Name: Konak-Patojen Etkileşimlerini İncelemek İçin Fare Prostat Organoid-Tabanlı Modelin Oluşturulması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-27T14:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: Keşfedin fare prostat organoidlerinden türetilmiş iki boyutlu kültür modeliyle konak-patojen etkileşimlerini. Bu yöntem, epitel hücre çeşitliliğini koruyarak UPEC enfeksiyon dinamiklerini inceleme olanağı sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>48 kuyu plakası</td><td>Sarstedt</td><td>83.3923</td><td>Alt şekli: düz</td></tr><tr><td>5&alfa;-Androstan-17&beta;-ol-3-bir dihidrotestosteron</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8380</td><td>DHT olarak adlandırıldı. Stok çözeltisi 10&mu; M %100 etanol içinde</td></tr><tr><td>Her kuyu başına 40 elektrot içeren 8 kuyruklu PET sürgü;</td><td>Uygulamalı Biyofizik</td><td>8W10E+</td><td>TEER ölçümleri için kullanılan slaytlar</td></tr><tr><td>96 kuyulu plaka</td><td>Sarstedt</td><td>82.1583</td><td>Alt şekli: konik</td></tr><tr><td>Dulbecco'yu ilerlet' s modifiye edilmiş Eagle orta/F12&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12634028</td><td>10 mmol L&minus ile takviye edildiğinde adDMEM/F12+/+ olarak adlandırıldı; 1 HEPES ve 1 kez GlutaMAX</td></tr><tr><td>Ampicilin</td><td>Roth</td><td>K029.2&nbsp;</td><td>Konsantrasyon stoku 100 mg/mL</td></tr><tr><td>Anti-CD24a antikor</td><td>Proteintech</td><td>10600-1-AP</td><td>Birincil antikor; 1x PBS 1%BSA içinde 1:100 seyreltme</td></tr><tr><td>Anti-Sitokeratin 5 Alexa Fluor 647 antikor&nbsp;</td><td>Abcam&nbsp;</td><td>ab193895</td><td>Birincil antikor; 1x PBS 1%BSA içinde 1:100 seyreltme</td></tr><tr><td>anti-Tavşan IgG Alexa Fluor 488&nbsp; Antikor</td><td>Invitrogen</td><td>A21441</td><td>İkincil antikor; 1x PBS 1%BSA içinde 1:500 seyreltme</td></tr><tr><td>Anti-ZO-1 Poliklonal antikor</td><td>Proteintech</td><td>21773-1-AP</td><td>Birincil antikor; 1x PBS 1%BS'de 1:750 seyreltme</td></tr><tr><td>B27, 50x</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>Sığır Serumalbumini (BSA) Fraktion V, Yeni Zelanda Kökeni</td><td>Roth</td><td>8076.3</td><td>1x PBS'de %1 oranında kullanılan bloklama tamponunun bileşeni</td></tr><tr><td>odalı &mikro;-Slide 8 Kuyu</td><td>İbidi</td><td>80806</td><td>Yüzey modifikasyonu: ibiTreat</td></tr><tr><td>Konik tüp (15 mL)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T1943</td><td>Düz taban küçük peletler için daha iyidir.&nbsp;</td></tr><tr><td>Disodiyum etilen diamintetra-asetat 2H2O (EDTA)</td><td>Roth&nbsp;</td><td>8043.2</td><td>Ev yapımı: 400 mL H2O'da 93.0 g, pH 8.0'a ayarlayın, sadece H2O ile 500 mL'ye kadar hacim; 0,5 M EDTA; Akış sitometre tamponunun bileşeni</td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Dengeli Tuz Çözeltisi (DPBS)</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td>PBS</td></tr><tr><td>ECHO Döner Mikroskobu&nbsp;</td><td>EKO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ECIS&nbsp; Z-Theta -&nbsp; Empedans tabanlı hücre analiz sistemi</td><td>Uygulamalı Biyofizik</td><td>ECIS&nbsp; Z-Theta</td><td>Sistem şunları içerir: 16 ve/veya 96 kuyulu istasyon; harici kontrol modülü; Dizüstü bilgisayar; ECIS kontrol, edinim ve görüntüleme yazılımı; otomatik hücre göçü ve elektroporasyon için yükseltilmiş alan modülü;</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS) Superior</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S0615</td><td>Akış sitometre tamponunun bileşeni; 293T Hücre Hattı kültür ortamının bileşeni; kültür ortamının HEK293T hücre hattı bileşeni</td></tr><tr><td>Flaş Falloidin Kırmızı 594</td><td>Biolegend</td><td>424203</td><td>1 PBS 1%BS'de 1:250 seyreltme</td></tr><tr><td>Akış sitometre tamponu</td><td></td><td></td><td>1x PBS, %10 FBS, 5 mM EDTA</td></tr><tr><td>Gentamicinin&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G1272</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050-038</td><td>adDMEM/F12+/+&nbsp'nin bileşeni olan L-alanil-L-glutamin dipeptidi;</td></tr><tr><td>Harvard Biochrom Ultrospec 10 Hücre Yoğunluk Ölçer</td><td>Fisher Scientific</td><td>10704417</td><td></td></tr><tr><td>HCS CellMask Koyu Kırmızı leke</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>H32721</td><td>1x PBS %1BS'de 1:1.000 seyreltme</td></tr><tr><td>HEK293T hücre hattı fare Noggin-Fc ifade vektörüyle transfekte edildi</td><td>Prof. Dr. Clevers'tan hücre hattı</td><td></td><td>Noggin üretiminde kullanılmıştır; kültür ortamı: 500ml DMEM, yüksek glikoz, GlutaMAX, piruvat (Gibco Life Technologies, 31966)+ 50ml FBS; Farin ve ark. Gastroenterology 143.6 (2012): 1518-1529</td></tr><tr><td>HEPES&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630056</td><td>adDMEM/F12+/+&nbsp bileşeni;</td></tr><tr><td>Hoechst 33342&nbsp;</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>H3570</td><td>1x PBS'de 1:5.000 seyreltme</td></tr><tr><td>İnsan epidermal büyüme faktörü (EGF) & nbsp;</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15</td><td>Konsantrasyon stoku 500 ve mikro; g/mL</td></tr><tr><td>Aşılama döngüleri</td><td>Sarstedt</td><td>86.1567.010</td><td></td></tr><tr><td>Aşılama tüpleri</td><td>Sarstedt</td><td>62.515.006</td><td></td></tr><tr><td>Leica Stellaris 5 konfokal mikroskobu</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Luria Bertani Bulbası (LB çorbası)</td><td>Roth&nbsp;</td><td>X968.1</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>356231</td><td>Ekstraselülük Matris (ECM)</td></tr><tr><td>N-Asetilsistein&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9165-25G</td><td>Konsantrasyon stoku 500 mM</td></tr><tr><td>Noggin CM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NovoCyte Quanteon&nbsp;</td><td>Çevik</td><td></td><td>Akış Sitometresi</td></tr><tr><td>Paraformaldehit (PFA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6148</td><td>%4 oranında 1x PBS, %4 sakaroz kullanılır</td></tr><tr><td>Primocin</td><td>Invivogen</td><td>Ant-pm-1</td><td></td></tr><tr><td>Q-VETTES yarı-mikro</td><td>Ratiolab</td><td>2712120</td><td></td></tr><tr><td>RHOKi (Y-27632)</td><td>AbMole</td><td>M1817</td><td>RhoA/ROCK inhibitörü; Konsantrasyon stoku 10 mM</td></tr><tr><td>R-spodin1 CM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>R-Spondin1, 293T hücre hattını ifade ediyor</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SCC111</td><td>R-spo1 CM üretiminde kullanılmıştır; kültür ortamı: 500ml DMEM, yüksek glikoz, GlutaMAX, piruvat (Gibco Life Technologies, 31966)+ 60ml FBS&nbsp;</td></tr><tr><td>TGF&beta; i (A-83-01)</td><td>Tocris</td><td>2939</td><td>ALK4/5/7 inhibitörü; Konsantrasyon stoku 5 mM&nbsp;</td></tr><tr><td>Triton X-100&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T9284</td><td>PBS 1x içinde %0,5 seyreltilmiştir</td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzimi &nbsp;</td><td>Gibco</td><td>12605028</td><td>3D fare prostat organoidlerini sindirmek için enzimatik hücre ayrıştırma ajanı</td></tr><tr><td>Uropatogenik Escherichia coli stür UTI89</td><td>Prof. Dr. Dobrindt'ten WT suşu</td><td></td><td>pFPV-mCherry ile dönüştürüldü (addgene #20956)</td></tr></tbody></table>

konak-patojen etkileşimlerini İncelemek İçin fare prostat organoid-tabanlı modelin oluşturulması

Generation of a Mouse Prostate Organoid-Based Model for Studying Host-Pathogen Interactions

Konak-Patojen Etkileşimlerini İncelemek İçin Fare Prostat Organoid-Tabanlı Modelin Oluşturulması

Aging men are highly affected by prostate diseases, such as benign prostatic hyperplasia, prostatitis, and prostate cancer. Together, these conditions ...

generation-mouse-prostate-organoid-based-model-for-studying-host

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Tümörlerden türetilen organoidler, tümörlerin patolojik özelliklerini ve organa özgü hücre soyunu koruyabilen bir tür 3B hücre kültürü modelidir. Örnek protokolde, bilim adamlarının genetik olarak tasarlanmış bir fare modelinden bir prostat tümöründen organoidler ürettiğini göreceğiz.

Tümörlerden Organoidlerin Hazırlanması: 3 Boyutlu İn Vitro Tümör Modeli

Bu videoda, izole fare prostat epitel hücrelerinin matris jel halkası bazlı bir kültür tekniği kullanılarak kültürlenmesini gösteriyoruz. Bu yaklaşım, genetik veya farmakolojik manipülasyona yanıt olarak prostat epitel hücrelerinin 3D glandüler yapılar oluşturmak için farklılaşma kapasitesi hakkında tamamlayıcı bilgi sağlayabilir.

Prostat Organoid Testi: Prostat Epitel Hücrelerinin Farklılaşma Kapasitesini İncelemek İçin Matris Jel Halka Bazlı Ex Vivo Kültür Tekniği

Kök hücre türevli kültürler, bulaşıcı hastalıkları modellemek için muazzam bir potansiyel barındırıyor. Burada, yetişkin kök hücrelerden türetilen fare ve insan mide organoidlerinin kültürü anlatılmaktadır. Organoidlere mide patojeni Helicobacter pylori mikroenjekte edilir.

Enfeksiyon Hastalıkları Modeli Olarak Organoids: Helicobacter Pylori ve İnsan Kültür ve kemirgen Mide Organoids ve Mikroenjeksiyon

Genetik fareler prostat kanseri mekanizmaları araştıran için yararlı modellerdir. Burada bir fare ürogenital sistemden prostat loblar incelemek, Histoloji üzerinde göre ayırt etmek ve yalıtmak ve pulcuklarının aşağı akım analizleri için olarak birincil Prostat hücreleri vitro kültür için bir iletişim kuralı mevcut.

Kimlik, histolojik karakterizasyonu ve için fare Vitro 3D küresel kültür modelleri prostat lob diseksiyonu

Burada, insan birincil prostat organoid kullanım kılavuzu sonra fenotip değerlendirmek için bitiş noktaları önermek için bir protokol mevcut. Tohum, kültür bakım, matris jel, kurtarma morfolojik miktar, katıştırma ve kesit, FFPE kesit, Bütün Dağı boyama ve ticari deneyleri uygulanması anlatılmaktadır.

Kullanım ve insan birincil prostat Organoid kültürü değerlendirilmesi

Biz prostat tümörü diseksiyon odaklanmak, fare prostat kanseri modellerinin otopsi ve diseksiyon için bir yöntem göstermektedir. Fare prostat tümörü organoidlerin oluşturulması için adım adım bir protokol de sunulmaktadır.

Prostat kanseri genetiği Işlenmiş fare modelleri tümör Organoids üretimi

Fare prostat organoidleri farklılaşmayı düzenleyen mekanizmaları değerlendirmek için umut verici bir bağlam temsil eder. Bu makalede prostat organoidleri kurmak için geliştirilmiş bir yaklaşım açıklanır ve (1) organoidlerden protein lysate toplamak için yöntemler tanıttı, ve (2) tam monte konfokal mikroskopi için düzeltve leke organoidler.

Organoid Kültürü Kullanarak Fare Prostat Epitel Hücrelerinin Ayırt Etme Kapasitesinin Değerlendirilmesi

Burada sunulan prostat epitel organoidleri farmakolojik yanıtları çalışma için bir protokoldür. Organoidler vivo biyolojiye çok benzer ler ve hasta genetiğini yeniden özetlerler, bu da onları çekici model sistemleri haline getirir. Prostat organoidleri wildtype prostatlar, genetiği değiştirilmiş fare modelleri, iyi huylu insan dokusu ve ileri prostat kanserinden kurulabilir.

Genotipleri ve Mutasyonel Profilleri Farmakolojik Tepkilere Çeviren Araçlar Olarak Prostat Organoid Kültürleri

Hasta BMPC örneklerinin üç boyutlu kültürleri ve kemik metastatik prostat kanserinin ksenogreftleri orijinal tümörlerinin fonksiyonel heterojenliğini korur ve bu da kistler, sferoidler ve kompleks, tümör benzeri organoidlerle sonuçlanır. Bu makale, heterojen hasta türemiş örneklerin 3D kültürü ve IFC kullanılarak analizleri için bir optimizasyon stratejisi ve protokolü sağlar.

Hasta Prostat Kanseri Kemik Metastazı Örneklerinden ve Ksenogreftlerinden Elde Edilen Üç Boyutlu (3D) Organoidlerin Oluşturulması ve Analizi

Prostat kanseri heterojenliği ve tedavi direnci zorluklar olmaya devam etmektedir. Temel ebeveyn tümör özelliklerini koruyan hasta kaynaklı organoidler (PDO'lar) üretmek için bir protokol açıklıyoruz. Bu standartlaştırılmış model, ilaç taramasını ve hassas tıptaki gelişmeleri destekler.

Hasta Kaynaklı Prostat Kanseri Organoidlerinin Oluşturulması ve Sürdürülmesi: Ayrıntılı Bir Deneysel Protokol

Çalışma, doku kök hücresinden türetilen bağırsak organoidleri kullanılarak bakteriyel enfeksiyonun in vitro incelenmesi için bir yöntem sunmaktadır. Protokol, organoidlerin iki boyutta nasıl kültürleneceğini ve farklılaştırılacağını, onları yapışkan-invaziv Escherichia coli ile enfekte edeceğini ve epitel bariyer sızıntısı, enfeksiyon görüntüleme ve epitel RNA yanıtı gibi önemli okumaları nasıl değerlendireceğini açıklar.

Konak-bakteri etkileşimlerini incelemek için invazin veya bazal zar ekstraktı üzerine iki boyutlu organoid kültürü

Keşfedin fare prostat organoidlerinden türetilmiş iki boyutlu kültür modeliyle konak-patojen etkileşimlerini. Bu yöntem, epitel hücre çeşitliliğini koruyarak UPEC enfeksiyon dinamiklerini inceleme olanağı sunar.

Konak-Patojen Etkileşimlerini İncelemek İçin Fare Prostat Organoid-Tabanlı Modelin Oluşturulması

Daha fazla video keşfet