Name: Hava-Sıvı Arayüz Kültür Sistemi Kullanılarak İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Düzlemsel Saç Taşıyan Cilt Organoidlerinin Üretimi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-17T14:10:00.000+00:00
Duration: 4 min 37 s
Description: Keşfedin, hava-sıvı arayüzü kültürü kullanarak insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden saç tüyü içeren düzlemsel cilt organoidleri üretimini. Bu yöntem, xeroderma pigmentosum gibi deri hastalıklarının incelenmesinde değerli bir model sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Kolarsick, P. A. J., Kolarsick, M. A., Goodwin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+and+physiology+of+the+skin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dermatol+Nurses+Assoc%22%5BJournal%5D)">Anatomy and physiology of the skin.</a> J Dermatol Nurses Assoc. 3 (4), 203-213 (2011).</li>
<li>Karimkhani, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+skin+disease+morbidity+and+mortality%3A+An+update+from+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2013%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Global skin disease morbidity and mortality: An update from the Global Burden of Disease Study 2013.</a> JAMA Dermatol. 153 (5), 406(2017).</li>
<li>Seth, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+burden+of+skin+disease%3A+Inequities+and+innovations%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Dermatol+Rep%22%5BJournal%5D)">Global burden of skin disease: Inequities and innovations.</a> Curr Dermatol Rep. 6 (3), 204-210 (2017).</li>
<li>Grada, A., Mervis, J., Falanga, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Research+techniques+made+simple%3A+Animal+models+of+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Research techniques made simple: Animal models of wound healing.</a> J Invest Dermatol. 138 (10), 2095-2105.e1 (2018).</li>
<li>Zomer, H. D., Trentin, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin+wound+healing+in+humans+and+mice%3A+Challenges+in+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dermatol+Sci%22%5BJournal%5D)">Skin wound healing in humans and mice: Challenges in translational research.</a> J Dermatol Sci. 90 (1), 3-12 (2018).</li>
<li>Vig, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+skin+regeneration+using+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Advances in skin regeneration using tissue engineering.</a> Int J Mol Sci. 18 (4), 789(2017).</li>
<li>Chu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+regeneration+strategies+of+hair+follicles%3A+Advances+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Functional regeneration strategies of hair follicles: Advances and challenges.</a> Stem Cell Res Ther. 16 (1), 77(2025).</li>
<li>Motter Catarino, C., Cigaran Schuck, D., Dechiario, L., Karande, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incorporation+of+hair+follicles+in+3D+bioprinted+models+of+human+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Incorporation of hair follicles in 3D bioprinted models of human skin.</a> Sci Adv. 9 (41), eadg0297(2023).</li>
<li>Kageyama, T., Miyata, H., Seo, J., Nanmo, A., Fukuda, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+hair+follicle+growth+model+for+drug+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">In vitro hair follicle growth model for drug testing.</a> Sci Rep. 13 (1), 4847(2023).</li>
<li>Abaci, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineering+of+human+hair+follicles+using+a+biomimetic+developmental+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Tissue engineering of human hair follicles using a biomimetic developmental approach.</a> Nat Commun. 9 (1), 5301(2018).</li>
<li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hair-bearing+human+skin+generated+entirely+from+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Hair-bearing human skin generated entirely from pluripotent stem cells.</a> Nature. 582 (7812), 399-404 (2020).</li>
<li>Jung, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wnt-activating+human+skin+organoid+model+of+atopic+dermatitis+induced+by+Staphylococcus+aureus+and+its+protective+effects+by+Cutibacterium+acnes%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Wnt-activating human skin organoid model of atopic dermatitis induced by Staphylococcus aureus and its protective effects by Cutibacterium acnes.</a> iScience. 25 (10), 105150(2022).</li>
<li>Zhang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recessive+cardiac+phenotypes+in+induced+pluripotent+stem+cell+models+of+Jervell+and+Lange-Nielsen+syndrome%3A+Disease+mechanisms+and+pharmacological+rescue%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Recessive cardiac phenotypes in induced pluripotent stem cell models of Jervell and Lange-Nielsen syndrome: Disease mechanisms and pharmacological rescue.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (5), E5383-E5392 (2014).</li>
<li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+and+characterization+of+hair-bearing+skin+organoids+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Generation and characterization of hair-bearing skin organoids from human pluripotent stem cells.</a> Nat Protoc. 17 (5), 1266-1305 (2022).</li>
<li>Hu, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+skin+development+and+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Organogenesis%22%5BJournal%5D)">Embryonic skin development and repair.</a> Organogenesis. 14 (1), 46-63 (2018).</li>
<li>Li, K. N., Tumbar, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hair+follicle+stem+cells+as+a+skin-organizing+signaling+center+during+adult+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Hair follicle stem cells as a skin-organizing signaling center during adult homeostasis.</a> EMBO J. 40 (11), e107135(2021).</li>
<li>Biggs, L. C., Kim, C. S., Miroshnikova, Y. A., Wickström, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+forces+in+the+skin%3A+Roles+in+tissue+architecture%2C+stability%2C+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Mechanical forces in the skin: Roles in tissue architecture, stability, and function.</a> J Invest Dermatol. 140 (2), 284-290 (2020).</li>
<li>Gopee, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+prenatal+skin+atlas+reveals+immune+regulation+of+human+skin+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A prenatal skin atlas reveals immune regulation of human skin morphogenesis.</a> Nature. 635 (8039), 679-689 (2024).</li>
<li>Tokuyama, E., Nagai, Y., Takahashi, K., Kimata, Y., Naruse, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+stretch+on+human+skin+equivalents+increases+the+epidermal+thickness+and+develops+the+basement+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Mechanical stretch on human skin equivalents increases the epidermal thickness and develops the basement membrane.</a> PLoS One. 10 (11), e0141989(2015).</li>
<li>Bai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+research%3A+Theory%2C+technology%2C+and+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Organoid+Res%22%5BJournal%5D)">Organoid research: Theory, technology, and therapeutics.</a> Organoid Res. 1 (1), 025040007(2025).</li>
<li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoid+research+breakthroughs+in+2024%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Organoid+Res%22%5BJournal%5D)">Organoid research breakthroughs in 2024: A review.</a> Organoid Res. 1 (2), 025040005(2025).</li>
<li>Li, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mpox+virus+infection+and+drug+treatment+modelled+in+human+skin+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Mpox virus infection and drug treatment modelled in human skin organoids.</a> Nat Microbiol. 8 (11), 2067-2079 (2023).</li>
<li>Kim, M. J., Ahn, H. J., Kong, D., Lee, S., Kim, D. H., Kang, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+of+solar+UV-induced+photodamage+on+the+hair+follicles+in+human+skin+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">Modeling of solar UV-induced photodamage on the hair follicles in human skin organoids.</a> J Tissue Eng. 15, 20417314241248753(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>İleri DMEM/F12</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>#12634010</td><td>metinde İleri Medium olarak adlandırılır.</td></tr><tr><td>ALK5, inhib. TGFb tip 1, SB431542</td><td>Tocris Bioscience</td><td>#1614</td><td>Aliquot, -20 derece ve derecede mağaza edin; C ve&nbsp; 4 derece ve derecede devam et; C en fazla 7 gün/nbsp;</td></tr><tr><td>Anti-CD104 sıçan monoklonal klonu 439-9B antikor</td><td>BD Biosciences</td><td>#555719</td><td>NA</td></tr><tr><td>anti-kollajen tip IV poliklonal antikor</td><td>MerckMillipore</td><td>#Ab769</td><td>NA</td></tr><tr><td>Anti-sitokeratin 10 tavşan poliklonal antikoru</td><td>Biolegend</td><td>#905401</td><td>NA</td></tr><tr><td>Anti-loricrin tavşan poliklonal antikoru</td><td>Biolegend</td><td>#905101</td><td>NA</td></tr><tr><td>anti-PMEL fare monoklonal antikor</td><td>Novus Biologicals</td><td>#NBP2-29407&nbsp;</td><td>NA</td></tr><tr><td>B-27 Takviyesi, A vitamini hariç</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>#12587010</td><td>Aliquot, -20 derece ve derecede mağaza edin; C&nbsp;</td></tr><tr><td>Hücre kültürü insertleri</td><td>Greiner Bio-one</td><td>#665641</td><td>12-well, gözenek boyutu 0.4 ve mikro; m; şeffaf (48 ekleme/kutu) ; https://shop.gbo.com/en/row/products/bioscience/3d-cell-culture/thincert/3d-thincert-cell-culture-inserts/665641.html</td></tr><tr><td>Kolajen Tip I</td><td>Corning</td><td>#354249</td><td>Stok çözeltiyi 4 derece derecede tutun; C</td></tr><tr><td>Tek kullanımlık skalpel steril 0507 No. 21</td><td>Swann Morton</td><td>#0507</td><td>NA</td></tr><tr><td>Dulbecco' s Fosfat-tamponlu tuzlu (DPBS)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>#14190094</td><td>NA</td></tr><tr><td>Temel 6 (E6) ortamı</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>#A1516401</td><td>hiPSC minimal ortam (hiMinM)&nbsp olarak adlandırılır; metinde bulunuyor.</td></tr><tr><td>Fasudil</td><td>LC Labs</td><td>#F-4660</td><td>Aliquot 1000x stok çözeltisi ile -20 °C derecede depolayın. Çözüldükten sonra 4 derece sıcaklıkta kalın; C en fazla 14 gün/nbsp;</td></tr><tr><td>Hafif Hücre Dissosiyası&nbsp; Reaktif</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>#100-0485</td><td>NA</td></tr><tr><td>GlutaMAX Takviyesi</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>#35050038</td><td>NA</td></tr><tr><td>İnsan FGF-2 temel prenium derecesi</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>#130-093-842</td><td>Aliquot, -80 derece ve derecede mağaza edin; C ve&nbsp; 4 derece ve derecede devam et; C en fazla 7 gün/nbsp;</td></tr><tr><td>LDN 193189 dihidroklorür</td><td>Tocris</td><td>#6053</td><td>Aliquot, ışığa duyarlı, -20 derece ve derecede depola; C&nbsp;</td></tr><tr><td>Matrigel Büyüme Faktörü Azaltılmış Bazal Zar Matrisi</td><td>Corning</td><td>#354230</td><td>Aliquot, -20 derece ve derecede mağaza edin; C ve&nbsp; 4 derece ve derecede devam et; C en fazla 7 gün/nbsp;</td></tr><tr><td>2-Merkaptoetanol</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>#21985023</td><td>Tehlikeli madde, toksik, aşındırıcı, tahriş edici, sağlık ve çevre tehlikesi.</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Merck</td><td>#567530-250MG</td><td>Tehlikeli madde, aşındırıcı ve tahriş edici. Bir çözümü doğaçlı olarak hazırlayın.</td></tr><tr><td>Nörobazal Ortam</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>#21103049</td><td>Sinirsel Bazal ortam olarak adlandırılır&nbsp; metinde bulunuyor.</td></tr><tr><td>Norbosin 50 mg/ml</td><td>Invivogen</td><td>#ant-NR-1</td><td>testte antibiyotik-antimikotik takviyesi olarak adlandırılır. Aliquot, -20 derece ve derecede mağaza edin; C ve&nbsp; 4 derece ve derecede devam et; C en fazla 14 gün/nbsp;</td></tr><tr><td>Nunclon Sphera 96-WellU-Bottom Mikroplakası</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>#174929</td><td>NA</td></tr><tr><td>Nunclon Sphera 174930 24 kuyu çoklu çeşidli</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>#174930</td><td>NA</td></tr><tr><td>N2 Eki</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>#17502048</td><td>Aliquot, -20 derece ve derecede mağaza edin; C&nbsp;</td></tr><tr><td>Yörünge sallayıcısı</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>#88881102</td><td>NA</td></tr><tr><td>Penisillin-Streptomisin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>#15070063</td><td>NA</td></tr><tr><td>Rekombinant insan BMP4 proteini</td><td>R& D Sistemleri</td><td>#314-BP-010</td><td>Aliquot, -80 derece ve derecede mağaza edin; C ve&nbsp; 4 derece ve derecede devam et; C en fazla 7 gün/nbsp;</td></tr><tr><td>StemFlex (SF) ortamı</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>#A3349401</td><td>hiPSC bakım ortamı (hiMM)&nbsp olarak adlandırılır; metinde bulunuyor.</td></tr><tr><td>SteriMax smart&nbsp;- Kızılötesi Döngü Kısırlaştırıcı</td><td>WLD-TEC</td><td>#4.002.000&nbsp;</td><td>Opsiyonel</td></tr><tr><td>Cımbız</td><td>Merck</td><td>#T4537-1EA</td><td>Stil 5; İnce iğne keskin, anti-manyetik paslanmaz çelik</td></tr><tr><td>Vitronektin</td><td>Kök Hücre Teknolojileri</td><td>#07180</td><td>NA</td></tr></tbody></table>

hava-sıvı arayüz kültür sistemi kullanılarak İnsan kaynaklı pluripotent kök hücre kaynaklı düzlemsel saç taşıyan cilt organoidlerinin Üretimi

Generation of Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Planar Hair-bearing Skin Organoids Using an Air-Liquid Interface Culture System

Kistik SO'ların oluşumu için optimizasyon ve kontrol noktaları kapsamlı bir şekilde açıklanmıştır14. Bu nedenle burada sunulan yöntem, kistik organoidlerin gelişimi sırasında değerlendirilecek temel kontrol noktalarına (Şekil 2A), düzlemsel SO'lara geçiş için uygun olanların seçimine (Şekil 2B) ve ortaya çıkan düzlemsel SO'ların kalitesini değerlendirmek için kullanılan kriterlere odaklanmaktadır (Şekil 1B-D ve Şekil 4).
Kistik SO'ların gelişimindeki ilk önemli adım, 0. günde kuyuda bulunan hücrelerin çoğunu içeren tek, yoğun bir hücresel agreganın oluşumudur (Şekil 2A). Bu, hiPSC'lerin dikkatli ve hızlı bir şekilde işlenmesi, verimli santrifüjleme ile birlikte elde edilir ve kuyunun merkezinde hücrelerin homojen bir dağılımı ile sonuçlanır (Şekil 2A, Gün -2). Yüzey ektoderminin uygun şekilde indüksiyonu, 3. günde agreganın en dış tabakasında ince, berrak bir epitel oluşumuna yol açar (Şekil 2A), daha sonra mezenkimal hücre indüksiyonunu takiben, 8. günde mezenkimal hücrelerin koyu bir çekirdeğini içeren şeffaf kistik agregalara dönüşür. 12. ve 20. günler arasında epitel kisti, kistin bir kutbunda biriken ince bir mezenkimal hücre tabakası ile kaplanır (Şekil 2A, Gün 12). Epitelyal ve mezenkimal hücrelerin başarılı bir şekilde birlikte indüksiyonu, sonuçta 50. ve 80. günler arasında görünür hale gelen saç plakodlarının ve mandalların oluşumunu sağlayan tabakalı bir epitel ile sonuçlanır (Şekil 2A,B). Bu gelişimsel kontrol noktalarına dayalı olarak uygun SO'lar seçilerek, düzlemsel SO'lara geçiş sırasında morfolojik ve boyut değişkenliği en aza indirilebilir.
Saç plakodlarının veya mandallarının varlığı, düzlemsel SO'lara daha fazla gelişme için kistik SO'ların seçilmesinde birincil dahil etme kriteridir. Görünür plakodların yokluğu genellikle epidermal tabakalaşmadaki bir kusurdan kaynaklanır ve bu daha sonra aşırı derecede ince görünür (Şekil 2B, Gün 50, orta panel). Düzleştirme için, sadece yan ürünleri bir kutupta yoğunlaşan ve genel olarak minimum yan ürünleri olan büyük kistler (en az 5 mm çapında) kullanılırken, polarize olmayan yan ürünlere sahip olanlar hariç tutulur (Şekil 2B).
Düzlemsel konfigürasyonlarına girdikten sonra, SO'ların birincil kalite kontrolü, bir stereomikroskop altında HF büyümesinin makroskopik olarak izlenmesine dayanır. HF'ler, ALI kültürünün 27 günü boyunca aşamalı olarak uzar, yağ bezleri 14. gün civarında görünür hale gelir ve pigmentasyon zamanla kademeli olarak artar (Şekil 1B, C). İnce kollajen jelin hemen altında yer alan ek membran tarafından uygulanan uzamsal kısıtlamalar nedeniyle, yalnızca düzlemsel SO'nun çevresinde bulunan HF'ler tamamen büyüyebilir ve bunu eke paralel bir oryantasyonda yaparlar (Şekil 1C). Özellikle, kıl gövdesi nadiren cilt yüzeyinin dışına taşar. Geliştirilen düzlemsel SO'ların kalitesini daha fazla değerlendirmek için, bileşimlerini ve morfolojilerini incelemek için parafin veya OCT'ye gömülebilir, kesitlenebilir ve boyanabilirler. H&amp;E boyama, yapılarının insan derisine (Şekil 4A) çok benzediğini, tamamen tabakalı bir epitel ve bir dermisin bir bazal membran ile ayrıldığını ortaya koymaktadır. Farklı epidermal katmanlar, yağ bezleri ve melanositler için spesifik belirteçler kullanan immünofloresan boyama, düzlemsel SO'ların insan derisi benzeri doku mimarisini daha da doğrular (Şekil 1D ve Şekil 4B).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69088/69088fig1.jpg"> 
Şekil 1: Bir ALI kültür sistemi kullanarak hiPSC'lerden HF'ler içeren düzlemsel SO'lar oluşturmak için iş akışı. Anahtar adımların şematik gösterimi ve temsili görüntüleri gösterilir. (A) Esasen daha önce tarif edildiği gibi kistik SO'ların oluşumu10. Gün civarında görünür saç plakodları/mandalları oluşana kadar. (B) Kistik SO'lar, tip I kollajen kaplı bir hücre kültürü eki üzerinde epidermis tarafı yukarı bakacak şekilde kesilir ve düzleştirilir. ALI kültürleri nemlendirilmiş koşullarda 21 gün, ardından kuru koşullarda 6 gün muhafaza edilir. (C) (B)'de gösterilen, saç folikülü büyümesini, yağ bezi benzeri yapı gelişimini (ok uçları) ve zaman içinde ilerleyici pigmentasyonu gösteren bir bölgenin yüksek büyütmeli görünümü. (D) Düzleştirme sonrası 27. günde düzlemsel SO kesitlerinin konfokal görüntüleri, yağ bezi benzeri yapıları işaretleyen Nil kırmızısı veya melanositleri boyayan anti-PMEL antikoru ile birlikte anti-tip IV kollajen antikoru ile etiketlenmiştir. Çekirdekler DAPI ile boyanır. Ölçek çubukları: 200 μm (A); 500 μm (B,C); 50 μm (D). Kısaltmalar: SO'lar = cilt organoidleri; HF'ler = saç kökleri; hiPSC'ler = insan kaynaklı pluripotent kök hücreler; ALI = hava-sıvı arayüzü; Sütun IV = tip IV kolajen; PMEL = premelanazom proteini; DAPI = 4',6-diamidino-2-fenilindol. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69088/69088fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69088/69088fig2.jpg"> 
Şekil 2: SO üretimi sırasında önemli adımlarda hücre agrega morfolojisinin temsili görüntüleri. (A) Farklı aşamalarda uygun (sol paneller) ve yetersiz (orta ve sağ paneller) morfolojilere sahip kistik SO'ların temsili görüntüleri. 2. Günde, hücre kümeleri düzgün bir dağılım göstermelidir (sol panel), oysa santrifüjlemeden sonra uygun olmayan plaka kullanımı hücre dağılımını bozabilir (sağ panel). 0. Günde, iyi biçimlendirilmiş agregalar kompakt, yoğun hücresel kümeler (sol panel) olarak görünürken, düşük hücre canlılığı, yaygın hücre ölümüne ve kompakt 3B yapıların kaybına ( sağ panel) neden olur. 3. günde, belirgin bir dış epitel tabakası görünür hale gelir (sol panel), yokluğu BMP4 konsantrasyonunun optimizasyona ihtiyacı olduğunu gösterebilir (sağ panel). 12. Günde, mezenkimal hücreler bir kutupta birikir ve epitelyal kisti (sol panel) sarmak için göç ederken, aşırı epitelyal (orta panel) veya mezenkimal (sağ panel) farklılaşma, uygun epitel tabakalaşmasını engeller. 50. Günde, SO'lar bir tarafta kistik deri ve diğer tarafta ağırlıklı olarak kıkırdak olmak üzere yan ürünler ( sol panel) ile bipolar morfoloji sergiler. Aşırı epitelyal (orta panel) veya mezenkimal (sağ panel) diferansiyasyon düzgün cilt gelişimini engeller. (B) 80. Gün civarında görünür saç mandalları olan kistik SO'ların temsili görüntüleri. Cilde göre yan ürünlerin (kesikli eğrinin solundaki) değişken oranına dikkat edin. En soldaki üç panel 2-4 düzlemsel SO oluşturulmasına izin verirken, en sağdaki panel düzleştirme için yetersiz kalitede bir SO gösterir. Ölçek çubukları: Gün -2, Gün 50 ve Gün 80 için 500 μm; 0. Gün, 3. Gün ve 12. Gün için 200 μm. Kısaltma: SO = cilt organoidi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69088/69088fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69088/69088fig3.jpg"> 
Şekil 3: Düzlemsel SO'ların üretilmesine yönelik teknik adımların şematik gösterimi. Bir LAF başlığı içinde bir stereomikroskop altında kistik SO'ların düzleştirilmesini gerçekleştirin. (A) Steril bir neşter kullanarak kistik SO'dan yan ürünler biriktiren direği çıkarın. (B) Doku açılmasını kolaylaştırmak için SO'nun üst ve alt ekstremitelerini kesin. (C) Düzlemsel dokuyu 2-4 parçaya kesin. Her bir parçayı, epidermal tarafı yukarı bakacak şekilde, steril forseps kullanarak kollajen kaplı bir ek parçaya aktarın ve düzleştirin. (D) Düzleştirilmiş dokuyu içeren kültür ekini 600 μL ortam içeren standart 12 oyuklu bir plakaya yerleştirin. (E) Plakayı 37 °C'de %5CO2 ile inkübe edin. (F) (B)'de gösterilen deri organoidinin şematik enine görünümü. (G) (C)'de gösterilen deri organoidinin şematik enine görünümü. (H) 600 μL ortam içeren 12 oyuklu bir plakaya yerleştirilmiş bir hücre kültürü eki üzerine dökülen bir tip I kollajen jel üzerine yerleştirilmiş düzlemsel bir SO'nun görüntüsü. Kısaltmalar: SO = cilt organoidi; LAF = laminer hava akışı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69088/69088fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69088/69088fig4.jpg"> 
Şekil 4: hiPSC'den türetilen düzlemsel SO'ların karakterizasyonu. (A) Düzleştirme sonrası 1. ve 27. günlerde H&amp;E boyalı düzlemsel SO'nun temsili parlak alan görüntüleri. 27. Günde, düzlemsel SO'lar, çok katlı bir epidermis ve yağ bezi benzeri yapılar (ok uçları) içeren HF'ler ile cilt olgunlaşması gösterir. (B) Anti-β4 integrin ve anti-keratin 10 veya anti-loricrin antikorları ile boyanmış düzlemsel SO kesitlerinin konfokal görüntüleri, 1. günde erken suprabazal farklılaşma (KRT10+ hücreleri) ve 27. günde geç farklılaşma (LOR+ tabakası) gösterir. Çekirdekler DAPI ile boyanır. Ölçek çubukları: 50 μm (A); 100 μm (B). Kısaltmalar: SO = cilt organoidi; hiPSC = insan kaynaklı pluripotent kök hücre; H&amp;E = hematoksilen ve eozin; β4 = b4 integrin; KRT10 = keratin 10; LOR = loricrin; DAPI = 4',6-diamidino-2-fenilindol. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69088/69088fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Hava-Sıvı Arayüz Kültür Sistemi Kullanılarak İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Düzlemsel Saç Taşıyan Cilt Organoidlerinin Üretimi

Human induced pluripotent stem cell (hiPSC)-derived skin organoids (SOs) containing hair follicles provide a sophisticated in vitro model for ...

generation-human-induced-pluripotent-stem-cell-derived-planar-hair

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu videoda, melanom ilerlemesini incelemek için in vitro 3D organotipik cilt rekonstrüksiyonları oluşturmak için ayrıntılı protokol açıklanmaktadır. Bu cilt modeli, in vivo organların hem mimarisini hem de çok hücreli karmaşıklığını taklit eder.

Organotipik Tam Cilt Rekonstrüksiyonlarının Oluşturulması: İnsan Derisi Örneklerini Kullanarak 3D Cilt Modeli Oluşturma Prosedürü

Bu video, indüklenmiş pluripotent kök hücrelerden (iPSC'ler) serebral organoidler üretmek için bir testi göstermektedir. İnsan iPSC'leri embriyoid cisimler (EB'ler) oluşturmak için indüklenir. EB'ler, bir indüksiyon ortamı kullanılarak bir polimer iskele üzerinde kültürlenir ve nöral kök hücrelere, progenitör hücrelere ve olgunlaşmamış nöronlara farklılaşmayı teşvik eder. Son olarak, EB'ler bir matrise gömülür ve serebral organoid oluşumu için bir bakım ortamına aktarılır.

İndüklenmiş Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Serebral Organoidlerin Üretilmesi

Bu el yazması, koparılmış saçlardan insan keratinositlerinin türetilmesi ve sürdürülmesi ve ardından epizomal vektörler tarafından entegrasyon gerektirmeyen insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerin (hiPSC'ler) üretilmesi için adım adım bir prosedür sağlar.

Saç türetilmiş keratinositlerden Kullanarak Entegrasyon serbest İnsan uyarılmış pluripotent kök hücrelerin üretilmesi

Biz İndüklenmiş pluripotent kök hücre kaynaklı lenfositi ve fibroblastlar ayırt etmek ve bir 3B cilt organoid oluşturmak gösterilmiştir bir protokol bu lenfositi ve fibroblastlar kullanarak öneriyoruz. Bu iletişim kuralı insanlaşmış fareler model oluşturma ek bir adım içerir. Burada sunulan teknik dermatolojik araştırma artıracaktır.

3B cilt Organoid kablosu kan kaynaklı nesil Pluripotent kök hücreler indüklenen

Bu protokol, insan pluripotent hücrelerinin bağırsak organoidlerine farklılaşmasına izin verir. Protokol, hücreleri kesin endoderm, arka bağırsak endodermi ve ardından bağırsak epiteli popülasyonuna farklılaştırarak normal insan gelişimini taklit eder. Bu, protokolü hem bağırsak gelişimini hem de hastalık modelleme uygulamalarını incelemek için uygun hale getirir.

Gelişimsel ve Hastalık Modelleme Uygulamaları için hiPSC Kaynaklı Bağırsak Organoidlerinin Üretilmesi

Burada, insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden (iPSC' ler) beyin organoidleri üretmek için bir protokol açıklıyoruz. Beyin organoidlerini büyük miktarlarda ve yüksek kalitede elde etmek için ev yapımı mini biyoreaktörler kullanıyoruz.

Ev Yapımı Mini Biyoreaktörlerde İndüklenmiş Pluripotent Kök Hücrelerden Beyin Organoidi Üretimi

Mevcut protokol, insan kaynaklı pluripotent kök hücre kaynaklı tip 2 alveoler epitel benzeri hücreleri (iAT2'ler) tanımlamaktadır. Bu hücreler 3D kültürde kendini yenileyen küreler olarak kültürlenebilir veya hava-sıvı arayüzü (ALI) kültürüne uyarlanabilir.

İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Tip 2 Alveolar Epitel Hücrelerinin 3D Küreleri ve 2D Hava-Sıvı Arayüz Kültürlerinin Üretilmesi

İnsan kaynaklı pluripotent kök hücre farklılaşma protokollerindeki son gelişmeler, organa özgü hücre tiplerinin kademeli olarak türetilmesine izin vermektedir. Burada, iPSC türevi hava yolu bazal hücrelerinin bakımı ve genişlemesi ve hava-sıvı arayüz kültürlerinde mukosiliyer bir epitel halinde farklılaşması için ayrıntılı adımlar sunuyoruz.

İnsan Pluripotent Kök Hücrelerinden Hava Yolu Epitel Hücresi Hava-Sıvı Arayüz Kültürlerinin Oluşturulması

Bu protokol, insan pluripotent ve indüklenmiş pluripotent kök hücrelerden kendi kendini organize eden kan damarlarının oluşumunu tanımlar. Bu kan damarı ağları, perisitler, düz kas aktini ve sürekli bir bazal membran ile çevrili geniş ve bağlı bir endotel ağı sergiler.

Pluripotent Kök Hücrelerden İnsan Kan Damarı Organoidlerinin Üretimi

Bu protokol, insan pluripotent kök hücrelerini kullanarak vasküler organoidler oluşturmak için bir yöntem sunar.

İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerden Vasküler Organoid Üretimi

Keşfedin, hava-sıvı arayüzü kültürü kullanarak insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden saç tüyü içeren düzlemsel cilt organoidleri üretimini. Bu yöntem, xeroderma pigmentosum gibi deri hastalıklarının incelenmesinde değerli bir model sunar.

Hava-Sıvı Arayüz Kültür Sistemi Kullanılarak İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Düzlemsel Saç Taşıyan Cilt Organoidlerinin Üretimi (Video) | JoVE Journal

Hava-Sıvı Arayüz Kültür Sistemi Kullanılarak İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Düzlemsel Saç Taşıyan Cilt Organoidlerinin Üretimi

Daha fazla video keşfet