Fare Arka Diz Altı Amputasyon Modeli ve Hemen Hedeflenmiş Kas Reinnervasyonu

Bir araştırma, sinir yaralanması ve amputasyonla ilişkili ağrıyı ve sinirlerin yeniden yönlendirilmesinin bu ağrıyı nasıl etkileyebileceğini incelemektedir. Amputasyon, standart ağrı değerlendirmelerini kısıtlar. Bu protokol, amputasyon sonrası ağrı davranışlarını ölçmek için modifiye edilmiş ve alternatif testler kullanır.

Başlamak için, sekiz ila 10 haftalık ve 250 ila 300 gram ağırlığında bir Sprague Dawley sıçanı temin edin. Isıtma pedini açın ve steril bir cerrahi alan hazırlayın. Cerrahi işlem için gerekli olan tüm steril alet ve malzemeleri düzenleyin.

Sıçanı %4 indüksiyon ve %1 ila %2 idame dozunda izofluran ile anestezi altına aldıktan sonra, alt sırttan başlayarak arka ekstremitenin tüm uzunluğu boyunca olan alanı tıraş edin. Cerrahi bölgeyi Povidone iyot antiseptik solüsyon ile temizleyin ve ardından alkollü temizleme pedi ile silin. Bu işlemi iki kez daha tekrarlayın.

Kilogram başına bir miligram meloksikamı deri altına enjekte etmek için bir tüberkülin şırıngası kullanın. Diz eklem hattını işaretlemek için bir cetvel kullanın. Ayrıca dizin distalinde, iki santimetre ve üç santimetre mesafeye iki ek işaret koyun.

Dizin 3 cm distalinden çevreleyici bir cilt insizyonu yapmak için neşter kullanın. Cilt, altındaki kaslardan serbestçe geri çekilene kadar künt ve keskin diseksiyon yaparak çevreleyici şekilde ayırın. Doku planlarını koruyarak kemiğe kadar diseksiyon yapmak için aynı undermining (altını boşaltma) işlemini daha derin kas katmanlarında tekrarlayın.

Çevresel insizyonun 1 cm proksimalinde tibia ve fibulayı işaretlemek için bir markör kullanın. İşaretlenen konumdan tibia ve fibulayı kesmek için küçük kemik makası kullanın. Kanamayı kontrol altına almak ve hemostaz sağlamak için koter kullanın.

Kemik ucunu inceleyin ve gerektiğinde keskin kenarları körelteyin veya tıraşlayın. Tibia üzerindeki kas kompartmanlarının anterior kenarlarını yaklaştırmak için 4-O emilebilir örgü sütür kullanın ve bunu eşit aralıklarla atılmış dört ila altı kesikli dikişle sabitleyin. Kemik üzerinde bir kas pedi oluşturmak için anterior ve posterior kas kompartmanlarını hizalayıp birlikte kapatın.

Ağırlık taşıyan stump üzerine yerleştirmekten kaçınarak, cildi lateralden kesikli 4-O emilebilir örgü sütürlerle kapatın. İnsizyon hattı boyunca cilt yapıştırıcısı uygulayın. Femurun yaklaşık beş milimetre posteriorundan, 1.5 ila iki santimetre uzunluğunda longitudinal bir gluteal split insizyon yapın.

Gluteal ve hamstring kaslarını ayırmak ve siyatik siniri trifurkasyonunun proksimalinde açığa çıkarmak için künt diseksiyon uygulayın. Caudal femoralis veya CFM'nin altındaki büyük dal ve bölümleri dahil olmak üzere proksimal motor dalları tanımlayın. CFM'yi pens ile kaldırın ve kesin.

Küt diseksiyon yoluyla semimembranosus ve biceps femoris dallarını nöralize etmek için ince mikrocerrahi Dumont pensleri kullanın. Epinüryumdan kavrayın ve ince eğri yaylı makas kullanarak boylamsal olarak açın. Ardından sinir dallarını ayırın.

Caudofemoralis dalını koruyun ve geri kalan dalları siyatik gövdenin yakınından kesin. Koaptasyonu kolaylaştırmak için motor dalları aşağıya doğru kıvırın. Epinüryumun açılması ve siyatik trifurkasyonun nöralize edilmesi için eğri yaylı makas kullanarak bölmeyi gerçekleştirin.

Sinir dallarını nazikçe ayırmak için ince pensler kullanın. Trifurkasyonun 5 ila 10 mm distalinden ortak peroneal, tibial ve sural olmak üzere üç dalın her birini pensle kavrayın. Gerginlik uygularken, her bir siniri distalden kesin ve segmentin 5 ila 10 mm'lik kısmını eksize edin.

Ortak perineal siniri önce semimembranosus kasına bağlayarak koaptasyonları gerçekleştirmek için 10-0 naylon sütürler kullanın. Sütür başına en az üç düğüm atın. Sinirin aşırı sıkılmasını ve kırılmasını önleyerek gerginliksiz yerleşimi sağlayın ve koaptasyonları keskin açılar oluşturmadan düzenleyin.

Ardından tibial siniri büyük biceps femoris dalına ve sural siniri küçük biceps femoris dalına bağlayın. Hedef kas yeniden sinirlendirmesi yapılmayan amputasyonlar için, siyatik dalları açığa çıkardıktan sonra, ortak peroneal, tibial ve sural sinirleri ligatüre etmek için 5-O ipek sütür ve pens kullanın; ligatürün siniri kıvırdığından ve dört kare düğümle sabitlendiğinden emin olun. Düğümü kullanarak her bir siniri nazikçe proksimale doğru çekin ve ligatürün 1-2 mm distalinden kesin.

Distal sinir segmentinin 10 milimetresini çıkarın ve ardından önceden gösterildiği şekilde amputasyona geçin. İnsizyonu kapattıktan sonra, insizyon hattı boyunca cilt yapıştırıcısı uygulayın. Sıçanı yedi gün boyunca her gün yara bütünlüğü, enfeksiyon belirtileri, ağrı veya stres açısından takip edin ve gerektiğinde IACUC kılavuzlarına uygun şekilde müdahale edin.

Von Frey testi ile ölçülen mekanik geri çekilme eşikleri, başlangıç değerlerine göre anlamlı düzeyde azalmış olup amputasyon sonrası zaman noktaları boyunca düşük kalmaya devam etmiştir. Pin testi, başlangıç değerlerine kıyasla zamanla artan noksiyöz yanıtlar eğilimini göstermiştir. Güdüğün soğuk hipersensitivitesi güçlüydü ve tüm zaman noktaları boyunca başlangıç değerlerine kıyasla sürdü.

Bu protokol, amputasyon bağlamında farklı sinir yönetimi stratejilerinin değerlendirilmesine olanak tanır. Bu protokolü uygularken karşılaşılan en büyük zorluk, genişliği bir milimetreden küçük olan sinirlerin travmaya yol açmadan manipüle edilmesidir. Gelecekteki çalışmalar, modelleri geliştirmek ve fantom uzuv ağrısını incelemek için daha güvenilir yöntemler geliştirmek amacıyla bu çalışmayı genişletebilir.