ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol>
	<li>Roth, T. L., Puig-Saus, C., Yu, R., Shifrut, E., Carnevale, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reprogramming+human+T+cell+function+and+specificity+with+non-viral+genome+targeting.">Reprogramming human T cell function and specificity with non-viral genome targeting.</a> Nat Biotechnol. 36 (4), 285-297 (2018).</li><li>Li, L. H., McCarthy, P., Hui, S. W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-efficiency+electrotransfection+of+human+primary+hematopoietic+stem+cells.">High-efficiency electrotransfection of human primary hematopoietic stem cells.</a> FASEB J. 15 (1), 159-167 (2001).</li><li>Parnas, O., Jovanovic, M., Eisenhaure, T. M., Herbst, R. H., Dixit, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genome-wide+CRISPR+screen+in+primary+immune+cells+to+dissect+regulatory+networks.">A genome-wide CRISPR screen in primary immune cells to dissect regulatory networks.</a> Cell. 162 (3), 675-686 (2015).</li><li>Geng, T., Lu, C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+electroporation+for+cellular+analysis+and+delivery.">Microfluidic electroporation for cellular analysis and delivery.</a> Lab Chip. 13 (19), 3803-3821 (2013).</li><li>Pollack, M. G., Fair, R. B., Shenderov, A. D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrowetting-based+actuation+of+liquid+droplets+for+microfluidic+applications.">Electrowetting-based actuation of liquid droplets for microfluidic applications.</a> Appl Phys Lett. 77 (11), 1725-1726 (2000).</li><li>Sinha, H., Quach, A. B. V., Vo, P. Q. N., Shih, S. C. C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+automated+microfluidic+gene-editing+platform+for+deciphering+cancer+genes.">An automated microfluidic gene-editing platform for deciphering cancer genes.</a> Lab Chip. 18 (21), 3291-3301 (2018).</li><li>Little, S. R., Rizzetto, S., Sherwood, C. A., Quach, A. B. V., Shih, S. C. C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+tri-droplet+liquid+structure+for+highly+efficient+intracellular+delivery+in+primary+mammalian+cells+using+digital+microfluidics.">A tri-droplet liquid structure for highly efficient intracellular delivery in primary mammalian cells using digital microfluidics.</a> Adv Mater Technol. 8 (11), 2300719 (2023).</li><li>Little, S. R., Vo, P. Q. N., Sinha, H., Shih, S. C. C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+digital+microfluidic+platform+for+the+microscale+production+of+functional+immune+cell+therapies.">A digital microfluidic platform for the microscale production of functional immune cell therapies.</a> Anal Chem. 97 (21), 11026-11034 (2025).</li><li>Patel, M. A., Boribong, B. P., Sinha, H., Xiao, B., Xie, K., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Miniaturized+scalable+arrayed+CRISPR+screening+in+primary+cells+enables+discovery+at+the+single+donor+resolution.">Miniaturized scalable arrayed CRISPR screening in primary cells enables discovery at the single donor resolution.</a> Sci Rep. 15, 29350 (2025).</li><li>Schindelin, J., Arganda-Carreras, I., Frise, E., Kaynig, V., Longair, M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nat Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Nguyen, D. N., Roth, T. L., Li, P. J., Chen, P. A., Apathy, R., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymer-stabilized+Cas9+nanoparticles+and+modified+repair+templates+increase+genome+editing+efficiency.">Polymer-stabilized Cas9 nanoparticles and modified repair templates increase genome editing efficiency.</a> Nat Biotechnol. 38 (1), 44-49 (2020).</li></ol>

```html
<table><tbody><tr><td>12 Channel VOYAGER Adjustable Tip Spacing Pipette</td><td>Integra</td><td>4732</td><td>Enstrümantasyon</td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Gibco</td><td></td><td>Akış Tamponu&nbsp;</td></tr><tr><td>96 Well Plate, Sphera Low-Attachment Surface</td><td>Thermo Fisher</td><td>174927</td><td>Sferoid protokolü</td></tr><tr><td>96-well conical-bottom plate&nbsp;</td><td>Sarstedt</td><td>82.1583.001</td><td>Sferoid protokolü</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 anti-human CD4 Antibody</td><td>Biolegend</td><td>357421</td><td>1 in 200, Clone A161A1</td></tr><tr><td>Attune Flow Cytometer</td><td>ThermoFisher</td><td></td><td>Enstrümantasyon</td></tr><tr><td>DMEM Media</td><td>Gibco</td><td>10564011</td><td>Medya Ekleme- Sferoid kültürü</td></tr><tr><td>DMF compatible buffer</td><td>DropGenie</td><td></td><td>Transfeksiyon</td></tr><tr><td>DropGenie Transfection System</td><td>DropGenie</td><td></td><td>Enstrümantasyon</td></tr><tr><td>Echo&nbsp;Acoustic Dispenser 650 Series</td><td>Beckman Coulter Life Scienes</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Echo&nbsp;Qualified 384-well Low Dead Volume</td><td>Beckman Coulter Life Scienes</td><td></td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Invitrogen</td><td></td><td>Akış Tamponu</td></tr><tr><td>EGFP mRNA</td><td>Trilink</td><td>L-7201</td><td></td></tr><tr><td>EVOS Fluorescent Microscope</td><td>ThermoFisher</td><td></td><td>Enstrümantasyon</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Gibco</td><td>16000044</td><td>Medya Ekleme- Sferoid kültürü</td></tr><tr><td>Fida 1 instrument and Fida Neo 480 nm detector</td><td>Fida Biosystems ApS</td><td></td><td>Enstrümantasyon</td></tr><tr><td>Ghost Dye Violet 510</td><td>Cytek Biosciences</td><td>13-0870</td><td></td></tr><tr><td>HEK293T Cells</td><td>ATCC</td><td></td><td>Sferoid protokolü</td></tr><tr><td>Human IL-2 Recombinant Protein,</td><td>Peprotech</td><td>200-02 50ug</td><td>T hücresi medya eklemesi</td></tr><tr><td>Human Primary Pan CD3+ T Cells</td><td>All Cells</td><td></td><td>Periferik Kan, Kriyokorunamış, pan CD3+ Yardımcı T Hücreleri, Negatif Seçilmiş</td></tr><tr><td>Immunocult CD3/CD28 Activator</td><td>StemCell Technologies</td><td>10970</td><td>T Hücresi Aktivasyon medya</td></tr><tr><td>Immunocult Expansion Media</td><td>StemCell Technologies</td><td>10981</td><td>T Hücresi Aktivasyon medya</td></tr><tr><td>Incucyte Live Cell Analysis System</td><td>Sartorius</td><td></td><td>Enstrümantasyon</td></tr><tr><td>INTEGRA ASSIST PLUS pipetting robot</td><td>Integra</td><td>4505, 4-Position Portrait Deck (PN 4521),&nbsp;</td><td>Enstrümantasyon</td></tr><tr><td>non targeting synthetic guide RNA</td><td>Synthego</td><td></td><td>5&rsquo; GCACTACCAGAGCTAACTCA 3'</td></tr><tr><td>NucleoCounter NC-202</td><td>Chemometec</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PE anti-human TCR &alpha;/&beta; Recombinant Antibody</td><td>Biolegend</td><td>380805</td><td>1 in 200, Clone QA20B12&nbsp;</td></tr><tr><td>PE-Cy 7 Anti-Human CD8</td><td>BD Pharmingen</td><td>557750</td><td>1 in 200, Clone RPA-T8</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>Medya Ekleme- Sferoid kültürü</td></tr><tr><td>Poly-L-glutamic Acid (PGA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P4761-100MG</td><td>100mg/ml kullanarak</td></tr><tr><td>Prism version 8.0.0</td><td>GraphPad Software, Inc.</td><td></td><td>Yazılım</td></tr><tr><td>sNLS-SpCas9-sNLS Nükleaz</td><td>IDT</td><td>10017687</td><td></td></tr><tr><td>Spheroid Microplate</td><td>Corning</td><td>3830</td><td>Sferoid protokolü</td></tr><tr><td>Surfactant F</td><td>DropGenie</td><td></td><td>Transfeksiyon- DMF uyumlu tamponda 1:20 oranında kullanarak komple Transfeksiyon tamponu hazırlama</td></tr><tr><td>TRAC synthetic guide RNA</td><td>Synthego</td><td></td><td>5&rsquo; AGAGTCTCTCAGCTGGTACA 3'</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.05%), phenol red</td><td>Gibco</td><td>25-300-062</td><td>Sferoid protokolü</td></tr></tbody></table>
```

düşük girişli crispr genom düzenleme ve süspansiyon t hücreleri ile 3d hücre modellerinde mrna transfeksiyonu için dijital mikrofluidik elektroporasyon platformu

A Digital Microfluidic Electroporation Platform for Low-Input CRISPR Genome Editing and mRNA Transfection In Suspension T Cells and 3D Cell Models

Düşük Girişli CRISPR Genom Düzenleme ve Süspansiyon T Hücreleri ile 3D Hücre Modellerinde mRNA Transfeksiyonu için Dijital Mikrofluidik Elektroporasyon Platformu

Digital microfluidic (DMF) electroporation enables precise, low-volume genetic manipulation of mammalian cells while minimizing cellular input by up to ...

Our research develops automated digital microfluidic platforms for efficient low input transfection and CRISPR gene editing. Standard electrocuration requires millions of cells. This platform achieves efficient editing with only 10, 000 cells per condition.To begin, obtain a T75 flask from the incubator containing CD3 positive human primary T cells. In the tissue culture hood, transfer the cells to a 15 milliliter falcon tube and centrifuge at a relative centrifugal force of 200 for five minutes. Discard the supernatant and re-suspend the pellet in five milliliters of fresh medium.Pipette 10 microliters of cell suspension into a counter cell counting chamber. Using an automated cell counter, determine the cell concentration and viability. Pipette 100, 000 cells into four to five wells of a V-bottom well plate and place on ice.Reconstitute one lyophilized track knockout targeting single guide RNA or other sgRNA and one lyophilized non-targeting control, or NTC sgRNA, in nucleus free water to a stock concentration of 100 micromolar. After preparing a 100 milligram per milliliter stock solution of polyL-glutamic acid, or PGA, in nucleus free water in two tubes, label the tubes as, tra

a-digital-microfluidic-electroporation-platform-for-low-input-crispr

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Biz farklı nörotransmitterlerin iyi kontrollü bir şekilde bir beyin dilim microscale yüzeyleri açığa çıkarmak için standart elektrofizyoloji kurulumları ile entegre edilebilir basit bir mikroakışkan cihaz imalatı göstermektedir.

Beyin Dilim Uyarım mikroakışkan Ağ ve Standart Perfüzyon Odası

CD4 + T-Lenfosit Yakalama HIV için Disposable mikroakışkan Chip

Burada fare retina ganglion hücrelerinin (RGCs) gen ekspresyonu işlemek için iki teknik...

Fare Retina Ganglion Hücreleri Gen İfadesi utero ve ex vivo Elektroporasyon

Bu yöntem, Gaussia lusiferaz (GLuc) geni içeren lineerize edilmiş bir plazmidden hem kaplı hem de kaplanmamış mRNA'nın yüksek verimli in vitro sentezini tanımlamaktadır. RNA saflaştırılır ve kaplanmamış RNA'nın bir kısmı Vaccinia virüsü kaplama enzimi kullanılarak enzimatik olarak kaplanır. Son adımda, mRNA HeLa hücrelerine transfekte edilir ve hücre kültürü süpernatantları lusiferaz aktivitesi için analiz edilir.

HeLa Hücre Transfeksiyon Ardından Gaussia Lusiferaz mRNA in vitro transkripsiyon ve Kapatma yılında

Virionların yüzeye bağlanması, Süper çözünürlüklü floresan görüntüleme veya atomik kuvvet mikroskopisi (AFM) ile tek virion görüntüleme için bir gerekliliktir. Burada, VIRIONların AFM ve süper çözünürlüklü floresan görüntülemede kullanıma uygun cam yüzeylere kontrollü yapışıklık için örnek bir hazırlama yöntemi gösteriyoruz.

Tek Virion Atomik Kuvvet Mikroskopisi ve Süper Çözünürlüklü Floresan Görüntüleme için Numune Hazırlama

Ökaryotik proteinlerin uygun translasyon sonrası modifikasyonla laboratuvar ölçeğinde üretimi önemli bir engel teşkil etmektedir. İşte bir memeli ekspresyon sistemi kullanarak protein ekspresyonu için hızlı kuruluş ve geri dönüşe sahip sağlam bir protokol. Bu sistem, seçici amino asidi, proteinlerin seçici etiketlenmesini ve glikan bileşiminin küçük molekül modülatörlerini destekler.

Süspansiyon HEK293 hücrelerinin kısa süreli transfection ile Rekombinant İnsan Proteinlerinin Yüksek Verimli İfadesi

Gen hedefleme mutajenez genom düzenleme teknikleri kullanılarak organizmaların geniş bir mümkündür. Burada, Astyanax mexicanus, yüzey balık ve cavefish içeren balık türlerinin efektör nükleazlar (Talens) gibi transkripsiyon aktivatörü kullanılarak hedeflenen gen mutasyon için bir protokol göstermektedir.

genom Düzenleme<em&gt; Astyanax mexicanustan</emKullanma&gt; Transkripsiyon Aktivatör benzeri Efektör Nükleazlar (Talens)

Burada CRISPR/Cas9 genom nakavt elektrikli balık üretimi ve arkası için bir protokol sunulmuştur. Ayrıntılı olarak özetlenen bir gymnotiform ve mormyrid hem de gerekli moleküler biyoloji, Üreme ve hayvancılık gereksinimleri ve cas9 indel F0 larvaları üretmek için enjeksiyon teknikleri vardır.

Kıvılcım Susturma: CRISPR/Cas9 Zayıf Elektrikli Balıklarda Genom Düzenleme

Burada, B hücrelerindeki genlerin biyolojik fonksiyonlarını ve B hücre terapötiklerinin gelişimini incelemek için gen nakavt (KO) ve knock-in (KI) için birincil insan B hücrelerinin CRISPR/ Cas9 tabanlı genom mühendisliği için ayrıntılı, adım adım bir protokol sunuyoruz.

CRISPR/Cas9 Kullanarak Birincil İnsan B Hücrelerinin Genom Mühendisliği

Burada, Nasonia vitripennis'te etkili pupal ve yetişkin enjeksiyonları için yöntemleri embriyo mikroenjeksiyonuna erişilebilir alternatifler olarak tanımlıyoruz ve RNA paraziti (RNAi) yoluyla RNA susturma veya CRISPR/Cas9 genom düzenlemesi yoluyla gen nakavt kullanarak ilgi genlerinin fonksiyonel analizini sağlıyoruz.

Nasonia vitripennis'te RNAi ve CRISPR Gen Düzenleme için Pupal ve Yetişkin Enjeksiyonları

DropGenie.  Bu protokol, birincil insan T hücrelerinde TCRα/β reseptörünün küçültülmüş CRISPR–Cas9 genom düzenlemesini 'DMF-ection' olan dijital mikrofluidik (DMF) elektroporasyon platformu kullanarak tanımlar. Bu yöntem, yüksek canlılıkla paralel, düşük girdili gen düzenlemesini mümkün kılar ve çok hücreli 3D sferoidlere mRNA iletimi için daha da uyarlanabilir.

Düşük Girişli CRISPR Genom Düzenleme ve Süspansiyon T Hücreleri ile 3D Hücre Modellerinde mRNA Transfeksiyonu için Dijital Mikrofluidik Elektroporasyon Platformu

Daha fazla video keşfet