Name: Drosophila embriyonik epitelinde çekirdek pileli septat bağlantı proteinlerini tanımlamak için immünboyama ve boya penetrasyonu deneyleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-27T14:25:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: Öğrenin, Drosophila embriyolarında pleated septat bağlantıların organizasyonunu ve bariyer fonksiyonunu immünboyama ve boya penetrasyonu deneyleriyle değerlendirin. Bu yöntemler, gen fonksiyonlarını in vivo çalışmak için araştırmacılara yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Farquhar, M. G., Palade, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Junctional+complexes+in+various+epithelia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Junctional complexes in various epithelia.</a> J. Cell Biol. 17, 375-412 (1963).</li>
<li>Lord, B. A., DiBona, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+septate+junction+in+the+regulation+of+paracellular+transepithelial+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Role of the septate junction in the regulation of paracellular transepithelial flow.</a> J. Cell Biol. 71 (3), 967-972 (1976).</li>
<li>Noirot-Timothée, C., Smith, D. S., Cayer, M. L., Noirot, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septate+junctions+in+insects%3A+comparison+between+intercellular+and+intramembranous+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Cell%22%5BJournal%5D)">Septate junctions in insects: comparison between intercellular and intramembranous structures.</a> Tissue Cell. 10 (1), 125-136 (1978).</li>
<li>Rouka, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+septate+junction+beyond+barrier+function%3A+review+of+the+literature%2C+prediction+of+human+orthologs+of+SJ-related+proteins+and+identification+of+protein+domain+families%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol%22%5BJournal%5D)">The Drosophila septate junction beyond barrier function: review of the literature, prediction of human orthologs of SJ-related proteins and identification of protein domain families.</a> Acta Physiol. 231 (1), e13527(2021).</li>
<li>Poodry, C., Schneiderman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ultrastructure+of+the+developing+leg+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Roux+Arch.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The ultrastructure of the developing leg of Drosophila melanogaster.</a> Roux Arch. Dev. Biol. 166, 1-44 (1970).</li>
<li>Tepass, U., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+cellular+junctions+in+the+Drosophila+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">The development of cellular junctions in the Drosophila embryo.</a> Dev. Biol. 161 (2), 563-596 (1994).</li>
<li>Rice, C., De, O., Alhadyian, H., Hall, S., Ward, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanding+the+junction%3A+new+insights+into+non-occluding+roles+for+septate+junction+proteins+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Expanding the junction: new insights into non-occluding roles for septate junction proteins during development.</a> J. Dev. Biol. 9 (1), 11(2021).</li>
<li>Baumgartner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+neurexin+is+required+for+septate+junction+and+blood-nerve+barrier+formation+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A Drosophila neurexin is required for septate junction and blood-nerve barrier formation and function.</a> Cell. 87 (6), 1059-1068 (1996).</li>
<li>Fehon, R. G., Dawson, I. A., Artavanis-Tsakonas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Drosophila+homologue+of+membrane-skeleton+protein+4.1+is+associated+with+septate+junctions+and+is+encoded+by+the+coracle+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A Drosophila homologue of membrane-skeleton protein 4.1 is associated with septate junctions and is encoded by the coracle gene.</a> Development. 120 (3), 545-557 (1994).</li>
<li>Hall, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macroglobulin+complement-related+%28Mcr%29+encodes+a+protein+required+for+septate+junction+organization+and+paracellular+barrier+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Macroglobulin complement-related (Mcr) encodes a protein required for septate junction organization and paracellular barrier function in Drosophila.</a> Development. 141, 889-898 (2014).</li>
<li>Nelson, K. S., Furuse, M., Beitel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+claudin+Kune-kune+is+required+for+septate+junction+organization+and+tracheal+tube+size+control%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The Drosophila claudin Kune-kune is required for septate junction organization and tracheal tube size control.</a> Genetics. 185 (3), 831-839 (2010).</li>
<li>Paul, S. M., Ternet, M., Salvaterra, P. M., Beitel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Na%E2%81%BA%2FK%E2%81%BA-ATPase+is+required+for+septate+junction+function+and+epithelial+tube-size+control+in+the+Drosophila+tracheal+system%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The Na⁺/K⁺-ATPase is required for septate junction function and epithelial tube-size control in the Drosophila tracheal system.</a> Development. 130 (20), 4963-4974 (2003).</li>
<li>Nilton, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((coiled+and+crimpled+are+three+Ly6-like+proteins+required+for+proper+localization+of+septate+junction+components%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">coiled and crimpled are three Ly6-like proteins required for proper localization of septate junction components.</a> Development. 137 (14), 2427-2437 (2010).</li>
<li>Tiklova, K., Senti, K. A., Wang, S., Gräslund, A., Samakovlis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+septate+junction+assembly+relies+on+melanotransferrin+iron+binding+and+endocytosis+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Epithelial septate junction assembly relies on melanotransferrin iron binding and endocytosis in Drosophila.</a> Nat. Cell Biol. 12 (11), 1071-1077 (2010).</li>
<li>Bilder, D., Schober, M., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+activity+of+PDZ+protein+complexes+regulates+epithelial+polarity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Integrated activity of PDZ protein complexes regulates epithelial polarity.</a> Nat. Cell Biol. 5 (1), 53-58 (2003).</li>
<li>Woods, D. F., Bryant, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+discs-large+tumor+suppressor+gene+of+Drosophila+encodes+a+guanylate+kinase+homolog+localized+at+septate+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The discs-large tumor suppressor gene of Drosophila encodes a guanylate kinase homolog localized at septate junctions.</a> Cell. 66 (3), 451-464 (1991).</li>
<li>Hall, S., Ward, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septate+junction+proteins+play+essential+roles+in+morphogenesis+throughout+embryonic+development+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22G3+%28Bethesda%29%22%5BJournal%5D)">Septate junction proteins play essential roles in morphogenesis throughout embryonic development in Drosophila.</a> G3 (Bethesda). 6 (8), 2375-2384 (2016).</li>
<li>Genova, J. L., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroglian%2C+Gliotactin%2C+and+the+Na%E2%81%BA%2FK%E2%81%BA-ATPase+are+essential+for+septate+junction+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Neuroglian, Gliotactin, and the Na⁺/K⁺-ATPase are essential for septate junction function in Drosophila.</a> J. Cell Biol. 161 (5), 979-989 (2003).</li>
<li>Ward, R. E., Lamb, R. S., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+conserved+functional+domain+of+Drosophila+coracle+is+required+for+localization+at+the+septate+junction+and+has+membrane-organizing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">A conserved functional domain of Drosophila coracle is required for localization at the septate junction and has membrane-organizing activity.</a> J. Cell Biol. 140 (6), 1463-1473 (1998).</li>
<li>De, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septate+junction+proteins+are+required+for+cell+shape+changes%2C+actomyosin+reorganization+and+cell+adhesion+during+dorsal+closure+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Cell+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Septate junction proteins are required for cell shape changes, actomyosin reorganization and cell adhesion during dorsal closure in Drosophila.</a> Front. Cell Dev. Biol. 10, 947444(2022).</li>
<li>Laprise, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+FERM+protein+Yurt+is+a+negative+regulatory+component+of+the+Crumbs+complex+that+controls+epithelial+polarity+and+apical+membrane+size%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">The FERM protein Yurt is a negative regulatory component of the Crumbs complex that controls epithelial polarity and apical membrane size.</a> Dev. Cell. 11 (3), 363-374 (2006).</li>
<li>Laprise, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurexin+IV+and+the+Na%E2%81%BA%2FK%E2%81%BA-ATPase+form+a+novel+group+of+epithelial+polarity+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neurexin IV and the Na⁺/K⁺-ATPase form a novel group of epithelial polarity proteins.</a> Nature. 459 (7250), 1141-1145 (2009).</li>
<li>Oshima, K., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+protein+dynamics+within+the+septate+junction+reveals+a+highly+stable+core+protein+complex+that+does+not+include+the+basolateral+polarity+protein+Discs+large%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Analysis of protein dynamics within the septate junction reveals a highly stable core protein complex that does not include the basolateral polarity protein Discs large.</a> J. Cell Sci. 124 (Pt 16), 2861-2871 (2011).</li>
<li>Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHartenstein%2C+V+%22Atlas+of+Drosophila+Development%22">Atlas of Drosophila Development</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. (1993).</li>
<li>Lamb, R. S., Ward, R. E., Schweizer, L., Fehon, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+coracle%2C+a+member+of+the+protein+4.1+superfamily%2C+has+essential+structural+functions+in+septate+junctions+and+developmental+roles+in+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Drosophila coracle, a member of the protein 4.1 superfamily, has essential structural functions in septate junctions and developmental roles in epithelial cells.</a> Mol. Biol. Cell. 9 (12), 3505-3519 (1998).</li>
<li>Davis, M. J., Talbot, D., Jemc, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assay+for+blood-brain+barrier+integrity+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Assay for blood-brain barrier integrity in Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. (151), e60233(2019).</li>
<li>Laprise, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+polarity+proteins+regulate+Drosophila+tracheal+tube+size+in+parallel+to+the+luminal+matrix+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Epithelial polarity proteins regulate Drosophila tracheal tube size in parallel to the luminal matrix pathway.</a> Curr. Biol. 20 (1), 55-61 (2010).</li>
<li>Batz, T., Förster, D., Luschnig, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transmembrane+protein+macroglobulin+complement-related+is+essential+for+septate+junction+formation+and+epithelial+barrier+function+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The transmembrane protein macroglobulin complement-related is essential for septate junction formation and epithelial barrier function in Drosophila.</a> Development. 141 (4), 899-908 (2014).</li>
<li>Behr, M., Riedel, D., Schuh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+claudin-like+Megatrachea+is+essential+in+septate+junctions+for+epithelial+barrier+function+in%C3%82%C2%A0Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">The claudin-like Megatrachea is essential in septate junctions for epithelial barrier function inÂ Drosophila.</a> Dev. Cell. 5 (4), 611-620 (2003).</li>
<li>Wu, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sinuous+is+a+Drosophila+claudin+required+for+septate+junction+organization+and+epithelial+tube+size+control%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Sinuous is a Drosophila claudin required for septate junction organization and epithelial tube size control.</a> J. Cell Biol. 164 (2), 313-323 (2004).</li>
<li>Wu, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+Varicose%2C+a+member+of+a+new+subgroup+of+basolateral+MAGUKs%2C+is+required+for+septate+junctions+and+tracheal+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Drosophila Varicose, a member of a new subgroup of basolateral MAGUKs, is required for septate junctions and tracheal morphogenesis.</a> Development. 134 (5), 999-1009 (2007).</li>
<li>Jaspers, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+claudin+Megatrachea+protein+complex%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">The claudin Megatrachea protein complex.</a> J. Biol. Chem. 287 (44), 36756-36765 (2012).</li>
<li>Dietzl, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genome-wide+transgenic+RNAi+library+for+conditional+gene+inactivation+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila.</a> Nature. 448 (7150), 151-156 (2007).</li>
<li>Zirin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large-scale+transgenic+Drosophila+resource+collections+for+loss-+and+gain-of-function+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Large-scale transgenic Drosophila resource collections for loss- and gain-of-function studies.</a> Genetics. 214 (4), 755-767 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>İğneler için kapiller tüp (Boro 1 X 0.5/Fiber)</td><td>FHC</td><td>30-30-1</td><td></td></tr><tr><td>Konfokal mikroskop</td><td>Leica</td><td>Stellaris 5&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Enjeksiyon için 22 x 22 2 kalınlığında kap camı</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-540-B</td><td></td></tr><tr><td>Kapak camı 22 x 30 1.5 kalınlıkta görüntüleme için</td><td>Corning</td><td>2980-233</td><td></td></tr><tr><td>İmmünboyama için kültür tüpü (6 x 50 mm)&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-958-A</td><td></td></tr><tr><td>Embriyo toplama kafesi</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-100</td><td></td></tr><tr><td>Floresans stereomikroskopu</td><td>Leica</td><td>MZ10 F</td><td></td></tr><tr><td>Halokarbon yağı (700)</td><td>Genesee Scientific</td><td>59-131</td><td></td></tr><tr><td>Heptane</td><td>Fisher Scientific</td><td>H350-4</td><td></td></tr><tr><td>Ters floresans mikroskobu</td><td>Leica</td><td>DMi8</td><td></td></tr><tr><td>Embriyoları dekoryonlaştırmak için ağ sepetler</td><td>Genesee Scientific</td><td>46-101</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A412-4</td><td></td></tr><tr><td>Mikromanipülatör</td><td>Narishige</td><td>MN151</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop slaytları</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544-2</td><td></td></tr><tr><td>İğne çekici</td><td>David Kopf enstrümanları</td><td>Model 720</td><td></td></tr><tr><td>Normal Eşek Serumu</td><td>Jackson ImmunoReseaerch</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>Naylon mesh (120 um)</td><td>Genesee Scientific</td><td>57-102</td><td></td></tr><tr><td>Objektif lens HC PL FLUOTR 10X/0.32 PH 1</td><td>Leica</td><td>11506537</td><td></td></tr><tr><td>Objektif lens HC PL APO 10x/0.40 CS2</td><td>Leica</td><td>15506407</td><td></td></tr><tr><td>Objektif lens HC PL APO 40x/1.30 CS2</td><td>Leica</td><td>15506358</td><td></td></tr><tr><td>Petri plakaları 60 x 15 mm</td><td>Corning</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>Platform sallayıcı</td><td>Globe Scientific</td><td>GTR-FS</td><td></td></tr><tr><td>Birincil antikor (Korakl)</td><td>DSHB</td><td>C566.9</td><td></td></tr><tr><td>Birincil antikor (Korakl)</td><td>DSHB</td><td>C615.16</td><td></td></tr><tr><td>Birincil antikor (E kadherin)</td><td>DSHB</td><td>DCAD2</td><td></td></tr><tr><td>Birincil antikor (Mcr)</td><td>Ward laboratuvarı, CWRU</td><td>Gine domuzu poliklonal</td><td></td></tr><tr><td>10 kDa dextran etiketli rodamin</td><td>Moleküler Problar</td><td>D1824</td><td></td></tr><tr><td>İkincil antikor (eşek anti-kobayı Cy3)</td><td>Jackson ImmunoReseaerch</td><td>706-165-148</td><td></td></tr><tr><td>İkincil antikor (eşek anti-fare Cy2)</td><td>Jackson ImmunoReseaerch</td><td>715-225-151</td><td></td></tr><tr><td>İkincil antikor (eşek anti-sıçan Cy5)</td><td>Jackson ImmunoReseaerch</td><td>712-175-150</td><td></td></tr><tr><td>Masa üstü shaker</td><td>New Brunswick Scientific</td><td>C2 platform sarstırıcı</td><td></td></tr><tr><td>Tegosept (metil 4-hidroksibenzoat)</td><td>TCI</td><td>H0216</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP151500</td><td></td></tr><tr><td>Fiksasyon için şişeler (20 ml WHEATON sıvı scintillasyon şişeleri)</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-341-73C</td><td></td></tr><tr><td>Whatman 3MM&nbsp; Kromatografi Makalesi</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-716-6H</td><td></td></tr><tr><td><Güçlü>Uçan hisse senetleri</güçlü></td><td><güçlü>tam genotip</güçlü></td><td><güçlü>hisse sayısı</güçlü></td><td><güçlü>Kaynak</güçlü></td></tr><tr><td>cor4</td><td>w*; P{neoFRT}43D cora4/CyO</td><td>52232</td><td>BDSC</td></tr><tr><td>w1118</td><td>w[1118]</td><td>5905</td><td>BDSC</td></tr><tr><td><güçlü>Çözüm</güçlü></td><td><güçlü>tarif</güçlü></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10x PBS</td><td>90 g NaCl, 20 g Na2HPO4 ve 8.3 g NaH2PO4.H2O ile dH20 karışımı ile 1L. Filtre steril edilsin. İmmünboyama aşamalarında yıkama adımları için dH2O ile 1X seyreltir.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>%10 Triton X-100 çözümü</td><td>1 ml Triton X-100 ile 9 ml dH2O'yu platform rocker üzerinde çözünene kadar karıştırın. Oda sıcaklığında sakla.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>%50 çamaşır suyu</td><td>Embriyoları dekoryonlaştırmadan önce 10 ml ticari çamaşır suyu (%7,5 sodyum hipoklorit) 10 ml suya karıştırın.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elma suyu tabakları</td><td>15 g Drosophila agarı 725 ml dH2O içinde kaynatın. 25 g şeker ve 250 ml elma suyu ekleyin ve karıştırana kadar karıştırın. Çözeltiyi 55 C'ye kadar soğut, sonra 1.3 g tegosept ekleyip nazikçe karıştır. 60 x 15 petri plakalarına dökün ve soğutun. 4 C'de depola.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Engelleme çözümü</td><td>9,8 ml 1X PBS'yi, 100 ul %10 Triton X-100 ve 100 ul Normal Donkey Serumu ile 15 konik bir tüpte karıştırın.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Embriyo yıkama çözeltisi</td><td>70 g NaCl ve 2 ml Triton X-100 ile 1L dH2O karıştırarak 10X embriyo yıkama çözeltisi yapın. Çalışan çözüm için dH2O ile 1X'e seyrelt.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Düzeltme</td><td>10 ml 1X PBS'yi mikrodalgada önceden ısıtın. 0.4 g&nbsp ekleyin; paraformaldehit ve pipet karışımı. Çözülmeyi hızlandırmak için 10 ul 14N NaOH ekleyin. 90 C'lik ısı bloğuna çözünene kadar koyun. Katı paraformaldehit kalmayınca, pH nötr hale getirmek için 10 ul 14N HCL ekleyin. Paraformaldehit kullanırken her zaman laboratuvar önlüğü, eldiven ve gözlükler takın.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Montaj medyası</td><td>9 ml gliserol ve 1 ml Tris baz pH 8.0 karıştırın. 0,05 g n-propil-gallat ekleyin,&nbsp; karıştırıp ısıtarak erisin. Aliquot 0.5 ml eppendorf tüplerine aktarın.&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rodamin dekstran çözeltisi</td><td>Rodamin etiketli 10 kDa Dekstranı 0,5M Sodyum Fosfat, pH 7,5 ve 5 mM Potasyum Klorür'de 1 mg/ml'ye çözünerek taze boya çözeltisi yapın.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hamaya ezmesi</td><td>50 g ticari maya (Red Star) ile bir tutam sakroz ve kalın bir macun elde edecek kadar su ile karıştırın. 4 C'de depola.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

drosophila embriyonik epitelinde çekirdek pileli septat bağlantı proteinlerini tanımlamak için immünboyama ve boya penetrasyonu deneyleri

Immunostaining and Dye Penetration Experiments to Define Core Pleated Septate Junction Proteins in Drosophila Embryonic Epithelia

Drosophila embriyonik epitelinde çekirdek pileli septat bağlantı proteinlerini tanımlamak için immünboyama ve boya penetrasyonu deneyleri

The purpose of these protocols is to evaluate the organization and barrier function of pleated Septate Junctions (pSJs) in the ectodermally-derived ...

immunostaining-dye-penetration-experiments-to-define-core-pleated

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu protokol disseke Drosophila larva immünohistokimya nasıl gerçekleştirileceği göstermektedir.

Drosophila Larvaların NMJ İmmünohistokimya

Aktif Bölgeleri Diseksiyon ve Görüntüleme Drosophila Nöromüsküler Junction

İmmün boyama, dokulardaki belirli hücre tiplerini ve proteinleri görselleştirmek için etkili bir tekniktir. Sonikasyonu kullanarak, burada açıklanan protokol, immünostainingden önce Drosophila melanogaster dokularını geç evre embriyolardan ve larvalardan ayırma ihtiyacını hafifletir. Formaldehitle sabitlenmiş bütün mount larvalarının immün boyaması için etkili bir metodoloji sunuyoruz.

Geç evre embriyonik ve larva soniklenmesi-kolaylaştırdı Immunoflorasan Boyama<em&gt; Drosophila</em&gt; Dokular<em&gt; Yerinde</em

Drosophila'nın yetişkin yapıları, hayali diskler adı verilen kese benzeri yapılardan türetilmiştir. Bu disklerin analizi, doku tayini, kompartman sınırı oluşturma, hücre proliferasyonu, hücre kaderi spesifikasyonu ve düzlemsel hücre polaritesi dahil olmak üzere birçok gelişimsel süreç hakkında bilgi sağlar. Bu protokol, ışık/floresan mikroskobu için hayali diskleri hazırlamak için kullanılır.

Diseksiyon ve hayali Disklerin immün itibaren Drosophila melanogaster

Bu protokol Proximity ligasyon Testi Drosophila larva nöromüsküler kavşakta yerinde protein-protein etkileşimleri tespit etmek için nasıl kullanılabileceğini gösteriyor. Bu teknikle, Diskler, büyük ve Hu-li tai shao postsinaptik bölgede bir kompleks, daha önce birlikte immunoprecipitation ile tespit dernek kurma gösterilmiştir.

Algılama In Situ Protein-protein kompleksleri Drosophila Larva Nöromüsküler Junction

Yaprak biti embriyoları üzerinde tam montajlı immün boyama protokolü sunulmuştur, burada arka plan boyamasını azaltmak ve doku geçirgenliğini artırmak için kritik koşullar ele alınmaktadır. Bu koşullar, yaprak bitlerinin embriyonik dokularında protein ekspresyonunun etkili bir şekilde tespit edilmesi için özel olarak geliştirilmiştir.

Bezelye Afit Embriyolar immün için kritik Koşulların Belirlenmesi: Doku geçirgenliğini arttırarak ve Arka Plan Boyama azaltılması

Burada, konfokal mikroskopi için uygun ve aynı zamanda tekrarlanabilir ve güvenilir etiketlemeye izin vermek için Drosophila testislerinin tüm montaj hazırlığı ve immünostainingi için geliştirilmiş bir protokol sunuyoruz. Bu protokolü, büyük S4-S5 spermatositleri üzerindeki kolokalizasyon deneylerinin 3D gösterimi ve niceliği ile göstermektedir.

Büyük Spermatositlerin 3D Konfokal Analizi için Tüm Kazdağları Drosophila Testlerinin İmmünostaining

Burada, Drosophila embriyo proteini ve RNA'nın toplanmasından ön gömülmesine ve gömülmesine, immünoboyamaya ve mRNA in situ hibridizasyonuna kadar tespiti ve lokalizasyonu için bir protokol tarif ediyoruz.

Erken Drosophila Embriyosunda İmmünohistokimya ve RNA In-situ Dağılımı için Bir Protokol

Mevcut protokol, Drosophila pupa notumunun sabit dokusunun hazırlanmasını ve görselleştirilmesini detaylandırmaktadır. Sağlam veya yaralı doku için kullanılabilir ve dokunun orijinal mimarisi korunur. Diseksiyon, sabitleme ve boyama prosedürlerinin tümü bu makalede açıklanmıştır.

Drosophila Pupal Notum'un Diseksiyonu, Sabitlenmesi ve Görselleştirilmesi

Burada, nöromüsküler kavşaklar ve kas hücrelerindeki mikrotübül ağlarını görselleştirmek için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz. Drosophila melanogaster'in güçlü genetik araçlarıyla birleştiğinde, bu protokol, sinir sistemindeki mikrotübül ağı düzenleyici proteinlerin rolü için genetik taramayı ve mikrotübül dinamiği analizini büyük ölçüde kolaylaştırır.

Mikrotübül Ağını Görselleştirmek için Drosophila Larva Nöromüsküler Kavşak ve Kas Hücrelerini Kullanma

Bu protokol, geleneksel GFP/mCherry etiketi yaklaşımları kullanılarak tespit edilmesi zor olan düşük bolluktaki proteinlerin veya translasyon sonrası modifikasyonların canlı görüntülenmesini sağlamak için özelleştirilmiş antikor bazlı floresan etiketlemeyi ve erken Drosophila embriyolarına enjeksiyonu açıklar.

Floresan Antikor Enjeksiyonu ile Canlı Drosophila Embriyolarında Düşük Bolluktaki Proteinlerin ve Translasyon Sonrası Modifikasyonların Görselleştirilmesi

Öğrenin, Drosophila embriyolarında pleated septat bağlantıların organizasyonunu ve bariyer fonksiyonunu immünboyama ve boya penetrasyonu deneyleriyle değerlendirin. Bu yöntemler, gen fonksiyonlarını in vivo çalışmak için araştırmacılara yardımcı olur.

Drosophila embriyonik epitelinde çekirdek pileli septat bağlantı proteinlerini tanımlamak için immünboyama ve boya penetrasyonu deneyleri (Video) | JoVE Journal

Drosophila embriyonik epitelinde çekirdek pileli septat bağlantı proteinlerini tanımlamak için immünboyama ve boya penetrasyonu deneyleri

Daha fazla video keşfet