Name: Kimerik Antijen Reseptörü-Hücre Dışı Veziküller (CAR-EV) Teknolojisinin Geliştirilmesi: Kanser Tedavisinin Geleceği (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-19T13:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 33 s
Description: Keşfedin kimerik antijen reseptörü hücre dışı veziküller (CAR-EV) teknolojisini kanser tedavisi için. Bu yöntem, iyon değişim kromatografisi ile yüksek verimli izolasyon sağlayarak hedefli terapötiklerin etkinliğini artırır ve solid tümörlerde RNA tedavisi potansiyelini gösterir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Park, J. H., Geyer, M. B., Brentjens, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD19-targeted+CAR+T-cell+therapeutics+for+hematologic+malignancies%3A+Interpreting+clinical+outcomes+to+date%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">CD19-targeted CAR T-cell therapeutics for hematologic malignancies: Interpreting clinical outcomes to date.</a> Blood. 127 (26), 3312-3320 (2016).</li>
<li>Jain, M. D., Smith, M., Shah, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+I+treat+refractory+CRS+and+ICANS+following+CAR+T-cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">How I treat refractory CRS and ICANS following CAR T-cell therapy.</a> Blood. 141 (20), 2430-2442 (2023).</li>
<li>Tang, X. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+potential+of+CAR-T+cell-derived+exosomes%3A+A+cell-free+modality+for+targeted+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Therapeutic potential of CAR-T cell-derived exosomes: A cell-free modality for targeted cancer therapy.</a> Oncotarget. 6 (42), 44179-44190 (2015).</li>
<li>St-Denis-Bissonnette, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+clinically+relevant+large-scale+biomanufacturing+workflow+to+produce+natural+killer+cells+and+natural+killer+cell-derived+extracellular+vesicles+for+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22JEV%22%5BJournal%5D)">A clinically relevant large-scale biomanufacturing workflow to produce natural killer cells and natural killer cell-derived extracellular vesicles for cancer immunotherapy.</a> JEV. 12 (12), e12387(2023).</li>
<li>Jiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+enhances+the+production+and+antitumor+effect+of+exosomes+derived+from+natural+killer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Hypoxia enhances the production and antitumor effect of exosomes derived from natural killer cells.</a> Ann Transl Med. 9 (6), 473-473 (2021).</li>
<li>Decot, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural-killer+cell+amplification+for+adoptive+leukemia+relapse+immunotherapy%3Acomparison+of+three+cytokines+IL-2%2C+IL-15%2C+or+IL-7+and+impact+on+NKG2D%2C+KIR2DL1%2C+and+KIR2DL2+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Hematol%22%5BJournal%5D)">Natural-killer cell amplification for adoptive leukemia relapse immunotherapy:comparison of three cytokines IL-2, IL-15, or IL-7 and impact on NKG2D, KIR2DL1, and KIR2DL2 expression.</a> Exp Hematol. 38 (5), 351-362 (2010).</li>
<li>Kim, I. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+enhancement+of+exosomes+derived+from+NK+cells+by+IL-15+and+IL-21+synergy+against+hepatocellular+carcinoma+cells%3A+The+cytotoxicity+and+apoptosis+in+vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22Heliyon%22%5BJournal%5D)">Functional enhancement of exosomes derived from NK cells by IL-15 and IL-21 synergy against hepatocellular carcinoma cells: The cytotoxicity and apoptosis in vitro study.</a> Heliyon. 9 (6), e16962-e16962 (2023).</li>
<li>Mehdiani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+innovative+method+for+exosome+quantification+and+size+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An innovative method for exosome quantification and size measurement.</a> J Vis Exp. (95), e50974(2015).</li>
<li>Bachurski, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicle+measurements+with+nanoparticle+tracking+analysis-an+accuracy+and+repeatability+comparison+between+NanoSight+NS300+and+ZetaView%5BTitle%5D)+AND+%22JEV%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicle measurements with nanoparticle tracking analysis-an accuracy and repeatability comparison between NanoSight NS300 and ZetaView.</a> JEV. 8 (1), 1596016(2019).</li>
<li>Khanabdali, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+throughput+surface+epitope+immunoaffinity+isolation+of+extracellular+vesicles+and+downstream+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Methods+Protoc%22%5BJournal%5D)">High throughput surface epitope immunoaffinity isolation of extracellular vesicles and downstream analysis.</a> Biol Methods Protoc. 9 (1), bpae032(2024).</li>
<li>Salomon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+detection+of+ovarian+cancer%3A+An+accurate+high-throughput+extracellular+vesicle+test%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Early detection of ovarian cancer: An accurate high-throughput extracellular vesicle test.</a> J Clin Oncol. 43 (16_suppl), 5582-5582 (2025).</li>
<li>Fu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAR+exosomes+derived+from+effector+CAR-T+cells+have+potent+antitumour+effects+and+low+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">CAR exosomes derived from effector CAR-T cells have potent antitumour effects and low toxicity.</a> Nat Commun. 10 (1), 1-12 (2019).</li>
<li>Zheng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhalable+CAR-T+cell-derived+exosomes+as+paclitaxel+carriers+for+treating+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Inhalable CAR-T cell-derived exosomes as paclitaxel carriers for treating lung cancer.</a> J Transl Med. 21 (1), 383(2023).</li>
<li>Tian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+exosome+for+drug+delivery%3A+Recent+development+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Nanomed%22%5BJournal%5D)">Engineered exosome for drug delivery: Recent development and clinical applications.</a> Int J Nanomed. 18, 7923-7940 (2023).</li>
<li>Chen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encapsulation+and+assessment+of+therapeutic+cargo+in+engineered+exosomes%3Aa+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">Encapsulation and assessment of therapeutic cargo in engineered exosomes:a systematic review.</a> J Nanobiotechnology. 22 (1), 18(2024).</li>
<li>Basyoni, A. E., Atta, A., Salem, M. M., Mohamed, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harnessing+exosomes+for+targeted+drug+delivery+systems+to+combat+brain+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell+Int%22%5BJournal%5D)">Harnessing exosomes for targeted drug delivery systems to combat brain cancer.</a> Cancer Cell Int. 25 (1), 150(2025).</li>
<li>Coughlan, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosome+isolation+by+ultracentrifugation+and+precipitation+and+techniques+for+downstream+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Exosome isolation by ultracentrifugation and precipitation and techniques for downstream analyses.</a> Curr Protoc Cell Biol. 88 (1), e110(2020).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+separation+and+purification+of+exosomes+using+ion-exchange+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Large-scale separation and purification of exosomes using ion-exchange chromatography.</a> Biomed Res Ther. 11 (4), 6348-6356 (2024).</li>
<li>Fernandes, R. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+isolation+of+extracellular+vesicles+from+cell+culture+supernatant+using+immuno-affinity+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Sep+Purif+Technol%22%5BJournal%5D)">Targeted isolation of extracellular vesicles from cell culture supernatant using immuno-affinity chromatography.</a> Sep Purif Technol. 358 (Part A), 130312-130312 (2024).</li>
<li>Jiang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-EGFR+ScFv+functionalized+exosomes+delivering+LPCAT1+specific+siRNAs+for+inhibition+of+lung+cancer+brain+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22JNB%22%5BJournal%5D)">Anti-EGFR ScFv functionalized exosomes delivering LPCAT1 specific siRNAs for inhibition of lung cancer brain metastases.</a> JNB. 22 (1), 159(2024).</li>
<li>Dobersberger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+engineering+strategy+to+target+activated+EGFR+with+CAR+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep+Methods%22%5BJournal%5D)">An engineering strategy to target activated EGFR with CAR T cells.</a> Cell Rep Methods. 4 (4), 100728-100728 (2024).</li>
<li>Shi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bispecific+CAR+T+cell+therapy+targeting+BCMA+and+CD19+in+relapsed%2Frefractory+multiple+myeloma%3Aa+phase+I%2FII+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Bispecific CAR T cell therapy targeting BCMA and CD19 in relapsed/refractory multiple myeloma:a phase I/II trial.</a> Nat Commun. 15 (1), 3371(2024).</li>
<li>Roddie, G., Amrolia, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+targeting+CAR-T+cells+for+B-cell+acute+lymphoblastic+leukaemia+and+B-cell+non-Hodgkin+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Adv%22%5BJournal%5D)">Dual targeting CAR-T cells for B-cell acute lymphoblastic leukaemia and B-cell non-Hodgkin lymphoma.</a> Blood Adv. 9 (4), 704-721 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td><güçlü>Malzemeler</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1x fosfat tamponlu salin (PBS), pH 7,4</td><td>Gibco</td><td>10010049</td><td>EV zenginleştirme</td></tr><tr><td>%1 sodyum dodesil sülfat (SDS)</td><td>Sigma</td><td>L3771-100G</td><td>1 g SDS tozunu 10 mL ultra saf suda çözün</td></tr><tr><td>1x tris tamponlu salin, Tween-20 (TBST) ile</td><td>Thermo Scientific Kimyasallar</td><td>J77500. K2</td><td>1x çözelti yapmak için ultra saf suyla seyreltin (alternatif olarak, 1x tris tamponlu salin içinde %0,1 polisorbat-20/Tween-20 çözeltisi hazırlayın)</td></tr><tr><td>96 oyuklu şeffaf düz tabanlı polistiren TC ile işlenmiş mikroplaka, steril</td><td>Corning</td><td>3595</td><td>İn vitro fonksiyonel test</td></tr><tr><td>Bolt Bis-Tris Plus Mini Protein Jelleri, %4-12, 1,0 mm, WedgeWell formatı</td><td>Davetli</td><td></td><td>Hücre/EV karakterizasyonu</td></tr><tr><td>Sığır serum albümini</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9647-100G</td><td>Hücre/EV karakterizasyonu</td></tr><tr><td>Kalneksin antikoru</td><td>Hücre Sinyali</td><td>2433'LER</td><td>Hücre/EV karakterizasyonu</td></tr><tr><td>CAR-NK/T hücreleri</td><td>ProMab Biyoteknolojileri</td><td>Değişir</td><td>CAR hücre dışı ligand bağlama alanı, alıcı hücrelerde tercih edilen hedefe bağlıdır</td></tr><tr><td>CellTiter 96 AQueous One Solüsyon Hücre Proliferasyon Testi (MTS)</td><td>Promega</td><td>G3580 Serisi</td><td>İn vitro fonksiyonel test</td></tr><tr><td>cOmplete, Mini, EDTA İçermeyen Proteaz İnhibitör Kokteyli</td><td>Roche</td><td>11836170001</td><td>Hücre lizizi</td></tr><tr><td>ECL Western blot tespit reaktifi</td><td>Amersham</td><td>RPN2232</td><td>Hücre/EV karakterizasyonu</td></tr><tr><td>Elüsyon tamponu</td><td>UYARI</td><td></td><td>EV zenginleştirme/izolasyon</td></tr><tr><td>Dengeleme tamponu</td><td>UYARI</td><td></td><td>EV zenginleştirme/izolasyon</td></tr><tr><td>EXO-ACE IEX sütunu</td><td>UYARI</td><td></td><td>Aşağı akış fonksiyonel tahlili için EV zenginleştirme/izolasyon Patent Kimliği AU2024901931</td></tr><tr><td>EXO-NET pan-eksozom yakalama boncukları</td><td>UYARI</td><td></td><td>Aşağı akış karakterizasyonu için EV izolasyonu Patent Kimliği WO/2014/011673</td></tr><tr><td>Granzim B antikoru</td><td>Hücre Sinyali</td><td>4275</td><td>Hücre/EV karakterizasyonu</td></tr><tr><td>İnsan IL-2 IS, birinci sınıf</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-097-744</td><td>T/NK hücrelerinin kseno içermeyen kültürü</td></tr><tr><td>iBlot 2 Transfer Yığınları, PVDF</td><td>Davetli</td><td></td><td>Hücre/EV karakterizasyonu</td></tr><tr><td>İmmünoKült-XF (cGMP)</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>100-0956</td><td>T/NK hücrelerinin kseno içermeyen kültürü</td></tr><tr><td>K-562 Serisi</td><td>ATCC</td><td>CCL-243 Serisi</td><td>İn vitro fonksiyonel test</td></tr><tr><td>MCF-7 Serisi</td><td>ATCC</td><td>HTB-22</td><td>İn vitro fonksiyonel test</td></tr><tr><td>Millex-GP şırınga filtre ünitesi, 0.22 &micro; m</td><td>Merck Millipore</td><td>SLGPR33RS</td><td>Terminal filtrasyonu</td></tr><tr><td>Yenileme tamponu</td><td>UYARI</td><td></td><td>EV zenginleştirme/izolasyon</td></tr><tr><td>RIPA arabelleği (10X)</td><td>Hücre Sinyalizasyon Teknolojisi</td><td>9806</td><td>Hücre lizizi</td></tr><tr><td>Tripan mavisi çözeltisi, %0,4</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td>Hücre canlılığı ve yoğunluğunun değerlendirilmesi</td></tr><tr><td>Yıkama tamponu</td><td>UYARI</td><td></td><td>EV zenginleştirme/izolasyon</td></tr><tr><td><güçlü>Ekipman</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Otomatik hücre sayacı</td><td>Davetli</td><td>Kontes II FL</td><td>Hücre canlılığı ve yoğunluğunun değerlendirilmesi</td></tr><tr><td>Tezgah üstü otomatik ekstraksiyon cihazı</td><td>Davetli</td><td>KingFisher Apex Sistemi</td><td>Yüksek verimli otomatik arıtma sistemi Protokol ayrıntıları için bağlantıya bakın: https://www.inoviq.com/site/technology/resources</td></tr><tr><td>Floresan mikroskobu</td><td>Zeiss</td><td>Axio Gözlemci 7</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Nanopartikül izleme analizi (NTA)</td><td>Parçacık Metrix GmbH</td><td>Zetaview PMX-130</td><td>Partikül analizi</td></tr><tr><td>Plaka okuyucu</td><td>BMG Laboratuvar Teknolojisi</td><td>SPECTROstar Nano</td><td>İn vitro fonksiyonel test</td></tr><tr><td>Soğutmalı tezgah üstü santrifüj</td><td>Beckman Coulter</td><td>Avanti J-15R</td><td>Hücre kültürü ve EV zenginleştirme işlemi</td></tr><tr><td>SDS-PAGE mini jel tankı</td><td>Davetli</td><td>A25977 Serisi</td><td>Hücre/EV karakterizasyonu</td></tr><tr><td>Western blot transfer sistemi</td><td>Davetli</td><td>iBlot 2</td><td>Hücre/EV karakterizasyonu</td></tr></tbody></table>

kimerik antijen reseptörü-hücre dışı veziküller (car-ev) teknolojisinin geliştirilmesi: kanser tedavisinin geleceği

Enhancing Chimeric Antigen Receptor-Extracellular Vesicles (CAR-EV) Technology: The Future of Cancer Therapy

CAR T/NK hücre kültürünün tipik bir iş akışı, ardından EV izolasyonu, EV'lerin karakterizasyonu ve fonksiyonel bir tahlilde kullanımı Şekil 1'de gösterilmektedir. CAR T/NK hücrelerinin kültürlenmesinden elde edilen CM, EV zenginleştirmesi ve aşağı akış karakterizasyonundan (nanopartikül izleme analizi dahil) ve çok kuyulu bir plaka MTS testi ile değerlendirilen fonksiyonel aktiviteden önce toplanır (Şekil 1).
GFP etiketli CAR hücreleri, kültürde CAR yapısının ekspresyonunu doğrulamak için mikroskopi yoluyla görselleştirilebilir. Yeterli transdüksiyon verimliliğini sağlamak için mikroskopi, CM'nin toplanmasından önce ve sırasında rutin bir adım olarak yapılmalıdır. Verimliliği değerlendirirken potansiyel otofloresansı yakalamak için parlak alan ve GFP kanallarını üst üste bindirmek önemlidir. Dikkat çekici bir şekilde, T hücreleri doğal olarak kümelenme eğilimine sahiptir (NK hücrelerinde benzer şekilde gözlenir; veriler gösterilmemiştir) ve hücreler kümelenmiş bir fenotip sergilediğinde floresan açıkça gözlemlenebilir (Şekil 2).
EV zenginleştirmesinin ardından EV'ler, NTA ve western immünoblotlama yoluyla karakterize edilebilir. NTA kullanılarak, partikül veriminin analizi, CM'ye kıyasla izole edilmiş EV'lerde artan bir konsantrasyonu doğrulayabilir (Şekil 3A). Western blot verileri ayrıca CAR hücrelerinde ve EV'lerde sitolitik işaretleyici granzim B'nin ekspresyonunu ve ikincisinde preparatlarda hücresel materyalin bulunmadığını doğrulayan kalneksin yokluğunu doğrular. HEK293T hücreler CAR-negatif kontrol olarak dahil edilmiştir (Şekil 3B).
EV işlevselliğinin analizi, hücre canlılığını/proliferasyon kapasitesini belirlemek için MTS testi ile gerçekleştirildi. EGFR ve HER2'yi hedefleyen CAR-EV'lerin MCF-7 meme kanseri ve K562 kan kanseri hücre canlılığı ve büyümesi üzerindeki etkisi, kolorimetrik MTS reaktifinin 490 nm'lik bir absorbansta (arka plan sinyalinin kaldırılmasından sonra) ölçülmesiyle belirlenir. Bu örnekte, EGFR hedefleme CAR-EV'ler, MCF-7 ve K562 hücre canlılığını sırasıyla p ve @ oranında azalttı. CAR-EV'leri hedefleyen HER-2, MCF-7'yi ~ oranında azalttı (Student's t-testi ile belirlendiği gibi). Deneysel düzen göz önüne alındığında, parametrik olmayan bir testin (örneğin, Mann-Whitney U) kullanılması, sonraki çalışmalarda daha sağlam bilgiler sunabilir (Şekil 4).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68726/68726fig1.jpg"> 
Şekil 1: CAR-EV üretimi, zenginleştirmesi, EV karakterizasyonu ve işlevsel okuma. İşlevsellik analizinden önce EV üretimi, üretimi ve zenginleştirilmiş CAR-EV örneklerinin karakterizasyonunun tipik bir iş akışını gösteren şematik diyagram. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68726/68726fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68726/68726fig2.jpg"> 
Şekil 2: HER2'yi hedefleyen CAR-T hücrelerinde GFP ekspresyonunun doğrulanmasıyla temsili mikroskopi analizi. Görüntüler, 20x objektif kullanılarak floresan mikroskobu ile yakalandı. Beyaz ölçek çubuğu 50 μm'lik bir uzunluğu temsil eder. T hücreleri, tek hücrelere ayrılmadan önce kümeler halinde büyüme konusunda doğal bir eğilime sahiptir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68726/68726fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68726/68726fig3.jpg"> 
Şekil 3: CAR hücrelerinin ve EV'lerin karakterizasyonu. (A) CAR-T CM ve zenginleştirilmiş EV'lerin nano izleme parçacık analizi. EV'lerin partikül konsantrasyonu, CM'ninkinden 1.6-2.1 kat daha fazlayken, protein konsantrasyonu %&gt;80 oranında azaldı. İstatistiksel olarak anlamlı farklılıklar tek yönlü ANOVA ve Tukey'in çoklu karşılaştırma testi ile test edildi; s≤ 0.001, **** s≤ 0.0001. (B) Transdüksiyona tabi tutulmuş T hücrelerinin ve zenginleştirilmiş CAR-EV'lerin Western blot analizi, hem CAR hücrelerinde hem de EV'lerde sitolitik granzim B'nin varlığını doğrularken, HEK293T CAR olmayan hücrelerde bir yokluk kaydedildi. CAR-EV'de kalneksin tespit edilmedi, bu da endoplazmik retikulum partikülleri tarafından düşük kontaminasyona işaret ediyor. Şerit başına protein yükü = 5 μg. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68726/68726fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68726/68726fig4.jpg"> 
Şekil 4: CAR-EV'lerin hedef hücre canlılığı üzerindeki etkisi (MCF-7 meme kanseri hücreleri ve K562 kronik miyeloid lösemi hücre hattı). Hedef hücreler, 3 güne kadar tek doz 4.5 x 105 ve 2.5 x10 5 EV/hücre (sırasıyla EGFR veya HER2 CAR'lar) veya kontrol (EV tamponu) ile tedavi edildi. (A) EGFR'yi hedefleyen CAR-EV hücreleri. (B) HER2'yi hedefleyen CAR-EV'ler. Her iki hücre hattında da absorbans okumasında (tedavi etkinliğinin göstergesi) bir azalma gözlendi. Veriler, iki kuyruklu eşleştirilmemiş bir Öğrenci t-testi kullanılarak analiz edilen SD (n = 3) ± ortalama absorbansı temsil eder ve p değerleri istatistiksel anlamlılığı gösterir; ** s≤ 0.01. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68726/68726fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Kimerik Antijen Reseptörü-Hücre Dışı Veziküller (CAR-EV) Teknolojisinin Geliştirilmesi: Kanser Tedavisinin Geleceği

CAR cell therapies have significantly advanced personalized treatment for several hematological malignancies. Currently, seven CAR-&#8239;cell products ...

enhancing-chimeric-antigen-receptor-extracellular-vesicles-car-ev

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu videoda, kimerik antijen reseptörü (CAR) T hücrelerinin ex vivo üretilmesi için kullanılan bir teknik gösterilmektedir. İnsan T hücreleri, anti-CD3 ve anti-CD28 antikorları ile kaplanmış manyetik boncuklar ve interlökin-2 (IL-2) ile takviye edilmiş bir ortam ile inkübe edilir ve bu da T hücresi aktivasyonuna ve çoğalmasına yol açar. Transgenik RNA'nın konakçı genomuna entegre olmasına ve transgeni eksprese etmesine izin veren transgenik lentiviral vektörler tanıtılır. Bu, transdüksiyona...

Kimerik Antijen Reseptörü T Hücreleri Üretmek için Ex Vivo Bir Teknik

Bu videoda, tümör antijenine özgü kimerik antijen reseptörü (CAR) T hücrelerinin ex vivo üretimi için bir teknik gösterilmektedir. Transgenik RNA taşıyan retroviral vektörler, T hücresi sağkalımını ve proliferasyonunu teşvik etmek için interlökin-2 ile takviye edilmiş bir ortamda dalak hücreleri ile karıştırılır. Karışım daha sonra rekombinant insan fibronektin fragmanları ile kaplanmış bir plakaya aktarılır ve virüsün hücre ile füzyonunu kolaylaştırmak için santrifüjlenir, bu da RNA'nın...

Tümöre özgü kimerik antijen reseptör T hücreleri oluşturmak için bir ex vivo teknik

Kemoterapi ve radyasyon bakım standardının lenfodepletiktif ve immünomodülatör etkileri, T hücresi immünoterapisinin antitümör etkinliğini artırmak için kullanılabilir. EGFRvIII'e özgü kimerik antijen reseptörü (CAR) T hücrelerinin üretilmesi ve bunların glioblastoma bakım standardı bağlamında uygulanması için bir yöntemin ana hatlarını çiziyoruz.

Bakım Glioblastoma Standardı Kapsamında Adoptif Tedavisi için CAR T hücrelerinin üretilmesi

Sıvı ve katı tümör hücrelerini hedefleyen kimerik antijen reseptör T hücrelerinin gücünü değerlendirmek için kantitatif gerçek zamanlı in vitro sitoz ispat sistemini tanımlıyoruz. Bu protokol diğer bağışıklık etki hücreleri değerlendirmek için uzatılabilir, yanı sıra kombinasyon tedavileri.

Katı ve Hematolojik Kanser Hücrelerini Hedefleyen İmhimik Antijen Reseptör T Hücreleri Için Gerçek Zamanlı Potens Tsay

Burada, antitümör T hücre etkinlik fenotipik ve fonksiyonel analiz için izin veren bir tüp bebek ortak kültür yöntemi yinelemeli olarak meydan tümör hedefli T hücreleri, açıklayın.

Vitro tümör hücre Rechallenge içinde akıllı Chimeric antijen reseptör T hücre antitümör işlevi değerlendirilmesi için

Biz güvenilir şemerik antijen reseptörü oluşturmak için bir yaklaşım tarif (CAR) T hücreleri ve in vitro ve in vivo onların farklılaşma ve fonksiyon test.

İmal İmmünoterapi için İmkanerik Antijen Reseptör (CAR) T Hücreleri

Bu protokol, retroviral vektör üretimini ve murin T hücresi transdüksiyonunu kolaylaştırarak fare CAR-T hücrelerinin verimli bir şekilde üretilmesini kolaylaştırır.

Murin kimerik antijen reseptörü (CAR)-T hücrelerinin verimli üretimi

Bu protokol, kanser immünoterapisi için entegre olmayan mRNA kullanarak geçici kimerik antijen reseptörü (CAR) T hücreleri oluşturmak için ayrıntılı bir prosedürü ana hatlarıyla belirtir ve CAR-T hücrelerini ve sitotoksik işlevlerini değerlendirmek için güvenilir yöntemler sağlar.

Kanser İmmünoterapisi için mRNA Kullanarak Geçici Kimerik Antijen Reseptörü T Hücreleri Oluşturmak İçin Viral Olmayan Bir Yaklaşım

Bu protokol, birincil T hücrelerinin yetiştirilmesi için temel adımları tanımlar; bunların izolasyonu, aktivasyonu, genişlemesi ve mRNA elektroporasyonu ile geçici transfeksiyonu dahildir. Ayrıca, fenotip, aktivasyon belirteçleri, canlılık ve kimerik antijen reseptörü (CAR) ekspresyonunun akış sitometrik analizi için bir iş akışı ve antikor paneli önerilmektedir.

Birincil insan T hücrelerinin izolasyonu, yetiştirilmesi ve geçici transfeksiyonu için kimerik antijen reseptörü (CAR) T hücreleri üretmek

Siteye özgü recombinase (SSR) teknolojisi ve Cre / lox sistemi gelişi, moleküler biyoloji alanındaki birçok gelişmeler açmıştır ve transgenik hayvanların gen fonksiyonunu değerlendirmek için değerli bir araç olarak kendini kanıtlamıştır. Bu röportaj, halka kapanması recombinase (Cre) ve bu enzim kullanımı geleneksel vuruş stratejileri üzerinde önemli avantajlara sahiptir koşullu mutagenez, gelişmesine yol açmıştır sahaya özgü rekombinasyon mekanizması tartışıyor.

Site Özel Recombinase (SSR) Teknoloji İlkeleri

Keşfedin kimerik antijen reseptörü hücre dışı veziküller (CAR-EV) teknolojisini kanser tedavisi için. Bu yöntem, iyon değişim kromatografisi ile yüksek verimli izolasyon sağlayarak hedefli terapötiklerin etkinliğini artırır ve solid tümörlerde RNA tedavisi potansiyelini gösterir.

Kimerik Antijen Reseptörü-Hücre Dışı Veziküller (CAR-EV) Teknolojisinin Geliştirilmesi: Kanser Tedavisinin Geleceği

Daha fazla video keşfet