Name: Düşük Yoğunluklu Lipoprotein Varlığında Nötrofil Hücre Dışı Tuzaklar Kullanılarak Vasküler Endotel Hücrelerinin Uyarılması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Keşfedin, düşük yoğunluklu lipoprotein varlığında nötrofil hücre dışı tuzaklar kullanarak insan aortik endotel hücrelerindeki inflamatuar yanıtları nasıl analiz edeceğinizi. Bu yöntem kardiyovasküler hastalıklardaki mekanizmaları anlamanıza yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Papayannopoulos, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+in+immunity+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps in immunity and disease.</a> Nat Rev Immunol. 18 (2), 134-147 (2018).</li>
<li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+extracellular+traps+in+homeostasis+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Neutrophil extracellular traps in homeostasis and disease.</a> Signal Transduct Target Ther. 9 (1), 235(2024).</li>
<li>Megens, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+luminal+neutrophil+extracellular+traps+in+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Presence of luminal neutrophil extracellular traps in atherosclerosis.</a> Thromb Haemost. 107 (3), 597-598 (2012).</li>
<li>Meher, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+role+of+IL+%28Interleukin%29-1%CE%B2+in+neutrophil+extracellular+trap+formation+and+abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Novel role of IL (Interleukin)-1β in neutrophil extracellular trap formation and abdominal aortic aneurysms.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 38 (4), 843-853 (2018).</li>
<li>Borissoff, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+levels+of+circulating+DNA+and+chromatin+are+independently+associated+with+severe+coronary+atherosclerosis+and+a+prothrombotic+state%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Elevated levels of circulating DNA and chromatin are independently associated with severe coronary atherosclerosis and a prothrombotic state.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33 (8), 2032-2040 (2013).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid-specific+deletion+of+Peptidylarginine+Deiminase+4+mitigates+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Myeloid-specific deletion of Peptidylarginine Deiminase 4 mitigates atherosclerosis.</a> Front Immunol. 9, 1680(2018).</li>
<li>Zhai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+traps+from+activated+vascular+smooth+muscle+cells+drive+the+progression+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Extracellular traps from activated vascular smooth muscle cells drive the progression of atherosclerosis.</a> Nat Commun. 13 (1), 7500(2022).</li>
<li>Abdo, A. I., Rayner, B. S., van Reyk, D. M., Hawkins, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-density+lipoprotein+modified+by+myeloperoxidase+oxidants+induces+endothelial+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biol%22%5BJournal%5D)">Low-density lipoprotein modified by myeloperoxidase oxidants induces endothelial dysfunction.</a> Redox Biol. 13, 623-632 (2017).</li>
<li>Mueller, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+lipoprotein+%28a%29+Isolation+from+a+small+volume+of+plasma+with+applications+for+clinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A method for lipoprotein (a) Isolation from a small volume of plasma with applications for clinical research.</a> Sci Rep. 12 (1), 9138(2022).</li>
<li>Hosseinzadeh, A., Messer, P. K., Urban, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+redox-cycling+nitroxide+tempol+inhibits+NET+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Stable redox-cycling nitroxide tempol inhibits NET formation.</a> Front Immunol. 3, 391(2012).</li>
<li>Gupta, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+endothelial+cells+induce+neutrophil+extracellular+traps+and+are+susceptible+to+NETosis-mediated+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Activated endothelial cells induce neutrophil extracellular traps and are susceptible to NETosis-mediated cell death.</a> FEBS Lett. 584 (14), 3193-3197 (2010).</li>
<li>Obama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperative+action+of+oxidized+low-density+lipoproteins+and+neutrophils+on+endothelial+inflammatory+responses+through+neutrophil+extracellular+trap+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cooperative action of oxidized low-density lipoproteins and neutrophils on endothelial inflammatory responses through neutrophil extracellular trap formation.</a> Front Immunol. 10, 1899(2019).</li>
<li>Schröter, J., Schiller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chlorinated+phospholipids+and+fatty+acids%3A+Patho%29physiological+relevance%2C+potential+toxicity%2C+and+analysis+of+lipid+chlorohydrins%5BTitle%5D)+AND+%22Oxid+Med+Cell+Longev%22%5BJournal%5D)">Chlorinated phospholipids and fatty acids: Patho)physiological relevance, potential toxicity, and analysis of lipid chlorohydrins.</a> Oxid Med Cell Longev. 2016, 8386362(2016).</li>
<li>Nose, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crucial+role+of+perilipin-3+%28TIP47%29+in+formation+of+lipid+droplets+and+PGE2+production+in+HL-60-derived+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Crucial role of perilipin-3 (TIP47) in formation of lipid droplets and PGE2 production in HL-60-derived neutrophils.</a> PLoS One. 8 (8), e71542(2013).</li>
<li>Manda-Handzlik, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+agents+differentiating+HL-60+cells+toward+granulocyte-like+cells+on+their+ability+to+release+neutrophil+extracellular+traps%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The influence of agents differentiating HL-60 cells toward granulocyte-like cells on their ability to release neutrophil extracellular traps.</a> Immunol Cell Biol. 96 (4), 413-425 (2018).</li>
<li>Ermert, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+neutrophil+extracellular+traps+in+microbial+infections%5BTitle%5D)+AND+%22J+Innate+Immun%22%5BJournal%5D)">Mouse neutrophil extracellular traps in microbial infections.</a> J Innate Immun. 1 (3), 181-193 (2009).</li>
<li>Ohinata, H., Obama, T., Makiyama, T., Watanabe, Y., Itabe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-density+lipoprotein+suppresses+neutrophil+extracellular+traps+enhanced+by+oxidized+low-density+lipoprotein+or+oxidized+phospholipids%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">High-density lipoprotein suppresses neutrophil extracellular traps enhanced by oxidized low-density lipoprotein or oxidized phospholipids.</a> Int J Mol Sci. 23 (22), 13992(2022).</li>
<li>Pertiwi, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+traps+derived+from+macrophages%2C+mast+cells%2C+eosinophils%2C+and+neutrophils+are+generated+in+a+time-dependent+manner+during+atherothrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Extracellular traps derived from macrophages, mast cells, eosinophils, and neutrophils are generated in a time-dependent manner during atherothrombosis.</a> J Pathol. 247 (4), 505-512 (2019).</li>
<li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+roles+of+eosinophils+in+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Differential roles of eosinophils in cardiovascular disease.</a> Nat Rev Cardiol. 22 (3), 165-182 (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>%0,1 Poli-L-Lizin</td><td>Sigma Aldrich Hakkında</td><td>P8920-100ML</td><td></td></tr><tr><td>10 cm çanak</td><td>Corning</td><td>430591</td><td></td></tr><tr><td>12 oyuklu Doku Kültürü Plakaları</td><td>Doğan</td><td>353043</td><td></td></tr><tr><td>%2 Jelatin</td><td>Sigma Aldrich Hakkında</td><td>G1393-20ML Serisi</td><td></td></tr><tr><td>4 adet tüp</td><td>Himac</td><td>S404332A</td><td></td></tr><tr><td>All-Trans Retinoik Asit</td><td>Uyan</td><td>188-01113</td><td>Herhangi bir satıcıyla değiştirilebilir</td></tr><tr><td>Selülozlu diyaliz tüpü</td><td>MISUMI Grup A.Ş.</td><td>0327-23-37-07 (UC18-32-100)</td><td>Herhangi bir satıcıyla değiştirilebilir</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Dojindo</td><td>345-01865</td><td>Herhangi bir satıcıyla değiştirilebilir</td></tr><tr><td>Endotel Hücre Büyüme Ortamı 2 Kit</td><td>Promosyon Hücresi</td><td>C-22111 (İngilizce)</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu</td><td>Gibco</td><td>10270-106</td><td>Herhangi bir satıcıyla değiştirilebilir</td></tr><tr><td>Heparin Sodyum (5.000 ünite/5 mL)</td><td>Mochida İlaç Co., Ltd.</td><td></td><td>Herhangi bir satıcıyla değiştirilebilir</td></tr><tr><td>Yüksek Hızlı Soğutmalı Santrifüj</td><td>TOMİ</td><td>SRX-201 Serisi</td><td>Hızlanma: 9, Yavaşlama: 7</td></tr><tr><td>İnsan Aort Endotel Hücreleri</td><td>Lonza</td><td>CC-2535 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>KBr</td><td>Uyan</td><td>168-03475</td><td>Herhangi bir satıcıyla değiştirilebilir</td></tr><tr><td>KEYENCE Mikroskopi yazılımı</td><td>ANAHTARLIK</td><td>BZ-II Analizörü</td><td></td></tr><tr><td>Mikro Ultrasantrifüj</td><td>Himac</td><td>CS150GX</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskopi</td><td>OLYMPUS</td><td>CK40 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskopi</td><td>ANAHTARLIK</td><td>BZ-9000 Serisi</td><td>Zaman atlamalı görüntüleme için (isteğe bağlı)</td></tr><tr><td>Mikroskopi kamerası</td><td>Nikon</td><td>DS-Fi3</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskopi kamera yazılımı</td><td>Nikon</td><td>DS-L4 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin/Streptomisin</td><td>Gibco</td><td>15140-122 100ML</td><td>Herhangi bir satıcıyla değiştirilebilir</td></tr><tr><td>fosfat tampon salin (&times; 10)</td><td></td><td></td><td>2,6 g NaH2PO4&middot; 2H2O, 29 g Na2HPO4&middot; 12H2O, 80 g NaCl ve 2.0 g KCl damıtılmış suda ve 1 L.&nbsp hacmine ayarlayın; (Herhangi bir satıcı ile değiştirilebilir)</td></tr><tr><td>PMA(Phorbol 12-Myristate 13-Asetat)</td><td>Uyan</td><td>162-23591</td><td>Herhangi bir satıcıyla değiştirilebilir</td></tr><tr><td>Reaktif Paketi</td><td>Lonza</td><td>CC-5034 Serisi</td><td>(CC-5022: HEPES Tamponlu Salin Çözeltisi, CC-5012: Tripsin/EDTA, CC-5002: Tripsin Nötralize Edici Çözelti)&nbsp;</td></tr><tr><td>Rotor</td><td>Himac</td><td>S100AT6-0242</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 (Fenol kırmızısı ile)</td><td>Uyan</td><td>189-02025</td><td>Herhangi bir satıcıyla değiştirilebilir</td></tr><tr><td>RPMI-1640 (Fenol kırmızısı olmadan)</td><td>Uyan</td><td>186-02155</td><td>Herhangi bir satıcıyla değiştirilebilir</td></tr><tr><td>T-25 şişesi</td><td>Corning</td><td>3275</td><td></td></tr></tbody></table>

düşük yoğunluklu lipoprotein varlığında nötrofil hücre dışı tuzaklar kullanılarak vasküler endotel hücrelerinin uyarılması

Stimulation of Vascular Endothelial Cells Using Neutrophil Extracellular Traps in the Presence of Low-Density Lipoprotein

Şilomikronların çıkarılmasından ve ardından sıralı ultrasantrifüjleme yoluyla insan plazmasından VLDL fraksiyonlarının çıkarılmasından sonra, yoğunluğu d = 1.063'e ayarlamak için insan plazması bir KBr çözeltisi ile karıştırıldı. Bu adımda, kalan çökeltici çözelti içinde tamamen çözülmedi ve LDL'yi sağlam tutmak için gaz kabarcıkları oluşturan şiddetli karışımdan kaçınıldı. Ultrasantrifüjden sonra, LDL üst tabaka üzerinde sarı-turuncu rengi9 ile görsel olarak değerlendirildi (<strong clas...

Düşük Yoğunluklu Lipoprotein Varlığında Nötrofil Hücre Dışı Tuzaklar Kullanılarak Vasküler Endotel Hücrelerinin Uyarılması

Neutrophil extracellular traps (NETs) have emerged as causative factors in various non-infectious diseases and have been implicated in cardiovascular ...

stimulation-vascular-endothelial-cells-using-neutrophil-extracellular

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Bu videoda, nötrofil hücre dışı tuzakları (NET'ler) oluşturmak ve izole etmek için kullanılan bir in vitro teknik gösterilmektedir. Nötrofiller periferik kandan izole edilir ve NET üretmek için forbol miristat asetat (PMA) ile uyarılır. İnkübasyon sırasında, nötrofiller, granüler sitoplazmik proteinlerle karıştırılmış yoğunlaştırılmış kromatin içeren NET'leri serbest bırakmak için bir hücre ölümü (NETosis) sürecinden geçer.

İnsan Nötrofil Hücre Dışı Tuzakları Oluşturmak için İn Vitro Teknik

Bu video, anti-nötrofil sitoplazmik antikorlar içeren hasta serumu kullanılarak önceden etiketlenmiş nötrofillerde nötrofil hücre dışı tuzakların veya NET'lerin indüksiyonunu ve görselleştirilmesini göstermektedir. Ayrıca, geçirimsiz bir DNA boyası ve floresan mikroskobu kullanmak, NET'lerin görüntülenmesini sağlar.

Önceden Etiketlenmiş Nötrofillerde Nötrofil Hücre Dışı Tuzakların İndüksiyonu ve Görselleştirilmesi

Bu video, TNF-alfa, PMA ve HOCL gibi farklı inflamatuar uyaranlar kullanılarak insan monosit türevi makrofajlarda makrofaj hücre dışı tuzaklarının (MET'ler) in vitro stimülasyonunu göstermektedir. Video ayrıca görselleştirme için MET'lerin SYTOX boya boyama yöntemini de göstermektedir.

Makrofaj hücre dışı tuzakların in vitro stimülasyonu ve görselleştirilmesi

Enfeksiyon bölgelerinde aktif endotele nötrofil bağlılık konağın inflamatuvar yanıt ayrılmaz bir bileşenidir. Için izin veren bir nötrofil bağlayıcı bir testtir Bu raporda...

Nicel<em&gt; In vitro</emStatik Koşullarında Account İlköğretim İnsan mikrovasküler endotel hücreleri için Nötrofil yapışma Tedbir&gt; Testi

Aşağıdaki protokol, piyasada kolayca bulunabilen ayıraçları kullanarak, insan tüm kanından Nötrofil Ekstrasellüler tuzakları (NET) izole etmek için çok basit bir şekilde tarif eder. Daha sonra izole edilmiş NET'ler kanser hücreleri bir in vitro yapışma deneyinde kullanılabilir gösterilmektedir.

Basitleştirilmiş İnsan Nötrofil Ekstrasellüler Tuzaklar (NET) İzolasyon ve Taşıma

Lipidler hücresel fonksiyonlarda önemli rol oynadıkları bilinmektedir. Burada, nötrofil hücre dışı tuzak oluşumunun altında yatan mekanizmaların daha iyi anlaşılması için HPTLC ve HPLC birlikte kullanarak, kolesterol seviyesi üzerinde durularak, nötrofillerin lipit bileşimini belirlemek için bir yöntem açıklanmaktadır.

Yöntemler lipid Nötrofiller değişiklikler ve Nötrofil Ekstrasellüler Tuzaklar sonraki oluşumunu incelemek

Burada, postoperatif peritoneal lavaj sıvı, kurtarılan insan düşük yoğunluklu nötrofil (LDN), büyük nötrofil hücre dışı tuzakları (ağlar) üretmek ve verimli bir şekilde daha sonra grow ücretsiz tümör hücreleri tuzak bir yöntem mevcut.

Düşük yoğunluklu nötrofil tarafından oluşturulan nötrofil hücre dışı tuzakları Peritoneal lavaj sıvı aracılık tümör hücre büyümesini ve eki elde

Burada mikroskopve floresan boyama kullanarak canlı hücre kültüründe makrofaj ekstrasellüler tuzak (MET) üretimini tespit etmek için bir protokol sunulmaktadır. Bu protokol, immünoresans boyama ile spesifik MET protein belirteçlerini incelemek için daha da genişletilebilir.

Diferansiye İnsan Monosit türevi Makrofajlarda Hücre Dışı Tuzak Salınımının İn Vitro Stimülasyon ve Görselleştirilmesi

Burada in vitro nötrofil hücre dışı tuzakların (NET'ler) indüksiyonu ve analizi için bir protokol sunulmaktadır. DNA, katelisidin (LL37) ve enzim aktivitesinin nicelleştirilmesi, benzer kontrollü koşullar altında mikrobiyal ve kimyasal uyaranlar tarafından indüklenen NET'lerin bileşimindeki ve morfolojisindeki değişkenliği gösteren veriler vermiştir.

Mikrobiyal ve Kimyasal Uyaranlar Tarafından İndüklenen Nötrofil Hücre Dışı Tuzakların Morfolojik ve Bileşimsel Analizi

Bu tanımlanmış protokol, insan nötrofil hücre dışı tuzak (NET) salınımını in vitro olarak görselleştirmek ve ölçmek için gerçek zamanlı, yüksek verimli bir mikroskopi yaklaşımını tanımlar. Tekrarlanabilir yöntem, farklı NETosis indükleyicileri ile stimülasyon üzerine NET salınımının özelliklerinin ve kinetiğinin araştırılmasına olanak tanır ve NETosis antagonistlerinin farmakolojisinin değerlendirilmesini sağlar.

İnsan Nötrofil Hücre Dışı Tuzak Salınımının Gerçek Zamanlı, Yüksek Verimli Mikroskobik Miktar Tayini ve Antagonistlerin Farmakolojisinin Değerlendirilmesi

Düşük yoğunluklu nötrofiller (LDN) birçok hastalıkta önemli ölçüde artar. LDN genellikle hücre sıralaması yoluyla izole edilir. Saf ve canlı LDN elde etmek için pratik bir yöntem sunuyoruz. Periferik kanın yoğunluk gradyanlı santrifüjlenmesinden sonra, hücreler manyetik mikro boncuklarla inkübe edilir ve daha sonra LDN, manyetik kolonlar aracılığıyla ayrılır.

Düşük Yoğunluklu Nötrofillerin Verimli Saflaştırılması için Hızlı Manyetik-mikro Boncuk Yöntemi

Keşfedin, düşük yoğunluklu lipoprotein varlığında nötrofil hücre dışı tuzaklar kullanarak insan aortik endotel hücrelerindeki inflamatuar yanıtları nasıl analiz edeceğinizi. Bu yöntem kardiyovasküler hastalıklardaki mekanizmaları anlamanıza yardımcı olur.

Düşük Yoğunluklu Lipoprotein Varlığında Nötrofil Hücre Dışı Tuzaklar Kullanılarak Vasküler Endotel Hücrelerinin Uyarılması

Daha fazla video keşfet