Name: Sandell-Kolthoff Reaksiyonu Kullanılarak İnsan Karaciğer Mikrozomlarında Deiodinaz 1 Aktivitesinin Kolorimetrik Değerlendirmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-10T13:05:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: Öğrenin, Sandell-Kolthoff reaksiyonu ile insan karaciğer mikrozomlarında Deiodinaz 1 aktivitesini kolorimetrik olarak değerlendirin. Bu yöntem, tiroid hormon dengesini bozan kimyasalları taramak için güvenilir ve ölçeklenebilir bir protokol sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Kabir, E. R., Rahman, M. S., Rahman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+endocrine+disruptors+and+their+possible+impacts+on+human+health%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">A review on endocrine disruptors and their possible impacts on human health.</a> Environ Toxicol Pharmacol. 40 (1), 241-258 (2015).</li>
<li>Yue, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+exposure+to+a+mixture+of+endocrine+disruptors+and+serum+levels+of+thyroid+hormones%3A+a+cross-sectional+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Environ+Sci%22%5BJournal%5D)">Human exposure to a mixture of endocrine disruptors and serum levels of thyroid hormones: a cross-sectional study.</a> J Environ Sci. 125, 641-649 (2023).</li>
<li>Köhrle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+deiodinase+family%3A+selenoenzymes+regulating+thyroid+hormone+availability+and+action%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">The deiodinase family: selenoenzymes regulating thyroid hormone availability and action.</a> Cell Mol Life Sci. 57 (13), 1853-1863 (2000).</li>
<li>Zhang, J., Lazar, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanism+of+action+of+thyroid+hormones%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">The mechanism of action of thyroid hormones.</a> Annu Rev Physiol. 62 (1), 439-466 (2000).</li>
<li>França, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+type+1+iodothyronine+deiodinase+%28DIO1%29+mutations+cause+abnormal+thyroid+hormone+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">Human type 1 iodothyronine deiodinase (DIO1) mutations cause abnormal thyroid hormone metabolism.</a> Thyroid. 31 (2), 202-207 (2020).</li>
<li>Weber, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+predictivity+of+the+DIO1-SK+assay+to+investigate+DIO1+inhibition+in+human+liver+microsomes%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Vitro+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Assessment of the predictivity of the DIO1-SK assay to investigate DIO1 inhibition in human liver microsomes.</a> Appl Vitro Toxicol. 9 (2), 44-59 (2023).</li>
<li>Weber, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+approach+method+to+study+thyroid+hormone+disruption%3A+optimization+and+standardization+of+an+assay+to+assess+the+inhibition+of+DIO1+enzyme+in+human+liver+microsomes%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Vitro+Toxicol%22%5BJournal%5D)">A new approach method to study thyroid hormone disruption: optimization and standardization of an assay to assess the inhibition of DIO1 enzyme in human liver microsomes.</a> Appl Vitro Toxicol. 8 (3), 67-82 (2022).</li>
<li>Renko, K., Hoefig, C. S., Hiller, F., Schomburg, L., Köhrle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+iopanoic+acid+as+substrate+of+type+1+deiodinase+by+a+novel+nonradioactive+iodide-release+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Identification of iopanoic acid as substrate of type 1 deiodinase by a novel nonradioactive iodide-release assay.</a> Endocrinology. 153 (5), 2506-2513 (2012).</li>
<li>Renko, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+nonradioactive+screening+method+identifies+genistein+and+xanthohumol+as+potent+inhibitors+of+iodothyronine+deiodinases%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">An improved nonradioactive screening method identifies genistein and xanthohumol as potent inhibitors of iodothyronine deiodinases.</a> Thyroid. 25 (8), 962-968 (2015).</li>
<li>Olker, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+the+ToxCast+phase+1%2C+phase+2%2C+and+e1k+chemical+libraries+for+inhibitors+of+iodothyronine+deiodinases%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Screening the ToxCast phase 1, phase 2, and e1k chemical libraries for inhibitors of iodothyronine deiodinases.</a> Toxicol Sci. 168 (2), 430-442 (2019).</li>
<li>Sane, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+highly+potent+and+isoenzyme-selective+inhibitors+of+deiodinase+type+I+via+a+nonradioactive+high-throughput+screening+method%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of highly potent and isoenzyme-selective inhibitors of deiodinase type I via a nonradioactive high-throughput screening method.</a> Thyroid. 35 (5), 576-589 (2025).</li>
<li>Visser, T. J., Van Overmeeren, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Binding+of+radioiodinated+propylthiouracil+to+rat+liver+microsomal+fractions%3A+stimulation+by+substrates+for+iodothyronine+5%E2%80%B2-deiodinase%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Binding of radioiodinated propylthiouracil to rat liver microsomal fractions: stimulation by substrates for iodothyronine 5′-deiodinase.</a> Biochem J. 183 (1), 167-169 (1979).</li>
<li>Hindrichs, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+fast+online+SPE-LC-MS%2FMS+method+to+quantify+thyroid+hormone+metabolites+in+rat+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Res+Toxicol%22%5BJournal%5D)">A novel and fast online SPE-LC-MS/MS method to quantify thyroid hormone metabolites in rat plasma.</a> Chem Res Toxicol. 37 (1), 33-41 (2024).</li>
<li>Kolthoff, I. M., Sandell, E. B., Lingane, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+persulfate-arsenite+method+for+manganese%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">A modified persulfate-arsenite method for manganese.</a> Anal Chem. 8 (1), 73-73 (1936).</li>
<li>Stefanidis, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+robustness+and+accuracy+of+the+deiodinase+1+Sandell%E2%80%93Kolthoff+assay%3A+a+comparative+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Vitro+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Assessment of the robustness and accuracy of the deiodinase 1 Sandell–Kolthoff assay: a comparative analysis.</a> Appl Vitro Toxicol. 10 (4), 80-90 (2024).</li>
<li>Satya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidance+document+on+standardised+test+guidelines+for+evaluating+chemicals+for+endocrine+disruption%5BTitle%5D)+AND+%22OECD+Environ+Health+Saf+Publ%22%5BJournal%5D)">Guidance document on standardised test guidelines for evaluating chemicals for endocrine disruption.</a> OECD Environ Health Saf Publ. 150, (2012).</li>
<li>Joseph, O., Eberle, M., Lieberman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolites+in+urine+that+interfere+with+the+Sandell%E2%80%93Kolthoff+assay+for+urinary+iodine%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Trace+Elem+Res%22%5BJournal%5D)">Metabolites in urine that interfere with the Sandell–Kolthoff assay for urinary iodine.</a> Biol Trace Elem Res. 202 (2), 466-472 (2024).</li>
<li>May, W., Wu, D., Eastman, C., Bourdoux, P., Maberly, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+automated+urinary+iodine+methods%3A+problems+of+interfering+substances+identified%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem%22%5BJournal%5D)">Evaluation of automated urinary iodine methods: problems of interfering substances identified.</a> Clin Chem. 36 (6), 865-869 (1990).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1-Tiyo-&beta;-D-glukoz sodyum tuzu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6375-1G</td><td>CAS 10593-29-0</td></tr><tr><td>3,3',5'-triiodotironin (rT3)&nbsp;</td><td>Santa Cruz Biyoteknolojisi</td><td>SC-209692</td><td>CAS 5817-39-0</td></tr><tr><td>6-Propil-2-tiourasil (6PTU)</td><td>Supelco</td><td>P3755-10G</td><td>CAS 51-52-5</td></tr><tr><td>Asetik asit</td><td>Thermo Fisher</td><td>9526-33</td><td>CAS 64-19-7</td></tr><tr><td>Analitik denge</td><td>NA</td><td>NA</td><td>0,1 mg okunabilirlikle 30 g'a kadar hassas bir ağırlık ile ulaşabilen</td></tr><tr><td>Arsenik sodyum oksit (NaAsO2)</td><td>Thermo Fisher</td><td>041533.AP</td><td>CAS 7784-46-5</td></tr><tr><td>Analiz plakaları (96 kuyuk formatı)</td><td>Merck</td><td>Z707902-108EA</td><td>Örneğin, doku kültür plakaları, 96 kuyu plakası, düz taban, polistiren, 0,34 cm2, steril, 108/cs, TPP</td></tr><tr><td>Aurothioglikoz (ATG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0606-5MG</td><td>CAS 12192-57-3</td></tr><tr><td>Santrifüj Tüpleri 15 ve 50&nbsp; mL</td><td>Merck</td><td>Z707724-800EA, Z707716-320EA</td><td>örneğin TPP santrifüj tüpleri, hacim 15 ve 50 mL, polipropilen &nbsp;</td></tr><tr><td>Mikrotiter plakaları için salınan rotorlu santrifüj</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Üzerinde 96 kuyu filtre plakası bulunan 96 derinliklik bir kuyu plakası (en az yaklaşık 6 cm yüksekliğinde) sığacak kadar yüksek olmalı</td></tr><tr><td>Seryum (IV) amonyum sülfat (Ce(NH4)4(SO4)4)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>22269-100G-F</td><td>CAS 10378-47-9</td></tr><tr><td>CO2 Kuluçka Makinesi</td><td>NA</td><td>NA</td><td>37 derece sıcaklıkları koruyabilen; C, %5 CO2 ve &ge; %90 nem</td></tr><tr><td>Derin kuyu plakaları (96 kuyulu format)</td><td>Supelco</td><td>575653-U</td><td>Örneğin, SPE 96-Derin Kare Kuyu Toplama Plakası, kuyu hacmi 2 mL, polipropilen</td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit (DMSO)</td><td>AppliChem</td><td>A3672,0250</td><td>CAS 67-68-5</td></tr><tr><td>Ditiothreitol (DTT)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9779-1G</td><td>CAS 3483-12-3</td></tr><tr><td>Etilen diamintetraasetik asit (EDTA) & nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>APO456787707-500G</td><td>CAS 6381-92-6</td></tr><tr><td>Filtre plakaları (96 kuyruklu format)</td><td>Merck</td><td>WHA77002810</td><td>örneğin Micro-Plates, 96-kuyruklu, şeffaf polistiren, 800 ve mikro; L, DNA Bağlama, Whatman</td></tr><tr><td>Gaz geçirmez plaka sızdırmazlayıcılar</td><td>Thermo Fisher</td><td>232698</td><td>Örneğin: Sızdırmazlık bandı, polyester, steril, Sızdırmazlık bandı, polyester, steril, Nunc</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Pan Biotech</td><td>P05-01100</td><td>CAS 7365-45-9</td></tr><tr><td>İnsan karaciğer mikrozomları</td><td>Biovit</td><td>X008070</td><td>Örneğin, INVITROCYP 150-Donör Havuzlu İnsan Karaciğer Karaciğer Mikrozomları</td></tr><tr><td>İyodid (IC standardı)</td><td>Supelco</td><td>41271-100ML</td><td>Örneğin, IC için iyodid standardı, suda 1000 mg/L, Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>Dowex 50WX2 gibi iyon değişim reçinesi</td><td>Roth</td><td>334.4</td><td>CAS 12612-37-2; Mesh 100-200</td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj tüpleri 1.5&nbsp; mL</td><td>Merck</td><td>EP0030120086-1PAK</td><td>örneğin Eppendorf&reg; Safe-Lock mikrosantrifüj tüpleri, hacim 1.5 mL, doğal</td></tr><tr><td>50 ila 300 Mbps ile ulaşabilen çok kanallı dağıtıcı; &micro; Adım başına L</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>10 ila 100&nbsp iletebilen çok kanallı pipet; &micro; Adım başına L</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Elektrotlu pH ölçer ve kalibrasyon tamponları</td><td>NA</td><td>NA</td><td>+/- 0.1 pH birimi okuyabilen</td></tr><tr><td>Soğurma ölçümü için fotometre</td><td>Tecan Trading AG</td><td>NA</td><td>örneğin Sunrise Absorbance Reader, INSTSUN-3</td></tr><tr><td>1 ile 10 ve nbsp teslimat yapabilen pipetler; &micro; L</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>10 ila 100 Mbps (yaklaşık 100 Mbps) verebilen pipetler; &micro; L</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>100 ila 1000 ile 1000 Mbps teslimat yapabilen pipetler; &micro; L&nbsp;</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Daha yüksek hacimler için pipetler</td><td>NA</td><td>NA</td><td>serolojik pipetler, örneğin 10, 25, 50 mL</td></tr><tr><td>Plaka sallayıcı</td><td>Thermo Fisher</td><td>NA</td><td>Örneğin, doğrudan kontrol edilen Thermo Scientific H+P MONOSHAKE VORTEXER mikrotiter plakası</td></tr><tr><td>Tekrarlayıcı pipet</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Sodyum klorür (NaCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888-25G</td><td>CAS: 7647-14-5, örneğin sodyum klorür, ACS reaktifi ve s.; 99.0 %</td></tr><tr><td>İstatistik yazılımı</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Analiz özelliklerini yansıtan regresyon analizi yapabilen ve inhibitör konsantrasyonları hesaplayabilen (örneğin GraphPad Prims 8, GraphPad)</td></tr><tr><td>Sülfürik asit (H2SO4)&nbsp;</td><td>Supelco</td><td>1007311000</td><td>CAS 7664-93-9</td></tr><tr><td>Hacimsel şişe</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Tanımlanmış hacimle sertifikalandırılmıştır</td></tr></tbody></table>

sandell-kolthoff reaksiyonu kullanılarak İnsan karaciğer mikrozomlarında deiodinaz 1 aktivitesinin kolorimetrik değerlendirmesi

Colorimetric Assessment of Deiodinase 1 Activity in Human Liver Microsomes Using the Sandell-Kolthoff Reaction

Sandell-Kolthoff Reaksiyonu Kullanılarak İnsan Karaciğer Mikrozomlarında Deiodinaz 1 Aktivitesinin Kolorimetrik Değerlendirmesi

This method enables the identification of test substances that inhibit DIO1 activity and may thus interfere with thyroid hormone homeostasis. The protocol ...

colorimetric-assessment-deiodinase-1-activity-human-liver-microsomes

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Indüklenebilir lizin dekarboksilaz aktivitesi toluen diferansiyel çözünürlüğü adducts oluşturmak için substrat L-lizin ve ürün cadaverine 2,4,6-trinitrobenzensulfonic asit ile reaksiyona girerek izlenir.

Etkinlik Ölçüm Bir Testi Escherichia coli Lizin Decarboxyase Đndüklenebilir

Bu videoda, fare karaciğer dokusundaki hem olmayan demir içeriğini belirlemek için kolorimetrik tabanlı bir yöntemi açıklıyoruz. Batofenantrolin sülfonat, ferrik demiri şelatlanabilir demirli demire dönüştüren bir indirgeyici ajanın varlığında kromojenik substrat olarak kullanılır.

Bathofenantrolin Sülfonat Bazlı Kolorimetrik Test: Fare Karaciğer Dokusunda Heme Olmayan Demirin Kantitasyonu İçin Basit ve Hızlı Bir Yöntem

Bu makale, hücreye nüfuz eden floresan muhabir molekülleri olan canlı yapışık hücrelerde, mitokondriyal membran potansiyeli ve morfolojisinin yanı sıra mitokondriyal morfofonksiyon olarak da adlandırılan, hücre içi ROS seviyelerinin aynı anda ölçülmesi için yüksek içerikli bir mikroskopi iş akışını sunuyor. 5- (ve- 6) -klorometil-2 ', 7'-diklorodihidrofloresan diasetat, asetil ester (CM-H2 DCFDA) ve tetrametilrhodamin metilester (TMRM).

Yüksek İçerikli Mikroskopi Kullanılarak Hücresel Redoks Profillemesi

In vitro sistemlerin Metabolik yetkinlik ilaç ve toksik maddelerin biyotransformasyonu ve dışa atılması için önemli bir gereksinimdir. Bu protokol, biz Hücre kültürlerinde metabolizma faz değerlendirmek için referans metabolik sondaları uygulanmasını açıklar.

Kütle Spektrometre ve lüminojenik tabanlı Yaklaşımlar Faz I Metabolik Yetkinlik ait Characterize<em&gt; İn Vitro</em&gt; Hücre Kültürleri

Burada, mikroskobik görselleştirmek ve dehydrogenases hücre ve dokulara ve onun kinetik, işlev ve hücre altı yerelleştirme etkinliğini ölçmek için kullanılan bir iletişim kuralı mevcut.

Metabolik eşleme: Nicel enzim Cytochemistry ve Histochemistry Dehydrogenases hücre ve dokulara etkinliğini belirlemek için

Biz nicotinatmide adenin dinükleotit fosfat (NAD(P)H) + H + doğrudan doku örnekleri '. oluşturmak enzimler için enzimatik aktivite kayma dağıtım eşleştirmek için bir protokol...

Eşleme metabolizma: doğrudan dokusunda laktat dehidrogenaz etkinliğini izleme

Memeli hücreleri toplu autophagic tutma etkinliği ölçmek için basit ve iyi doğrulanmış bir iletişim kuralı burada açıklanmıştır. Bu yöntem laktat dehidrogenaz (karaciğer) oranı miktarının toplam hücresel karaciğer düzeylere göre sedimentable hücre kesirler dayanır.

Laktat dehidrogenaz haciz tahlil — Toplu Autophagic haciz etkinliğini memeli hücreleri belirlemek için basit ve güvenilir Yöntem

Burada, hayvan dokularındaki heme olmayan demir içeriğinin ölçümü için, çoğu laboratuvarda kolayca uygulanabilen basit, köklü bir kolorimetrik test kullanılarak bir protokol sağlanmaktadır.

Batofenantropin Bazlı Kolorimetrik Tahlil Kullanılarak Doku Non-Heme Demir İçeriğinin Ölçülmesi

Çok hücreli 3D tümör sferoidleri, akciğer adenokarsinom hücreleri, fibroblastlar ve monositler ile hazırlandı ve bunu kanserle ilişkili fibroblastların (CAF'lar) bu sferoidlerden izole edilmesi izledi. İzole CAF'lar, mitokondriyal transmembran potansiyelini, reaktif oksijen türlerini ve enzimatik aktiviteleri inceleyerek mitokondriyal sağlığı değerlendirmek için normal fibroblastlarla karşılaştırıldı.

3D Çok Hücreli Akciğer Tümörü Sferoidlerinden İzole Edilen Kanserle İlişkili Fibroblastlarda Mitokondriyal Sağlığın Değerlendirilmesi

Burada, memeli hücrelerinde moleküler oksijen tüketme yeteneklerinden bağımsız olarak mitokondriyal fonksiyonu doğrudan ölçmek için bir tahlil derlemesi sunuyoruz.

Memelilerde Mitokondriyal Fonksiyonu Ölçmek için Oksijenden Bağımsız Tahliller

Bu protokol, yüksek verimli bir tarama yaklaşımı kullanarak bir floresan boya probu olarak dihidroetidyum (DHE) kullanarak hücre içi reaktif oksijen türlerini (ROS) ölçmek için yeni bir yöntemi açıklar. Protokol, üç farklı hepatoselüler karsinom hücre hattında hücre içi reaktif oksijen türlerinin (ROS) kantitatif değerlendirme yöntemlerini açıklar.

Dihidroetidyum (DHE) Floresan Boya Kullanılarak Reaktif Oksijen Türleri (ROS) Üretiminin Yüksek Verimli Tarama Değerlendirmesi

Öğrenin, Sandell-Kolthoff reaksiyonu ile insan karaciğer mikrozomlarında Deiodinaz 1 aktivitesini kolorimetrik olarak değerlendirin. Bu yöntem, tiroid hormon dengesini bozan kimyasalları taramak için güvenilir ve ölçeklenebilir bir protokol sunar.

Sandell-Kolthoff Reaksiyonu Kullanılarak İnsan Karaciğer Mikrozomlarında Deiodinaz 1 Aktivitesinin Kolorimetrik Değerlendirmesi

Daha fazla video keşfet