Name: Neonatal fare yavrularında oral gavaj ve Ussing Chambers kullanılarak bağırsak bariyeri bütünlüğünün fonksiyonel değerlendirmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 18 s
Description: Keşfedin, oral gavaj ve Ussing Chambers kullanarak neonatal fare yavrularında bağırsak bariyeri bütünlüğünü fonksiyonel olarak değerlendirme yöntemini. Bu protokol, erken yaşam maruziyetlerinin ve mikroRNA'ların bağırsak geçirgenliği üzerindeki etkilerini incelemek için güvenilir bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Di Vincenzo, F., Del Gaudio, A., Petito, V., Lopetuso, L. R., Scaldaferri, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbiota%2C+intestinal+permeability%2C+and+systemic+inflammation%3A+A+narrative+review%5BTitle%5D)+AND+%22Intern+Emerg+Med%22%5BJournal%5D)">Gut microbiota, intestinal permeability, and systemic inflammation: A narrative review.</a> Intern Emerg Med. 19 (2), 275-293 (2024).</li>
<li>Mu, Q., Kirby, J., Reilly, C. M., Luo, X. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leaky+gut+as+a+danger+signal+for+autoimmune+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Leaky gut as a danger signal for autoimmune diseases.</a> Front Immunol. 8, 598(2017).</li>
<li>Sorini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+gut+barrier+integrity+triggers+activation+of+islet-reactive+T+cells+and+autoimmune+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Loss of gut barrier integrity triggers activation of islet-reactive T cells and autoimmune diabetes.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 116 (30), 15140-15149 (2019).</li>
<li>An, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+intestinal+mucosal+barrier+in+autoimmune+disease%3A+a+potential+target%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">The role of intestinal mucosal barrier in autoimmune disease: a potential target.</a> Front Immunol. 13, 871713(2022).</li>
<li>Picco, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+gut+permeability+in+juvenile+chronic+arthritides%3A+a+multivariate+analysis+of+the+diagnostic+parameters%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Increased gut permeability in juvenile chronic arthritides: a multivariate analysis of the diagnostic parameters.</a> Clin Exp Rheumatol. 18 (6), 773-778 (2000).</li>
<li>Dunleavy, K. A., Raffals, L. E., Camilleri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intestinal+barrier+dysfunction+in+inflammatory+bowel+disease%3A+underpinning+pathogenesis+and+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Dis+Sci%22%5BJournal%5D)">Intestinal barrier dysfunction in inflammatory bowel disease: underpinning pathogenesis and therapeutics.</a> Dig Dis Sci. 68 (12), 4306-4320 (2023).</li>
<li>Borrego-Ruiz, A., Borrego, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early-life+gut+microbiome+development+and+its+potential+long-term+impact+on+health+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiome+Res+Rep%22%5BJournal%5D)">Early-life gut microbiome development and its potential long-term impact on health outcomes.</a> Microbiome Res Rep. 4 (2), 20(2025).</li>
<li>Di Costanzo, M., De Paulis, N., Biasucci, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Butyrate%3A+A+link+between+early+life+nutrition+and+gut+microbiome+in+the+development+of+food+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22Life+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Butyrate: A link between early life nutrition and gut microbiome in the development of food allergy.</a> Life (Basel). 11 (5), 384(2021).</li>
<li>Kindgren, E., Ahrens, A. P., Triplett, E. W., Ludvigsson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infant+gut+microbiota+and+environment+associate+with+juvenile+idiopathic+arthritis+many+years+prior+to+disease+onset%2C+especially+in+genetically+vulnerable+children%5BTitle%5D)+AND+%22eBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Infant gut microbiota and environment associate with juvenile idiopathic arthritis many years prior to disease onset, especially in genetically vulnerable children.</a> eBioMedicine. 93, 104654(2023).</li>
<li>Borowitz, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epidemiology+of+inflammatory+bowel+disease%3A+clues+to+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pediatr%22%5BJournal%5D)">The epidemiology of inflammatory bowel disease: clues to pathogenesis.</a> Front Pediatr. 10, 1103713(2023).</li>
<li>Leete, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+age+on+the+progression+and+severity+of+type+1+diabetes%3A+potential+effects+on+disease+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Diab+Rep%22%5BJournal%5D)">The effect of age on the progression and severity of type 1 diabetes: potential effects on disease mechanisms.</a> Curr Diab Rep. 18 (11), 115(2018).</li>
<li>Francis, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probiotic+studies+in+neonatal+mice+using+gavage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Probiotic studies in neonatal mice using gavage.</a> J Vis Exp. (143), e59074(2019).</li>
<li>McClain, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+mouse+model%3A+review+of+methods+and+results%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Neonatal mouse model: review of methods and results.</a> Toxicol Pathol. 29 (Suppl), 128-137 (2001).</li>
<li>Thomson, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Ussing+chamber+system+for+measuring+intestinal+permeability+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">The Ussing chamber system for measuring intestinal permeability in health and disease.</a> BMC Gastroenterol. 19, 98(2019).</li>
<li>Clarke, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+Ussing+chamber+studies+of+mouse+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">A guide to Ussing chamber studies of mouse intestine.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 296 (6), G1151-G1166 (2009).</li>
<li>Westerhout, J., Wortelboer, H., Verhoeckx, K. Ussing chamber. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterhout%2C+J+%22The+Impact+of+Food+Bioactives+on+Health%3A+in+vitro+and+ex+vivo+models%22">The Impact of Food Bioactives on Health: in vitro and ex vivo models</a>. , (2015).</li>
<li>Hempstock, W., Ishizuka, N., Hayashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+assessment+of+intestinal+tight+junction+barrier+and+ion+permeability+in+native+tissue+by+Ussing+chamber+technique%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Functional assessment of intestinal tight junction barrier and ion permeability in native tissue by Ussing chamber technique.</a> J Vis Exp. (171), e62468(2021).</li>
<li>Sjögren, E., Eriksson, J., Vedin, C., Breitholtz, K., Hilgendorf, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excised+segments+of+rat+small+intestine+in+Ussing+chamber+studies%3A+A+comparison+of+native+and+stripped+tissue+viability+and+permeability+to+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Pharm%22%5BJournal%5D)">Excised segments of rat small intestine in Ussing chamber studies: A comparison of native and stripped tissue viability and permeability to drugs.</a> Int J Pharm. 505 (1), 361-368 (2016).</li>
<li>Moussaoui, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+intestinal+glucocorticoid+sensitivity+in+early+life+shape+the+risk+of+epithelial+barrier+defect+in+maternal-deprived+rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Changes in intestinal glucocorticoid sensitivity in early life shape the risk of epithelial barrier defect in maternal-deprived rats.</a> PLoS One. 9 (2), e88382(2014).</li>
<li>Gleeson, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+enhanced+intestinal+permeability+of+infant+mice+enables+oral+protein+and+macromolecular+absorption+without+delivery+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Pharm%22%5BJournal%5D)">The enhanced intestinal permeability of infant mice enables oral protein and macromolecular absorption without delivery technology.</a> Int J Pharm. 593, 120120(2021).</li>
<li>Birchenough, G. M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+development+of+the+small+intestinal+mucosa+drives+age-dependent%2C+regio-selective+susceptibility+to+Escherichia+coli+K1+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Postnatal development of the small intestinal mucosa drives age-dependent, regio-selective susceptibility to Escherichia coli K1 infection.</a> Sci Rep. 7 (1), 83(2017).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>10x DPBS CA & O olmadan Mg</td><td>Dulbeccos</td><td>14200091</td><td></td></tr><tr><td>Anti-HRP antikor</td><td>Nordic Biyositesi</td><td>GTX10183</td><td>Monoklonal Fare Dağ Peroksidaz IgG [2H11]</td></tr><tr><td>Dürbün lupe</td><td>Olympus&nbsp;</td><td>SZ61</td><td>Şart şart yok.</td></tr><tr><td>Siyah 96 kuyu plaka düz tabanlı</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>137101</td><td>Plakalar siyah olmalı ve floresans ölçümlerine uyarlanmalıdır. Okuma sırasında kapağın açılması gerekir.</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Merck</td><td>A4503</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J fareleri</td><td>Charles Nehri</td><td>632C57BL/6J&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Merck</td><td>2382</td><td></td></tr><tr><td>Şeffaf 96 kuyruklu Şeffaf Düz Tabanlı Yüksek Bağlama</td><td>Corning</td><td>9018</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Glikoz</td><td>Merck</td><td>G8270&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Distile H2O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>D-Mannitol</td><td>Merck</td><td>M4125</td><td></td></tr><tr><td>İnce Penseps</td><td>FST</td><td>11445-12</td><td></td></tr><tr><td>İnce Makas</td><td>FST</td><td>14058-09</td><td></td></tr><tr><td>FITC-Dextran 4Kd</td><td>FD4</td><td>TdB Labs</td><td>Fotodegradasyona karşı hassas.</td></tr><tr><td>Isıtma pedi</td><td>Minerve</td><td>20 031 01</td><td></td></tr><tr><td>HRP</td><td>Merck</td><td>P8375</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2, 6H2O</td><td>Merck</td><td>M2670&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q H2O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>P2300 EasyMount Ussing Sistemi & Odalar</td><td>Fizyolojik Aletler</td><td>EM6-C-CE</td><td>Sistemler, odalar ve kaydırıcılar hepsi uyumlu olmalı.</td></tr><tr><td>P2306 Ussing Chamber Slider</td><td>Fizyolojik Aletler</td><td>PI-P2306</td><td>Farklı boyut ve biçimdeki dokular için farklı kaydırıcı modelleri mevcuttur.</td></tr><tr><td>QuantaBlu Florojenik Peroksidaz Substrat Kiti</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15169</td><td></td></tr><tr><td>Yeniden Kullanılabilir Besleme İğneleri Yuvarlak Uç</td><td>FST</td><td>18061-24</td><td>24 Gauge, 1.25mm uç çapı, yuvarlak uç. Steril su, %70 etanol ile yıkanmalı ve kullanımdan önce otoklavlanmalıdır.</td></tr><tr><td>Sodyum bikarbonat</td><td>Merck</td><td>S6297</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum karbonat</td><td>Merck</td><td>S7795</td><td></td></tr><tr><td>Spektrofotometre</td><td>TECAN&nbsp;</td><td>Spark 10M</td><td>137101 siyah plakalar kullanılıyorsa, üstten alma özelliğine sahip bir plaka okuyucu gereklidir.</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Merck</td><td>P7949</td><td></td></tr></tbody></table>

neonatal fare yavrularında oral gavaj ve ussing chambers kullanılarak bağırsak bariyeri bütünlüğünün fonksiyonel değerlendirmesi

Oral Gavage in Neonatal Mouse Pups and Functional Assessment of Gut Barrier Integrity Using Ussing Chambers

Standart eğri ve kuyu konsantrasyonu niceliklendirmesi Boş atışların ortalama değeri levhanın her kuyusundan çıkarıldı. Y ekseninde absorbans değerleri ve X ekseninde konsantrasyonlarla, GraphPad Prism'den "Standart bir eğriyi interpole et" fonksiyonu kullanılarak standart bir eğri oluşturuldu. Tüm standart noktalar hizalanmışsa, "Çizgi" modeli en iyi sonucu verir. Alternatif olarak, "Sigmoidal, 4 PL, X konsantrasyondur" modeli, doğrusal olmayan standart eğri interpolasyonu ile büyük esneklik ve doğru...

Neonatal fare yavrularında oral gavaj ve Ussing Chambers kullanılarak bağırsak bariyeri bütünlüğünün fonksiyonel değerlendirmesi

Growing evidence underscores the importance of the first 1,000 days of life in shaping the gut-microbiome axis. This early-life window is critical in the ...

oral-gavage-neonatal-mouse-pups-functional-assessment-gut-barrier

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Postoperatif ileus (POI) artmış morbidite ve uzamış hastanede kalış yol abdominal cerrahi bir komplikasyonudur. Profilaktik veya terapötik stratejiler yoğunlaştırılmış araştırma yokluğu nedeniyle gereklidir. Bu nedenle İÇN patofizyolojisi araştırmak ve olası tedavi seçenekleri incelemek için bir standart ve uygulanabilir fare modeli kurulmuştur.

Bağırsak Manipülasyon bir Standart Model Analizleri: Kemirgenler Barsak Motilite ve Gut Duvar İnflamasyon İşlevsel Değerlendirilmesi

Bu protokol, eksize edilmiş bağırsak dokusu preparatlarının veya "bağırsak keselerinin" bağırsak bariyer fonksiyonunun ex vivo modeli olarak kullanımını tanımlar. Bu model, sindirim hastalığının hayvan modellerinde belirli bağırsak bölgelerinde hem epitel bariyerinin hem de mukoza jel tabakasının bütünlüğünü değerlendirmek için kullanılabilir.

Ex Vivo Bağırsak Sacs Gastrointestinal Hastalık Modelleri mukozal geçirgenliği Değerlendirmek için

Bu çalışmada yenidoğan fareler için Probiyotikler gavaging kesin miktarda işlem ayrıntıları. Deneysel ayarı içerecek şekilde optimize edildi ama dozaj, yönetim yöntemleri ve bakterilerin bağırsak quantification probiyotik sınırlı değildir.

Probiyotik çalışmalar yenidoğan farelerde sonda ile besleme kullanarak

İntravital mikroskopiden yararlanan burada sunulan yöntem, canlı hayvanlarda bağırsak epitel hücresi dökülmesinin gerçek zamanlı olarak görüntülenmesidir. Bu nedenle anestezili farelerin topikal lekeli bağırsak mukozası (acriflavine ve rhodamineB-dextran) konfokal mikroskopi kullanılarak tek hücreçözünürlüğe kadar görüntülenir.

İntravital Mikroskopi Tabanlı Bir Yaklaşım Bağırsak Geçirgenliği ve Epitel Hücre Dökülme Performansını Değerlendirmek için

Düzensiz bağırsak epitel bariyer fonksiyonu ve immün yanıtlar, fizyolojik modellerin eksikliği nedeniyle kötü araştırılmaya devam eden enflamatuar bağırsak hastalığının ayırt edici özellikleridir. Burada, mukozal geçirgenliği ve lökosit işe alımını vivo olarak incelemek için iyi vaskülerleştirilmiş ve dışlanmış bir bağırsak segmenti kullanan bir fare bağırsak döngüsü modelini tarif ediyoruz.

Standartlaştırılmış Bağırsak Döngüsü Modeli Kullanılarak Farelerde Bağırsak Geçirgenliği ve Nötrofil Transepithelial Göçün Fonksiyonel Değerlendirmesi

Bağırsak epiteli sadece besin emilimini değil, aynı zamanda zararlı maddelere karşı koruma sağlar. Apikal-en epitelyal hücreler arası bileşke, yani sıkı bileşke, parasellüler çözünen ve iyon geçirgenliğini düzenler. Burada, mukozal tabakaların hazırlanması ve Ussing oda tekniği kullanılarak sıkı bağlantıların iyon seçiciliğinin değerlendirilmesi için bir protokol açıklanmaktadır.

Doğal Dokuda İntestinal Sıkı Bileşke Bariyeri ve İyon Geçirgenliğinin Ussing Oda Tekniği ile Fonksiyonel Olarak Değerlendirilmesi

Nekrotizan enterokolit (NEC), prematüre bebeklerde, özellikle çok düşük doğum ağırlıklı bebeklerde, yüksek mortalite ve belirsiz patogenez ile sıklıkla ortaya çıkan en şiddetli gastrointestinal (GI) hastalıktır. NEC'in nedeni inflamatuar immün düzenleyici sistem anormallikleri ile ilgili olabilir. Bir NEC hayvan modeli, NEC hastalığı bağışıklık araştırmaları için vazgeçilmez bir araçtır. NEC hayvan modelleri genellikle C57BL /6J yenidoğan fareleri kullanır; BALB/c yenidoğan fareleri nadiren...

Nekrotizan Enterokolit'in Yenidoğan BALB/c Fare Modeli

İnce bağırsağın farklı boyutlardaki partikülleri nasıl işlediğini incelemek için, ince bağırsak geçişini belirlemek için yerleşik bir in vivo yöntemi değiştirdik.

Luminal Partiküllerin Murine İnce Bağırsak Mekanosenizasyonunun İncelenmesi

Bu çalışmada, floresein-izotiyosiyanat etiketli (FITC) dekstran, hem in vivo hem de plazma ve dışkı örneklerinde bağırsak geçirgenliğini değerlendirmek için farelere oral gavaj yoluyla uygulanmaktadır. Bağırsak bariyeri fonksiyonu birçok hastalık sürecinde etkilendiğinden, bu doğrudan ve nicel tahlil çeşitli araştırma alanlarında kullanılabilir.

Floresein-İzotiyosiyanat-Etiketli Dextran Kullanarak Farelerde Bağırsak Bariyer Bütünlüğünün Değerlendirilmesi

Bu protokol, nekrotizan enterokolitin (NEC) yenidoğan fare modelini ve ardından yenidoğan murin ince bağırsağından lamina propria bağışıklık hücrelerinin izolasyonunu özetlemektedir.

İmmün Hücre Profili Oluşturma için Nekrotizan Enterokolit ve Lamina Propria İzolasyonunun Yenidoğan Fare Modeli

Bu protokolün amacı, fırın diş eti epitel bariyerinin bütünlüğünü nicel olarak değerlendirmek için standart bir yaklaşım sağlamaktır; diş eti yüzeyine farklı moleküler boyutlarda floresans etiketli dekstransları in vivo uygulanarak ve ardından tek foton mikroskopi sistemiyle ex vivo görüntüleme uygulanır.

Fusesans İzleyicilerle Fare Diş Etili Epitelyal Bariyerinin Fonksiyonel Değerlendirmesi

Keşfedin, oral gavaj ve Ussing Chambers kullanarak neonatal fare yavrularında bağırsak bariyeri bütünlüğünü fonksiyonel olarak değerlendirme yöntemini. Bu protokol, erken yaşam maruziyetlerinin ve mikroRNA'ların bağırsak geçirgenliği üzerindeki etkilerini incelemek için güvenilir bir araç sunar.

Neonatal fare yavrularında oral gavaj ve Ussing Chambers kullanılarak bağırsak bariyeri bütünlüğünün fonksiyonel değerlendirmesi (Video) | JoVE Journal

Neonatal fare yavrularında oral gavaj ve Ussing Chambers kullanılarak bağırsak bariyeri bütünlüğünün fonksiyonel değerlendirmesi

Daha fazla video keşfet