.

Keşfedin sığır teka ve granüloza hücrelerinin ko-kültür modelini; parakrin sinyalleşme ve foliküler dinamikleri in vivo ortamda analiz edin. Bu yöntem üreme biyolojisi araştırmaları için değerli bir temel sunar.

Sığır Yumurtalığındaki Granüloza-Teka Hücre Etkileşimlerini Anlamak için Modifiye Edilmiş Bir Ko-Kültür Sistemi

Daha fazla video keşfet