Name: İnsan SOD1-G93A ALS farelerinde hassas CNS hedefleme ve öngörücü etkinlik için SOD1-ASOların bel intratekal enjeksiyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-24T13:20:00.000+00:00
Duration: 4 min 41 s
Description: Keşfedin, farelerde serbest elle lomber intratekal enjeksiyon yöntemiyle SOD1 hedefleyen antisens oligonükleotidlerin ALS modelinde gen ekspresyonunu düşürme etkinliğini. Bu minimal invaziv teknik, santral sinir sistemi ilaç teslimi için güçlü translayonal potansiyel sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>BT enjeksiyonu için 0.3 mL 29 G, 1/2 inç insülin şırıngası</td><td>Smiths Tıp</td><td>4429-3</td><td></td></tr><tr><td>0,5 mm çapında steril matkap buru</td><td>Güzel Bilimler Araçları (FST) veya eşdeğeri</td><td>1900705</td><td></td></tr><tr><td>5-0 Prolene Monofilament Dikiş</td><td>Ethicon&nbsp;</td><td>8870H&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Alkol sürüntü çubukları</td><td>Dynarex</td><td>1203</td><td></td></tr><tr><td>Alkol sürüntü çubukları</td><td>Dynarex</td><td>1203</td><td></td></tr><tr><td>Analjezik- Buprenorfin Uzatılmış salınımlı</td><td></td><td></td><td>Reçete Gereklidir</td></tr><tr><td>Hayvan makası</td><td>Wahl</td><td>08787-450A</td><td></td></tr><tr><td>Applied Biosystems Yüksek Kapasiteli cDNA Ters Transkripsiyon Kiti</td><td>Fisher Scientific</td><td>43-688-14</td><td></td></tr><tr><td>Bead Ruptor 24 Homojenizer</td><td>Omni International, Inc.</td><td>19-070</td><td></td></tr><tr><td>Kan toplama ve serum ayırma tüpleri</td><td>Beckton Dickinson (BD)</td><td>365967</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür dihidrat</td><td>JT Baker</td><td>1335</td><td></td></tr><tr><td>Dijital şırınga pompası</td><td>Harvard Aparatı</td><td>70-4507</td><td></td></tr><tr><td>Ella Otomatik İmmünoanaliz Sistemi</td><td>R& D Sistemleri</td><td>600-100</td><td></td></tr><tr><td>Göz Merhemi-Puralube</td><td>Decra</td><td>17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>Geno/Grinder</td><td>SPEX SamplePrep</td><td>2010</td><td></td></tr><tr><td>Germinator 500 Kuru sterilizatör</td><td>Braintree Scientific veya eşdeğeri</td><td>GER 5287-120V</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton şırıngası ve iğneli (26s/2"/2 (uçlu stili)</td><td>Hamilton</td><td>80300</td><td>26s/2"/2:&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 26s: 26 G; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 2" uzunluk; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 2: Nokta Stili</td></tr><tr><td>Sert Doku Homojenleştirici Karışım 2.8 mm Seramik (2 mL takviyeli tüpler) (50/pk)</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-280-9286</td><td>Tedarikçi: Revvity Health Sciences Inc</td></tr><tr><td>Isıtma Pedi</td><td>K& H Üretimi</td><td>1060</td><td></td></tr><tr><td>ICV platformu</td><td>Stoelting</td><td>502063</td><td></td></tr><tr><td>İzofloran odası ve temizleyici sistemi</td><td>VetEquip</td><td>901820</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum klorür heahidrat</td><td>EMD Kimyasalları</td><td>1.05832</td><td></td></tr><tr><td>Metzenbaum Makası</td><td>Güzel Bilimler Araçları (FST) veya eşdeğeri</td><td>14016-14</td><td></td></tr><tr><td>Fare GAPDH TaqMan Test Kimliği Mm99999915_g1</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>4331182</td><td></td></tr><tr><td>CMAP için İğne Elektrotları, 28 G</td><td>Natus Medical (Teca markası)</td><td>#902-DMF25-TP</td><td></td></tr><tr><td>NutraGel: Tam beslenme</td><td>Bio Serv</td><td>NGB-2</td><td></td></tr><tr><td>Olsen-Hegar İğne Tutacağı</td><td>Güzel Bilimler Araçları (FST) veya eşdeğeri</td><td>12502-12</td><td></td></tr><tr><td>Poloksamer 188</td><td>Mutchler</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Potasyum klorür</td><td>JT Baker</td><td>3045</td><td></td></tr><tr><td>Ön amplifikatör (CMAP için)</td><td>Dünya Hassas Aletleri (WPI)</td><td>SYS-DAM50</td><td></td></tr><tr><td>ProteinSimple pNFH kiti</td><td>R& D Sistemleri</td><td>SPCKB-PS-000519</td><td></td></tr><tr><td>Providone-Iodide sürüntü çubukları</td><td>Dynarex</td><td>1201</td><td></td></tr><tr><td>QIAzol Liz Reagenti&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>79306</td><td></td></tr><tr><td>QuantStudio 12K Flex sistemi</td><td>Uygulamalı Biyosistemler</td><td>4471087</td><td></td></tr><tr><td>Scoopula</td><td>Fisherbrand</td><td>01-257-567</td><td></td></tr><tr><td>Signal v6.04</td><td>Cambridge Elektronik Tasarımı</td><td>Seri No. 061144</td><td>CMAP Yazılımı&nbsp;</td></tr><tr><td>Küçük hayvan kurtarma odası</td><td>Termocare Taşınabilir Hayvan Yoğun Bakım Üniteleri Model FW-1</td><td>FW-1&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Dijital ekran konsollu küçük hayvan stereotaksik çerçevesi</td><td>KOPF</td><td>Model 940&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>SOD1 G93A fareleri</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>Stok # 004435</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Klorür</td><td>EMD Kimyasalları</td><td>1.16224</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Fosfat Dibazik Ansusuz</td><td>Sigma Aldrich</td><td>55136</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Fosfat Monobazik Dihidrat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>3819</td><td></td></tr><tr><td>Steril tek kullanımlık bistür</td><td>Med Vet International veya benzeri</td><td>MIL4410</td><td></td></tr><tr><td>Steril perde</td><td>Dynarex</td><td>4410</td><td></td></tr><tr><td>Steril gazlı bez pedler</td><td>Dynarex veya eşdeğeri</td><td>DRX-3354</td><td></td></tr><tr><td>Steril salin</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14190094</td><td></td></tr><tr><td>Steril cerrahi eldivenler</td><td>Ansell veya eşdeğeri</td><td>20277290</td><td></td></tr><tr><td>Uyarıcı İzolatör (CMAP için)</td><td>Dünya Hassas Aletleri (WPI)</td><td>SYS-A365D</td><td></td></tr><tr><td>Stoelting Micro Matkap&nbsp;</td><td>Stoelting</td><td>58610</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi kavisli forseps (Graefe Penseps - Titanyum)</td><td>Güzel Bilimler Araçları (FST) veya eşdeğeri</td><td>11652-10</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi dik penseps (Graefe penseps - Titanyum)</td><td>Güzel Bilimler Araçları (FST) veya eşdeğeri</td><td>11650-10</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi bant</td><td>Dynarex veya eşdeğeri</td><td>3572</td><td></td></tr><tr><td>Analjezik enjeksiyonu için deri altı enjekte için şırınge</td><td>BD</td><td>309582</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Hızlı İleri Master Mix</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>4444556</td><td></td></tr><tr><td>Su (Milli-Q)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tartı</td><td>Mettler Toledo&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; Model XSR2002S</td><td>23-112795</td><td></td></tr><tr><td>Vahşi tip C57BL/6J fareleri</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>Stok # 000664</td><td></td></tr></tbody></table>

İnsan sod1-g93a als farelerinde hassas cns hedefleme ve öngörücü etkinlik için sod1-aso'ların bel intratekal enjeksiyonu

Lumbar Intrathecal Injection of SOD1-ASOs for Precise CNS Targeting and Predictive Efficacy in Human SOD1-G93A ALS Mice

Yetişkin farelerde intrathecal (BT) uygulamanın hassasiyetini ve verimliliğini titizlikle tanımlamak için, önce CSF akışı ve doku geçirimliliğinin görsel izleyicisi olarak Evans mavi boyasını (%0,5) kullanarak temel doğrulama deneyleri yaptık. Yetişkin yabani tip C57BL/6J fareleri (süst #000664; ağırlık 25-30g) hareket artefaktlarını ortadan kaldırmak için oksijende izofluran (%2-2,5) ile anestezi edildi ve bel bölgesi aseptik koşullarda hazırlandı. IT enjeksiyonları, doz/hacim ve boyama yoğunluğu ilişkisi değerlendirilmek için 20 μL, 30 μL ve 50 μL tek artan dozlarda subaraknoid boşluğa lomber ponksiyon ile yapıldı. İğnenin doğru yerleşimi, enjeksiyon sırasında kuyruk sallanması veya negatif direnç gözlemlenerek doğrulandı.
Boya teslimatından 5 dakika sonra, fareler damar yapısından kalan boya çıkarmak için soğuk fosfat-tamponlu tuzlu su (PBS) ile transkardiyal perfüze edildi. Omurilik daha sonra nazikçe çıkarılıp standart aydınlatma altında nötr bir arka plan üzerinde fotoğraflandı. Görsel inceleme, boya alan tüm farelerde Evans mavisinin dorsal-ventral dağılımı tutarlı ve eşit olduğunu ortaya koydu. Daha yüksek enjeksiyon hacimleri, rostrokaudal eksen boyunca yoğunlaşmış boya doygunluğuyla korelasyonluydu, ancak 20 μL hacimle enjekte edilen farede bile sağlam boyama da vardı. Buna karşılık, Evans mavi boyası almayan farelerde (steril salin enjekte edilen kontrol grubu) omurilik dokusunda görünür bir renk veya arka plan lekesi görülmemiştir (Şekil 1). Bu bulgular, farelerde yapılan BT enjeksiyonlarının omurilik boyunca hızlı ve tekrarlanabilir çözünen taşınmasını mümkün kıldığını göstermektedir. Bu deneylerin sınırlamaları arasında, boya dağılımının nicel değerlendirmesinin olmaması ve ASO uygulaması için kullanılan 10 μL enjeksiyon hacminde boya dağılım analizinin olmaması yer almaktadır. Ancak, insan SOD1-G93A farelerinde gen ifadesi düzeyinde sonraki hedef etkileşim ölçümlerinde, insan SOD1-spesifik gen ekspresyonu analizi kullanılarak nicel ölçümler gerçekleştirildi. ASO uygulaması için sonraki deneylerde kullanılan 10 μL enjeksiyon hacmi, farelerde güvenli ve iyi tolere edilen dozu sağlamak için seçildi ve önceki çalışmalara dayanarak yeterli CNS maruziyeti sağlamasıbeklenmektedir 38.
Bu anatomik doğrulama üzerine inşa ederek, SOD1-ALS modellerinde doğrulanmış bir tedavi stratejisi olan mutant SOD1'i hedefleyen ASO'lar kullanarak BT teslimatının işlevsel önemini değerlendirdik. İnsan mutant SOD1 genini taşıyan hemizigot SOD1-G93A transgenik fareler, öngörülebilir motor nöron dejenerasyonu ve nöromüsküler gerileme gösterir; bu da onları köklü bir preklinik model haline getirir. 5 haftalıkken, semptomatik başlangıçtan önce, farelere 100 μg konsantrasyonda 100 μg konsantrasyonda tek bir SOD1-spesifik ASO bolusu verildi. Bu doz, McCampbell ve ark. (2018)36 tarafından bildirilen farelerde ICV uygulaması kullanılarak yapılan önceki optimizasyon çalışmalarına dayanarak seçilmiştir. BT ile ICV teslimatı arasındaki etkinliği karşılaştırmak için, ayrı bir grup aynı ASO dozunda stereotaktik teslimat kullanılarak ICV enjeksiyonları aldı. Kontroller, IT yolu üzerinden Inactive ASO (hedefsiz kontrol) aldı.
Tedaviden beş hafta sonra (10 haftalıkken), fareler hafif izoflüran anestezisi altında bileşik kas aksiyon potansiyeli (CMAP) testi geçirdi. Standart siyatik sinir stimülasyon protokolleriyle arka uzuv kaslarından alınan CMAP kayıtları, hem BT hem de ICV ile tedavi edilen gruplarda, aktif olmayan ASO ile tedavi edilen kontrollere kıyasla genliğin önemli korunduğunu gösterdi (p &lt; 0.0001, tek yönlü ANOVA ile Tukey'nin post -hoc testi). Önemli olarak, genlik koruması BT ve ICV teslimat yöntemleri arasında anlamlı bir fark yaratmadı (p &gt; 0.05), bu da benzer nöromüsküler korumayı gösterir (Şekil 2A).
Nöron bütünlüğünün sistemik biyobelirteçlerini değerlendirmek için, fosforile edilmiş nörofilament ağır zincirinin (pNFH) serum seviyeleri yüksek hassasiyetli bir elektrokemilyüminsans testi kullanılarak ölçüldü. Enjeksiyon sonrası 5 hafta zaman noktasında alınan kan örneklerinde, ASO ile tedavi edilen farelerde araçla tedavi edilen kontrollere göre pNFH konsantrasyonunda &gt;%40 azalma (p &lt; 0.0001) gösterilmiştir ve BT ile ICV modaliteleri arasında anlamlı bir fark gözlemlenmemiştir (Şekil 2B). Uniform moleküler biyobelirteç yanıtı, elektrofizyolojik verileri doğrularak, bu ALS modelinde BT sunumunun nörodejeneratif süreçleri etkili bir şekilde azalttığını öne sürmektedir.
SOD1-ASO'nun moleküler düzeyde hedef etkileşimini değerlendirmek için, disseksiye edilmiş servikal ve torasik omurilik dokularında ters transkripsiyon nicel PCR (RT-qPCR) uyguladık. Toplam RNA, yüksek saflık (A260/A280&gt;1.8) sağlamak için kolon tabanlı bir protokol kullanılarak çıkarıldı, ardından rastgele heksamer primingiyle cDNA sentezi yapıldı. İnsan SOD1 transkriptlerini hedefleyen nicel PCR amplifikasyonu, GAPDH'ye normalleştirilmiş olarak, BT teslimatından sonra ortalama %60 ve ICV sonrası %35 düşüş göstermiştir; her ikisi de aktif olmayan ASO kontrollerine göre anlamlıdır (her ikisi &lt; 0.0001 olur). Teslimat yolları arasındaki doğrudan karşılaştırma, BT teslimatında anlamlı şekilde daha fazla knockdown (p &lt; 0.0001) göstermiştir; bu da doğrudan omurilik erişimi yoluyla omurilikte daha etkili hedef etkileşimini gösterir (Şekil 3). Diğer CNS bölgelerinde hedef etkileşimini değerlendirmek için daha fazla çalışma gereklidir.
Bu kapsamlı veriler, IT enjeksiyonlarını, fare modellerinde ASO'ların merkezi sinir sistemine (CNS) iletmek için kesin, tekrarlanabilir ve minimal invaziv bir teknik olarak güçlü doğrulama sunmaktadır. BT yönetimi, nörolojik fonksiyonun (CMAP) sürekli korunması, hastalıkla ilgili biyobelirteçlerin normalizasyonu (pNFH) ve hedeflenen CNS bölgelerinde insan SOD1 transkriptlerinin sağlam moleküler etkisi dahil olmak üzere geniş bir sonuç ölçütleri yelpazesinde ICV teslimatıyla eşdeğer terapötik etkinlik gösterdi. Bu bulgular, IT sunumunun CNS hedefli ASO tedavileri için klinik olarak çevrilebilir bir yol olarak çok yönlülüğünü vurguluyor; ICV'ye eşdeğer etkinlik sunarken, prosedürel sadeliği ve azaltılmış invazivliği korur. Bu nedenle, BT ve ICV uygulaması, CNS hedefli müdahaleler için eşit derecede uygulanabilir yaklaşımlardır ve anatomik erişilebilirlik, prosedürel fizibilite ve terapötik bağlama bağlı olarak preklinik ortamlarda esneklik sunar. Bu durum, BT sunumunu gelecekteki CNS hedefli tedaviler için umut vadeden bir çeviri platformu olarak konumlandırıyor. Translasyonel çalışmaları desteklemek için, beyin omurilik sıvısı, çeşitli CNS bölgeleri ve hedef hücre alımı içindeki farmakokinetik dağılımın değerlendirilmesi için floresans in situ hibritizasyon veya immünoflüoresans gibi tekniklerle daha fazla preklinik çalışmalar yapılmasını öneriyoruz.
<img alt="Şekil 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69788/69788fig1.jpg" data-altupdatedat="1778562059000" data-alt="Figure 1"> 
Şekil 1: Yetişkin farelerde intratekal enjeksiyon sonrası Evans mavi boya dağılımının görselleştirilmesi. Evans Blue Dye (%0,5) yetişkin farelere doğrudan intratekal (IT) enjeksiyonla uygulanarak omurilik dağılımını niteliksel olarak değerlendirdi. Üç farklı boya hacmi 20 μL, 30 μL ve 50 μL ayrı deneysel gruplarda (n = hacim koşulu başına 1 fare) teslim edildi. Enjeksiyondan sonra, omurilik hücreleri alındı ve boya nüfuzu değerlendirilerek doku boyunca lekelenme yoğunluğuna göre değerlendirildi. Omurilik dokusunun görüntüleri, her enjeksiyon hacmiyle ilişkili boya dispersiyasının boyutunu gösterir; bu da omurilik boyunca kapsayıcı ve boyama yoğunluğunda doz hacmine bağlı bir artış göstermektedir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69788/69788fig1large.jpg" target="_blank">Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Şekil 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69788/69788fig2v2.jpg" data-altupdatedat="1778562059000" data-alt="Figure 2"> 
Şekil 2: SOD1 hedefleyen antisens oligonukleotid tedavisi, farelerde motor fonksiyonu geri kazandırır ve patolojik nörofilament seviyelerini azaltır. Yetişkin SOD1-G93A transgenik fareler, 5 haftalıkta intratekal (IT) veya intracerebroventriküler (ICV) enjeksiyonla aktif SOD1 hedefleyen antisens oligonukleotid (SOD1-ASO) ya da IT enjeksiyonu ile aktif olmayan kontrol ASO almıştır. Terapötik etki 10 haftalıkta, tedavi sonrası 5 haftaya karşılık gelen 10 haftalıkta değerlendirildi. (A) Tedavi edilen hayvanlarda nöromüsküler fonksiyonu değerlendirmek için bileşik kas aksiyon potansiyeli (CMAP) kayıtları alındı. SOD1-ASO ile tedavi edilen gruplar (n = 5 - 6 kişi) kontrol grubuna göre CMAP düşüşünde tersine dönüş gösterdi ve bu fonksiyonel iyileşmeyi gösterdi. (B) 10. haftada toplanan serumdan (n = 5 - 8) nörodejenerasyonun bir biyobelirteç noktası olan fosforile nörofilament ağır zincirinin (pNFH) çevresel seviyeleri nicele edildi. SOD1-ASO tedavisi, dolaşımdaki pNFH seviyelerinde kontrol seviyesine kıyasla anlamlı bir azalmaya yol açtı ve hastalıkla ilişkili nöron hasarının zayıflamasına işaret etti. Tüm veriler ortalama SD ± olarak sunulmuştur. İstatistiksel anlamlılık tek yönlü varyans analizi (ANOVA) ile belirlenmiştir; ardından Tukey'nin çoklu karşılaştırma testi uygulanmıştır; p-değerleri ≤ 0.0001 tedavi grupları arasında sağlam farklılıkları göstermektedir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69788/69788fig2v2large.jpg" target="_blank">Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Şekil 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69788/69788fig3.jpg" data-altupdatedat="1778562059000" data-alt="Figure 3"> 
Şekil 3: SOD1-ASO uygulaması, transgenik SOD1-G93A fare omuriliğinde insan SOD1 mRNA ifadesini önemli ölçüde bastırır. SOD1 hedefleyen antisens oligonukleotidin (SOD1-ASO) hedefleme etkinliğini değerlendirmek için, intratekal (IT) veya intracerebroventriküler (ICV) enjeksiyonla verilen SOD1-G93A transgenik farelerinden alınan omurilik dokumasının servikal/torakik kesiti ters transgenik farelerden (uygulamadan 5 hafta sonra) insan SOD1 mRNA ekspresyonu için ters transkripsiyon kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (RT-qPCR) kullanılarak analiz edildi. İnsan SOD1 transkript seviyeleri, inaktif ASO ile tedavi edilen grupta ekspresyona göre nicelendirildi ve normalleştirildi. Şekil, her tedavi grubu için insan SOD1 mRNA'sında (GAPDH olarak normalleştirilmiş olarak) katlama değişimini (n = grup başına 5-7 fare) göstermekte olup, SOD1-ASO uygulamasına yanıt olarak önemli bir düşüş olduğunu vurgulamaktadır. Veriler ortalama ± SD olarak sunulmaktadır. Gruplar arasındaki istatistiksel farklılıklar, tek yönlü varyans analizi (ANOVA) kullanılarak belirlenmiştir; ardından Tukey'nin çoklu karşılaştırma testi uygulanmıştır; p-değerleri ≤ 0.0001 tedavi grupları arasındaki sağlam farklılıkları göstermektedir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69788/69788fig3large.jpg" target="_blank">Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bileşen</td>
			<td>FW</td>
			<td>Toplama Miktarı (L veya kg başlıkta)</td>
			<td>Birimler</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodyum Fosfat Monobazik Dihidrat</td>
			<td></td>
			<td>0.034</td>
			<td>g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodyum Fosfat Dibazik Ansusuz</td>
			<td>142</td>
			<td>0.111</td>
			<td>g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodyum Klorür</td>
			<td>58.44</td>
			<td>8.766</td>
			<td>g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potasyum klorür</td>
			<td>74.56</td>
			<td>0.224</td>
			<td>g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kalsiyum klorür dihidrat</td>
			<td>147.02</td>
			<td>0.206</td>
			<td>g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnezyum klorür heksahidrat</td>
			<td></td>
			<td>0.163</td>
			<td>g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Su (Milli-Q)</td>
			<td></td>
			<td>993</td>
			<td>g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poloksamer 188</td>
			<td></td>
			<td>0.01</td>
			<td>g</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tablo 1: aCSF bileşimi.
Ek Şekil 1: Bel intratekal enjeksiyonu için fare konumlandırması. Karın altına yerleştirilen kavisli bir spatula veya scoopula omurgayı büker, omurgalar arası boşluğu genişletir. Enjeksiyon, gösterildiği gibi omurganın medial ekseni boyunca doğru hizalanarak L4-L5 veya L5-L6 seviyesini hedefliyor. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69788/Supplementary%20Figure%201.pdf" target="_blank">Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Dosya 1: ASO dizisi ve kimyası. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69788/Supplementary%20File%201.pdf" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

İnsan SOD1-G93A ALS farelerinde hassas CNS hedefleme ve öngörücü etkinlik için SOD1-ASO'ların bel intratekal enjeksiyonu

Intrathecal (IT) administration of central nervous system (CNS)-targeted therapeutics offers a minimally invasive route for direct drug delivery into the ...

lumbar-intrathecal-injection-sod1-asos-for-precise-cns-targeting

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Sinir habercisi nakli, korunması ve / veya spinal kord yaralanması (SCI) ve motor nöron bozukluğu, amiyotrofik lateraller skleroz (ALS) kaybettim / işlevsiz servikal frenik motor nöronların yerini gelecek vaat eden bir strateji. Biz, ALS ve SKY kemirgen modellerinde servikal omurilik ventral boynuz hücre teslimat için bir protokol sağlar.

Amyotrophic Lateral Sclerosis ve Travmatik Spinal Kord Yaralanması Servikal Ventral Horn Hedefleme intraspinal Hücre Transplantasyonu

Amiyotrofik lateral skleroz (ALS) için bir fare modelinde klinik ve davranışsal incelenmiştir. Beraberindeki immünohistolojik analizi için bir önkoşul olarak omurilik hazırlanmasında detaylı bir şekilde anlatılır.

Amyotrofik Lateral Skleroz için Fare Modeli (ALS) Klinik Test ve Omurilik Kaldırma

Ya bir kateterin yerleştirilmesi ya da farelerde sağ yan ventrikül içine, bir bolus enjeksiyonu gerçekleştirerek merkezi sinir sistemi ilaçları hedeflemek için bir yöntem açıklanmaktadır. Biz antisens oligonükleotidler teslim odaklanmıştır. Bu teknik, diğer ilaçlara ve sıçanlara, kolaylıkla adapte edilebilir.

Kemirgen Merkezi Sinir Sistemi İlaçların doğrudan Intraventriküler teslim

Bu rapor, kısa süreli hafif anestezi altında fare lumbar spinal kordda siRNA yerelleştirilmiş transfeksiyonu için intratekal iğne giriş basit ve hızlı bir yöntem açıklanır.

Farelerde Hızlı noninvaziv Lomber İntratekal enjeksiyon yoluyla Vivo siRNA&#39;nın Transfaksiyon ve Omurilik Gen demonte olarak

Bu video protokolü, amyotrofik lateral sklerozun transgenik fare modelindeki nöromüsküler eksiklikleri değerlendirmek için hassas, güvenilir ve hızlı bir yöntemi tanımlar.

ALS SOD1-G93A Fare Modeli hastalığın ilerlemesine değerlendirilmesi için Hızlı Fenotipik Nörolojik Puanlama Sistemi

Bu çalışmanın amacı yetişkin farelerde yeni bir subpial gen dağıtım tekniği kullanarak spinal adeno-ilişkili virüs 9 (AAV9) aracılı gen dağıtımının potensi ve güvenliğini geliştirmek ve doğrulamaktı.

Yetişkin Farelerde Subpial Adeno-ilişkili Virüs 9 (AAV9) Vektör Teslimatı

Burada %1 lidokain hidroklorür viral bir çözümde küçük hayvanlar için verimli adeno ilişkili virüs teslim edilmesini sağlamak ve iletim verimliliği merkezi tahmin etmek için bir skorlama sistemi kurmak için bir doğrudan intratekal enjeksiyon tekniği mevcut sinir sistemi geçici zayıflık lidokain tarafından indüklenen derecesine göre.

Rekombinant Adeno ilişkili virüs yetişkin farelerde doğrudan intratekal enjeksiyon

Burada, omurganın lomber intratekal uzayına bir kateter yerleştirerek sıçan merkezi sinir sistemine ilaç teslim etmek için bir yöntem açıklıyoruz. Bu yöntem diğer terapötik yöntemlerin de teslimi için uygun olsa da, antisense oligonükleotidlerin teslimatına odaklanıyoruz.

Sıçan Merkezi Sinir Sisteminde Antisense Oligonükleotidlerin İntinal Teslimi

Genç sıçanın bel sarnıcına enjeksiyon yapmak için cerrahi bir prosedür tarif edilmiştir. Bu yaklaşım, gen terapisi vektörlerinin intratekal verilmesi için kullanılmıştır, ancak bu yaklaşımın hücreler ve ilaçlar dahil olmak üzere çeşitli terapötikler için kullanılabileceği tahmin edilmektedir.

Juvenil Sıçanlarda Lomber Sarnıç Enjeksiyonu ile İntratekal Vektör Verilmesi

Lomber intratekal enjeksiyon, gen terapisini merkezi sinir sistemine iletmek için translasyonel olarak ilgili bir uygulama yolunu temsil eder. Yenidoğan, juvenil ve yetişkin farelerde ve sıçanlarda lomber intratekal enjeksiyonlar için bu kapsamlı standartlaştırılmış protokol, araştırmacılara klinik öncesi gen tedavisi çalışmaları için bu tekniği benimsemede rehberlik etmeyi amaçlamaktadır.

Farelerde ve Sıçanlarda Merkezi Sinir Sistemi Hedeflemesi için Gen Tedavisi Vektörlerinin Lomber İntratekal Enjeksiyonu

Keşfedin, farelerde serbest elle lomber intratekal enjeksiyon yöntemiyle SOD1 hedefleyen antisens oligonükleotidlerin ALS modelinde gen ekspresyonunu düşürme etkinliğini. Bu minimal invaziv teknik, santral sinir sistemi ilaç teslimi için güçlü translayonal potansiyel sunar.

İnsan SOD1-G93A ALS farelerinde hassas CNS hedefleme ve öngörücü etkinlik için SOD1-ASO'ların bel intratekal enjeksiyonu

Daha fazla video keşfet