Name: Birincil mikrogliada glikolizin ekstraselüler akı testi kullanılarak araştırılması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-10T12:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 21 s
Description: Öğrenin, ekstraselüler akı analizörü kullanarak birincil mikroglialarda glikoliz aktivitesini nasıl ölçeceğinizi. Bu yöntem, enflamatuvar uyaranlar altında metabolik değişiklikleri incelemek için gerçek zamanlı ECAR ölçümü sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Prinz, M., Jung, S., Priller, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+biology%3A+One+century+of+evolving+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Microglia biology: One century of evolving concepts.</a> Cell. 179, 292-311 (2019).</li>
<li>Tay, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+microglia+recovery+population+revealed+by+single-cell+RNAseq+following+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol.+Commun%22%5BJournal%5D)">Unique microglia recovery population revealed by single-cell RNAseq following neurodegeneration.</a> Acta Neuropathol. Commun. 6, 87(2018).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycolysis+and+oxidative+phosphorylation+play+critical+roles+in+natural+killer+cell+receptor-mediated+natural+killer+cell+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Glycolysis and oxidative phosphorylation play critical roles in natural killer cell receptor-mediated natural killer cell functions.</a> Front. Immunol. 11, 202(2020).</li>
<li>Soto-Heredero, G., Gómezde Las Heras, M. M., Gabandé-Rodríguez, E., Oller, J., Mittelbrunn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycolysis-a+key+player+in+the+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Glycolysis-a key player in the inflammatory response.</a> FEBS J. 287, 3350-3369 (2020).</li>
<li>O'Neill, L. A., Kishton, R. J., Rathmell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+immunometabolism+for+immunologists%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">A guide to immunometabolism for immunologists.</a> Nat. Rev. Immunol. 16, 553-565 (2016).</li>
<li>Bernier, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+metabolic+flexibility+supports+immune+surveillance+of+the+brain+parenchyma%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">Microglial metabolic flexibility supports immune surveillance of the brain parenchyma.</a> Nat. Commun. 11, 1559(2020).</li>
<li>Bernier, L. P., York, E. M., MacVicar, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunometabolism+in+the+brain%3A+How+metabolism+shapes+microglial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Immunometabolism in the brain: How metabolism shapes microglial function.</a> Trends Neurosci. 43, 854-869 (2020).</li>
<li>Geric, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+reprogramming+during+microglia+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunometabolism%22%5BJournal%5D)">Metabolic reprogramming during microglia activation.</a> Immunometabolism. 1, e190002(2019).</li>
<li>Yoo, I., Ahn, I., Lee, J., Lee, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+flux+assay+%28Seahorse+assay%29%3A+Diverse+applications+in+metabolic+research+across+biological+disciplines%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cells%22%5BJournal%5D)">Extracellular flux assay (Seahorse assay): Diverse applications in metabolic research across biological disciplines.</a> Mol. Cells. 47, 100095(2024).</li>
<li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamine+metabolism+modulates+microglial+NLRP3+inflammasome+activity+through+mitophagy+in+Alzheimer%E2%80%99s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Glutamine metabolism modulates microglial NLRP3 inflammasome activity through mitophagy in Alzheimer’s disease.</a> J. Neuroinflammation. 21, 261(2024).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+transporter+1+critically+controls+microglial+activation+through+facilitating+glycolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Glucose transporter 1 critically controls microglial activation through facilitating glycolysis.</a> Mol. Neurodegener. 14, 2(2019).</li>
<li>Lu, J., Zhou, W., Dou, F., Wang, C., Yu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TRPV1+sustains+microglial+metabolic+reprogramming+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">TRPV1 sustains microglial metabolic reprogramming in Alzheimer's disease.</a> EMBO Rep. 22, e52013(2021).</li>
<li>Orihuela, R., McPherson, C. A., Harry, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+M1%2FM2+polarization+and+metabolic+states%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Microglial M1/M2 polarization and metabolic states.</a> Br. J. Pharmacol. 173, 649-665 (2016).</li>
<li>Cheng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+glycolytic+reprogramming+controls+microglial+inflammatory+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Early glycolytic reprogramming controls microglial inflammatory activation.</a> J. Neuroinflammation. 18, 129(2021).</li>
<li>Kaushik, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+glycolytic+metabolism+supports+transmigration+of+brain-infiltrating+macrophages+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Enhanced glycolytic metabolism supports transmigration of brain-infiltrating macrophages in multiple sclerosis.</a> J. Clin. Invest. 129, 3277-3292 (2019).</li>
<li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mTOR-mediated+metabolic+reprogramming+shapes+distinct+microglia+functions+in+response+to+lipopolysaccharide+and%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">mTOR-mediated metabolic reprogramming shapes distinct microglia functions in response to lipopolysaccharide and.</a> Glia. 68, 1031-1045 (2020).</li>
<li>Montilla, A., Zabala, A., Matute, C., Domercq, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+metabolic+characterization+of+microglia+culture+in+a+defined+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Cell.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Functional and metabolic characterization of microglia culture in a defined medium.</a> Front. Cell. Neurosci. 14, 22(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1M HEPES çözümü</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H0887</td><td></td></tr><tr><td>1X HBSS</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp; 14175-079</td><td></td></tr><tr><td>%2,5 Tripsin</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp; 15090-046</td><td></td></tr><tr><td>2DG</td><td>Millipore sigma&nbsp;</td><td>D6134</td><td></td></tr><tr><td>Antibiyotik/Antimikotik&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>D &ndash; (+)Glikoz, susuz &nbsp;</td><td>Termoscientif&nbsp; &nbsp;</td><td>A16828.36</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>&nbsp; 11965-092</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Millipore sigma&nbsp;</td><td>11284932001- Roche</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Fisherbrand</td><td>FB12999102</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp; 35050-061</td><td></td></tr><tr><td>L-Laktat Kiti</td><td>Abcam</td><td>AB65330</td><td></td></tr><tr><td>LPS&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>&nbsp; L4391</td><td></td></tr><tr><td>MEM NEAA&nbsp;</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp; 11140-050</td><td></td></tr><tr><td>Oligomisin A</td><td>Millipore sigma&nbsp;</td><td>495455</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin/Streptomisin</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp; 15240-062</td><td></td></tr><tr><td>pH gösterge şeritleri</td><td>Fisherbrand</td><td>13-640-516</td><td></td></tr><tr><td>Seahorse XFe24</td><td>Agilent Teknolojileri</td><td>Yok</td><td>Genel adı: Ekstraselülük akı analizörü</td></tr><tr><td>Seahorse 24 V7 PS hücre kültürü mikroplakaları</td><td>Çevik Deniz Atı</td><td>100777-004</td><td>Genel adı: Ekstraselülük akı hücre kültürü mikroplakaları</td></tr><tr><td>Deniz atı testi XF Kalibrant tamponu (pH 7.4)</td><td>Agilent Seahorse&nbsp;</td><td>&nbsp; 100840-000</td><td>Genel adı: Hücre dışı akı kalibrant tamponu</td></tr><tr><td>Deniz atı testi XF DMEM ortamı (pH 7.4)</td><td>Agilent Seahorse&nbsp; &nbsp;</td><td>&nbsp; 103575-100</td><td>Genel adı: Ekstraselülör akı testi ortamı</td></tr><tr><td>Deniz atı ekstraselüler akı test kiti</td><td>Agilent Seahorse&nbsp;</td><td>102342-100</td><td>Genel adı: Ekstraselülük akı kalibrasyon plakası&nbsp;</td></tr><tr><td>Sodyum piruvat&nbsp;</td><td>Gibco&nbsp;</td><td>&nbsp; 11360-070</td><td></td></tr></tbody></table>

birincil mikrogliada glikolizin ekstraselüler akı testi kullanılarak araştırılması

Investigating Glycolysis in Primary Microglia Using Extracellular Flux Assay

Birincil mikrogliada glikolizin ekstraselüler akı testi kullanılarak araştırılması

Microglia, the resident macrophage cells of the central nervous system, dynamically alter their metabolic programs in response to physiological and ...

investigating-glycolysis-primary-microglia-using-extracellular-flux

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Beynin hücresel heterojenite birincil mikroglia Yalıtımlı fizyolojik ve patolojik hem de kendi rolünü araştırmak için esastır. Bu protokol bir mekanik izolasyon ve yüksek verim ve yüksek saflıkta sağlar karışık hücre kültürü tekniği için geçerli birincil mikroglia hücreleri...

Yenidoğan Rat Beyin Dokusu Karışık Glial Hücre Kültürleri Primer mikroglia İzolasyonu

Bu protokol, hücre dışı akı testi ile primer lösemik hücrelerin hücre dışı asitlenme oranını (ECAR) ve oksijen tüketim oranını (OCR) ölçmek için biyokimyasal bir yaklaşım sağlar. Bu hücrelerin metabolik profilinin değerlendirilmesi, taleplerinin karakterize edilmesine yardımcı olarak kişiselleştirilmiş tedaviye yol açar.

Hücre Dışı Akı Deneyi: Hücrelerin Metabolik Profilini Ölçmek İçin Bir Yöntem

Metabolik yeniden programlama, M1 ve M2 makrofaj polarizasyonu için bir özellik ve önkoşuldur. Bu el yazması, fare kemik iliği türevli makrofajlarda glikoliz ve mitokondriyal fonksiyonun temel parametrelerinin ölçümü için bir testi açıklamaktadır. Bu araç, belirli faktörlerin makrofajın metabolizmasını ve fenotipini nasıl etkilediğini araştırmak için uygulanabilir.

Gerçek zamanlı Ekstrasellüler Flux Analizi Polarize M1 ve M2 Kemik İliği-türevli Makrofagların Metabolik Karakterizasyonu

Glikoliz, çoklu biyolojik sistemlerde tanımlayıcı bir metabolik belirteçtir. H + hücre dışı akışını ölçerek glikolizin izlenmesi yaygındır, ancak kantitatif ve açık olması için düzeltme gerektirir. Burada, hücre dışı asitlenmenin solunum ve glikolitik kaynaklarını ayırt etmek için hücre dışı akı verilerinin nasıl toplanacağını ve düzeltileceğini gösteriyoruz.

Ekstraselüler Asit Üretim Ölçüm ve Analiz Glikolitik Hızı belirleme

Metabolizma çalışması, immünolojik araştırmalarla giderek daha fazla ilgili hale geliyor. Burada, fare splenositlerinde ve T ve B lenfositlerinde glikoliz ve mitokondriyal solunumu ölçmek için optimize edilmiş bir yöntem sunuyoruz.

Bir Optimize Protokol Lenfositlerindeki Glikoliz ve Mitokondriyal Solunum Analiz

Bu yazıda, periferik kandan izole edilen primer insan Doğal Öldürücü (NK) hücrelerinde glikoliz ve mitokondriyal solunumu ölçmek için bir yöntem, istirahatte veya IL15 kaynaklı aktivasyonu takiben açıklıyoruz. Açıklanan protokol kolayca birincil insan NK hücreleri diğer sitokinler veya çözünür uyaranlar tarafından aktive genişletilebilir.

İnsan Doğal Katil Hücre Metabolizmasının Analizi

Burada, akış sitometrisi kullanarak vGLUT1 pozitif sinapsların ve pHRodo Red etiketli ham sinaptozomların mikroglial yutulmasını ölçmek için iki protokol sunuyoruz.

Akış Sitometrisi Kullanılarak Sinaptik Materyalin Mikroglial Yutulmasının Miktar Tayini

Alkol kötüye kullanımı, baskılanmış mitokondriyal solunum ve biyoenerjetik nedeniyle alveoler makrofaj () bağışıklığını bozar. Yakın zamanda etanol (EtOH) maruziyetinin'lerde mitokondriyal solunum için glutamin bağımlılığını artırdığını gösterdik. Burada, hücre dışı akı biyoanalizörü kullanılarak EtOH ile tedavi edilen'lerde mitokondriyal solunum için glutamin kullanımını belirlemek için yöntemler sağlanmaktadır.

Hücre Dışı Akı Biyoanalizörü Kullanılarak Kronik Etanole Maruz Kalan Alveolar Makrofajlar için Yakıt Kaynağı Olarak Glutaminin Değerlendirilmesi

Burada, kemik iliği, dalak ve enfarktüslü kalpten makrofajların çıkarılması ve ardından canlı hücrelerdeki metabolik akışın değerlendirilmesi için yöntemleri ayrıntılı olarak açıklıyoruz.

Dalak ve Kardiyak Makrofajlarda ve Kemik İliği Monositlerinde Ex Vivo Metabolik Akının Analizi

Mikroglial hücrelerden saflaştırılmış mitokondrinin hazırlanması, N-glikan salınımı için mitokondriyal proteinlerin izolasyonu ve yüksek çözünürlüklü doğru kütle analizörü kütle spektrometresine bağlı kızılötesi matris destekli lazer desorpsiyon elektrosprey iyonizasyonu kullanılarak hücre altı, mitokondriyal glikanların hızlı tespiti için bir protokol geliştirilmiştir.

Glikan Analizi için Microglia'dan Mitokondriyal Hazırlık

Öğrenin, ekstraselüler akı analizörü kullanarak birincil mikroglialarda glikoliz aktivitesini nasıl ölçeceğinizi. Bu yöntem, enflamatuvar uyaranlar altında metabolik değişiklikleri incelemek için gerçek zamanlı ECAR ölçümü sağlar.

Birincil mikrogliada glikolizin ekstraselüler akı testi kullanılarak araştırılması

Daha fazla video keşfet