Mikroenjeksiyon kullanarak Yaprak bitleri Viral İletim Fizyolojik Engelleri Test

Eğer bitki virüslerinin etkili taşıyıcıları iseler, virüsün mikroenjeksiyonu durumunda, bugün size göstereceğimiz prosedür, araştırmacıların virüsü doğrudan AFib'in hemos hücresine enjekte etmesine olanak tanıyan ve sirkülatif şekilde virüs iletimi için iki ana engelden biri olan bağırsağı devre dışı bırakan bir tekniktir. Merhaba, ben Cornell Üniversitesi Bitki Patolojisi Bölümü'nde doktora sonrası araştırmacı Cecilia Tamrin Dehi. Bugün size, daha sonra farklı bitki türlerine iletilebilen virüslerin AFib hemos hücresine nasıl enjekte edileceğini göstereceğim.

Örneğin, bu FE bitkisi PLRV patates yaprak virüsü ile enfekte edilmiştir. Sağlıklı ve enfekte bir bitki arasındaki farkı görebilirsiniz. En belirgin semptom taven sklerozudur.

PLRV, memeli kanının böceklerdeki karşılığı olan hemolenf içinde APHIS tarafından taşınan bir luthier virüsüdür. Enfekte olmamış bir AFI, enfekte bir bitkiyle beslendiğinde, burada görebileceğiniz üzere bitki özsuyu aracılığıyla virüsü kapar. Yutulduktan sonra virüsün, böcek bağırsağından hemolenfe geçmesi ve ardından ESE bitkisine tekrar bulaştırılabilmesi için tükürük bezinden geçmesi gerekir.

ESE bitkisinden beslenirken birçok virüs alınabilse de, sadece küçük bir kısmı bağırsak ve tükürük bezinden geçecektir. Daha fazla bitkiyi enfekte ederek testi gerçekleştirmek için iletimdeki iki ana engel bunlardır. Eğer bir afit virüsü vektörleme yeteneğine sahip değilse, afitleri iki gün boyunca enfekte dokuyla besleriz, ardından beş gün boyunca sağlıklı bir bitkiden beslenmelerine izin veririz.

Ardından bitki tütsülenir ve üç hafta sonra semptomlar aranmaya başlanır. Virüsü vektörleyemeyen bir AFib bulduğumuzda, bugün size göstereceğim mikroenjeksiyon prosedürünü kullanarak iki bariyerden hangisinin virüsü durdurduğunu değerlendirebiliriz. Bu prosedürde virüs, bağırsak iletim bariyerini doğrudan devre dışı bırakarak oradaki hemo hücreye enjekte edilir.

Hadi başlayalım; size bazı apekslerin nasıl mikroenjeksiyon yapılacağını göstereceğim. Kullandığımız cam iğneler bunlardır. Cam iğneleri, bir APU kullanarak bu cam tüplerden çekiyoruz.

İşte mikro enjektör. Bir virüsün mikro enjeksiyonunu yapmak için, iğneyi iğne tutucuya yerleştirmeye başlayacağım.

Şimdi iğneyi yerleştiriyorum ve olması gereken konuma getiriyorum. Şimdi, virüsü iğneye, bu helm'in üst kısmına kadar yükleyeceğim. Artık mikroenjeksiyon için AFI'yi konumlandırmamız gerekiyor.

Şimdi, ağrı baskısı ile bir afit alacağım ve onu afit tutucuya yerleştireceğim. İdeal olarak, afidin karın bölgesine erişebilmek için afidin arka kısmını tutucuya yaslamaya çalışacağım. Tamam, harika.

Şimdi mikroenjeksiyona geçebiliriz. Tamam, şimdi iğneyi konumlandıracağım ve AFib'e daha fazla yaklaştıracağım. Şimdi iğneyi AFib ile temas ettireceğim ve ekzoskeleti delmek için en iyi yöntem, bacakların tabanındaki segmentlerin arasından delmeye çalışmaktır.

Şimdi enjeksiyon yapacağım. Fırça ile AFI'yi alıyorum ve bir süre kurumaya bırakacağım geri kazanım kağıdına yerleştiriyorum. Ayrıca kontrol AFI'yi de mikroenjeksiyonla uygulamamız gerekiyor.

Bu kontrol mikroenjeksiyonu, virüs içermeyen sadece tampon çözelti ile gerçekleştirilir. Kullandığımız tampon çözelti, pH 7 olan 0.1 M fosfat tamponudur. Agrobacterium'u sağlıklı bir bitkiye yerleştireceğim ve beş gün boyunca enfeksiyonun gerçekleşmesine izin vereceğim; ardından bitkiyi besleyip semptomların gelişmesini bekleyeceğim. Alt zincir NA'nın mikroenjeksiyonundan sonraki bir hafta boyunca, her gün hedef genin ekspresyon seviyesi afi'de ölçülür.

Böylece, virüsü iletemeyen bir afidi mikroenjeksiyona tabi tuttuk. Mikroenjeksiyondan sonra AFI virüsü iletebilirse, bu AFI'nin virüsü engelleyen bir bağırsak bariyerine sahip olduğu anlamına gelecektir. Öte yandan, hiçbir semptom gelişmezse, bu afidin güçlü bir tükürük bezi bariyerine sahip olduğu anlamına gelecektir.

Böylece, virüslerin yapraklara nasıl mikroenjeksiyonla verildiğini göstermiş olduk. Aynı prosedür, yapraklarda gen işlevlerini incelemeye yardımcı olan ilgi çekici bir teknik olan RNAi (RNA interferans) işlemini gerçekleştirmek için çift zincirli RNA'ların mikroenjeksiyonla verilmesinde de kullanılır. Mikroenjeksiyon işlemi için anlatacaklarımız bu kadar.

Umarım beğenirsiniz ve deneyleriniz için faydalı olur. Teşekkürler.