Name: Rekombinant İnsan SLFN14 ribonükleazının hızlı üretimi ve kütle fotometrisi ile stoikiyometrik analiz (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-20T14:05:00.000+00:00
Duration: 10 min 20 s
Description: Keşfedin rekombinant insan SLFN14 ribonükleazının hızlı üretimini ve kütle fotometrisi ile stoikiyometrik analizini. Bu yöntem, memeli hücre hatları kullanarak protein saflaştırma ve biyokimyasal çalışmalar için etkili bir strateji sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Pisareva, V. P., Muslimov, I. A., Tcherepanov, A., Pisarev, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+novel+ribosome-associated+endoribonuclease+slfn14+from+rabbit+reticulocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Characterization of novel ribosome-associated endoribonuclease slfn14 from rabbit reticulocytes.</a> Biochemistry. 54 (21), 3286-3301 (2015).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+schlafen+14+cleavage+of+short+double-stranded+rnas+underpins+its+antiviral+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Sci+%28Weinh%29%22%5BJournal%5D)">Human schlafen 14 cleavage of short double-stranded rnas underpins its antiviral activity.</a> Adv Sci (Weinh). 12 (37), e01727(2025).</li>
<li>Seong, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schlafen+14+%28slfn14%29+is+a+novel+antiviral+factor+involved+in+the+control+of+viral+replication%5BTitle%5D)+AND+%22Immunobiology%22%5BJournal%5D)">Schlafen 14 (slfn14) is a novel antiviral factor involved in the control of viral replication.</a> Immunobiology. 222 (11), 979-988 (2017).</li>
<li>Jo, U., Pommier, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural%2C+molecular%2C+and+functional+insights+into+schlafen+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Structural, molecular, and functional insights into schlafen proteins.</a> Exp Mol Med. 54 (6), 730-738 (2022).</li>
<li>Lee, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Velcrin-induced+selective+cleavage+of+trna%28leu%29%28taa%29+by+slfn12+causes+cancer+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Velcrin-induced selective cleavage of trna(leu)(taa) by slfn12 causes cancer cell death.</a> Nat Chem Biol. 19 (3), 301-310 (2023).</li>
<li>Murai, J., Thomas, A., Miettinen, M., Pommier, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schlafen+11+%28slfn11%29%2C+a+restriction+factor+for+replicative+stress+induced+by+DNA-targeting+anti-cancer+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Ther%22%5BJournal%5D)">Schlafen 11 (slfn11), a restriction factor for replicative stress induced by DNA-targeting anti-cancer therapies.</a> Pharmacol Ther. 201, 94-102 (2019).</li>
<li>Zhang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schlafen+11+triggers+innate+immune+responses+through+its+ribonuclease+activity+upon+detection+of+single-stranded+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Immunol%22%5BJournal%5D)">Schlafen 11 triggers innate immune responses through its ribonuclease activity upon detection of single-stranded DNA.</a> Sci Immunol. 9 (96), eadj5465(2024).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Codon-usage-based+inhibition+of+hiv+protein+synthesis+by+human+schlafen+11%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Codon-usage-based inhibition of hiv protein synthesis by human schlafen 11.</a> Nature. 491 (7422), 125-128 (2012).</li>
<li>Valenzuela, C., Saucedo, S., Llano, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Schlafen14+impairs+hiv-1+expression+in+a+codon+usage-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Schlafen14 impairs hiv-1 expression in a codon usage-dependent manner.</a> Viruses. 16 (4), (2024).</li>
<li>Metzner, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanistic+understanding+of+human+slfn11%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Mechanistic understanding of human slfn11.</a> Nat Commun. 13 (1), 5464(2022).</li>
<li>Garvie, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+pde3a-slfn12+complex+reveals+requirements+for+activation+of+slfn12+rnase%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Structure of pde3a-slfn12 complex reveals requirements for activation of slfn12 rnase.</a> Nat Commun. 12 (1), 4375(2021).</li>
<li>Kugler, M., Metzner, F. J., Witte, G., Hopfner, K. P., Lammens, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphorylation-mediated+conformational+change+regulates+human+slfn11%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Phosphorylation-mediated conformational change regulates human slfn11.</a> Nat Commun. 15 (1), 10500(2024).</li>
<li>Van Riper, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryoem+structure+of+the+slfn14+endoribonuclease+reveals+insight+into+rna+binding+and+cleavage%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Cryoem structure of the slfn14 endoribonuclease reveals insight into rna binding and cleavage.</a> Nat Commun. 16 (1), 5848(2025).</li>
<li>Luo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+characterization+of+human+slfn14%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Structural and functional characterization of human slfn14.</a> Nucleic Acids Res. 53 (10), (2025).</li>
<li>Schellenberg, M. J., Maheshwari, S., Pillon, M. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSchellenberg%2C+MJ+%22Encyclopedia+of+cell+biology%22">Encyclopedia of cell biology</a>. Vol. 1, Elsevier. 57-73 (2022).</li>
<li>Hutchinson, A., Seitova, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+recombinant+prmt+proteins+using+the+baculovirus+expression+vector+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Production of recombinant prmt proteins using the baculovirus expression vector system.</a> J Vis Exp. (173), e62510(2021).</li>
<li>Ojha, R., Timin, E., Szirovicza, L., Xu, W., Hepojoki, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+comparison+of+in-house+prepared+transfection+reagents+in+the+delivery+of+mrna+or+DNA+to+a+wide+range+of+cultured+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">A systematic comparison of in-house prepared transfection reagents in the delivery of mrna or DNA to a wide range of cultured cells.</a> J Biol Chem. 301 (12), 110742(2025).</li>
<li>Subedi, G. P., Johnson, R. W., Moniz, H. A., Moremen, K. W., Barb, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+yield+expression+of+recombinant+human+proteins+with+the+transient+transfection+of+hek293+cells+in+suspension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High yield expression of recombinant human proteins with the transient transfection of hek293 cells in suspension.</a> J Vis Exp. (106), e53568(2015).</li>
<li>Piccinini, F., Tesei, A., Arienti, C., Bevilacqua, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+counting+and+viability+assessment+of+2d+and+3d+cell+cultures%3A+Expected+reliability+of+the+trypan+blue+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Proced+Online%22%5BJournal%5D)">Cell counting and viability assessment of 2d and 3d cell cultures: Expected reliability of the trypan blue assay.</a> Biol Proced Online. 19, 8(2017).</li>
<li>Pace, C. N., Vajdos, F., Fee, L., Grimsley, G., Gray, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+measure+and+predict+the+molar+absorption+coefficient+of+a+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">How to measure and predict the molar absorption coefficient of a protein.</a> Protein Sci. 4 (11), 2411-2423 (1995).</li>
<li>Glasel, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validity+of+nucleic+acid+purities+monitored+by+260nm%2F280nm+absorbance+ratios%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Validity of nucleic acid purities monitored by 260nm/280nm absorbance ratios.</a> Biotechniques. 18 (1), 62-63 (1995).</li>
<li>Li, X., Ben-Dov, I. Z., Mauro, M., Williams, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lowering+the+quantification+limit+of+the+qubittm+rna+hs+assay+using+rna+spike-in%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Lowering the quantification limit of the qubittm rna hs assay using rna spike-in.</a> BMC Mol Biol. 16, 9(2015).</li>
<li>Swiech, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+transfection+of+serum-free+suspension+hek+293+cell+culture+for+efficient+production+of+human+rfviii%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Transient transfection of serum-free suspension hek 293 cell culture for efficient production of human rfviii.</a> BMC Biotechnol. 11, 114(2011).</li>
<li>Gu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correction%3A+Advances+in+the+structures%2C+mechanisms+and+targeting+of+molecular+chaperones%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Correction: Advances in the structures, mechanisms and targeting of molecular chaperones.</a> Signal Transduct Target Ther. 10 (1), 117(2025).</li>
<li>Bernhard, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+basis+of+spliced+leader+rna+recognition+by+the+trypanosoma+brucei+cap-binding+complex%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Structural basis of spliced leader rna recognition by the trypanosoma brucei cap-binding complex.</a> Nat Commun. 16 (1), 685(2025).</li>
<li>Lai, S. H., Tamara, S., Heck, A. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-particle+mass+analysis+of+intact+ribosomes+by+mass+photometry+and+orbitrap-based+charge+detection+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Single-particle mass analysis of intact ribosomes by mass photometry and orbitrap-based charge detection mass spectrometry.</a> iScience. 24 (11), 103211(2021).</li>
<li>Liu, H., May, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disulfide+bond+structures+of+igg+molecules%3A+Structural+variations%2C+chemical+modifications+and+possible+impacts+to+stability+and+biological+function%5BTitle%5D)+AND+%22MAbs%22%5BJournal%5D)">Disulfide bond structures of igg molecules: Structural variations, chemical modifications and possible impacts to stability and biological function.</a> MAbs. 4 (1), 17-23 (2012).</li>
<li>Marenchino, M., Armbruster, D. W., Hennig, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+efficient+purification+of+rna-binding+proteins%3A+Application+to+hiv-1+rev%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Expr+Purif%22%5BJournal%5D)">Rapid and efficient purification of rna-binding proteins: Application to hiv-1 rev.</a> Protein Expr Purif. 63 (2), 112-119 (2009).</li>
<li>Smith, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+proteoform+project%3A+Defining+the+human+proteome%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">The human proteoform project: Defining the human proteome.</a> Sci Adv. 7 (46), eabk0734(2021).</li>
<li>Carrasco-Zanini, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+biological+influences+on+the+human+plasma+proteome+beyond+the+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Metab%22%5BJournal%5D)">Mapping biological influences on the human plasma proteome beyond the genome.</a> Nat Metab. 6 (10), 2010-2023 (2024).</li>
<li>Adhikari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-stringency+blueprint+of+the+human+proteome%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">A high-stringency blueprint of the human proteome.</a> Nat Commun. 11 (1), 5301(2020).</li>
<li>Liao, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rbpworld+for+exploring+functions+and+disease+associations+of+rna-binding+proteins+across+species%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Rbpworld for exploring functions and disease associations of rna-binding proteins across species.</a> Nucleic Acids Res. 53 (D1), D220-D232 (2025).</li>
<li>Gebauer, F., Schwarzl, T., Valcarcel, J., Hentze, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rna-binding+proteins+in+human+genetic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Rna-binding proteins in human genetic disease.</a> Nat Rev Genet. 22 (3), 185-198 (2021).</li>
<li>Poodts, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+expression+of+sars-cov-2+spike+rbd+using+the+insect+cell-baculovirus+system%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Improved expression of sars-cov-2 spike rbd using the insect cell-baculovirus system.</a> Viruses. 14 (12), (2022).</li>
<li>Mckenzie, E. A., Abbott, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+recombinant+proteins+in+insect+and+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Expression of recombinant proteins in insect and mammalian cells.</a> Methods. 147, 40-49 (2018).</li>
<li>Shi, X., Jarvis, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+n-glycosylation+in+the+baculovirus-insect+cell+system%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">Protein n-glycosylation in the baculovirus-insect cell system.</a> Curr Drug Targets. 8 (10), 1116-1125 (2007).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2-merkaptoetanol (b-Me)</td><td>Sigma</td><td>M3148-500ML</td><td>14.3 M çözüm tock</td></tr><tr><td>AcquireMP 2024 R2</td><td>Refeyn</td><td>/</td><td>Veri Edinme Yazılımı</td></tr><tr><td>Adenosin-5'-trifosfat disodyum tuzu trihidrat (ATP)</td><td>Chem-Impex International</td><td>00015-100G</td><td>Çözeltiyi pH 7.0'a ayarlayın</td></tr><tr><td>Anti-Flag M2 affinity jeli</td><td>Millipore</td><td>A2220</td><td>Bayrak karşıtı affinity reçinesi</td></tr><tr><td>Benzamidin hidroklorür hidrat</td><td>Sigma</td><td>B6506-25G</td><td>Proteaz inhibitörü</td></tr><tr><td>Geniş aralıklı protein standartları (10-250 kDa)</td><td>Bio-Rad</td><td>P7719S</td><td>Prestained protein standartları</td></tr><tr><td>Kontes 3</td><td>Invitrogen</td><td>A49862</td><td>Otomatik hücre sayacı</td></tr><tr><td>DiscoverMP v2024 R2</td><td>Refeyn</td><td>/</td><td>Veri analiz yazılımı</td></tr><tr><td>Dulbecco'nun fosfatla tamponlanmış tuzlu suyu</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td>1x çözelti stok</td></tr><tr><td>DYKDDDDK peptidi</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A36805</td><td>3xFlag peptidi</td></tr><tr><td>FreeStyle 293-F Hücreleri</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R79007</td><td>memeli süspansiyon hücreleri</td></tr><tr><td>Geniust M nükleaz DMF dosyası</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-391121B</td><td>Evrensel nükleaz</td></tr><tr><td>HyClone CDM4HEK293 medyası</td><td>Cytiva</td><td>SH3085802</td><td>Serumsuz büyüme ortamı</td></tr><tr><td>HyClone SFM4Transfx-293 medya</td><td>Cytiva</td><td>SH3086002</td><td>Geçici transfeksiyon ortamı</td></tr><tr><td>Immersol 518F</td><td>Zeiss</td><td>4Y00-R0DY-1007-3BF3</td><td>Daldırma yağı</td></tr><tr><td>İzopropil alkol</td><td>Macron İnce Kimyasalları</td><td>3032-02</td><td></td></tr><tr><td>Laemmli örnek tamponu</td><td>Bio-Rad</td><td>1610737</td><td>2x çözelti stoku</td></tr><tr><td>Leupeptin</td><td>VWR</td><td>J580-25MG</td><td>Proteaz inhibitörü</td></tr><tr><td>Magnezyum klorür heksahidrat (MgCl2)</td><td>Fisher Scientific</td><td>M33-500</td><td></td></tr><tr><td>MassFerence P1&nbsp;</td><td>Refeyn</td><td>MP-CON-41033</td><td>500x kalibre dipçik</td></tr><tr><td>MassGlass UC numune hazırlık kiti</td><td>Refeyn</td><td>MP-CON-21022</td><td>Sürgü ve conta</td></tr><tr><td>Mikro biyo-spin kolonu</td><td>Bio-Rad</td><td>7326204</td><td>Boş polipropilen spin sütunu</td></tr><tr><td>Milli-Q IQ 7000 sistemi</td><td>Millipore</td><td>ZIQ7000T0C</td><td>Tip I ultrasaf su</td></tr><tr><td>Mini-Protean TGX lekesiz jeller</td><td>Bio-Rad</td><td>4568086</td><td>%4-15 SDS-SAYFA</td></tr><tr><td>Nem ile soğutma ve CO2 özellikli Minitron</td><td>Infors</td><td>72175</td><td>kuluçka makinesi sarsıntısı</td></tr><tr><td>MP hizalama kiti</td><td>Refeyn</td><td>MP-CON-21019</td><td>hizalama aracı, yumuşak uçlu cımbız, mıknatıs</td></tr><tr><td>Nanofotometre</td><td>Implen</td><td>NP80</td><td>UV-vis spektrofotometresi</td></tr><tr><td>Nutator</td><td>Clay Adams Markası</td><td>421105</td><td></td></tr><tr><td>Pepstatin A</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-45036B</td><td>Proteaz inhibitörü</td></tr><tr><td>Fenilmetilsülfonil florür (PMSF)</td><td>Research Products International</td><td>P20270-25.0</td><td>Proteaz inhibitörü</td></tr><tr><td>Polikarbonat shake matrosu ve nbsp;</td><td>Duran Wheaton Kimble</td><td>WPFBC1000S</td><td>havalandırmalı, bıçaq taban şişesi</td></tr><tr><td>Polietilen (PEI) MW 40.000</td><td>Çok bilimler</td><td>24765</td><td>Transfeksiyon Reaktifi</td></tr><tr><td>Qubit 4 Fluorometre</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Q33226</td><td></td></tr><tr><td>Kubit RNA yüksek hassasiyetli test kiti</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Q32852</td><td>RNA'ya özgü boya kullanılarak nicelik</td></tr><tr><td>SimplyBlue SafeStain</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>LC6065</td><td>Coomassie G-250</td></tr><tr><td>SLFN14 ekspresyon plazmid DNA'sı</td><td>Origene</td><td>RC226257</td><td>insan etiketli ORF klonu</td></tr><tr><td>Sodyum klorür (NaCl)</td><td>Millipore</td><td>1.37017</td><td></td></tr><tr><td>Tris, pH 7.4</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>J60202. K2</td><td>1 M tamponlu çözelti stok</td></tr><tr><td>Tris (2-karboksietil) fosfin hidroklorür (TCEP)</td><td>Altın Biyoteknolojisi</td><td>TCEP10</td><td>TCEP</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>VWR</td><td>M143-1L</td><td>deterjan</td></tr><tr><td>Trypan mavi lekesi</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>T10282</td><td>%0,4 çözelti stoku</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>VWR</td><td>0777-1L</td><td>deterjan</td></tr><tr><td>TwoMP</td><td>Refeyn</td><td>MP-PRO-00001</td><td>Kütle fotometresi</td></tr><tr><td>Zeba 40K Desaltin Kolonu</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A57759</td><td>Boyut Dışlama Kromatografisi</td></tr></tbody></table>

rekombinant İnsan slfn14 ribonükleazının hızlı üretimi ve kütle fotometrisi ile stoikiyometrik analiz

Rapid Production of Recombinant Human SLFN14 Ribonuclease and Stoichiometric Analysis by Mass Photometry

Rekombinant İnsan SLFN14 ribonükleazının hızlı üretimi ve kütle fotometrisi ile stoikiyometrik analiz

Ribonucleases are a specialized class of RNA binding proteins that catalyze RNA cleavage and contribute to diverse biological processes including gene ...

rapid-production-recombinant-human-slfn14-ribonuclease-stoichiometric

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

FRET kantitatif analizi (Förster rezonans enerji transferi) sinyalleri içeren bir roman yöntemini enzim kinetiği çalışmaları için tanımlanmıştır.

Kantitatif SENP1 Proteaz Kinetik Belirlenmesi (Förster rezonans enerji transferi) Analizi FRET

Toplam hücresel RNA, kısa vadeli RNA sentezi ve çürüme değişikliklerin yanı sıra, RNA işleme kinetiğini incelemek için kötü bir şablon sağlar. Burada, 4-thiouridine ile yeni kopyalanan RNA metabolik etiketlenmesi tarif, bu sınırlılıkların üstesinden gelmek için izin veren yeni transkripsiyonu RNA tiyol-spesifik bir biotinilasyon ve saflaştırma takip etti.

Hücre Kültürü RNA sentezi, İşleme ve Çürüme Yüksek Çözünürlük Gen İfadesi Profil için Yeni Transkripsiyonu RNA Metabolik Etiketleme

Eksonükleazlar, genom stabilitesinin sağlanmasında kritik roller oynar. WRN eksonükleaz fonksiyonunun kaybı erken yaşlanmaya neden olur. Nükleazın substratlarını ve diğer gereksinimlerini in vitro olarak incelemek, in vivo rolünü aydınlatmaya yardımcı olabilir. Burada, nükleaz aktivitesini ölçmek için hızlı ve tekrarlanabilir floresan bazlı bir test gösteriyoruz.

İnsan Progeroid WRN Eksonükleazının Ortologu DmWRNexo'yu Karakterize Etmek için Floresan Bazlı Bir Eksonükleaz Testi ve Diğer Nükleazlara Uygulanması

Bu protokol, seçilen reaksiyon izleme kullanılarak karmaşık biyolojik numuneler içindeki hedef proteinlerin mutlak miktar tayini testlerinin nasıl gerçekleştirileceğini açıklar. Fare makrofaj kemotaksisi sinyal yolunun proteinlerini doğru bir şekilde ölçmek için kullanıldı. Hedef peptit seçimi, tahlil geliştirme ve kalitatif ve kantitatif tahliller ayrıntılı olarak açıklanmaktadır.

Mutlak Protein Niceleme Kütle Spektrometresi İzleme Seçilen Tepki

Bu iletişim kuralı ChIP-seq, 4sU seq, toplam RNA-seq ve hücre satırları ve Primer hücre için profil oluşturma ribozom Kombinatorik kullanımını açıklar. Transkripsiyon faktörü de novo transkripsiyon, RNA işlenmesi, ciro ve çeviri zamanla, bağlama ve olayların genel gidişatı harekete geçirmek ve/veya hızla değişen hücrelerde görüntüleme izleme değişiklikleri sağlar.

Gerçek zamanlı analiz bağlama, transkripsiyon, çeviri ve ciro hücresel etkinleştirme sırasında küresel olayları görüntülemek üzere transkripsiyon faktörü

Biz üretmek için bir yöntem tanımlamak ve genetik olarak yükseltecek solunum sinsisyal virüs (RSVs) ve bir en iyi duruma getirilmiş plak tahlil RSVs için değiştirilebilir. Biz bu protokolü sırasıyla miktar RSV çoğaltma izin ve analiz RSV dahil organları ve granül dahil organları ilişkili dynamics canlı iki rekombinant virüs oluşturarak göstermektedir.

Üretimi, güçlendirme ve titrasyon rekombinant solunum sinsisyal virüs

Burada, bir cDNA ara ürünü olmadan kısa RNA'yı (çalışma başına &lt;35 nt) dizilemek için doğrudan bir yöntem olarak ve tek bir çalışmada tek baz hassasiyetinde farklı nükleotid modifikasyonlarını dizilemek için genel bir yöntem olarak kullanılabilen LC-MS tabanlı bir dizileme yöntemi için ayrıntılı bir protokol açıklıyoruz.

2D-HELS MS Seq: Farklı Nükleotid Modifikasyonlarına Sahip RNA Karışımlarının Doğrudan ve de novo Dizilimi için Genel LC-MS Tabanlı Bir Yöntem

Tek moleküllü floresan enerji transferi ribozomal protein sentezi sırasında tRNA dinamiklerini izleyen bir yöntemdir. Bireysel ribozomları izleyerek, mekanizmalara ışık tutan inhomogeneöz popülasyonlar tanımlanır. Bu yöntem, diğer birçok karmaşık biyosistemdeki dinamik işlev ilişkilerini ortaya çıkarmak için genel olarak biyolojik konformasyon değişikliklerini izlemek için kullanılabilir. Tek molekül yöntemleri, ortalama etki nedeniyle geleneksel topluluk yöntemleriyle erişilemeyen oransız...

Ribozom Protein Sentezinin Tek Molekül floresan Enerji Transferi Çalışması

İki jetli bir CIJ ve dört jetli çok girişli girdap karıştırıcı (μMIVM) dahil olmak üzere sınırlı çarpma jeti (CIJ) karıştırıcı teknolojileri kullanılarak lipid nanopartiküllerinin (LNP'ler) sentezlenmesi için ayrıntılı bir protokol gösterilmiştir. CIJ mikserleri, tekrarlanabilir, türbülanslı mikro karıştırma ortamları oluşturur ve bu da monodispers LNP'lerin üretilmesiyle sonuçlanır.

Lipid Nanopartiküllerinin Kapalı Çarpmalı Jet Karıştırıcılarda Türbülanslı Akışla Sentezlenmesi

OnePot 'Rekombinant Elementler Kullanarak Protein Sentezi' (PURE) sisteminin ve hücresiz protein sentezi için ham ribozomların üretimi için güncellenmiş bir protokol sunuyoruz ve partiden partiye varyasyonları en aza indirmek için hücre büyümesini kontrol etmeye odaklanıyoruz.

Tekrarlanabilir Hücresiz Protein Sentezi için OnePot PURE ve Ham Ribozom Üretiminin İyileştirilmesi

Bu protokol, Escherichia coli'den hidrofobin SC16'nın rekombinant üretimi ve arıtmasını tanımlar ve kendi kendini montajını izlemek için floresan tabanlı testler sağlar.

Escherichia coli'den hidrofobin SC16'nın Rekombinant Üretimi ve Arındırılması ile floresan testleriyle kendi kendine montajının izlenmesi

Keşfedin rekombinant insan SLFN14 ribonükleazının hızlı üretimini ve kütle fotometrisi ile stoikiyometrik analizini. Bu yöntem, memeli hücre hatları kullanarak protein saflaştırma ve biyokimyasal çalışmalar için etkili bir strateji sunar.

Rekombinant İnsan SLFN14 ribonükleazının hızlı üretimi ve kütle fotometrisi ile stoikiyometrik analiz

Daha fazla video keşfet