Name: Fare Oküler Lens Epitelinden ve Fiber Hücre Yığın Kitlelerinden RNA İzolasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-10T12:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: Öğrenin fare göz lensinden epitel ve fiber hücrelerin RNA izolasyonu yöntemini. Bu teknik transkriptomik analiz için hücre tiplerini ayırarak yaşla ilişkili lens patolojilerinin araştırılmasına olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Lovicu, F. J., Robinson, M. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLovicu%2C+FJ+%22Development+of+the+Ocular+Lens%22">Development of the Ocular Lens</a>. , Cambridge University Press. (2004).</li>
<li>Bassnett, S., Winzenburger, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphometric+analysis+of+fibre+cell+growth+in+the+developing+chicken+lens%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Morphometric analysis of fibre cell growth in the developing chicken lens.</a> Exp Eye Res. 76 (3), 291-302 (2003).</li>
<li>Kuszak, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ultrastructure+of+epithelial+and+fiber+cells+in+the+crystalline+lens%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cytol%22%5BJournal%5D)">The ultrastructure of epithelial and fiber cells in the crystalline lens.</a> Int Rev Cytol. 163, 305-350 (1995).</li>
<li>Yamamoto, N., Majima, K., Marunouchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+study+of+the+proliferating+activity+in+lens+epithelium+and+the+identification+of+tissue-type+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Mol+Morphol%22%5BJournal%5D)">A study of the proliferating activity in lens epithelium and the identification of tissue-type stem cells.</a> Med Mol Morphol. 41 (2), 83-91 (2008).</li>
<li>Bassnett, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+mechanism+of+organelle+degradation+in+the+vertebrate+lens%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">On the mechanism of organelle degradation in the vertebrate lens.</a> Exp Eye Res. 88 (2), 133-139 (2009).</li>
<li>Bassnett, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fate+of+the+Golgi+apparatus+and+the+endoplasmic+reticulum+during+lens+fiber+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">The fate of the Golgi apparatus and the endoplasmic reticulum during lens fiber cell differentiation.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 36 (9), 1793-1803 (1995).</li>
<li>Bassnett, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lens+organelle+degradation%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Lens organelle degradation.</a> Exp Eye Res. 74 (1), 1-6 (2002).</li>
<li>Bassnett, S., Beebe, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coincident+loss+of+mitochondria+and+nuclei+during+lens+fiber+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Coincident loss of mitochondria and nuclei during lens fiber cell differentiation.</a> Dev Dyn. 194 (2), 85-93 (1992).</li>
<li>Bassnett, S., Shi, Y., Vrensen, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+glass%3A+Structural+determinants+of+eye+lens+transparency%5BTitle%5D)+AND+%22Philos+Trans+R+Soc+Lond+B+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Biological glass: Structural determinants of eye lens transparency.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 366 (1568), 1250-1264 (2011).</li>
<li>Vrensen, G. F., Graw, J., De Wolf, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+breakdown+during+terminal+differentiation+of+primary+lens+fibres+in+mice%3A+A+transmission+electron+microscopic+study%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Nuclear breakdown during terminal differentiation of primary lens fibres in mice: A transmission electron microscopic study.</a> Exp Eye Res. 52 (6), 647-659 (1991).</li>
<li>Counis, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+nuclear+degradation+during+lens+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Analysis of nuclear degradation during lens cell differentiation.</a> Cell Death Differ. 5 (4), 251-261 (1998).</li>
<li>Piatigorsky, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lens+differentiation+in+vertebrates.+A+review+of+cellular+and+molecular+features%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">Lens differentiation in vertebrates. A review of cellular and molecular features.</a> Differentiation. 19 (3), 134-153 (1981).</li>
<li>Al-Khudari, S., Donohue, S. T., Al-Ghoul, W. M., Al-Ghoul, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+compaction+of+lens+fibers+affects+the+structure+and+optical+properties+of+rabbit+lenses%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Age-related compaction of lens fibers affects the structure and optical properties of rabbit lenses.</a> BMC Ophthalmol. 7, 19(2007).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22World+Report+on+Vision%22">World Report on Vision</a>. , World Health Organization. Geneva. (2019).</li>
<li>Hashemi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+and+regional+prevalence+of+age-related+cataract%3A+A+comprehensive+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Eye+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Global and regional prevalence of age-related cataract: A comprehensive systematic review and meta-analysis.</a> Eye (Lond). 34 (8), 1357-1370 (2020).</li>
<li>Cheng, C., Gong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diverse+roles+of+eph%2Fephrin+signaling+in+the+mouse+lens%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Diverse roles of eph/ephrin signaling in the mouse lens.</a> PLoS One. 6 (11), e28147(2011).</li>
<li>Ibaraki, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+brighter+future+for+cataract+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">A brighter future for cataract surgery.</a> Nat Med. 3 (9), 958-960 (1997).</li>
<li>Scullica, L., Grimes, P., Mcelvain, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Further+autoradiographic+studies+of+the+lens+epithelium.+Normal+and+x-irradiated+rat+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Further autoradiographic studies of the lens epithelium. Normal and x-irradiated rat eyes.</a> Arch Ophthalmol. 70, 659-665 (1963).</li>
<li>Caraguel, C. G., Stryhn, H., Gagne, N., Dohoo, I. R., Hammell, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+of+a+cutoff+value+for+real-time+polymerase+chain+reaction+results+to+fit+a+diagnostic+purpose%3A+Analytical+and+epidemiologic+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vet+Diagn+Invest%22%5BJournal%5D)">Selection of a cutoff value for real-time polymerase chain reaction results to fit a diagnostic purpose: Analytical and epidemiologic approaches.</a> J Vet Diagn Invest. 23 (1), 2-15 (2011).</li>
<li>60/280 and 260/230 ratios. , Thermo Scientific. 
 <a target="_blank" href="https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/CAD/Product-Bulletins/T123-NanoDrop-Lite-Interpretation-of-Nucleic-Acid-260-280-Ratios.pdf">https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/CAD/Product-Bulletins/T123-NanoDrop-Lite-Interpretation-of-Nucleic-Acid-260-280-Ratios.pdf</a> (2009).</li>
<li>Beyer, E. C., Kistler, J., Paul, D. L., Goodenough, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisera+directed+against+connexin43+peptides+react+with+a+43-kd+protein+localized+to+gap+junctions+in+myocardium+and+other+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Antisera directed against connexin43 peptides react with a 43-kd protein localized to gap junctions in myocardium and other tissues.</a> J Cell Biol. 108 (2), 595-605 (1989).</li>
<li>Gong, X., Cheng, C., Xia, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexins+in+lens+development+and+cataractogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Membr+Biol%22%5BJournal%5D)">Connexins in lens development and cataractogenesis.</a> J Membr Biol. 218 (1-3), 9-12 (2007).</li>
<li>Leonard, M., Zhang, L., Bleaken, B. M., Menko, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+for+n-cadherin+linked+c-src+and+fyn+kinases+in+lens+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Distinct roles for n-cadherin linked c-src and fyn kinases in lens development.</a> Dev Dyn. 242 (5), 469-484 (2013).</li>
<li>Leonard, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+n-cadherin+junctions+and+their+role+as+epicenters+of+differentiation-specific+actin+regulation+in+the+developing+lens%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Modulation of n-cadherin junctions and their role as epicenters of differentiation-specific actin regulation in the developing lens.</a> Dev Biol. 349 (2), 363-377 (2011).</li>
<li>Logan, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-cadherin+regulates+signaling+mechanisms+required+for+lens+fiber+cell+elongation+and+lens+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">N-cadherin regulates signaling mechanisms required for lens fiber cell elongation and lens morphogenesis.</a> Dev Biol. 428 (1), 118-134 (2017).</li>
<li>Maddala, R., Nagendran, T., Lang, R. A., Morozov, A., Rao, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rap1+gtpase+is+required+for+mouse+lens+epithelial+maintenance+and+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Rap1 gtpase is required for mouse lens epithelial maintenance and morphogenesis.</a> Dev Biol. 406 (1), 74-91 (2015).</li>
<li>Parreno, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methodologies+to+unlock+the+molecular+expression+and+cellular+structure+of+ocular+lens+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Methodologies to unlock the molecular expression and cellular structure of ocular lens epithelial cells.</a> Front Cell Dev Biol. 10, 983178(2022).</li>
<li>Paul, D. L., Ebihara, L., Takemoto, L. J., Swenson, K. I., Goodenough, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexin46%2C+a+novel+lens+gap+junction+protein%2C+induces+voltage-gated+currents+in+nonjunctional+plasma+membrane+of+xenopus+oocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Connexin46, a novel lens gap junction protein, induces voltage-gated currents in nonjunctional plasma membrane of xenopus oocytes.</a> J Cell Biol. 115 (4), 1077-1089 (1991).</li>
<li>Rong, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+gja8+%28alpha8+connexin%29+in+mice+leads+to+microphthalmia+associated+with+retardation+of+lens+growth+and+lens+fiber+maturation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Disruption of gja8 (alpha8 connexin) in mice leads to microphthalmia associated with retardation of lens growth and lens fiber maturation.</a> Development. 129 (1), 167-174 (2002).</li>
<li>Terrell, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+characterization+of+mouse+lens+epithelial+cell+lines+and+their+suitability+to+study+RNA+granules+and+cataract+associated+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Molecular characterization of mouse lens epithelial cell lines and their suitability to study RNA granules and cataract associated genes.</a> Exp Eye Res. 131, 42-55 (2015).</li>
<li>White, T. W., Bruzzone, R., Goodenough, D. A., Paul, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+cx50%2C+a+functional+member+of+the+connexin+family+of+gap+junction+proteins%2C+is+the+lens+fiber+protein+mp70%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Mouse cx50, a functional member of the connexin family of gap junction proteins, is the lens fiber protein mp70.</a> Molecular Biology of the Cell. 3 (7), 711-720 (1992).</li>
<li>Xia, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+cell+clusters+and+upregulated+Aqp1+in+connexin+50+knockout+lens+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Altered cell clusters and upregulated Aqp1 in connexin 50 knockout lens epithelium.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 65 (11), 27(2024).</li>
<li>Beyer, E. C., Paul, D. L., Goodenough, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexin43%3A+A+protein+from+rat+heart+homologous+to+a+gap+junction+protein+from+liver%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Connexin43: A protein from rat heart homologous to a gap junction protein from liver.</a> J Cell Biol. 105 (6 Pt 1), 2621-2629 (1987).</li>
<li>Gong, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+Alpha3+connexin+gene+leads+to+proteolysis+and+cataractogenesis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Disruption of Alpha3 connexin gene leads to proteolysis and cataractogenesis in mice.</a> Cell. 91 (6), 833-843 (1997).</li>
<li>Xu, L., Overbeek, P. A., Reneker, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+analysis+of+E-%2C+N-+and+P-cadherin+expression+in+mouse+eye+development%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Systematic analysis of E-, N- and P-cadherin expression in mouse eye development.</a> Exp Eye Res. 74 (6), 753-760 (2002).</li>
<li>Nishina, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pax6+expression+in+the+developing+human+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Pax6 expression in the developing human eye.</a> Br J Ophthalmol. 83 (6), 723-727 (1999).</li>
<li>Wistow, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gamman-crystallin+and+the+evolution+of+the+betagamma-crystallin+superfamily+in+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Gamman-crystallin and the evolution of the betagamma-crystallin superfamily in vertebrates.</a> FEBS J. 272 (9), 2276-2291 (2005).</li>
<li>Cheng, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue%2C+cellular%2C+and+molecular+level+determinants+for+eye+lens+stiffness+and+elasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Ophthalmol+%28Lausanne%29%22%5BJournal%5D)">Tissue, cellular, and molecular level determinants for eye lens stiffness and elasticity.</a> Front Ophthalmol (Lausanne). 4, 1456474(2024).</li>
<li>Huynh, P. N., Cheng, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial-temporal+comparison+of+eph%2Fephrin+gene+expression+in+ocular+lenses+from+aging+and+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Ophthalmol+%28Lausanne%29%22%5BJournal%5D)">Spatial-temporal comparison of eph/ephrin gene expression in ocular lenses from aging and knockout mice.</a> Front Ophthalmol (Lausanne). 4, 1410860(2024).</li>
<li>Zelenka, P. S., Gao, C. Y., Saravanamuthu, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+culture+of+rat+lens+epithelial+explants+for+studying+terminal+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation and culture of rat lens epithelial explants for studying terminal differentiation.</a> J Vis Exp. (31), e1519(2009).</li>
</ol>

Oküler lens, net bir görüntü elde etmek için ışığı retinaya ince bir şekilde odaklayan şeffaf bir organdır. Lens iki ana hücre tipinden oluşur: ön hemisferi kaplayan tek katmanlı epitel hücreleri ve dokunun toplu kütlesini oluşturan lif hücreleri (Şekil 1). Lens, epitel hücrelerinin sıkıca yapıştığı lens kapsülü olarak bilinen kollajen bir bazal membran ile çevrilidir. Lens büyüdükçe, ekvatordaki epitel hücreleri çoğalır ve lens üzerine eşmerkezli bir şekilde katmanlanan yeni oluşan lif hücre kabuklarına farklılaşır 1,2,3. Yaşam boyu lens büyümesi, çimlenme bölgesini4 oluşturan bu küçük ekvator epitel hücresi popülasyonunun sürekli çoğalmasına bağlıdır. Lif hücreleri olgunlaştıkça, tüm hücresel organeller, ışık saçan nesneleri 5,6,7,8,9,10,11 ortadan kaldırmak ve doku şeffaflığını korumak için bozulur ve en içteki lif hücreleri sonunda sıkıştırılır, bu da sert bir mercek merkezi 9,12 ile sonuçlanır. Çevreleyen lens kapsülü nedeniyle lenste hücre döngüsü olmaz ve doku çevresine veya kortekse yeni lifler eklendikçe seminal lifler yaşam boyunca lensin merkezinde kalır. Merceğin fiber hücreleri, yaşlarına bağlı olarak farklı optik özelliklere sahiptir ve verilen her aşamada değişen biyolojik özelliklerin zamansal bir anlık görüntüsünü sağlayabilir13.
Mevcut cerrahi seçeneklere rağmen, normalde şeffaf olan lensteki herhangi bir opaklık olarak tanımlanan katarakt, dünyada körlüğün önde gelen nedeni olmaya devam etmektedir14. Katarakt, lens epitelinde, kortekste veya çekirdekte farklı patofizyolojilerle ortaya çıkabilir15. Bununla birlikte, katarakt oluşumunun hücresel ve moleküler mekanizmaları belirsizliğini korumaktadır16,17. Bu farklı katarakt türlerinin nasıl önleneceğini daha iyi anlamak ve cerrahiye alternatifler geliştirmek için, bu farklı hücre tiplerinin lenste homeostazlarını nasıl koruduklarını daha iyi anlamalıyız.
Epitel ve lif hücreleri lenste farklı fizyolojik roller oynar. Örneğin hücre proliferasyonu lens epiteli18 ile sınırlıdır. Bu arada, lens lifleri, lensin büyük kütlesini oluşturur ve lense yapı ve kırılma özellikleri sağlar9. Lensin farklı bölümlerinde yer alan biyolojik süreçlere ilişkin daha incelikli bir bakış açısı elde etmek için epitel ve lif hücreleri ayrı ayrı araştırılmalıdır. Burada, epiteli lif hücre yığın kütlesinden izole etmek, her fraksiyondan mRNA'yı çıkarmak ve bu transkriptleri ters transkripsiyon kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (RT-qPCR) kullanarak analiz etmek için bir yöntem sunuyoruz.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69079/69079fig1.jpg"> 
Şekil 1: Lens anatomisi diyagramı. Lens, ön hemisferi kaplayan tek katmanlı bir epitel hücresi (mavi ve turuncu) ve bir yığın lens lifi kütlesi (beyaz) olmak üzere iki hücre tipinden oluşur. Doku, lens kapsülü (bronzluk) olarak bilinen ince bir kollajen zarla çevrilidir. Ön epitel hücreleri (mavi) hareketsizken, ekvator epitel hücreleri (turuncu) çoğalır, farklılaşır ve lens çevresinde yeni lif hücresi katmanları (beyaz) olmak üzere uzar. Yeni nesil lif hücreleri, eşmerkezli kabuklarda önceki nesil liflerin üzerine bindirilir. En eski lens lifi hücreleri dokunun merkezine sıkıştırılır. Bu rakam Cheng'den (2024)38 değiştirilmiştir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69079/69079fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

<table><tbody><tr><td>Santrifüj ve Rotor</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>14285554PM</td><td></td></tr><tr><td>Kloroform, HPLC sınıfı</td><td>Alfa Aesar</td><td>22920</td><td></td></tr><tr><td>Etanol (190 geçirmez)</td><td>Decon Laboratuvarları</td><td>2801</td><td></td></tr><tr><td>Etanol (200 geçirmez)</td><td>Fisher Biyoreaktifleri</td><td>BP2818 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Pelet Havaneli</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>12-141-363</td><td></td></tr><tr><td>Forseps, kavisli; Öğrenci Cımbızı #7</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>501981</td><td></td></tr><tr><td>Forseps, düz; Dumont #5</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11252-40</td><td></td></tr><tr><td>Forseps, düz; Öğrenci Cımbızı #4</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>501978</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes, küçük</td><td>Kimberly-Clark Hakkında</td><td>34155</td><td>Hassas görev silme</td></tr><tr><td>MicroAmp Yapışkan Film Aplikatörü</td><td>Uygulamalı Biyosistemler</td><td>4333183</td><td></td></tr><tr><td>MicroAmp EnduraPlate Optik 96-Kuyucuklu Hızlı Şeffaf Reaksiyon Plakası Barkodlu</td><td>Uygulamalı Biyosistemler</td><td>4483485</td><td></td></tr><tr><td>Mikropipetleyiciler</td><td>Eppendorf Belediyesi</td><td>&nbsp; 01-671-120</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop, Diseksiyon</td><td>Carl Zeiss</td><td>SteREO Keşfi.V8</td><td></td></tr><tr><td>MiniAmp Optik Yapışkanlı Kapak</td><td>Uygulamalı Biyosistemler</td><td>4360954</td><td></td></tr><tr><td>MiniAmp Termal Döngüleyici</td><td>Uygulamalı Biyosistemler</td><td>A37834</td><td></td></tr><tr><td>MixMate Plakalı Vorteks Mikser</td><td>Eppendorf Belediyesi</td><td>5353000529</td><td></td></tr><tr><td>Moleküler Sınıf Su</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>BP28191</td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop One Mikro Hacimli UV-Vis Spektrofotometre</td><td>Termo Bilimsel</td><td>ND-BİR-W</td><td></td></tr><tr><td>Nunc MicroWell Mini Tepsiler</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>12-565-154</td><td>Diseksiyon Tepsisi</td></tr><tr><td>PCR Tüpleri</td><td>VWR</td><td>201007-012</td><td></td></tr><tr><td>Petri Kabı, 60 mm x 15 mm</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>FB0875713A</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat Tamponlu Salin, 1x Dulbecco's</td><td>Gibco</td><td>14190-136</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Uçları, 10 &micro; L Mezun</td><td>ABD Bilimsel</td><td>1161-3700</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Uçları, 1250 &micro; L XL Mezun</td><td>ABD Bilimsel</td><td>1161-1720</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Uçları, 200 &micro; L Profil Mezun</td><td>ABD Bilimsel</td><td>1163-1700</td><td></td></tr><tr><td>QuantStudio 3 Gerçek Zamanlı PCR Sistemi</td><td>Uygulamalı Biyosistemler</td><td>A28567 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Ters Transkriptaz, SuperScript IV VILO&nbsp;</td><td>Davetli</td><td>11756050</td><td>Yüksek oranda işlemsel ve termostabil ters transkriptaz</td></tr><tr><td>RNA Temizleme ve Konsantratör 5 Kiti</td><td>Zimo</td><td>ZR1013 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>RNaz İçermeyen Su</td><td>Fisher Biyoreaktifleri</td><td>BP2819 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>RNaseZap</td><td>Sigma</td><td>R2020</td><td>RNaz dekontaminasyon solüsyonu</td></tr><tr><td>SealRite Mikrosantrifüj 1,5 mL Tüpler</td><td>ABD Bilimsel</td><td>1615-5500</td><td></td></tr><tr><td>Süper İnce Vannas 8 cm</td><td>Dünya Hassas Aletler</td><td>501778</td><td>Makas</td></tr><tr><td>qPCR için TaqMan FAST Gelişmiş Ana Karışım</td><td>Uygulamalı Biyosistemler</td><td>4444557</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Gen Ekspresyon Testi (FAM) Probu (MTO)</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>4448892</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol</td><td>Davetli</td><td>15596026</td><td>Asit-guanidinyum-fenol çözeltisi</td></tr><tr><td>Vorteks Karıştırıcı</td><td>Termo Bilimsel</td><td>88880017</td><td></td></tr></tbody></table>

fare oküler lens epitelinden ve fiber hücre yığın kitlelerinden rna İzolasyonu

RNA Isolation from Mouse Ocular Lens Epithelium and Fiber Cell Bulk Masses

Lens epiteli ve lifleri, 6 ila 7 haftalık vahşi tip farelerden izole edildi. Bu deneyler için üç fare kullanıldı ve her fareden 2 lens kapsülü veya 2 fiber hücre kütlesi, bir biyolojik kopya için bir araya toplandı. Protokolde açıklandığı gibi, RNA, TRIzol reaktif faz ayrımı kullanılarak ekstrakte edildi. Ortalama olarak, bir çift lens epiteli ve lif yığın kütlesi sırasıyla 0.8 μg (SD ± 0.2) ve 9.7 μg (SD ± 2.3) RNA verdi. 15 μL'lik bir elüsyondaki ortalama konsantrasyon, epitel ve lif numuneleri için sırasıyla 55.4 ng/μ...

Fare Oküler Lens Epitelinden ve Fiber Hücre Yığın Kitlelerinden RNA İzolasyonu

The lens is a specialized, transparent tissue in the anterior chamber of the eye that is comprised of two major cell types, epithelial cells and fiber ...

rna-isolation-from-mouse-ocular-lens-epithelium-fiber-cell-bulk

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Burada, biz bir tekrarlanabilir lazer yakalama mikrodiseksiyon (LCM) için bir protokol trabeküler meshwork (TM) aşağı akım RNA analizi için yalıtmak için açıklamak. TM ifadede gen değişiklikleri analiz yeteneği göz hastalıkları TM ile ilgili temel moleküler mekanizmaları anlamada yardımcı olacaktır.

Lazer yakalama mikrodiseksiyon son derece saf trabeküler Meshwork gen ifade analizi için fare gözlerinden

Lakrimal bezi (LG), α-pürüzsüz Kas aksini (αSMA) ifade eden iki hücre türüne sahiptir: miyoepitelyal hücreler (MECs) ve perikayt. MECS ektodermal orijinli, birçok glandüler dokularda bulunan, perikayt endodermal kökeni vasküler pürüzsüz Kas hücreleri iken. Bu protokol, murine LGs 'den MECs ve perikaytları yalıtır.

Yetişkin Murine lacrimal ve submandibular bezlerden Myoepitelyal hücrelerin izolasyonu

Bu protokol, fare göz küresinin göz kapağı, göz yüzeyi, anterior ve posterior segmentleri ile nispeten sağlam konumda izolasyonu için bir yöntem açıklanmaktadır.

Histolojik Muayene ve İmmünohistokimya için İntegral Göz Yüzey Dokusu Elde Etmek Için Bozulmamış Göz Küresinin İzolasyon

Bu protokol, karmaşık hücreden hücreye interdigitasyonları ve membran mimarisini incelemek için periferik, olgun ve nükleer göz merceği fiber hücrelerini immünofloresan boyama için hazırlama yöntemlerini açıklar.

Göz Merceğinin Korteks ve Çekirdeğinden Demetlerin ve Tek Fiber Hücrelerin Hazırlanması ve İmmünofloresan Boyanması

Bu makale, katarakt ve arka kapsül opaklaşmasında (PCO) tekrarlanabilirliği iyileştirmeyi ve araştırmalara yardımcı olmayı amaçlayan primer lens epitel hücrelerinin (LEC'ler) kültürlenmesi için ayrıntılı bir video protokolünü özetlemektedir. Lens diseksiyonu, LEC izolasyonu ve validasyonu hakkında adım adım talimatlar sunarak, özellikle bu alanda yeni başlayanlar için değerli bir rehber görevi görür.

Fare Primer Lens Epitel Hücre Kültürünü Optimize Etme: Tripsinizasyon için Kapsamlı Bir Kılavuz

Mevcut protokoller, oküler lensteki periferik yapıların görüntü niceleme yöntemleriyle görselleştirilmesi için yeni tam montajlı görüntülemeyi tanımlamaktadır. Bu protokoller, lens mikro ölçekli yapıları ile lens gelişimi/işlevi arasındaki ilişkiyi daha iyi anlamak için yapılan çalışmalarda kullanılabilir.

Periferik lens yapısını, hücre morfolojisini ve organizasyonunu görselleştirmek ve ölçmek için tam montajlı görüntüleme

Retina pigment epiteli (RPE), koroid ve retina arasında çok önemli bir bariyer görevi görür ve fotoreseptörler gibi retina hücre tiplerinin sağlığını ve işlevini destekler. Burada, yetişkin murin RPE'yi izole etmek ve kültürlemek için basit ve etkili bir protokol açıklıyoruz.

Yetişkin Farelerden Retinal Pigment Epitel Hücrelerinin İzolasyonu ve Kültürü için Basitleştirilmiş Bir Yöntem

Yakın zamanda retina kapiller sertleşmesini diyabetle ilişkili retina disfonksiyonu için yeni bir paradigma olarak tanımladık. Bu protokol, fare retina kılcal damarlarının ve subendotel matrisinin retinal endotel kültürlerinden izolasyon adımlarını detaylandırır ve ardından atomik kuvvet mikroskobu kullanılarak sertlik ölçüm tekniğinin bir açıklaması yapılır.

Atomik Kuvvet Mikroskobu Kullanılarak Sertlik Ölçümü için Fare Retina Kılcal Damarlarının ve Subendotelyal Matriksin İzolasyonu

Retina, laminer yapısı boyunca karmaşık uzamsal organizasyon sergiler. Modern mekansal transkriptomik ve dizileme teknikleri, 20 μm kalınlığında doku kesitleri &lt; gerektirir ve bu da retinal araştırma uygulanabilirliklerini sınırlar. Bu taze dondurulmuş kriyoseksiyon yöntemi, düzlemsel uzamsal ilişkileri korurken fare retinasının ince yüz kesitlerini üretir ve laminalar arasında kapsamlı moleküler haritalama sağlar.

En yüz Yüksek Boyutlu Mekansal Moleküler Analiz için Fare Retinasının Kriyoseksiyonu

Burada, kollajenaz A ve tripsin ile ardışık sindirim yoluyla tüm fare kornealarından yüksek kaliteli tek hücreli süspansiyonlar elde etmek için bir protokol sunuyoruz. Bu yöntem, yüksek RNA bütünlüğüne sahip geçerli tek hücreler sağlar ve bu da onları tek hücreli RNA dizileme ve akış sitometriy gibi sonraki uygulamalarla uyumlu kılar.

Fare Kornealarından Tek Hücreli Süspansiyonun Hasat İçin Bir Protokol

Göz lensin ışığı retinaya odaklama işlevi, doku şeffaflığına, biyomekaniğe ve kırılma indeksine bağlıdır. Bu inceleme, lensin üç boyutlu mimarisini vurgular ve doku homeostazını koruyan karmaşık mekanizmaları tartışır.

Memeli Göz Merceği: Gelişim, Anatomi, Fizyoloji, Şeffaflık, Biyomekanik ve Yaşa Bağlı Zorluklar

Öğrenin fare göz lensinden epitel ve fiber hücrelerin RNA izolasyonu yöntemini. Bu teknik transkriptomik analiz için hücre tiplerini ayırarak yaşla ilişkili lens patolojilerinin araştırılmasına olanak tanır.

Fare Oküler Lens Epitelinden ve Fiber Hücre Yığın Kitlelerinden RNA İzolasyonu

Daha fazla video keşfet