Name: In Vitro Epitelyal organoid-T hücre ko-kültür sistemi kullanılarak yerleşik bellek CD8 T hücresi farklılaşması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 48 s
Description: Keşfedin CD8 yerleşik bellek T hücresi farklılaşmasını epitel organoid-T hücre ko-kültür sistemi kullanarak. Bu yöntem, kadın üreme sistemindeki immün yanıtları in vitro ortamda araştırmayı mümkün kılar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Rosato, P. C., Beura, L. K., Masopust, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+resident+memory+T+cells+and+viral+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Virol%22%5BJournal%5D)">Tissue resident memory T cells and viral immunity.</a> Curr Opin Virol. 22, 44-50 (2017).</li>
<li>Park, C. O., Kupper, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+emerging+role+of+resident+memory+T+cells+in+protective+immunity+and+inflammatory+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">The emerging role of resident memory T cells in protective immunity and inflammatory disease.</a> Nat Med. 21, 688-697 (2015).</li>
<li>Schenkel, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resident+memory+CD8+T+cells+trigger+protective+innate+and+adaptive+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Resident memory CD8 T cells trigger protective innate and adaptive immune responses.</a> Science. 346 (6205), 98-101 (2014).</li>
<li>Ariotti, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin-resident+memory+CD8+%2B+T+cells+trigger+a+state+of+tissue-wide+pathogen+alert%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Skin-resident memory CD8 + T cells trigger a state of tissue-wide pathogen alert.</a> Science. 346 (6205), 101-105 (2014).</li>
<li>Christo, S. N., Park, S. L., Mueller, S. N., Mackay, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Multifaceted+Role+of+Tissue-Resident+Memory+T+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">The Multifaceted Role of Tissue-Resident Memory T Cells.</a> Annu Rev Immunol. 42 (1), 317-345 (2024).</li>
<li>Gavil, N. V., Cheng, K., Masopust, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resident+memory+T+cells+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Resident memory T cells and cancer.</a> Immunity. 57 (8), 1734-1751 (2024).</li>
<li>Christo, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discrete+tissue+microenvironments+instruct+diversity+in+resident+memory+T+cell+function+and+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Discrete tissue microenvironments instruct diversity in resident memory T cell function and plasticity.</a> Nat Immunol. 22 (9), 1140-1151 (2021).</li>
<li>Pan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+of+tissue-resident+memory+T+cells+requires+exogenous+lipid+uptake+and+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Survival of tissue-resident memory T cells requires exogenous lipid uptake and metabolism.</a> Nature. 543, 252-256 (2017).</li>
<li>Hasan, M. H., Beura, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+interactions+in+resident+memory+T+cell+establishment+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cellular interactions in resident memory T cell establishment and function.</a> Curr Opin Immunol. 74, 68-75 (2022).</li>
<li>Ulibarri, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+organoid+supports+resident+memory+CD8+T+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Epithelial organoid supports resident memory CD8 T cell differentiation.</a> Cell Rep. 43 (8), 114621(2024).</li>
<li>Evrard, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+protein+expression+profiling+resolves+circulating+and+resident+memory+T+cell+diversity+across+tissues+and+infection+contexts%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Single-cell protein expression profiling resolves circulating and resident memory T cell diversity across tissues and infection contexts.</a> Immunity. 56 (7), 1664-1680.e9 (2023).</li>
<li>Borges da Silva, H., Wang, H., Qian, L. J., Hogquist, K. A., Jameson, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ARTC2.2%2FP2RX7+Signaling+during+Cell+Isolation+Distorts+Function+and+Quantification+of+Tissue-Resident+CD8%2B+T+Cell+and+Invariant+NKT+Subsets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">ARTC2.2/P2RX7 Signaling during Cell Isolation Distorts Function and Quantification of Tissue-Resident CD8+ T Cell and Invariant NKT Subsets.</a> J Immunol. 202 (7), 2153-2163 (2019).</li>
<li>Künzli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-lived+T+follicular+helper+cells+retain+plasticity+and+help+sustain+humoral+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Immunol%22%5BJournal%5D)">Long-lived T follicular helper cells retain plasticity and help sustain humoral immunity.</a> Sci Immunol. 5 (45), eaay5552(2020).</li>
<li>Kang, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+induced+alveolar+assembloids+with+functional+alveolar-like+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Generation of induced alveolar assembloids with functional alveolar-like macrophages.</a> Nat Commun. 16, 3346(2025).</li>
<li>Lin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+gastrointestinal+assembloids+to+study+the+interplay+between+epithelial+crypts+and+their+mesenchymal+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Establishment of gastrointestinal assembloids to study the interplay between epithelial crypts and their mesenchymal niche.</a> Nat Commun. 14, 3025(2023).</li>
<li>Park, S. E., Georgescu, A., Huh, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organoids-on-a-chip%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Organoids-on-a-chip.</a> Science. 364 (6444), 960-965 (2019).</li>
<li>Quintard, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microfluidic+platform+integrating+functional+vascularized+organoids-on-chip%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A microfluidic platform integrating functional vascularized organoids-on-chip.</a> Nat Commun. 15, 1452(2024).</li>
<li>Vincenti, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-resident+memory+CD8%2B+T+cells+cooperate+with+CD4%2B+T+cells+to+drive+compartmentalized+immunopathology+in+the+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Tissue-resident memory CD8+ T cells cooperate with CD4+ T cells to drive compartmentalized immunopathology in the CNS.</a> Sci Transl Med. 14 (640), eabl6058(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>%16 paraformaldehit sulu çözeltisi</td><td>Elektron Mikroskopi Bilimleri</td><td>15710-S</td><td></td></tr><tr><td>24-Hole polistiren işlememiş çoklu kuyu tissuce kültür plakaları</td><td>VWR International</td><td>10861-558</td><td></td></tr><tr><td>2-Merkaptoetanol</td><td>Gibco</td><td>21985023</td><td></td></tr><tr><td>3 mL Steril Şırıngalar</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-955-457</td><td></td></tr><tr><td>5 mL,&nbsp; Snap Cap,&nbsp; Steril, yuvarlak tabanlı polistiren test tüpleri</td><td>Falcon</td><td>352058</td><td></td></tr><tr><td>60 mm Petri Kabları</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875713A&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>70 &mu; m Steril Hücre Süzgeçleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-548</td><td></td></tr><tr><td>96 kuyuluklu İşlenmemiş Polistiren Yuvarlak Tabanlı Mikroplakalar</td><td>Greiner Bio-One</td><td>650101</td><td></td></tr><tr><td>96 Kuyu polistiren işlememiş çoklu kuyu doku kültür plakaları</td><td>VWR International</td><td>10861-562</td><td></td></tr><tr><td>Albümin sığır/fraksiyon V</td><td>Termobilimsel Kimyasallar</td><td>J6465518</td><td></td></tr><tr><td>Amonyum klorür</td><td>Fisher Scientific</td><td>A661-500</td><td></td></tr><tr><td>Amfoterisin B&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9528-100MG</td><td></td></tr><tr><td>B-27 Eki</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>ioTek Cytation 5 Hücre Görüntüleme Çok Modlu Okuyucu</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12 1:1 Orta Ölçüm</td><td>Cytiva</td><td>SH30271. FS</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Fosfatla Tamponlu Tuz Çözeltisi 1x</td><td>Corning</td><td>21031CV</td><td></td></tr><tr><td>Etilenidiamintetraasetik Asit (0,5 M Çözeltisi/pH 8,0)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2482-500</td><td></td></tr><tr><td>Ekstra İnce Mikro Disseksiya Makasları</td><td>Roboz Cerrahi Aletler Şirketi.</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu - Kömür/Dekstran Tedavisi</td><td>R& D Sistemleri</td><td>S11650</td><td></td></tr><tr><td>Flowjo v10 yazılımı</td><td>Becton, Dickinson ve Şirketi</td><td>FlowJo (RRID:SCR_008520)</td><td></td></tr><tr><td>Graefe pensepsi</td><td>Roboz Cerrahi Aletler Şirketi.</td><td>RS-5135</td><td></td></tr><tr><td>HEPES Çözümü</td><td>Cytiva</td><td>SH30237.01</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin (200 mM)</td><td>Gibco</td><td>A2916801</td><td></td></tr><tr><td>Mıknatıs 5mL</td><td>Biolegend</td><td>480019</td><td></td></tr><tr><td>Fare CD8 Ne ve SİL; ve T Hücre İzolasyon Kiti</td><td>Biolegend</td><td>480044</td><td></td></tr><tr><td>Fare EGF Rekombinant Proteini</td><td>Gibco</td><td>315091MG</td><td></td></tr><tr><td>Temel Olmayan Amino Asit Çözeltisi (100x)</td><td>Gibco</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>Penisillin-Streptomisin çözeltisi</td><td>Cytiva</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum Bikarbonat</td><td>MP Biyomedikal</td><td>0215255780</td><td></td></tr><tr><td>Arındırılmış anti-fare CD3&epsilon; Antikor</td><td>Biolegend</td><td>100360</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant Fare B7.1 (CD80)-Fc Chimera (taşıyıcısız)</td><td>Biolegend</td><td>555406</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant Fare IL-12 (s70) (taşıyıcısız)</td><td>Biolegend</td><td>577004</td><td></td></tr><tr><td>Rekombinant Fare IL-2 (taşıyıcısız)</td><td>Biolegend</td><td>575406</td><td></td></tr><tr><td>Azaltılmış Büyüme Faktörü Bazal Membran Ekstraktı</td><td>R& D Sistemleri</td><td>BME001-10</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 Medya</td><td>Cytiva</td><td>SH30027.LS</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Azid</td><td>Fisher Scientific</td><td>S227I-25</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Piruvat (100 mM)</td><td>Gibco</td><td>11360070</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin %0,25 proteaz ve domuz tripsin</td><td>Cytiva</td><td>SH30042.02</td><td></td></tr><tr><td>Yaşam Boyası (Kırmızı 780)</td><td>Cytek Biosciences</td><td>13-0865-T100</td><td></td></tr></tbody></table>

in vitro epitelyal organoid-t hücre ko-kültür sistemi kullanılarak yerleşik bellek cd8 t hücresi farklılaşması

In Vitro Resident Memory CD8 T Cell Differentiation Using Epithelial Organoid-T Cell Co-culture System

In Vitro Epitelyal organoid-T hücre ko-kültür sistemi kullanılarak yerleşik bellek CD8 T hücresi farklılaşması

Barrier mucosal tissues play an important role in the differentiation and function of resident T cells. Among the diverse cell populations within these ...

in-vitro-resident-memory-cd8-t-cell-differentiation-using-epithelial

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu protokol ana Lgr5-pozitif yer alan organoid kültür ve Retroviral transdüksiyonun müteakip bir uygulama açıklanmaktadır. Bu in vitro olarak Organotipik bir roman içinde gerçekleştirilebilir fonksiyonel çalışmalar teslim transjenin uyarımlı Cre aşırı ekspresyonunu veya demonte sağlar ve sağlar   model sistem.

İlköğretim Bağırsak organoid Kültür Retrovirütik Enfeksiyon Bir Video Protokolü

Fare embriyonik kök hücreleri, OP9-DL1 ko-kültür sistemi kullanılarak in vitro olarak T hücrelerine farklılaştırılabilir. Bu prosedürde başarı, reaktif/hücre bakımına ve tekniğe duyarlı temel adımlara dikkat edilmesini gerektirir. Burada bu kritik parametreleri tartışıyor ve bu teknolojinin benimsenmesini teşvik etmek için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz.

T hücrelerinin türetilmesi İn Vitro Fare Embriyonik Kök Hücreleri

İnce bağırsak kriptlerinden insan enteroidlerini ve hem cerrahi dokudan hem de biyopsilerden toplanan kolon kriptlerinden kolonoidleri oluşturmak için bir yöntem tarif ediyoruz. Bu metodolojik makalede, insan enteroidlerinin ve kolonoidlerinin başarılı bir şekilde büyümesi ve sürdürülmesi için gerekli olan kültür modalitelerini sunuyoruz.

Tüm Doku ve Biyopsi İnsan Epitelyal Enteroids ve Colonoids kurulması

Medüller timik epitel hücrelerinin in vitro olarak incelenmesi, mevcut 2D kültür sistemleri in vivo senaryoyu taklit etmediği için büyük ölçüde başarısız olmuştur. Burada tarif edilen 3D kültür sistemi - modifiye edilmiş bir cilt organotipik kültür modeli - mTEC proliferasyonunu, farklılaşmasını ve rastgele gen ekspresyonunun sürdürülmesini özetlemede üstün olduğu kanıtlanmıştır.

Medüller Timik epitel hücre proliferasyonu, farklılaşması ve Promiscuous Gen İfade Destekleme 3D Organotipik Co-kültür Modeli

Bu makalede, üç boyutlu (3D) timik kültür sistemi tarafından tümör antijene özgü indüklenen pluripotent kök hücre kaynaklı timik göçmenler (iTE) oluşturmak için yeni bir yöntem açıklanmaktadır. iTE, proliferasyon, hafıza oluşumu ve tümör baskılanması kapasitesine sahip naif T hücreleri ile yakından ilişkili T hücrelerinin homojen bir alt kümesidir.

Üç boyutlu Timik Kültür Sistemi Murine indüklenen Pluripotent Kök Hücre kaynaklı Tümör Antijen-spesifik Timik Emigrants oluşturmak için

Çok adımlı kültür sistemleri kullanarak, biz in vitro bir B hücre plazma hücre farklılaşması modeli için rapor.

Uzun ömürlü plazma hücreleri insan Normal bellek B hücrelerine vitro farklılaştırma modelinde

Burada, bağırsak bariyer fonksiyonunu, geçirgenliğini ve taşınmasını incelemek için insan organoid türevi bağırsak epitel monokatmanlarının hazırlanmasını açıklıyoruz. Organoidler dış uyaranlara karşı orijinal epitel dokusu yanıtını temsil ettiğinden, bu modeller hücre hatlarının genişletilebilirliğinin avantajlarını ve birincil dokunun alaka düzeyini ve karmaşıklığını birleştirir.

Organoid Kaynaklı Epitel Tek Katmanlı: Bağırsak Bariyer Fonksiyonu için Klinik Olarak İlgili Bir In Vitro Model

Bu protokol, murin ince bağırsak organoidlerinin oluşturulması, tip-1 doğuştan gelen lenfoid hücrelerin murin ince bağırsak lamina propriasından izole edilmesi ve bağırsak epitel hücreleri ile tip-1 doğuştan gelen lenfoid hücreler arasındaki çift yönlü etkileşimleri incelemek için her iki hücre tipi arasında 3 boyutlu (3D) ortak kültürlerin oluşturulması için ayrıntılı talimatlar sunmaktadır.

Murin İnce Bağırsak Epitel Organoidlerinin Doğuştan Lenfoid Hücrelerle Ko-Kültürü

Protokol, etkileşimlerini ve terapötik potansiyellerini incelemek için tümör infiltre eden lenfositler (TIL'ler) ile birlikte kültürlenmiş, hasta kaynaklı bir kolorektal kanser (CRC) organoid modeli oluşturmak için bir yöntemi açıklar. Bu model, tümör mikroçevresindeki immün yanıtları araştırmak ve kişiselleştirilmiş KRK tedavisi için TIL bazlı tedavinin etkinliğini tahmin etmek için klinik öncesi bir platform sağlar.

Hasta Kaynaklı Kolorektal Tümör Organoidleri ve Tümör İnfiltre Eden Lenfositlerden (TIL'ler) Oluşan Bir Ko-Kültür Sisteminin Kurulması

Bu protokol, düzenleyici T hücrelerinin efektör T hücre çoğalması ve farklılaşması üzerindeki etkilerini araştırmak için in vitro bir ortak kültür stratejisi sunar.

In Vitro Düzenleyici T Hücrelerinin Fonksiyonel Analizi: Proliferasyon ve Farklılaşmaya Odaklanma

Keşfedin CD8 yerleşik bellek T hücresi farklılaşmasını epitel organoid-T hücre ko-kültür sistemi kullanarak. Bu yöntem, kadın üreme sistemindeki immün yanıtları in vitro ortamda araştırmayı mümkün kılar.

In Vitro Epitelyal organoid-T hücre ko-kültür sistemi kullanılarak yerleşik bellek CD8 T hücresi farklılaşması

Daha fazla video keşfet