Name: Memeli Hücrelerinde Nicel Görüntüleme Kullanılarak Plazma Zarı ve Hücre İçi Nikotinik Asetilkolin Reseptörlerinin Lokalizasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-19T14:05:00.000+00:00
Duration: 9 min 6 s
Description: Keşfedin, memeli N2a hücrelerinde nikotinik asetilkolin reseptörlerinin plazma zarı ve hücre içi lokalizasyonunu nicel görüntüleme ile nasıl ölçebilirsiniz. Bu yöntem, reseptör taşınımı ve ilaç geliştirme çalışmalarına katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>%0,25 Tripsin-EDTA (1X)&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td>Hücre ayrılma reaktifi</td></tr><tr><td>Alfa-Bungarotoksin Alexa Fluor 647</td><td>Invitrogen</td><td>B35450</td><td>Alfa-Bungarotoksin konjugatı</td></tr><tr><td>BSL-seviye 1 Biyogüvenlik Kabinesi&nbsp;</td><td>Nuaire</td><td>NU-425-400</td><td>Steril hücre kültürü çalışma alanı</td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür</td><td>Aventor/VWR</td><td>BDH9224</td><td>Tampon bileşeni</td></tr><tr><td>D-(+)-Glikoz</td><td>MilliPore Sigma&nbsp;</td><td>G8270</td><td>Tampon bileşeni</td></tr><tr><td>EMEM ile L-glutamin</td><td>ATCC</td><td>30-2003</td><td>Hücre ortamı</td></tr><tr><td>Endotoksin içermeyen DNA</td><td>Zymo kitleriyle kendi evimizde üretildi</td><td>Geçerli değil</td><td>Hücre geçici transfeksiyonları için kullanılacak nAChR DNA'ları</td></tr><tr><td>Endotoksin içermeyen mikrosantrifüj tüpleri, 0,5 mL&nbsp;</td><td>Aventor/VWR</td><td>89000-010</td><td>DNA ve transfeksiyon hazırlığı</td></tr><tr><td>Endotoksin içermeyen mikrosantrifüj tüpleri, 1.5 mL&nbsp;</td><td>Aventor/VWR</td><td>20170-038</td><td>DNA ve transfeksiyon hazırlığı</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu</td><td>Aventor/VWR</td><td>97068-085</td><td>Serum takviyesi</td></tr><tr><td>Fluoview FV10i</td><td>Olympus</td><td>FV10i</td><td>Konfokal Mikroskop</td></tr><tr><td>Cam Tabanlı MatTek Tabaklar</td><td>MatTek</td><td>P35GC-0-10-C</td><td>İmaj tabanlar</td></tr><tr><td>GraphPad Prism v. 10</td><td>GraphPad Prizması</td><td>https://www.graphpad.com/features</td><td>Veri analiz yazılımı</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>MilliPore Sigma&nbsp;</td><td>H3375</td><td>Tampon bileşeni</td></tr><tr><td>Lipofektamin 2000</td><td>Invitrogen</td><td>11668019</td><td>Transfeksiyon reaktifi</td></tr><tr><td>Magnezyum klorür heksahidrat</td><td>Termobilimsel</td><td>413410025</td><td>Tampon bileşeni</td></tr><tr><td>MES hidratı</td><td>MilliPore Sigma&nbsp;</td><td>M5287</td><td>Tampon bileşeni</td></tr><tr><td>mTagBFP2-pBAD</td><td>AddGene&nbsp;</td><td>54572</td><td>Hücre geçici transfeksiyonu için kullanılacak kontrol DNA'sı&nbsp;</td></tr><tr><td>Nöro 2 a (N2a) hücreleri</td><td>Amerikan Tip Kültürü Koleksiyonu</td><td>CCL-131</td><td>DNA transfeksiyonları ve nAChR ifadesi için kullanılan hücreler</td></tr><tr><td>Opti-MEM</td><td>Gibco</td><td>31985-070</td><td>İngengenç serum ortamı</td></tr><tr><td>Penisilin/Streptomisin</td><td>Aventor/VWR</td><td>K952-100mL</td><td>Antibiyotik</td></tr><tr><td>Peristalsis pompası</td><td>Gilson</td><td>MiniPuls3</td><td>Tampon görüntüler&nbsp;</td></tr><tr><td>Fosfatla tamponlanmış tuzlu su</td><td>Kaliteli Biyolojik</td><td>119-069-131</td><td>Salin tamponu</td></tr><tr><td>Pipet Yardımı</td><td>Drummond&nbsp;</td><td>140084</td><td>Hassas sıvı transferi</td></tr><tr><td>Pipet uçları (steril ve endotoksinsiz, 1000uL)</td><td>Rainin</td><td>30389216</td><td>Hassas sıvı transferi</td></tr><tr><td>Pipet uçları (steril ve endotoksinsiz, 20uL)</td><td>Rainin</td><td>30389229</td><td>Hassas sıvı transferi</td></tr><tr><td>Pipet uçları (steril ve endotoksinsiz, 250uL)</td><td>Rainin</td><td>30389246</td><td>Hassas sıvı transferi</td></tr><tr><td>Pipetler, P10</td><td>Rainin&nbsp;</td><td>L-10XLS</td><td>Hassas sıvı transferi</td></tr><tr><td>Pipetler, P100</td><td>Rainin&nbsp;</td><td>L-100XLS</td><td>Hassas sıvı transferi</td></tr><tr><td>Pipetler, P1000</td><td>Rainin&nbsp;</td><td>L-1000XLS</td><td>Hassas sıvı transferi</td></tr><tr><td>Potasyum klorür</td><td>MilliPore Sigma&nbsp;</td><td>P3911</td><td>Tampon bileşeni</td></tr><tr><td>Serolojik pipetler (steril ve endotoksinsiz, 10 ML)</td><td>Aventor/VWR</td><td>89130-898</td><td>Hassas sıvı transferi</td></tr><tr><td>Serolojik pipetler (steril ve endotoksin içermemiş, 25 mL)</td><td>Aventor/VWR</td><td>89130-900</td><td>Hassas sıvı transferi</td></tr><tr><td>Serolojik pipetler (steril ve endotoksinsiz, 5 mL)</td><td>Aventor/VWR</td><td>76201-710</td><td>Hassas sıvı transferi</td></tr><tr><td>Serolojik pipetler (steril ve endotoksinsiz, 50 mL)</td><td>Aventor/VWR</td><td>75816-088</td><td>Hassas sıvı transferi</td></tr><tr><td>Sodyum klorür</td><td>Aventor/VWR</td><td>BDH9286</td><td>Tampon bileşeni</td></tr><tr><td>Doku Kültürü Matarası</td><td>Falcon</td><td>353109</td><td>Yetiştirme tabakları</td></tr><tr><td>ZymoPure II plazmid Maxiprep Kiti</td><td>ZYMO ARAŞTIRMASI</td><td>D4203-A + D4203-B</td><td>Endotoksin içermeyen DNA üretimi</td></tr><tr><td>&alpha; 4-SEP&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific GeneArt Gen Sentezi Hizmetleri&nbsp; &nbsp;</td><td>https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cloning/c-misc/geneart.html</td><td>Özel gen sentezi hizmetleri</td></tr><tr><td>&alpha; 7-pHuji</td><td>Twist Bioscience</td><td>https://www.twistbioscience.com/</td><td>Özel gen sentezi hizmetleri</td></tr><tr><td>&beta; 2-pHuji</td><td>ThermoFisher Scientific GeneArt Gen Sentezi Hizmetleri&nbsp; &nbsp;</td><td>https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cloning/c-misc/geneart.html</td><td>Özel gen sentezi hizmetleri</td></tr></tbody></table>

memeli hücrelerinde nicel görüntüleme kullanılarak plazma zarı ve hücre İçi nikotinik asetilkolin reseptörlerinin lokalizasyonu

Localization of Plasma Membrane and Intracellular Neuronal Nicotinic Acetylcholine Receptors Using Quantitative Imaging in Mammalian Cells

Memeli Hücrelerinde Nicel Görüntüleme Kullanılarak Plazma Zarı ve Hücre İçi Nikotinik Asetilkolin Reseptörlerinin Lokalizasyonu

Quantification of neuronal nicotinic acetylcholine receptors (nAChRs) expressed on the plasma membrane of mammalian cells is important for the development ...

localization-plasma-membrane-intracellular-neuronal-nicotinic

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Biz daha iyi bir yaklaşım knock-in ve spektral kullanarak reseptör floresan protein etiketleme dahil yaklaşımların bir arada kullanılarak nikotin bağımlılığı mekanizmalarını anlamak için MSS nöron spesifik alt tiplerinin Subselüler bölgeler içinde nikotinik asetilkolin reseptör değişiklikleri nicel yeni bir teknik geliştirdik konfokal görüntüleme.

Kronik Nikotin İdaresi fareler Knock-in içinde floresan etiketli Nikotinik Reseptör Spektral Konfokal Görüntüleme

Etiketleme tarafından superecliptic pHluorin membran reseptörlerinin ekstraselüler domain ve görüntüleme kültürlü fare nöronları bu füzyon reseptörleri, biz doğrudan plazma membran reseptörlerinin bireysel veziküler ekleme olayları oluşturulabiliyor. Bu teknik, plazma membran reseptör ekleme düzenleyen moleküler mekanizmalarının aydınlatılmasına vesile olacaktır.

Görüntüleme İlköğretim Kültürlü Fare Nöronlar içinde Plazma Membran Reseptör Yerleştirme pHluorin etiketli

Kaynak: Zhang, J., et al. Retinal Şerit Sinapslarında Membran Reseptörlerinin Yüksek Çözünürlüklü Kantitatif İmmünogold Analizi. J. Vis. Uzm. (2016)Bu video, retinal sinapslarda nörotransmitter reseptör lokalizasyonunu görselleştirmek için bir elektron mikroskobu tekniğini göstermektedir. Retina bölümleri, membrana bağlı nörotransmitter reseptörleri sergileyen ve kolera toksin alt birimi B (CTB) ile işaretlenmiş retinal ganglion hücreleri içerir. İşaretleyiciler altın nanopartikül konjuge...

Retinal Sinapslarda Nörotransmitter Reseptörlerinin Yüksek Çözünürlüklü Görüntülenmesi

Bu yazıda, akut izole beyin dilimleri arasında nöronlarda ligand kapılı iyon kanal fonksiyonunu incelemek için kullanışlı bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntem, standart yama kelepçe teknikler kullanılarak kaydedilmiş nöronlar için ilaçların lokal uygulama için bir ilacın dolu bir mikropipet kullanımını içerir.

Fare Beyin dilimleri içinde Nikotinik Asetilkolin Reseptör Fonksiyon Okumak Uyuşturucu Yerel Uygulama

Nikotinik asetilkolin reseptörlerinin (nAChR'ler) aracılı sinaptik iletimin presinaptik mekanizmalarını analiz etmek için doğrudan canlı görüntülemeye izin veren in vitro ventral hipokampal - accumbens devresinin gen-kimerik bir preparatını geliştirdik. Bu hazırlık aynı zamanda sinaptik plastisitenin sinaptik öncesi ve sonrası mekanizmalarını incelemek için bilgilendirici bir yaklaşım sağlar.

Nikotin Kaynaklı Kalsiyum Sinyali ve ventral Hipokampal Aksonlar boyunca Nörotransmitter Release Canlı Görüntüleme

Gömme sonrası immünogold yöntemi, spesifik moleküllerin hücre altı lokalizasyonunun yüksek çözünürlüklü analizlerini sağlamanın en etkili yollarından biridir. Burada, retinal şerit sinapslarında glutamat reseptörlerini kantitatif olarak analiz etmek için bir protokol açıklıyoruz.

Retina Şerit Sinapslar at Membran Reseptör Yüksek Çözünürlüklü Sayısal immunogold Analizi

Işık mikroskobu teknikleri, biyokimyasal tahlillerle birleştiğinde, netrin bağımlı akson dallanmasında SNARE aracılı ekzositozun katılımını aydınlatmaktadır. Bu tekniklerin kombinasyonu, akson dallanmasını ve hücre şekli değişikliğini kontrol eden moleküler mekanizmaların tanımlanmasına izin verir.

Kombine Metodolojileri kullanan Akson Dallanman ve Nöronal Morfogenez sırasında Plazma Membran Teslimat Rolü tanımlayın

pH'ya duyarlı bir florofor ile bir membran proteinin hücre dışı alanını Etiketleme, superecliptic pHluorin (SEP), hücre içi lokalizasyonu, sentezleme ve trafik saptanmasına olanak sağlamaktadır. Görüntüleme toplam iç yansıma floresan mikroskobu (TIRFM) proteinleri Eylül-etiketli periferal ER ve plazma membranı protein seviyelerinin ölçümü sağlar.

pHluorin etiketli Reseptör kullanarak Subselüler Yerelleşme ve Ticareti Monitör

Bu makalede nikotin uncaging tarafından fare Beyin dilimleri nikotinik asetilkolin reseptörü (nAChRs) çalışmak için bir yöntem sunar. Eşzamanlı yama kelepçe kayıt ve mikroskobu tarama 2-foton lazer ile birleştiğinde nikotin uncaging nikotinik reseptör işlevi kolinerjik Nörobiyoloji daha derin bir anlayış sağlayan hücresel morfoloji ile bağlanır.

Fare beyin dilim Photoactivatable nikotin lazer Flash Photolysis üzerinden nikotinik asetilkolin reseptör işlevinde sondalama

Burada, bir sinaptik protein ayirt boyama kullanarak işaret protein, confocal mikroskobu ve bilgisayar tabanlı analiz göre dağılımını belirlemek için nicel bir yaklaşım açıklar.

Türdeş olmayan dağıtım ayirt kullanarak fare beynindeki bir sinaptik protein miktarının

Mevcut yöntemler, kolayca bulunabilen genetik olarak kodlanmış kalsiyum göstergelerini kullanarak Caenorhabditis elegans'ta in vivo olarak yüksek çözünürlüklü, sub-kompartmanlı kalsiyum görüntüleme için orantılı olmayan bir yaklaşımı tanımlamaktadır.

Nöronal Kalsiyum Kullanımının In Vivo Subsellüler Görüntülemesi

Keşfedin, memeli N2a hücrelerinde nikotinik asetilkolin reseptörlerinin plazma zarı ve hücre içi lokalizasyonunu nicel görüntüleme ile nasıl ölçebilirsiniz. Bu yöntem, reseptör taşınımı ve ilaç geliştirme çalışmalarına katkı sağlar.

Memeli Hücrelerinde Nicel Görüntüleme Kullanılarak Plazma Zarı ve Hücre İçi Nikotinik Asetilkolin Reseptörlerinin Lokalizasyonu

Daha fazla video keşfet