Name: Nakavt Fare Üretimi için Oviduktal Nükleik Asitler Teslimatına Dayalı In Vivo Elektroporasyon Tekniği ile Geliştirilmiş Genom Düzenleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-26T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 56 s
Description: Keşfedin I-GONAD yöntemiyle farelerde genom düzenleme ve nakavt modelleri üretimi. Bu teknik, geleneksel mikroenjeksiyona göre hayvan kullanımını azaltarak CRISPR/Cas9 ile yüksek verimlilik sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Fujihara, Y., Ikawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR%2FCas9-Based+Genome+Editing+in+Mice+by+Single+Plasmid+Injection%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">CRISPR/Cas9-Based Genome Editing in Mice by Single Plasmid Injection.</a> Methods Enzymol. 546, 319-336 (2014).</li>
<li>Zuo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-step+generation+of+complete+gene+knockout+mice+and+monkeys+by+CRISPR%2FCas9-mediated+gene+editing+with+multiple+sgRNAs%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">One-step generation of complete gene knockout mice and monkeys by CRISPR/Cas9-mediated gene editing with multiple sgRNAs.</a> Cell Res. 27 (7), 933-945 (2017).</li>
<li>Hubrecht, R. C., Carter, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+3Rs+and+humane+experimental+technique%3A+Implementing+change%5BTitle%5D)+AND+%22Animals%22%5BJournal%5D)">The 3Rs and humane experimental technique: Implementing change.</a> Animals. 9 (10), 754(2019).</li>
<li>Kobayashi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modification+of+i-GONAD+suitable+for+production+of+genome-edited+C57BL%2F6+inbred+mouse+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Modification of i-GONAD suitable for production of genome-edited C57BL/6 inbred mouse strain.</a> Cells. 9 (4), 957(2020).</li>
<li>Takabayashi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Successful+i-GONAD+in+mice+at+early+zygote+stage+through+in+vivo+electroporation+three+minutes+after+intra-oviductal+instillation+of+CRISPR-ribonucleoprotein%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Successful i-GONAD in mice at early zygote stage through in vivo electroporation three minutes after intra-oviductal instillation of CRISPR-ribonucleoprotein.</a> Int J Mol Sci. 23 (18), 10678(2022).</li>
<li>Sato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequential+i-GONAD%3A+An+improved+in+vivo+technique+for+CRISPR%2FCas9-based+genetic+manipulations+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Sequential i-GONAD: An improved in vivo technique for CRISPR/Cas9-based genetic manipulations in mice.</a> Cells. 9 (3), 546(2020).</li>
<li>Kessler, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multiple+super-enhancer+region+establishes+inter-TAD+interactions+and+controls+Hoxa+function+in+cranial+neural+crest%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A multiple super-enhancer region establishes inter-TAD interactions and controls Hoxa function in cranial neural crest.</a> Nat Commun. 14 (1), 3242(2023).</li>
<li>Kaneko, T., Tanaka, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvement+of+genome+editing+by+electroporation+using+embryos+artificially+removed+cumulus+cells+in+the+oviducts%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Improvement of genome editing by electroporation using embryos artificially removed cumulus cells in the oviducts.</a> Biochem Biophys Res Commun. 527 (4), 1039-1042 (2020).</li>
<li>Gurumurthy, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creation+of+CRISPR-based+germline-genome-engineered+mice+without+ex+vivo+handling+of+zygotes+by+i-GONAD%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Creation of CRISPR-based germline-genome-engineered mice without ex vivo handling of zygotes by i-GONAD.</a> Nat Protoc. 14 (8), 2452-2482 (2019).</li>
<li>Ohtsuka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((i-GONAD%3A+A+robust+method+for+in+situ+germline+genome+engineering+using+CRISPR+nucleases%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">i-GONAD: A robust method for in situ germline genome engineering using CRISPR nucleases.</a> Genome Biol. 19 (1), 25(2018).</li>
<li>Marshall, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PerlPrimer%3A+Cross-platform%2C+graphical+primer+design+for+standard%2C+bisulphite+and+real-time+PCR%5BTitle%5D)+AND+%22Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">PerlPrimer: Cross-platform, graphical primer design for standard, bisulphite and real-time PCR.</a> Bioinformatics. 20 (15), 2471-2472 (2004).</li>
<li>Truett, G. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+PCR-quality+mouse+genomic+DNA+with+hot+sodium+hydroxide+and+Tris+%28HotSHOT%29%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Preparation of PCR-quality mouse genomic DNA with hot sodium hydroxide and Tris (HotSHOT).</a> BioTechniques. 29 (1), 52-54 (2000).</li>
<li>Brinkman, E. K., Van Steensel, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+quantitative+evaluation+of+CRISPR+genome+editing+by+TIDE+and+TIDER%5BTitle%5D)+AND+%22CRISPR+Gene+Editing%22%5BJournal%5D)">Rapid quantitative evaluation of CRISPR genome editing by TIDE and TIDER.</a> CRISPR Gene Editing. 1961, 29-44 (2019).</li>
<li>Imai, Y., Tanave, A., Matsuyama, M., Koide, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+genome+editing+in+wild+strains+of+mice+using+the+i-GONAD+method%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Efficient genome editing in wild strains of mice using the i-GONAD method.</a> Sci Rep. 12 (1), 13821(2022).</li>
<li>Iwata, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+and+large-scale+chromosomal+engineering+of+mouse+zygotes+viain+vitro+and+in+vivo+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Simple and large-scale chromosomal engineering of mouse zygotes viain vitro and in vivo electroporation.</a> Sci Rep. 9 (1), 14713(2019).</li>
<li>Abe, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+for+large-fragment+knock-in+animal+production+without+ex+vivo+handling+of+zygotes%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A novel technique for large-fragment knock-in animal production without ex vivo handling of zygotes.</a> Sci Rep. 13 (1), 2245(2023).</li>
<li>Meyer-Dilhet, G., Courchet, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+utero+cortical+electroporation+of+plasmids+in+the+mouse+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protocols%22%5BJournal%5D)">In utero cortical electroporation of plasmids in the mouse embryo.</a> STAR Protocols. 1 (1), 100027(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.5&ndash; 5 uL pipet&nbsp;</td><td>Termo Bilimsel</td><td>4642020</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL tüp</td><td>Aptaca</td><td>1003/G</td><td></td></tr><tr><td>100-1000 uL pipet&nbsp;</td><td>Termo Bilimsel</td><td>4642090</td><td></td></tr><tr><td>200 uL tüp</td><td>Axygen</td><td>PCR-02-C</td><td></td></tr><tr><td>20-200 uL pipet&nbsp;</td><td>Termo Bilimsel</td><td>4642080</td><td></td></tr><tr><td>2-20 uL pipet&nbsp;</td><td>Termo Bilimsel</td><td>4642060</td><td></td></tr><tr><td>4x Jel Yükleme Boya</td><td>Biolabmix</td><td>D-3002</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>AppliChem</td><td>A8963,0500</td><td></td></tr><tr><td>DNaz I, RNaz-free (1 U/&mu; L)</td><td>Thermo Fisher</td><td>EN0521</td><td></td></tr><tr><td>dNTP Set, 100 mM Çözüm</td><td>Termo Bilimsel</td><td>R0181</td><td></td></tr><tr><td>DreamTaq Yeşil DNA Polimeraz (5 U/&mu; L)</td><td>Termo Bilimsel</td><td>EP0713</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s modifiye fosfat-tamponlu tuzlu</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>EditCo ICE Analizi</td><td>https://ice.editco.bio/#/</td><td></td><td>04.06.2025 tarihinde erişildi</td></tr><tr><td>EDTA 0.5M çözeltisi, pH = 8</td><td>AppliChem</td><td>A4892,0500</td><td></td></tr><tr><td>Topluluk</td><td>&nbsp; https://www.ensembl.org/index.html</td><td></td><td>09.06.2025 tarihinde erişildi</td></tr><tr><td>Ethidium bromid</td><td>Biolabmix</td><td>EtBr-10</td><td></td></tr><tr><td>Göz jeli damlaları" Oftagel"</td><td>URSAPHARM</td><td>204604</td><td></td></tr><tr><td>Gel-belgeleme sistemi ChemiDoc XRS+</td><td>Bio-Rad</td><td>1708265</td><td></td></tr><tr><td>In-Silico PCR V39x1&nbsp;</td><td>https://genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgPcr</td><td></td><td>&nbsp; 09.06.2025 tarihinde erişildi</td></tr><tr><td>Entegre DNA Teknolojileri&nbsp;</td><td>https://eu.idtdna.com</td><td></td><td>09.06.2025 tarihinde erişildi</td></tr><tr><td>Mikrocerrahi makas</td><td>Medin URAL</td><td>M124</td><td></td></tr><tr><td>NEPA21 elektroporatörü</td><td>Nepa Geni</td><td>NEPA21</td><td>CUY652P2.5X4 elektrodla</td></tr><tr><td>NTP Seti, 100 mM Çözüm</td><td>Termo Bilimsel</td><td>R0481</td><td></td></tr><tr><td>Oligonukleotidler</td><td>Evrogen</td><td></td><td>Doğrudan düzen, standart tuz arıtma arıtma</td></tr><tr><td>Opti-MEM I İngenezilmiş Serum Ortamı</td><td>Thermo Fisher</td><td>31985070</td><td></td></tr><tr><td>PerlPrimer</td><td>https://perlprimer.sourceforge.net</td><td></td><td>Sürüm 1.1.21.</td></tr><tr><td>Füzyon Yüksek Hassasiyetli DNA Polimeraz (2 U/&mu; L)</td><td>Termo Bilimsel</td><td>F530L</td><td></td></tr><tr><td>Pipet 10 uL uçları</td><td>Ulplast</td><td>HT-10-960</td><td></td></tr><tr><td>Pipet 1000 uL uçları</td><td>Ulplast</td><td>HT-1000-576</td><td></td></tr><tr><td>Pipet 200 uL uçları</td><td>Ulplast</td><td>HT-200-960</td><td></td></tr><tr><td>Güç kaynağı " Elf-4"</td><td>DNA teknolojisi</td><td>PS-400 YENI</td><td></td></tr><tr><td>RNAse/DNA içermeyen su</td><td>Invitrogen</td><td>10977049</td><td></td></tr><tr><td>Tuzlu çözelti</td><td>PanEco</td><td>P011n</td><td></td></tr><tr><td>SE-1 horisontal elektroforez sistemi</td><td>Helicon</td><td>SE-1</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Hidroksit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5881-500G</td><td></td></tr><tr><td>Step100 DNA Merdiveni</td><td>Biolabmix</td><td>S-8100</td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop SMZ1000</td><td>Nikon</td><td>5-363376</td><td></td></tr><tr><td>Soyucu mikropipetter</td><td>CooperSurgical</td><td>MXL3-STR</td><td></td></tr><tr><td>Soyucu uçları</td><td>ORIGIO</td><td>MXL3-125</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi İğne;</td><td>KMIZ</td><td>4A1- 0,6& kez; 20</td><td></td></tr><tr><td>Dikiş pensepleri</td><td>Medin URAL</td><td>M302.2</td><td></td></tr><tr><td>Dikiş pensepleri</td><td>Medin URAL</td><td>M303</td><td></td></tr><tr><td>Dikiş ipliği POLYCON N<img alt="Denklem 1" src="/files/ftp_upload/68704/68704eq1.jpg" style="margin: auto; "/>0</td><td>Tonzos 95</td><td>234</td><td></td></tr><tr><td>SYNTHEGO Knockout Rehberi Tasarımı&nbsp;</td><td>https://design.synthego.com/#/</td><td></td><td>09.06.2025 tarihinde erişildi</td></tr><tr><td>T100 amplifikatörü</td><td>BioRad</td><td>10014822</td><td></td></tr><tr><td>T7 RNA polimeraz&nbsp;</td><td>Termo Bilimsel</td><td>EP0111</td><td></td></tr><tr><td>TBE 10x tampon</td><td>Biolabmix</td><td>TBE-500</td><td></td></tr><tr><td>Tide&nbsp;</td><td>https://tide.nki.nl/</td><td></td><td>04.06.2025 tarihinde erişildi & NBSP;</td></tr><tr><td>Tris hidroklorür</td><td>Suzhou Yacoo Bilimi</td><td>SYS-S0005-0.5</td><td></td></tr><tr><td>Trizma hidroklorür çözeltisi</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T2663</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol Reaktifi</td><td>Invitrogen</td><td>15596026</td><td></td></tr><tr><td>TrueCut Cas9 Proteini</td><td>Invitrogen</td><td>A36499</td><td></td></tr><tr><td>Evrensel makas</td><td>Medin URAL</td><td>M147</td><td></td></tr><tr><td>Ksilazin</td><td>Interchemie Werken de Adelaar</td><td>IX2</td><td></td></tr><tr><td>Zoletil</td><td>Virbac Laboratuvarı</td><td>2000443714739.00</td><td></td></tr></tbody></table>

nakavt fare Üretimi için oviduktal nükleik asitler teslimatına dayalı in vivo elektroporasyon tekniği ile geliştirilmiş genom düzenleme

Improved Genome Editing via Oviductal Nucleic Acids Delivery-based In Vivo Electroporation Technique for Knockout Mice Generation

Nakavt Fare Üretimi için Oviduktal Nükleik Asitler Teslimatına Dayalı In Vivo Elektroporasyon Tekniği ile Geliştirilmiş Genom Düzenleme

Methods for creating knockout mice typically involve three main steps: (1) collecting embryos from donor females, (2) microinjecting genetic constructs ...

improved-genome-editing-via-oviductal-nucleic-acids-delivery-based

Research

JoVE Journal

Genetics

Genetik

Işlevi ve orta beyin dopaminerjik nöron gelişimi sırasında genlerin düzenlenmesi değerlendirmek için, içeren bir yöntem...

Dopaminerjik Nöron Geliştirme Gen Fonksiyonunun Çalışılması için Chick orta beyin içinde ovo Elektroporasyon yılında

Örneğin çinko parmak nükleazlara (ZFNs) ve transkripsiyon aktivatörü gibi efektör nükleazlara (TALENS) olarak tasarımcı nükleazlar homolog olmayan uç birleştirme (NHEJ) ile homolog yeniden birleştirmeye (HR) yolaklar tetikleyerek fare preimplantasyon embriyoların genomunu değiştirmek için kullanılabilir. Bu gelişmeler kesin genetik değişiklikler farelerde hızlı üretimini sağlar.

Tasarımcı nükleazlar kullanılması Fare Genom Mühendisliği

Fare oositlerinin mikroenjeksiyonu hem klasik transgenezis ( yani, transgenlerin rastgele bütünleşmesi) hem de CRISPR aracılı gen hedeflemesi için yaygın olarak kullanılır. Bu protokol, kalite kontrolü ve genotiplendirme stratejileri üzerinde özel bir vurguyla mikroenjeksiyondaki en son gelişmeleri gözden geçiriyor.

Oositlerin Mikroenjeksiyonu ile Genetiği Değiştirilmiş Farelerin Üretilmesi

Burada, tek hücreli embriyoların kriyopreservation için değiştirilmiş bir yöntem yanı sıra genetik olarak değiştirilmiş farelerin verimli nesil için dondurulmuş çözülmüş embriyolar ve elektroporasyon kullanarak çiftler bir protokol sıyoruz.

Genetiği Değiştirilmiş Farelerin Yüksek Verimli Üretimi için Dondurulmuş Çözülmüş Embriyoların Kullanımı

Mevcut protokol, gen kaseti knock-in ve flokslu fareleri verimli bir şekilde üretmek için CRISPR-Cas9 ve donör DNA'sının zigot mikroenjeksiyonunu tanımlamaktadır.

Farelerde gen kaseti knock-in ve flox alelleri oluşturmak için zigot mikroenjeksiyonu

Burada, CRISPR RNP Zygotes Elektroporasyonu (CRISPR-EZ) adı verilen genetiği değiştirilmiş farelerin verimli bir şekilde üretilmesi için tasarlanmış basit bir tekniği açıklıyoruz. Bu yöntem, elektroporasyon yoluyla düzenleme reaktiflerini embriyolara %100'e yaklaşan bir verimlilikle teslim eder. Bu protokol, memeli embriyolarındaki nokta mutasyonları, küçük genomik eklemeler ve delesyonlar için etkilidir.

Zigotların CRISPR Elektroporasyonu ile Farelerin Verimli Genom Düzenlemesi

Burada, embriyonik kök hücreler kullanarak, özellikle büyük DNA knock-in (KI) için genetiği değiştirilmiş fare modelleri geliştirmek için bir protokol sunuyoruz. Bu protokol, CRISPR / Cas9 genom düzenlemesi kullanılarak ayarlanır ve geleneksel homolog rekombinasyon aracılı doğrusallaştırılmış DNA hedefleme yöntemine kıyasla önemli ölçüde iyileştirilmiş KI verimliliği ile sonuçlanır.

Genle Manipüle Edilmiş Fare Modelleri Geliştirmek için Embriyonik Kök Hücrelerde CRISPR / Cas9 Aracılı Yüksek Verimli Gen Hedefleme

Bu protokol, fare yumurtalık kanalında bölgesel olarak kısıtlanmış CRISPR aracılı genom düzenlemesi için mikroenjeksiyon ve in vivo elektroporasyonu tanımlar.

In Vivo Mikroenjeksiyon ve Elektroporasyon Kullanan Somatik Genom Mühendisliği Fare Modelleri

Bu protokol, genetiği değiştirilmiş sıçan modelleri üretmek için optimize edilmiş bir yaklaşım sunar. Adeno-ilişkili virüs (AAV), bir DNA onarım şablonu sunmak için kullanılır ve elektroporasyon, 2 hücreli embriyoda genom düzenleme işlemini tamamlamak için CRISPR-Cas9 reaktiflerini iletmek için kullanılır.

CRISPR-Cas9 Adeno-İlişkili Virüs (AAV) ve 2 Hücreli Embriyo Elektroporasyonu Kullanılarak Sıçan Embriyolarının Genom Düzenlemesi

Genom editörlerinin RNA olarak sunulması, birincil memeli hücrelerinin ve hücre hatlarının genomlarını değiştirmek için özellikle güçlü bir yöntemdir. Bu protokolün amacı, genom düzenleyicilerini mRNA olarak birincil memeli hücrelerine ve hücre hatlarına göndermek, ardından düzenleme sonuçlarını nicelendirmek için hedefli Illumina dizileme ve analizi yapmaktır.

Birincil memeli hücrelerinde editör RNA'nın elektroporasyonu yoluyla genom düzenlemesi

Keşfedin I-GONAD yöntemiyle farelerde genom düzenleme ve nakavt modelleri üretimi. Bu teknik, geleneksel mikroenjeksiyona göre hayvan kullanımını azaltarak CRISPR/Cas9 ile yüksek verimlilik sağlar.

Nakavt Fare Üretimi için Oviduktal Nükleik Asitler Teslimatına Dayalı In Vivo Elektroporasyon Tekniği ile Geliştirilmiş Genom Düzenleme (Video) | JoVE Journal

Nakavt Fare Üretimi için Oviduktal Nükleik Asitler Teslimatına Dayalı In Vivo Elektroporasyon Tekniği ile Geliştirilmiş Genom Düzenleme

Daha fazla video keşfet