Name: Korunmuş fonksiyon ve mimariyle ex vivo insan sinovyal dokusu kullanılarak sinovitin klinik öncesi modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-20T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: Keşfedin eklem iltihabı araştırmaları için JSAS modüler sistemi kullanarak insan sinovyal dokusunun korunmuş mimarisinde akut değişiklikleri. Bu yöntem klinik öncesi romatoloji çalışmalarına olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

```html
<table><tbody><tr><td>10 cm Petri dishes</td><td>Corning</td><td>CLS430167</td><td></td></tr><tr><td>23srRNA RNAscope probe</td><td>ACD/Biotechne</td><td>468211</td><td></td></tr><tr><td>24 well plates</td><td>Life Sciences</td><td>3524</td><td></td></tr><tr><td>3 mm biopsy punches</td><td>Integra</td><td>12460406</td><td></td></tr><tr><td>50 mL conicals</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>70% ethanol (for sterilization)</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Borrelia burgdorferi</td><td>ATCC</td><td>35210&nbsp;</td><td>maksimum patojenite için geç eksponensyel fazda kullanılmalıdır</td></tr><tr><td>BSK-H</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B8291</td><td></td></tr><tr><td>CD68 antibody</td><td>Invitrogen</td><td>14-0688-82</td><td>1:1000</td></tr><tr><td>CO2 tank (standart koşullar)</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate buffered saline (Ca-/Mg-)</td><td>Thermofisher</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>fetal bovine serum</td><td>Biotechne</td><td>S11150</td><td>Isı ile inaktive Edilmiş Lot: F22100</td></tr><tr><td>forceps (dişsiz)</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>hemostat</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nemli hücre inkübatörü (standart koşullar)</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hipoksi inkübatörü</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>hipoksi tankı (%5 O2, %5 CO2, geri kalanı N2, fizyolojik koşullar)</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IL-4 antibody</td><td>Thermofisher</td><td>MA5-42470</td><td>1:100</td></tr><tr><td>iNOS antibody</td><td>Thermofisher</td><td>PA1-036</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Iris makas</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lipopolisakkarit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L2630</td><td></td></tr><tr><td>düşük glukozlu DMEM (+Sodyum pirüvat, +L-glutamin)</td><td>Life Technologies</td><td>11885084</td><td></td></tr><tr><td>MMP9 antibody</td><td>Thermofisher</td><td>MA5-32705</td><td>1:1000</td></tr><tr><td>Modüler inkübatör bölmesi (hiperoksik koşullar)</td><td>Emrbient, Inc</td><td>MIC-101</td><td></td></tr><tr><td>Monosit kemotaktik protein 1</td><td>Peptrotech</td><td>300-04-20UG</td><td></td></tr><tr><td>N-asetil sistein</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9165</td><td>Her deney için taze hazırlanmalı ve eşit molar sodyum bikarbonat ile pH 7-7.4'e tamponlanmalıdır</td></tr><tr><td>OPG ELISA</td><td>Millipore</td><td>RAB0484</td><td>1:1 seyreltme</td></tr><tr><td>Oksijen tankı, litredeki akış regülatörü</td><td>N/A</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PDPN antibody</td><td>Invitrogen</td><td>14-9381-82</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Propidyum İyodür</td><td>Thermofisher</td><td>J66764.MC</td><td></td></tr><tr><td>RNAscope multiplex floresan V2 tahlili</td><td>ACD/Biotechne</td><td>323100</td><td></td></tr><tr><td>sRANKL ELISA</td><td>MyBioSource</td><td>MBS262624</td><td>1:1 seyreltme</td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus USA 300 MRSA</td><td>ATCC</td><td>BAA-1717</td><td></td></tr><tr><td>SYBR Green</td><td>Thermofisher</td><td>S7563</td><td>10.000X stoklu</td></tr><tr><td>TNF antibody</td><td>Thermofisher</td><td>PA5-19810</td><td>1:100</td></tr><tr><td>transwell insertleri - 0.4 µm boyutu</td><td>Millicell</td><td>PICM01250</td><td></td></tr><tr><td>transwell insertleri - 5 µm boyutu</td><td>Corning</td><td>CLS3421</td><td></td></tr></tbody></table>
```

korunmuş fonksiyon ve mimariyle ex vivo insan sinovyal dokusu kullanılarak sinovitin klinik öncesi modeli

A Pre-Clinical Model of Synovitis Using Ex vivo Human Synovial Tissue with Preserved Function and Architecture

Oksijen kültürü koşullarının optimize edilmesi
Fizyolojik doku perfüzyonu yaklaşık %6-8 oksijendir; hücre kültürü için standart kuluçka koşulları ise atmosferik oksijen seviyelerinde (~%21)16. Karşılaştırıldığında, hiperoksijenasyon hücre kültürünün canlılığını artırabilir veya toksik olabilir17. JSAS'ın yeterli kullanımı, sinovyal doku canlılığının erken belirlenmesini gerektirdi; Bu nedenle, apoptoz, 0, 1, 2, 3, 5 ve 7. günlerd...

Korunmuş fonksiyon ve mimariyle ex vivo insan sinovyal dokusu kullanılarak sinovitin klinik öncesi modeli

Arthritis is an inflammatory state within joints resulting in cartilage damage, pain, and loss of mobility. Recent advances in arthritis research ...

Cevaplamak istediğimiz ana sorular, bulaşıcı ve enflamatuar uyaranlara yönelik özgün sinovyal bağışıklık tepkisi nedir ve bunun sinovyal yapıdaki değişikliklere nasıl yansıdığıdır. Ana klinik ve araştırma odak noktam, ilerlemiş RC artriti olan morbid obez hastaların tedavisidir. Bu hasta popülasyonunda, hastalıkları için cerrahi tedavi seçenekleri bulmakta zorlandıkları için tıbbi olarak ihmal edilmişlerdir.Başlamak için ameliyathanede artrotomi ve diseksiyon gerçekleştirin. Standart medial parapatellar yaklaşımı kullanın ve morbid obezite ve ilerlemiş osteoartrit olan bir hastada ameliyat yaparken daha geniş bir eksipozisyon gerçekleştirin. Ön sinovyumu tanımlayın ve dokuyu çıkarmak için elektrokauteri kullanın.Enflamasyon belirtileri için diz eklemini gözlemleyin, çünkü obeziteli hastalarda lokal bir enflamatuar yanıt sergileyebilirler ve bu, obezitenin daha geniş enflamatuar etkileriyle ilişkili olabilir. Sinovyumu steril bir şekilde araştırma ekibi üyesine ulaşırın. Soğuk Dulbecco's PBS veya DPBS ile dolu olan numune kabını buz üzerine yerleştirin ve toplam diz artroplastisi sırasında elde edilen insan ön sinovyal dokusunu kabın içine aktarın.Dokusunu soğuk DPBS'de bir plaka rocker üzerinde 10 dakika süreyle iki kez yıkayın. Ardından sinovyumu, Biosafety Level 2 kabini altında 10 santimetre veya daha büyük bir steril Petri kabına aktarın. Yarım dolu olana kadar, sodyum pirüvat ve L-glutamin içeren soğuk steril düşük glukozlu DMEM ekleyin.İncimsi intimal tabaka ile sinovyal çizgiyi, onu soymadan tanımlayın. En az iki teknik tekrar için üç milimetre biyopsi çekirdeği elde etmek için gereken aletleri düzenleyin. İris makasları veya bir neşter kullanarak, yakılmış taraftan fazla yağ ve stroma dokusunu çıkararak sinovyumu izole edin, tüm boyunca yaklaşık dört ila beş milimetre doku derinliğini koruyun.Gerekirse alanın görüşünü korumak için Petri kabının ortamını değiştirin. Dokuyu, sinovyal çizgi koruyucu aletin karşısında olacak şekilde yerleştirin. Dokuyu, forseps veya hemostat kullanarak baskın olmayan elinizle sabitleyin ve hafifçe çevirerek sıkı bir dikey basınç uygulayarak dokudan çekirdek alın.Biyopsi delicisini yaklaşık 10 ila 15 kullanımdan sonra veya dokunun delme sırasında büküldüğünde değiştirin, böylece intimal çizgi yapısına zarar vermeyin. İkinci bir Petri kabını açın ve 37 derecede temperlenmiş olan %10FBS içeren beş ila on mililitre ortamla doldurun. Düz veya dişsiz forseps kullanarak çekirdekleri kabın içine aktarın ve bir ila iki saniye boyunca hafifçe çalkalayın, böylece molozları sıkmadan yıkayın.Eklem Boşluğu Analiz Sisteminin alt kuyuğunu hazırlamak için 37 derecede temperlenmiş olan 10%FBS içeren düşük glukozlu DMEM'in 600 mikrolitresini ekleyin. Alt kuyuğa araç kontrolünü veya tercih edilen tedavi reaktifini, örneğin LPS veya MCP-1'i ekleyin. İstenen deney sonucuna göre transwell gözenek boyutunu seçin ve transwell'e 10%FBS içeren düşük glukozlu DMEM'in 300 mikrolitresini ekleyin.Steril forseps kullanarak bireysel doku çekirdeklerini, yırtık ve yüzen çekirdeklerden kaçınarak, transwell'in ortamına nazikçe aktarın. Ardından, montajı sekiz ila 72 saat boyunca 37 derecede %5 karbon dioksit ile bir inkübatöre yerleştirin, gerçekleştirilecek olan aşağı akış analizlarına göre değişir. Sinovyal dokuyu %10 nötral tamponlu formalinde sabitleyin.Sonra histolojik analiz için gömme yapın ve kesin. Hematoksilin ve eosin ile boyamadan sonra, doku kesitlerini 10X ve 40X'te parlak alan mikroskobu kullanarak görüntüleyin. 40X TIFF görüntüsünde intimal çizgi ve sublining bölgelerini Photoshop kullanarak çizerek, hedef dışı alanları, eritrositleri ve büyük damarları maskeleyin, sonraki kantitatif analiz için.Son maskeleri analiz edin ve intimal çizgi ve sublining kalınlığını, bütünlüğünü ve hücreselliğini niceliklendirin. Son olarak, geçiş yapan hücreleri akış sitometrisi ile ve toplanan ortamdaki çözünür faktörleri enzim bağlı immünosorbent analizi ile değerlendirin. Artan dozlarda MCP-1 veya LPS ile kültürlenen sinovyal doku, kontrole kıyasla değişken intimal çizgi morfolojisi değişiklikleri gösterdi, bu değişiklikler arasında gevrek intimal çizgi ve azalmış hücre yoğunluğu ile kalınlaşmış intimal çizgi bulunmaktadır.MCP-1 ve LPS tedavisi sinovyal sitokin tepkisini değiştirdi. MCP-1, sublining'de patojenik fibroblast markörü podoplanin ekspresyonunu indüklediği halde, LPS hem intimal çizgide hem de sublining'de podoplaninin artmasını sağladı. Alt kuyuğa geçen bağışıklık hücreleri arasında nötrofiller, NK hücreleri, NKT hücreleri, T hücreleri, B hücreleri veya dendritik hücreler, monositler veya makrofajlarla birlikte M2 makrofajlarla birlikte yer almaktadır.T hücreleri en bol bulunan geçiş yapan bağışıklık hücreleriydi. İstatistiksel olarak, alt kuyuğun uyarıcına göre hücre göçünde fark yoktu. Artritle ilgili bir protein olan osteoprotegerin, 24, 48 ve

a-pre-clinical-model-synovitis-using-ex-vivo-human-synovial-tissue

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Biz hücre ölümü yaralanma/olduğu gibi fare eklemlerin eklem yüzeyinde kayma ölçüde kontrollü mekanik yükler veya etkileri uygulamadan sonra değerlendirmek için bir yöntem mevcut. Bu yöntem, osteoartrit, genetik faktörler ve/veya farklı yükleme rejimleri içinde situ kondrosit güvenlik açığı nasıl etkilediğini araştırmak için kullanılabilir.

Gerçek zamanlı görselleştirme ve analiz nedeniyle tam olarak olduğu gibi fare kıkırdak Explants mekanik yükleme kondrosit yaralanma

Burada, büyükbaş dizleri kıkırdak eksültasyonunun izole edilmesi ve kültürlenmesini açıklayan bir protokol salıyoruz. Bu yöntem, eklemi hedefleyen biyolojik uyaranlara veya yeni terapötiklere yanıt olarak doku değişikliklerini tanımlamak için kolay ve erişilebilir bir araç sağlar.

Sığır Diz Eksbitkilerinde Kıkırdak Remodeling Ex Vivo Doku Kültür Modeli

Burada, murine dalak, kemik iliği, lenf düğümleri ve sinovyal doku içinde hem ekstra hem de hücre içi boyama tahlilleri kullanarak monosit/makrofaj ve T hücrealt kümelerini tanımlamak için ayrıntılı ve tekrarlanabilir akış sitometri protokolünü tanımladık ve murine osteoartritin yerleşik bir cerrahi modelini kullanıyoruz.

Bir Osteoartrit Modelinde Minör Dalak, Kemik İliği, Lenf Düğümleri ve Sinovyal DokuDaki İmmün Hücre Alt Kümelerinin Akış Sitometri Analizi

İnsan diz eklemindeki kıkırdak, kemik, yağ yastığı ve sinovyumu özetlemek için kullanılan insan mezenkimal kök hücrelerinden dört tip doku üretmek için ayrıntılı yöntemler sunuyoruz. Bu dört doku özelleştirilmiş bir biyoreaktöre entegre edilir ve mikroakışkanlar yoluyla bağlanır, böylece çip üzerinde bir diz eklemi oluşturur.

Eklem hastalıklarını modellemek ve ilaçları test etmek için çip üzerinde diz eklemi oluşturulması

Atomik kuvvet mikroskobu mikro girintileriyle ilgili en yaygın sorunları belirlemek ve ele almak için adım adım bir yaklaşım sunuyoruz. Çeşitli derecelerde osteoartrit kaynaklı dejenerasyon ile karakterize edilen yerli insan eklem kıkırdak eksplantlarında ortaya çıkan sorunları örneklendiriyoruz.

İnsan Eklem Kıkırdak Eksplantlarında Atomik Kuvvet Mikroskobu Tabanlı Mikro Girintide Pratik Konuların Ele Alınması

Bu çalışma, sinovyal makrofajları ve fibroblastları murin inflamatuar artrit dokusundan izole etmek için modifiye edilmiş bir protokol sunmaktadır.

Murin Artrit Dokusundan Primer Sinovyal Makrofaj ve Fibroblastların İzolasyonu ve Kültürü

Burada, yük taşıyan tendon çekirdek dokusu ile hastalık ve yaralanma ile aktive olan hücre popülasyonlarını içeren bir dışsal bölme arasındaki tendon hücresel karışmasını taklit etmek için bir asambloid model sistemi sunuyoruz. Önemli bir kullanım durumu olarak, sistemin dışsal endotel hücrelerinin hastalıkla ilgili aktivasyonunu araştırmak için nasıl konuşlandırılabileceğini gösteriyoruz.

Hastalık ve Onarımda Hücresel Karışmayı Araştırmak için Mühendislik Tendon Toplulukları

Burada, SKG farelerinden CD4 + T hücrelerinin evlat edinilmiş transferi yoluyla bir romatoid artrit (RA) fare modeli oluşturan, immünolojik mekanizmaları, patolojik ilerlemeyi ve RA için yeni tedavilerin geliştirilmesini araştırmak için hızlı ve güvenilir bir deneysel araç sağlayan bir protokol sunuyoruz.

Farelerde Romatoid Artritin Evlat Edinen Bir Transfer Modeli

Burada, kemirgenlerde diz osteoartritini indüklemek için güvenilir bir model olarak ön çapraz bağı (ÖÇB) kesmek için cerrahi bir yöntem ve diz sinovyal sıvısının toplanması, diz ödeminin ölçülmesi ve osteoartrit şiddetinin değerlendirilmesi için metodolojiler açıklanmaktadır.

Eklem iltihabı ve travma sonrası osteoartriti incelemek için bir kemirgen modelinde ön çapraz bağ transeksiyonu ve sinovyal sıvı lavajı

Antijen-spesifik T hücrelerinin indüksiyon ve genişleme için yeni bir DC bağımsız bir yöntem açıklanmıştır. HLA-A2-Ig tabanlı yapay Antijen sunan hücreler (aAPC), HLA-A2 verimli farklı antijen özgüllüğü CTL genişletmek için kısıtlı peptitler ile yüklenir. Bu teknoloji tabanlı CTL evlatlık immünoterapi için büyük bir potansiyele sahiptir.

Verimli HLA-Ig Tabanlı Yapay antijen sunan hücrelerin Ex vivo</emİnsan CTL> Genleşme

Keşfedin eklem iltihabı araştırmaları için JSAS modüler sistemi kullanarak insan sinovyal dokusunun korunmuş mimarisinde akut değişiklikleri. Bu yöntem klinik öncesi romatoloji çalışmalarına olanak tanır.

Korunmuş fonksiyon ve mimariyle ex vivo insan sinovyal dokusu kullanılarak sinovitin klinik öncesi modeli

Daha fazla video keşfet