Name: Bekçiyi Görselleştirmek: Evanın Yetişkin Zebra Balıklarında Kan-Beyin Bariyeri Geçirgenliğine İlişkin Mavi Boya Bazlı Değerlendirmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-30T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Keşfedin: Yetişkin zebra balıklarında kan-beyin bariyeri bütünlüğünü değerlendirmek için basit ve uygun maliyetli Evans mavisi boya yöntemi. Bu protokol, nörovasküler değişiklikleri nicel ve nitel olarak analiz ederek hastalık modellerinde araştırmaları kolaylaştırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu protokol takip edildi ve Malezya Uluslararası İslam Üniversitesi (IIUM) bünyesindeki Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından hayvan etiği onayına atıfta bulunularak izin verildi (ref. no.: IIUM/504/14/2/IACUC).
1. Evans Blue boya stok solüsyonunu hazırlayın
<ol>
	<li>%1 (a/h) stok çözeltisi hazırlamak için 0,1 g EB boyasını 10 mL 1x fosfat tamponlu salin (PBS) içinde çözün. Boya tamamen eriyene kadar iyice karıştırın. DİKKAT: EB, Kanserojen Kategori 1B olarak sınıflandırılır. Cilt ve gözlerle doğrudan temasından kaçının. Koruyucu giysi, eldiven, koruyucu gözlük ve toz maskesi kullanın. Tozu solumaktan kaçının ve üreticinin kullanım talimatlarına uyun. Evans Blue boyasını (katı veya çözelti) lavaboya atmayın. Atıkları etiketli orijinal kaplarda saklayın. Ulusal ve yerel tehlikeli atık yönetmeliklerine göre bertaraf edin.</li>
	<li>Çözeltiyi 0,45 μm'lik bir şırınga filtresi kullanarak filtreleyin. Süzüntüyü steril 15 mL'lik bir santrifüj tüpüne toplayın. Tüpü alüminyum folyoya sarın ve 4 °C'de saklayın. NOT: Daha küçük gözenek boyutlu bir filtre (örn. 0,2 μm) de kullanılabilir. Stok çözeltisi 4 °C'de iki haftaya kadar veya -20 °C'de bir aya kadar saklanabilir ve donmuş halde saklandığında tekrarlanan donma-çözülme döngülerini en aza indirmek için alikotlama önerilir.</li>
</ol>
2. Yetişkin zebra balığına Evans Blue boyasını uygulayın
<ol>
	<li>Balık artık dokunsal uyaranlara tepki vermeyene kadar su sıcaklığını kademeli olarak 12 °C'den 7 °C'ye düşürerek zebra balığını hipotermik şok yoluyla uyuşturun. NOT: Suya birkaç dakika içinde yavaşça az miktarda kırılmış buz eklenerek sıcaklığın kademeli olarak düşürülmesi sağlanabilir ve sıcaklığın kademeli olarak düşmesine izin verilir. Trikain daldırma da uygun bir alternatif anestezi yöntemidir.</li>
	<li>31 G'lik bir insülin şırıngası kullanarak intraperitoneal (IP) boşluğa 20 μL% 1 EB boyası enjekte edin. Geri akışı önlemek için enjeksiyon bölgesine 10 saniye boyunca hafif basınç uygulayın. NOT: Zebra balığı intraperitoneal boşluğu, pelvik kuşağın arkasında bulunur. EB uygulamasının başarı oranını artırmak için, enjeksiyondan önce balıkları 24 saat aç bırakın. Bu, intraperitoneal boşluğa daha iyi erişim ve doğruluk sağlamak için karın boşluğunu boşaltacaktır.</li>
	<li>Balıkları bir geri kazanım tankına aktarın ve 30 dakika boyunca toparlanmaya izin verin. Yaralanma, ölüm veya davranış değişikliklerini izleyin. NOT: Zebra balığının iyileşmesine yardımcı olmak için, hafif bir anestezik etki sağlamak ve enjeksiyon sonrası olası rahatsızlığı uyuşturmaya yardımcı olmak için geri kazanım tankı için biraz düşük su sıcaklığı (20-24 °C) kullanın. Enjekte edilen balık, başarılı boya sirkülasyonunu gösteren mavi bir renk tonu sergileyecektir (Şekil 1).</li>
	<li>30 dakika sonra, balığa 1 °C ila 3 °C'de hipotermik şok yoluyla ötenazi yapın. Ardından, steril bir bıçak veya cerrahi makas kullanarak balığın başını kesin. NOT: Daha sonra beyin diseksiyonuna yardımcı olmak için, başını keserken başın arkasında fazladan et bırakın.</li>
	<li>Fazla kanı ve EB boyasını çıkarmak için kafayı 1x PBS'de (1:20 balık/PBS oranı) iki kez durulayın. NOT: Yetersiz yıkama, yanlış pozitif sonuçlara yol açabilir ve analizin doğruluğunu tehlikeye atabilir. Bunu önlemek için, beyin dokusunu en az iki kez 1x PBS ile iyice yıkayın, tüm görünür kanın ve serbest akışlı boyanın çıkarıldığından emin olun. Herhangi bir boya kalıntısı kalırsa, üçüncü bir yıkama şiddetle tavsiye edilir.</li>
	<li>Kafayı gece boyunca 4 °C'de (1:20 balık/fiksatif oran) %4 paraformaldehit (PFA) içinde sabitleyin. Zebra balığı kafasının küçük boyutu ve yeterli fiksatif hacmi, statik koşullar altında etkili penetrasyona izin verdiğinden, fiksasyon sırasında çalkalama gerekli değildir. DİKKAT: PFA yutulması, solunması veya ciltle teması halinde zararlıdır. PFA solüsyonunu çeker ocak altında hazırlayın. Uygun kişisel koruyucu ekipman kullanın ve tozun solunmasından kaçının. Üreticiye göre tüm güvenlik yönergelerine uyun. PFA'yı tehlikeli atık olarak değerlendirin. Kanalizasyona atmaktan kaçının. Atıkları kapalı kaplarda toplayın ve etiketleyin ve yerel ve ulusal düzenlemelere uygun olarak bertaraf edin.</li>
	<li>Zebra balığı beynini inceleyin<ol>
		<li>Sabit başlığı temiz bir petri kabına yerleştirin ve sivri uçlu cımbız kullanarak beyni daha önce tarif edildiği gibi15 parçalara ayırın. Dokuyu nemli tutmak ve kurumayı önlemek için diseksiyon sırasında sürekli olarak damla damla 1x PBS ekleyin.</li>
		<li>1 g agarozu 100 mL damıtılmış suda çözerek agaroz plakasını hazırlayın. Tamamen eriyene kadar mikrodalgada pişirin, bir petri kabına dökün ve katılaşmasına izin verin.</li>
		<li>Disseke edilmiş beyni iki ayrı 1x PBS banyosunda iki kez durulayın. Ardından, nemi korumak ve büzülmeyi önlemek için dokuyu %1'lik bir agaroz plakasına yerleştirin. NOT: Yetersiz yıkama, yanlış pozitif sonuçlara yol açabilir ve analizin doğruluğunu tehlikeye atabilir. Bunu önlemek için, beyin dokusunu en az iki kez 1× PBS ile iyice yıkayın, tüm görünür kanın ve serbest akışlı boyanın çıkarıldığından emin olun. Herhangi bir boya kalıntısı kalırsa, üçüncü bir yıkama şiddetle tavsiye edilir.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69010/69010fig1.jpg"> 
Şekil 1: Normal ve EB enjekte edilmiş zebra balığı arasındaki cilt renginin karşılaştırılması. (A) Tipik kahverengimsi bir cilt tonu sergileyen normal zebra balığı. (B) EB enjekte edilmiş zebra balığı, boyanın başarılı sistemik dolaşımını gösteren, gözle görülür mavimsi bir renk tonu sergiler. Ölçek çubuğu = 1 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69010/69010fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
3. Bıçak yarası yaralanması (SWI) yoluyla pozitif kontrol sağlayın
NOT: Bıçak yarası yaralanması BBB'yi kırar ve yaralanma bölgesinde EB ekstravazasyonunu sağlar.
<ol>
	<li>Balıkları hipotermik şok yöntemini kullanarak uyuşturun (bkz. adım 2.1). Anestezi uygulandıktan sonra, 20 μL %1 EB boyası enjekte edin ve balığın 2.2 ve 2.3 adımlarında açıklandığı gibi 30 dakika iyileşmesine izin verin.</li>
	<li>30 dakikalık iyileşme süresinden sonra, bir insülin şırıngasına bağlı steril bir 31 G iğne hazırlayın ve aşağıdaki gibi bir bıçak yarası yaralanması prosedürü uygulayın:<ol>
		<li>Balıkları tekrar uyuşturun.</li>
		<li>Balığı düz, soğuk bir yüzeye dik olarak yerleştirin (örn. buz jeli paketi). İğneyi telensefalonun bir tarafına 90° açıyla 1,5 mm'yi geçmeyen bir derinliğe sokun (Şekil 2). NOT: Buz jeli paketiyle doğrudan cilt temasını önlemek ve olası cilt hasarını önlemek için, balık ile soğuk yüzey arasına bir gazlı bez veya kağıt havlu tabakası yerleştirin (Şekil 2). Alternatif olarak balık, doğrudan temas olmadan soğutmayı sürdürmek için soğuk paketin üzerine yerleştirilen sığ bir petri kabına yerleştirilebilir. Aşırı penetrasyonu önlemek için iğne üzerinde 1,5 mm işaretleyin.</li>
		<li>Balıkları bir geri kazanım tankına aktarın ve 30 dakika dinlenmeye bırakın.</li>
		<li>2.4 ila 2.7. adımlarda açıklandığı gibi beyni ötenazi yapın, başını kesin, düzeltin ve parçalara ayırın.</li>
		<li>Negatif kontrol için, EB boyası yerine 2.1 μL 2.7x PBS kullanarak 20 ila 1 arasındaki adımları tekrarlayın.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69010/69010fig2.jpg"> 
Şekil 2: Pozitif kontrol için bıçak yarası yaralanması. (A) EB boyasının beyin dokusuna nüfuz etmesini kolaylaştırmak için telensefalona (kırmızı daire) kısaca bir 31G iğne sokun; Yaralanmamış bir beyin ile bıçaklanmış bir beynin yan yana karşılaştırılması, (B) bıçak bölgesinin dorsal görünümü (kırmızı daire), (C) bıçak bölgesinin yandan görünümü. Ölçek çubuğu = 1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69010/69010fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
4. EB ekstravazasyonunun kalitatif analizi
<ol>
	<li>Disseke beyin dokularını stereomikroskop altında gözlemleyin. Tutarlılığı sağlamak için görüntü ayarlarını (yakınlaştırma, beyaz dengesi, pozlama, kontrast vb.) optimize edin.</li>
	<li>Mikroskop monteli bir kamera kullanarak görüntüleri yakalayın ve . TIFF formatı. NOT: Karşılaştırmalı geçerliliği sağlamak için tüm numuneler için aynı görüntüleme ayarlarını kullanın.</li>
</ol>
5. EB ekstravazasyonunun kantitatif analizi
<ol>
	<li>Fiji'yi indirin ve yükleyin (yazılımı indirmek için bir bağlantı Malzeme Tablosunda mevcuttur). Resmi Fiji'de açın.</li>
	<li>Tıklayarak renk ters evrişimi gerçekleştirin: RGB'&gt; Renk &gt; Renk Ters Evrişimi &gt; Görüntü, kırmızı, yeşil ve mavi tonları temsil eden üç ayrı görüntüyle sonuçlanır. NOT: Bu adım, mavi tonu diğer renk bileşenlerinden izole ederek yalnızca mavi boyanın yoğunluğunun ölçülmesini sağlar.</li>
	<li>Resme tıklayarak mavi kanal görüntüsünü (genellikle "Color_3" olarak etiketlenir) etkinleştirin. Tıklayarak 8 bit gri tonlamaya dönüştürün: Görüntü &gt; Yazın &gt; 8 bit. NOT: Gri tonlama dönüştürme, renk bozulmalarını en aza indirir ve yoğunluğa dayalı analizi geliştirir.</li>
	<li>8 bitlik görüntünün gri yoğunluğunu ölçün.<ol>
		<li>Ölçümleri şu şekilde ayarlayın: Ölçümleri Analiz Et &gt; Ayarla; Alan ve Ortalama gri değer'i seçin.</li>
		<li>Dikdörtgen seçim aracını kullanarak, tek tip boyutlu bir ilgi alanı (ROI) çizin ve Analiz &gt; Ölç'ü seçerek veya Ctrl + M tuşlarına basarak gri yoğunluğu ölçün. NOT: Tüm örneklerde aynı ROI boyutu kullanılmalıdır. ROI'nin mutlak boyutları, elde edilen görüntünün büyütme ve çözünürlüğüne bağlı olarak değişebilir, bu nedenle araştırmacılar, karşılaştırılabilirliği sağlamak için veri setlerindeki ROI boyutunu standartlaştırmalıdır. 8 bit gri tonlamalı görüntüdeki her piksel, 0 ile 255 arasında değişen bir yoğunluk değerine sahiptir, burada 0 saf siyahı, 255 saf beyazı ve aradaki değerler grinin çeşitli tonlarını temsil eder.</li>
		<li>Önyargıyı azaltmak için, tüm örneklerde beynin anatomik olarak tutarlı bölgelerinde üç ila beş yatırım getirisi çizin. Artefaktların veya tutarsız boyamaların olduğu bölgelerden kaçının. NOT: Yerleştirme tutarlılığı, anatomik işaretlere atıfta bulunularak ve ROI konumlandırmasının deney grupları arasında simetrik olmasını sağlayarak elde edilebilir.</li>
		<li>Beyin başına tek bir yoğunluk değeri elde etmek için her görüntü için ROI'lerden ortalama gri değerlerin ortalamasını alın. Gruplar arasında istatistiksel karşılaştırma için bu ortalamayı kullanın.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Kadry, H., Noorani, B., Cucullo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+blood-brain+barrier+overview+on+structure%2C+function%2C+impairment%2C+and+biomarkers+of+integrity%5BTitle%5D)+AND+%22Fluids+Barriers+CNS%22%5BJournal%5D)">A blood-brain barrier overview on structure, function, impairment, and biomarkers of integrity.</a> Fluids Barriers CNS. 17, 1-24 (2020).</li>
<li>Knox, E. G., Aburto, M. R., Clarke, G., Cryan, J. F., O'Driscoll, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+blood-brain+barrier+in+aging+and+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">The blood-brain barrier in aging and neurodegeneration.</a> Mol Psychiatry. 27 (6), 2659-2673 (2022).</li>
<li>Sweeney, M. D., Sagare, A. P., Zlokovic, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+breakdown+in+Alzheimer+disease+and+other+neurodegenerative+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurol%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier breakdown in Alzheimer disease and other neurodegenerative disorders.</a> Nat Rev Neurol. 14 (3), 133-150 (2018).</li>
<li>Kim, S., Jung, U. J., Kim, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+crucial+role+of+the+blood-brain+barrier+in+neurodegenerative+diseases%3A+Mechanisms+of+disruption+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">The crucial role of the blood-brain barrier in neurodegenerative diseases: Mechanisms of disruption and therapeutic implications.</a> J Clin Med. 14 (2), 386(2025).</li>
<li>Guarino, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advancements+in+modelling+human+blood-brain+barrier+on+a+chip%5BTitle%5D)+AND+%22Biofabrication%22%5BJournal%5D)">Advancements in modelling human blood-brain barrier on a chip.</a> Biofabrication. 15 (2), 022003(2023).</li>
<li>Kalueff, A. V., Stewart, A. M., Gerlai, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+as+an+emerging+model+for+studying+complex+brain+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Zebrafish as an emerging model for studying complex brain disorders.</a> Trends Pharmacol Sci. 35 (2), 63-75 (2014).</li>
<li>Eliceiri, B. P., Gonzalez, A. M., Baird, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aEliceiri%2C+BP+%22The+blood-brain+and+other+neural+barriers%3A+reviews+and+protocols%22">The blood-brain and other neural barriers: reviews and protocols</a>. , Humana Press. Totowa, NJ. (2010).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish%3A+A+promising+in+vivo+model+for+assessing+the+delivery+of+natural+products%2C+fluorescence+dyes+and+drugs+across+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Res%22%5BJournal%5D)">Zebrafish: A promising in vivo model for assessing the delivery of natural products, fluorescence dyes and drugs across the blood-brain barrier.</a> Pharmacol Res. 125, 246-257 (2017).</li>
<li>Fleming, A., Diekmann, H., Goldsmith, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+characterisation+of+the+maturation+of+the+blood-brain+barrier+in+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Functional characterisation of the maturation of the blood-brain barrier in larval zebrafish.</a> PLoS One. 8 (10), e77548(2013).</li>
<li>Kislyuk, S., van den Bosch, W., Adams, E., De Witte, P., Cabooter, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+sensitive+and+quantitative+capillary+LC-UV+method+to+study+the+uptake+of+pharmaceuticals+in+zebrafish+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Bioanal+Chem%22%5BJournal%5D)">Development of a sensitive and quantitative capillary LC-UV method to study the uptake of pharmaceuticals in zebrafish brain.</a> Anal Bioanal Chem. 410, 2751-2764 (2018).</li>
<li>Jaffer, H., Adjei, I. M., Labhasetwar, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+imaging+to+map+blood-brain+barrier+leakage%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Optical imaging to map blood-brain barrier leakage.</a> Sci Rep. 3 (1), 3117(2013).</li>
<li>Yao, L., Xue, X., Yu, P., Ni, Y., Chen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evans+blue+dye%3A+A+revisit+of+its+applications+in+biomedicine%5BTitle%5D)+AND+%22Contrast+Media+Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Evans blue dye: A revisit of its applications in biomedicine.</a> Contrast Media Mol Imaging. 2018 (1), 7628037(2018).</li>
<li>Goldim, M. P. S., Della Giustina, A., Petronilho, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+Evans+blue+dye+to+determine+blood-brain+barrier+integrity+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">Using Evans blue dye to determine blood-brain barrier integrity in rodents.</a> Curr Protoc Immunol. 126 (1), e83(2019).</li>
<li>Razali, K., Kumar, J., Mohamed, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterizing+the+adult+zebrafish+model+of+Parkinson%27s+disease%3A+a+systematic+review+of+dynamic+changes+in+behavior+and+physiology+post-MPTP+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Characterizing the adult zebrafish model of Parkinson's disease: a systematic review of dynamic changes in behavior and physiology post-MPTP administration.</a> Front Neurosci. 18, 1432102(2024).</li>
<li>Lopez-Ramirez, M. A., Calvo, C. F., Ristori, E., Thomas, J. L., Nicoli, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+adult+zebrafish+brain-derived+neurospheres%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of adult zebrafish brain-derived neurospheres.</a> J Vis Exp. (108), e53617(2016).</li>
<li>Al-Bachari, S., Naish, J. H., Parker, G. J., Emsley, H. C., Parkes, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+leakage+is+increased+in+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier leakage is increased in Parkinson's disease.</a> Front Physiol. 11, 593026(2020).</li>
<li>Gray, M. T., Woulfe, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Striatal+blood-brain+barrier+permeability+in+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Striatal blood-brain barrier permeability in Parkinson's disease.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 35 (5), 747-750 (2015).</li>
<li>Hourfar, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+%CE%B1-synuclein+aggregates+on+blood-brain+barrier+integrity+in+the+presence+of+neurovascular+unit+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Macromol%22%5BJournal%5D)">The impact of α-synuclein aggregates on blood-brain barrier integrity in the presence of neurovascular unit cells.</a> Int J Biol Macromol. 229, 305-320 (2023).</li>
<li>Olmedo-Díaz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+altered+blood-brain+barrier+contributes+to+brain+iron+accumulation+and+neuroinflammation+in+the+6-OHDA+rat+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">An altered blood-brain barrier contributes to brain iron accumulation and neuroinflammation in the 6-OHDA rat model of Parkinson's disease.</a> Neuroscience. 362, 141-151 (2017).</li>
<li>Ravenstijn, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+blood-brain+barrier+transport+and+CNS+drug+metabolism+in+diseased+and+control+brain+after+intravenous+L-dopa+in+a+unilateral+rat+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Fluids+Barriers+CNS%22%5BJournal%5D)">Evaluation of blood-brain barrier transport and CNS drug metabolism in diseased and control brain after intravenous L-dopa in a unilateral rat model of Parkinson's disease.</a> Fluids Barriers CNS. 9, 1-14 (2012).</li>
<li>Wu, Y. C., Sonninen, T. M., Peltonen, S., Koistinaho, J., Lehtonen, Š <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+and+neurodegenerative+diseases-modeling+with+iPSC-derived+brain+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier and neurodegenerative diseases-modeling with iPSC-derived brain cells.</a> Int J Mol Sci. 22 (14), 7710(2021).</li>
<li>Hosseini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+phenotypic+sex+classification+of+zebrafish+using+machine+learning+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Ecol+Evol%22%5BJournal%5D)">Efficient phenotypic sex classification of zebrafish using machine learning methods.</a> Ecol Evol. 9 (23), 13332-13343 (2019).</li>
<li>Dithmer, S., Blasig, I. E., Fraser, P. A., Qin, Z., Haseloff, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+basic+requirement+of+tight+junction+proteins+in+blood-brain+barrier+function+and+their+role+in+pathologies%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">The basic requirement of tight junction proteins in blood-brain barrier function and their role in pathologies.</a> Int J Mol Sci. 25 (11), 5601(2024).</li>
<li>Kinkel, M. D., Eames, S. C., Philipson, L. H., Prince, V. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+injection+into+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal injection into adult zebrafish.</a> J Vis Exp. (42), e2126(2010).</li>
<li>Nishimura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+novel+indoline+derivative+for+in+vivo+fluorescent+imaging+of+blood-brain+barrier+disruption+in+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Identification of a novel indoline derivative for in vivo fluorescent imaging of blood-brain barrier disruption in animal models.</a> ACS Chem Neurosci. 4 (8), 1183-1193 (2013).</li>
<li>Schoknecht, K., Eilers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain-to-blood+transport+of+fluorescein+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Brain-to-blood transport of fluorescein in vitro.</a> Sci Rep. 14 (1), 25572(2024).</li>
<li>Harris, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+methods+for+imaging+blood-brain+barrier+function+and+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Nucl+Med+Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">In vivo methods for imaging blood-brain barrier function and dysfunction.</a> Eur J Nucl Med Mol Imaging. 50 (4), 1051-1083 (2023).</li>
<li>Hamilton, N., Allen, C., Reynolds, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+MRI+brain+studies+in+live+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22NMR+Biomed%22%5BJournal%5D)">Longitudinal MRI brain studies in live adult zebrafish.</a> NMR Biomed. 36 (7), e4891(2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Agaroz tozu</td><td>Vivantis</td><td>PC0701</td><td></td></tr><tr><td>Evan'ın mavi boyası</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E2129</td><td></td></tr><tr><td>Fiji ImageJ</td><td>Ulusal Sağlık Enstitüleri, ABD</td><td></td><td>İndirme bağlantısı: https://imagej.net/software/fiji/downloads</td></tr><tr><td>Mikroskop kamerası</td><td>Shenzhen Hayear Elektronik Ltd. Şti.</td><td>HY-500M</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit (PFA) tozu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum klorür (NaCl)</td><td>HmbG Kimyasallar</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Olympus Şirketi</td><td>SZ40 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga filtre ünitesi, 0.45&micro; m</td><td>Merck Millipore&nbsp;</td><td>SLHV004SL</td><td></td></tr></tbody></table>

bekçiyi görselleştirmek: evan'ın yetişkin zebra balıklarında kan-beyin bariyeri geçirgenliğine İlişkin mavi boya bazlı değerlendirmesi

Visualizing the Gatekeeper: Evan's Blue Dye-Based Assessment of Blood-Brain Barrier Permeability in Adult Zebrafish

Bu protokol bir Parkinson zebra balığı modeli üzerinde test edildi. BBB'nin uzlaşması, PD hastalarında 16,17,18 ve çeşitli Parkinson hayvan modellerinde 19,20,21 iyi belgelenmiş bir olgudur. Yetişkin zebra balığı Parkinson modelinde BBB bütünlüğünü araştırmak için, beyin dokularına EB boya ekstravazasyonu, salin enjekte edilen (kontrol...

Bekçiyi Görselleştirmek: Evan'ın Yetişkin Zebra Balıklarında Kan-Beyin Bariyeri Geçirgenliğine İlişkin Mavi Boya Bazlı Değerlendirmesi

The Blood-Brain Barrier (BBB) is a semi-permeable interface that maintains central nervous system (CNS) homeostasis by regulating the movement of ...

visualizing-gatekeeper-evan-s-blue-dye-based-assessment-blood-brain

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Biz embriyonik zebrafish beyin geçirgenliği için canlı bir bütün hayvan kantitatif ölçümü tarif. Tekniği nöral tüp lümeninde farklı molekül ağırlıklarında beyin omurilik sıvısı ve molekülleri korumak için yeteneği analiz ve ventriküllerin kendi hareketini rakamlarla. Bu yöntem, gelişme esnasında ve hastalık epitel geçirgenlik ve olgunlaşma farklılıkları belirlemek için yararlıdır.

Zebra balığı Embriyonik nöroepitelyumda geçirgenliği için bir Assay

Standart embriyo mikroenjeksiyonu ve stereomikroskopi ekipmanları kullanılarak, zebrafish larvalarının mikrogavage işlemi için yeni bir yöntem sunuyoruz. Mikrogavage işleminin, çeşitli materyallerin kontrollü miktarlarda özellikle zebrafish larvalarının intestinal lümenine iletilmesi için kullanışlı, güvenli ve etkili bir teknik olduğunu gösteriyoruz.

Zebra balığı larvalarının Microgavage

Bu video, bir EAE fare modelinde kan-beyin bariyeri bozulmasını değerlendirmek için bir prosedürü göstermektedir. Farklı boyutlardaki floresan boyalar retro-orbital olarak enjekte edilir ve beynin kan damarlarında dolaşır. Daha küçük boya, boşluklardan beyin dokusuna sızarken, daha büyük boya, yalnızca bozulma şiddetli olduğunda girer ve bariyer hasarının derecesi ile ilişkilidir.

Bir EAE Fare Modelinde Floresan Boyalar Kullanılarak Kan-Beyin Bariyeri Bozulmasının Belirlenmesi

Kan-beyin bariyeri bozulması, beyin bazı ilaçların ulaştırılması, yardımcı olur. Mannitol fiziksel bariyer düzenini bozacak içi arterially kan damarları çevreleyen daralır hücreleri teslim.

Kan-beyin bariyer bozulması arasında Rat Modeli Nörovasküler Therapeutics Hedefli izin ver için

Bu çalışmanın amacı, singeneik fare endotelial hücreler ve astrositlerin ortak-kültür içeren bir in vitro modelinin BBB tekrarlanabilirliğini doğrulamak için oldu. Endotel hücre tek yüksek Teer ve düşük LY geçirgenliği sundu. Belirli TJ proteinlerin ekspresyonu, enflamasyon ve taşıyıcı ve reseptörlerin işlevselliğine fonksiyonel tepkileri değerlendirildi.

Ayarlama-up bir<em&gt; In Vitro</emSıçan Kan-beyin bariyerinin&gt; Model (BBB): BBB geçirimsizliği ve Reseptör aracılı Ulaştırması Bir Odak

Burada bir fare beyin damar geçirgenliği tahlil mayi enjeksiyon kan - beyin bariyerini disfonksiyon hayvan modelleri için geçerlidir perfüzyon ardından floresan tarayıcıları kullanarak mevcut. Bir hemi-beyin geçirgenliği kantitatif değerlendirilmesi ve diğer izleme görselleştirme/immunostaining için kullanılır. Yordamı 5-6 h 10 fareler için alır.

Vivo kan - beyin bariyerini geçirgenliği tahlil Fluorescently kullanarak farelerde izleyiciler etiketli

Kan-beyin bariyerbütünlüğü sinir sistemi fonksiyonu için çok önemlidir. Drosophila melanogasterolarak, kan-beyin bariyeri geç embriyogenez sırasında glial hücreler tarafından oluşur. Bu protokol, D. melanogaster embriyolarında ve üçüncü instar larvalarında kan-beyin bariyeri oluşumu ve bakımı için taht yöntemlerini açıklamaktadır.

Drosophila melanogaster Kan-beyin Bariyer Bütünlüğü için Tahse

Burada zebra balığı embriyonik beynini larva ve çocuk evrelerine kadar in vivo olarak görüntüleyen bir yöntem sunuyoruz. Elektrofizyolojik yaklaşımlardan uyarlanan bu mikroinvaziv prosedür, olgun nöronun hücresel ve hücre altı ayrıntılarına erişim sağlar ve beyin fonksiyonu ve ilaç müdahalesini karakterize etmek için optogenetik ve nörofarmakolojik çalışmalarla birleştirilebilir.

Kafatası ve Deri Temizleme ile Uyanık Zebra Balığı Larvaları ve Yavrularında Tam Aktif Beyin Dokusunun In vivo Görüntülemesi

Bu protokol, ortaya çıkan nöroinflamatuar yanıtı ve nörotoksisiteyi incelemek için bir zebra balığı larva modelinde beyin ventriküler bölgesine lipopolisakkaritin mikroenjeksiyonunu göstermektedir.

Nöroinflamasyon ve Nörotoksisiteyi Değerlendirmek için Larva Zebra Balıklarına Lipopolisakkaritin Beyin Ventriküler Mikroenjeksiyonları

Hipoksik koşullar altında kültürlenen plasental eksplantlardan izole edilen küçük EV'lerin (sEV'ler) (preeklampsinin bir yönünü modelleme) hamile olmayan yetişkin dişi farelerde kan-beyin bariyerini bozup bozmadığını değerlendirmek için bir protokol sunulmaktadır.

Hipoksik İnsan Plasentalarından Küçük Hücre Dışı Veziküller Tarafından Fare Kan-Beyin Bariyerinin Bozulması

Farelere farklı zaman noktalarında iki floresan boya uygulanarak kan-beyin bariyeri (BBB) bozulmasına bağlı boya ekstravazasyonunu görselleştirmek için bir yöntem geliştirilmiştir. Gliserolün kriyoprotektan olarak kullanılması, aynı numune üzerinde immünohistokimyayı kolaylaştırdı.

Hafif Travmatik Beyin Hasarı Olan Bir Fare Modelinde Kan-Beyin Bariyeri Bozulmasının Değerlendirilmesi

Keşfedin: Yetişkin zebra balıklarında kan-beyin bariyeri bütünlüğünü değerlendirmek için basit ve uygun maliyetli Evans mavisi boya yöntemi. Bu protokol, nörovasküler değişiklikleri nicel ve nitel olarak analiz ederek hastalık modellerinde araştırmaları kolaylaştırır.

Bekçiyi Görselleştirmek: Evanın Yetişkin Zebra Balıklarında Kan-Beyin Bariyeri Geçirgenliğine İlişkin Mavi Boya Bazlı Değerlendirmesi (Video) | JoVE Journal

Bekçiyi Görselleştirmek: Evan'ın Yetişkin Zebra Balıklarında Kan-Beyin Bariyeri Geçirgenliğine İlişkin Mavi Boya Bazlı Değerlendirmesi

Daha fazla video keşfet