Miyokard Enfarktüsünün Sıçan Modelinde Hedefli ve Güvenilir İntramiyokardiyal Kök Hücre Dağıtımı için Ekokardiyografi Kılavuzluğunda Enjeksiyon

Başlamak için, kuruluğu önlemek için anestezi uygulanmış bir sıçanın her iki gözüne oftalmik jel uygulamak için steril bir aplikatör kullanın. Epilasyon tamamlandıktan sonra, uygun bir cerrahi ovma ajanını %70 etanol ile değiştirerek enjeksiyon bölgesini dezenfekte edin. Sıçanı ısıtma yastığından ultrason görüntüleme sisteminin hayvan platformuna aktarın.

Sıçanın pençelerini platform elektrotlarına tutturmak için az miktarda elektrot jeli uygulayın ve sinyal kalitesini artırın. Ardından vücut ısısını sürekli olarak izlemek için rektal sıcaklık probunu takın. Şimdi, hem B modunda hem de M modunda parasternal uzun eksen ve kısa eksen görünümlerinin yanı sıra anatomik ve fonksiyonel değerlendirme için dört oda görüntüsü dahil olmak üzere istenen temel veya enjeksiyon öncesi görüntüleri elde edin.

Enjeksiyon sistemini hazırlamak için, bir mililitrelik bir şırıngaya 22 gauge steril bir kılavuz iğne takın. Şırıngayı kılavuz iğne ile enjeksiyon kelepçesine monte edin ve yerine sabitleyin. Ardından, kılavuz iğnenin görüntüleme alanında görünür olduğundan emin olmak için ultrason dönüştürücüsünü enjeksiyon yuvasıyla hizalayın.

Dönüştürücü montajını ve tutma kelepçesini kullanarak dönüştürücü konumunu ayarlayın. Fareyi hareket ettirmeden, dönüştürücüdeki çentik farenin sağ omzuna doğru bakana kadar hayvan platformunu döndürün. Görüntülemeye ince ayar yapmak için hayvan platform rayındaki mikromanipülatör vidalarını ayarlayın.

İğne ile hizalamayı korumak için dönüştürücüyü sabit tutun. Şimdi, parasternal uzun eksen B modunu ve M modu görüntülemeyi kullanarak enfarktüslü alanı görselleştirin. Enjeksiyon fizibilitesini belirlemek için enfarktüsün boyutunu, bölgesel duvar hareketini ve duvar incelme alanlarını değerlendirin.

Peri-enfarktüs bölgesini tanımlayın ve enfarktüs çekirdeğinin yanında, diyastol sonu duvar kalınlığı bir milimetreden fazla olan bir hipokinetik alan seçin. Ardından, ray sistemini kullanarak enjeksiyon montajını hayvan platformuna doğru ilerletin. Ardından, iğne ucunu dönüştürücü alanının tam merkeziyle ince hizalamak için enjeksiyon montajının mikromanipülatör vidalarını ayarlayın.

Şimdi, kılavuz iğneyi yavaşça ilerletmek ve cildi delmek için, enjeksiyon yuvasındaki enjeksiyon mikromanipülatör vidasını çevirin ve iğne ucunun ultrason alanında görünür olduğunu doğrulayın. Ardından, kılavuz iğnenin planlanan yörüngesini doğrulamak için ultrason yazılımındaki iğne kılavuzu özelliğini etkinleştirin. Kılavuz iğneyi, sol ventrikül ön duvarından bir ila iki milimetre eğimle durarak seçilen enjeksiyon bölgesine doğru ilerletin.

İğne yerine oturduğunda, sabit ultrason görselleştirmesini sürdürmek için bir operatöre kılavuz iğneyi tabanında stabilize etmesini söyleyin. Başka bir operatörden şırınga kelepçesini gevşetmesini, şırıngayı dikkatlice çıkarmasını ve enjeksiyonu içeren şırınga ile değiştirmesini isteyin. Ardından, enjeksiyonu içeren şırıngaya 88 milimetre uzunluğunda 29 gauge bir iğne takın.

Şırıngayı enjeksiyon yuvasına sabitleyin. İğneyi sabit kılavuz iğneden manuel olarak geçirin ve gerekirse mikromanipülatör vidalarıyla x ekseni boyunca küçük ayarlamalar yapın. Ultrasonda göğüs boşluğunda eğim görünene kadar iğneyi manuel olarak ilerletmeye devam edin.

29 gauge iğne ultrasonda göründüğünde, hassas kontrol için mikromanipülatör vidalarını kullanarak sol ventrikül ön duvarının miyokardına ilerletin. İğne eğiminin tüm uzunluğunun miyokardın içine gömüldüğünden emin olun. Enjeksiyonu yavaşça miyokardiyuma enjekte edin.

Enjeksiyon bölgesinde sol ventrikül ön duvarının duvar hareketi ile hareket eden parlak, yoğun bir ekojenik nokta gözlemleyerek başarılı bir enjeksiyonu onaylayın. Son olarak, yanlışlıkla iğne batmasını önlemek için şırıngayı ve iğneleri enjeksiyon yuvasından çıkarın. Fareyi hayvan platformundan dikkatlice kaldırın ve iyileşmesi için bir ısıtma yastığının üzerine yerleştirin.

Biyolüminesans görüntülemede, göğüs boşluğunda diffüz lüminesans sinyal ile gösterilen erken iğne çekilmesine bağlı olarak enjekte edilen kök hücrelerde kısmi sızıntı olduğu görüldü. Başarılı bir intramiyokardiyal enjeksiyon, sol ventrikül orta apeks bölgesinde konsantre bir lüminesans sinyal ile doğrulandı. Kesitli kalplerin ex vivo görüntülemesi, orta apeks diliminde en güçlü biyolüminesans sinyali, apeks ve orta ventrikül bölümlerinde daha zayıf sinyaller gösterdi.

Kalbin postmortem görüntülemesi, enfarktüs bölgesine bitişik görünür bir mor hidrojel gösterdi ve hedeflenen doğumu doğruladı. Kalp dokusunun floresan görüntülemesi, kırmızı izleyicinin peri-enfarktüs bölgesiyle sınırlı olduğunu ve lokalize doğumu doğruladığını gösterdi. Sirius kırmızısı boyama, izleyicinin enfarktüs çekirdeği ile sağlıklı miyokard arasındaki orta duvar kalınlığına sahip bir bölgeye iletildiğini doğruladı.

Renkli Doppler görüntüleme, iğnenin enjeksiyondan önce görünür kan akışı olmadan miyokard içine doğru şekilde yerleştirildiğini doğruladı. Enjeksiyon sırasında, dış kan akışı tespit edilmeden ön duvar sağlam kaldı. İğne çekildikten sonra, tutulan enjeksiyon miyokard içinde görüldü ve kanama gözlenmedi.