Tekrarlanabilir ve minimal invaziv fare modelleri için Rafine Aerosol Tabanlı intratrakeal bleomicin teslimat yöntemi

Akciğer fibrozunu indüklemek ve preklinik ilaç değerlendirmesini iyileştirmek için tekrarlanabilir, minimal invaziv, aerosol bazlı bir ilaç teslimat modeli geliştirmeyi hedefliyoruz. Modelimiz, cerrahi travmayı azaltır ve deneyler arasında tekrarlanabilirliği artırırken, tutarlı ve güvenilir ilaç teslimatını sağlar. Bu modeli, pulmoner fibroz ve klinik akciğer yaralanması için benzersiz tedavimizi test etmek için uygulamayı planlıyoruz.

Başlamak için, steril bir mililitrelik bir şırınga kullanarak, üç mililitre steril %0,9 sodyum klorür alın, ardından 15 birim bleomisin hidroklorür içeren bir şişeye sodyum klorür enjekte edilir. Şişeyi nazikçe çevirerek bleomisin tozu tamamen çözünene kadar çevirin; böylece mililitrede beş birimlik stok çözeltisi elde edin. Stok çözeltiyi steril, 1,5 mililitrelik mikro santrifüj tüplerine dönüştürün.

Daha sonra steril salinle seyreltilerek mililitrede 3,75 ve mililitrede 2,5 birim çalışma çözeltileri hazırlanır. Aerosol dağıtım cihazını hazırlayın; nebulizasyon iğnesi, nebulizasyon şırıngası ve doz direğinin hepsinin hazır olduğundan emin olun. Aerosol dağıtım şırıngasını steril salin içine batırın.

Sıvıyı yavaşça aspire edin, sekiz saniye duraklayın, ardından sıvıyı hızla dışarı atın. Son dışarıdan sonra şırıngayı steril salinle doldurun. Aerosol iğnesini takın ve birleşimin salin ile doldurulduğundan emin olun.

Sonra tam yığılmış iğneyi steril salin içine batırın. Aerosol iğnesini bleomisin çalışan çözeltiyle astarlamak için, her döngü arasında sekiz saniyelik duraklamalarla üç kez aspirasyon ve dışarı at. Bleomisin etkili çözeltiyi şırıngaya aspire edin.

Toplam hacmi kalibre etmek için 50 mikrolitrelik sütunun üzerine 25 mikrolitrelik bir dozlama sütunu yerleştirin. Fazla çözeltiyi dışarı at. Sonra anestezi altındaki fareyi entübasyon platformuna yerleştirin.

Üst kesici dişleri tel halkaya bağlayın ve uzuvları bantlayarak fareyi konumunda sabitleyin. Kıvrımlı forsepslerle dili nazikçe çekin. Glottisi görselleştirmek ve açığa çıkarmak için küçük bir hayvan laringoskobu takın.

Sonra aerosol iğnesini açık glottis'ten dikey olarak geçirin ve bleomisin aerosolünü trakeyaya hızla iletebilirsiniz. Bundan sonra, vücut sıcaklığını korumak için fareyi ısıtıcı pedin üzerine koyun. Anesteziden tamamen iyileşene kadar fareyi sürekli gözlemleyin.

Parmak sıkıştırma işlemi yapın, refleksleri kontrol edin ve farenin hayatta olup olmadığını doğrulayın. Hematoksilin ve eosin boyamaları, kilogram başına beş birim bleomisin grubunda hafif alveolar duvar kalınlaşması ve lokal fibroz gösterdi. Kilogram başına 7,5 birim grup ise geniş alveolar çökme ve şiddetli fibrotik lezyonlar görüldü.

Modifiye Ashcroft Skoru nicelendirmesi, bleomisin ile tedavi edilen farelerde fizozun şiddetinde salin kontrollerine kıyasla doza bağlı bir artış göstermiştir. Masson'ın trikrom boyaması, kilogram başına beş birim grupta artan kolajen birikimi ve 7,5 birim kilogram grubunda yaygın interstisyel fibroz gösterdi. Kolajen pozitif alanların nicelendirilmesi, bleomisin tedavisi sonrası kolajen birikiminde doz bağımlı anlamlı bir artış olduğunu doğruladı.

İmmünohistokimyasal boyama, her iki bleomisin grubunun akciğerlerinde Col1A1 proteininin artan ekspresyonunu gösterdi ve 7,5 birim kilogram başına grupta daha güçlü ve daha geniş boyama gözlemlendi. Hidroksiprolin içeriği, bleomisin ile tedavi edilen her iki grupta da anlamlı şekilde daha yüksekti ve bu da akciğer dokusunda artan kolajen birikimini doğruladı. Bleomisin ile tedavi edilen gruplarda statik akciğer uyumluluğu, doza bağlı olarak anlamlı şekilde azaldı.

Spiratör kapasite, sadece 7,5 birim bleomisin grubunda, salin ile karşılaştırıldığında anlamlı derecede düşüktü. Solunum sistemi elastinleri, kilogram başına 7,5 birim grupta salinle karşılaştırıldığında anlamlı şekilde arttı. Solunum sistemi uyumu yalnızca kilogram başına 7,5 birim grupta anlamlı şekilde azaldı.