ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol>
	<li>Hussein, R. S., Bin Dayel, S., Abahussein, O., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influences+on+skin+and+intrinsic+aging:+biological,+environmental,+and+therapeutic+insight.">Influences on skin and intrinsic aging: biological, environmental, and therapeutic insight.</a> J Cosmet Dermatol. 24, e16688 (2025).</li><li>Dorf, N., Maciejczyk, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+senescence-from+basic+research+to+clinical+practice.">Skin senescence-from basic research to clinical practice.</a> Front Med (Lausanne). 11, 1484345 (2024).</li><li>Grenier, A., Morissette, M. C., Rochette, P. J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+combination+of+cigarette+smoke+and+solar+rays+causes+effects+similar+to+skin+aging+in+a+bilayer+skin+model.">The combination of cigarette smoke and solar rays causes effects similar to skin aging in a bilayer skin model.</a> Sci Rep. 13, 17969 (2023).</li><li>Varani, J., Dame, M. K., Rittie, L., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+collagen+production+in+chronologically+aged+skin:+roles+of+age-dependent+alteration+in+fibroblast+function+and+defective+mechanical+stimulation.">Decreased collagen production in chronologically aged skin: roles of age-dependent alteration in fibroblast function and defective mechanical stimulation.</a> Am J Pathol. 168, 1861-1868 (2006).</li><li>Zhang, S., Duan, E. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fighting+against+skin+aging:+the+way+from+bench+to+bedside.">Fighting against skin aging: the way from bench to bedside.</a> Cell Transplant. 27, 729-738 (2018).</li><li>Hussen, N. H. a., Abdulla, S. K., Ali, N. M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+antioxidants+in+skin+aging+and+the+molecular+mechanism+of+ROS:+a+comprehensive+review.">Role of antioxidants in skin aging and the molecular mechanism of ROS: a comprehensive review.</a> Aspects Mol Med. 5, 100063 (2025).</li><li>Addor, F. A. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beyond+photoaging:+additional+factors+involved+in+the+process+of+skin+aging.">Beyond photoaging: additional factors involved in the process of skin aging.</a> Clin Cosmet Investig Dermatol. 11, 437-443 (2018).</li><li>Mucha, M., Skrzydlewska, E., GÄ™gotek, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+protection+against+oxidative+stress+in+human+skin+melanocytes.">Natural protection against oxidative stress in human skin melanocytes.</a> Commun Biol. 8, 1283 (2025).</li><li>Hughes, B. K., Bishop, C. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+understanding+of+the+role+of+senescent+melanocytes+in+skin+ageing.">Current understanding of the role of senescent melanocytes in skin ageing.</a> Biomedicines. 10, 3111 (2022).</li><li>Kami&#324;ski, K., Kazimierczak, U., Kolenda, T. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+in+melanogenesis+and+melanoma+development.">Oxidative stress in melanogenesis and melanoma development.</a> Contemp Oncol (Pozn). 26, 1-7 (2022).</li><li>Jim&#233;nez-Cervantes, C., Mart&#237;nez-Esparza, M., P&#233;rez, C., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+melanogenesis+in+response+to+oxidative+stress:+transient+downregulation+of+melanocyte+differentiation+markers+and+possible+involvement+of+microphthalmia+transcription+factor.">Inhibition of melanogenesis in response to oxidative stress: transient downregulation of melanocyte differentiation markers and possible involvement of microphthalmia transcription factor.</a> J Cell Sci. 114, 2335-2344 (2001).</li><li>Da&#324;czak-Pazdrowska, A., Gornowicz-Porowska, J., Pola&#324;ska, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+senescence+in+skin-related+research:+targeted+signaling+pathways+and+naturally+occurring+therapeutic+agents.">Cellular senescence in skin-related research: targeted signaling pathways and naturally occurring therapeutic agents.</a> Aging Cell. 22, e13845 (2023).</li><li>Green, K. J., Pokorny, J., Jarrell, B. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dangerous+liaisons:+loss+of+keratinocyte+control+over+melanocytes+in+melanomagenesis.">Dangerous liaisons: loss of keratinocyte control over melanocytes in melanomagenesis.</a> Bioessays. 46, e2400135 (2024).</li><li>Ali, L., Al Niaimi, F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+melasma+explained.">Pathogenesis of melasma explained.</a> Int J Dermatol. 64, 1201-1212 (2025).</li><li>Low, E., Alimohammadiha, G., Smith, L. A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+good+is+the+evidence+that+cellular+senescence+causes+skin+ageing.">How good is the evidence that cellular senescence causes skin ageing.</a> Ageing Res Rev. 71, 101456 (2021).</li><li>Chin, T., Lee, X. E., Ng, P. Y., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+cellular+senescence+in+skin+aging+and+age-related+skin+pathologies.">The role of cellular senescence in skin aging and age-related skin pathologies.</a> Front Physiol. 14, 1297637 (2023).</li><li>Gerasymchuk, M., Robinson, G. I., Kovalchuk, O., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+of+the+senescence-associated+phenotype+in+human+skin+fibroblasts.">Modeling of the senescence-associated phenotype in human skin fibroblasts.</a> Int J Mol Sci. 23, 7124 (2022).</li><li>Zimmermann, T., Pommer, M., Kluge, V., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+cellular+senescence+in+human+primary+melanocytes+and+malignant+melanoma+cells+in+vitro.">Detection of cellular senescence in human primary melanocytes and malignant melanoma cells in vitro.</a> Cells. 11, 1489 (2022).</li><li>Tang, J., Li, Q., Cheng, B., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+culture+of+human+face+skin+melanocytes+for+the+study+of+hyperpigmentation.">Primary culture of human face skin melanocytes for the study of hyperpigmentation.</a> Cytotechnology. 66, 891-898 (2014).</li><li>Ku&#269;era, O., Endlicher, R., Rou&#353;ar, T., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+tert-butyl+hydroperoxide-induced+oxidative+stress+on+lean+and+steatotic+rat+hepatocytes+in+vitro.">The effect of tert-butyl hydroperoxide-induced oxidative stress on lean and steatotic rat hepatocytes in vitro.</a> Oxid Med Cell Longev. 2014, 752506 (2014).</li><li>Wedel, S., Martic, I., Hrapovic, N., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=tBHP+treatment+as+a+model+for+cellular+senescence+and+pollution-induced+skin+aging.">tBHP treatment as a model for cellular senescence and pollution-induced skin aging.</a> Mech Ageing Dev. 190, 111318 (2020).</li><li>Rabin, D. M., Rabin, R. L., Blenkinsop, T. A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+oxidative+stress+upregulates+drusen-related+protein+expression+in+adult+human+RPE+stem+cell-derived+RPE+cells:+a+novel+culture+model+for+dry+AMD.">Chronic oxidative stress upregulates drusen-related protein expression in adult human RPE stem cell-derived RPE cells: a novel culture model for dry AMD.</a> Aging (Albany NY). 5, 51-66 (2013).</li><li>Shakel, Z., Costa Lima, S. A., Reis, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+to+make+human+skin+models+based+on+cellular+senescence+for+ageing+research.">Strategies to make human skin models based on cellular senescence for ageing research.</a> Ageing Res Rev. 100, 102430 (2024).</li><li>Mort, R. L., Jackson, I. J., Patton, E. E. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+melanocyte+lineage+in+development+and+disease.">The melanocyte lineage in development and disease.</a> Development. 142, 620-632 (2015).</li><li>Goff, P. S., Castle, J. T., Kohli, J. S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+culture,+and+transfection+of+melanocytes.">Isolation, culture, and transfection of melanocytes.</a> Curr Protoc. 3, e774 (2023).</li><li>Martic, I., Wedel, S., Jansen-DÃ¼rr, P., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+to+investigate+UVB-induced+cellular+senescence+and+pigmentation+in+melanocytes.">A new model to investigate UVB-induced cellular senescence and pigmentation in melanocytes.</a> Mech Ageing Dev. 190, 111322 (2020).</li><li>Victorelli, S., Lagnado, A., Halim, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescent+human+melanocytes+drive+skin+ageing+via+paracrine+telomere+dysfunction.">Senescent human melanocytes drive skin ageing via paracrine telomere dysfunction.</a> EMBO J. 38, e101982 (2019).</li><li>Zhang, H., Davies, K. J. A., Forman, H. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+response+and+Nrf2+signaling+in+aging.">Oxidative stress response and Nrf2 signaling in aging.</a> Free Radic Biol Med. 88, 314-336 (2015).</li><li>Birch, J., Gil, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senescence+and+the+SASP:+many+therapeutic+avenues.">Senescence and the SASP: many therapeutic avenues.</a> Genes Dev. 34, 1565-1576 (2020).</li><li>Kang, H. Y., Ortonne, J. P. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+should+be+considered+in+treatment+of+melasma.">What should be considered in treatment of melasma.</a> Ann Dermatol. 22, 373-378 (2010).</li><li>Davalli, P., Mitic, T., Caporali, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ROS,+cell+senescence,+and+novel+molecular+mechanisms+in+aging+and+age-related+diseases.">ROS, cell senescence, and novel molecular mechanisms in aging and age-related diseases.</a> Oxid Med Cell Longev. 2016, 3565127 (2016).</li><li>Almeida, F. V., Douglass, S. M., Fane, M. E., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bad+company:+microenvironmentally+mediated+resistance+to+targeted+therapy+in+melanoma.">Bad company: microenvironmentally mediated resistance to targeted therapy in melanoma.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 32, 237-247 (2019).</li><li>Brenner, M., Hearing, V. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+protective+role+of+melanin+against+UV+damage+in+human+skin.">The protective role of melanin against UV damage in human skin.</a> Photochem Photobiol. 84, 539-549 (2008).</li><li>L&#243;pez-Ot&#237;n, C., Blasco, M. A., Partridge, L., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hallmarks+of+aging.">The hallmarks of aging.</a> Cell. 153, 1194-1217 (2013).</li><li>Videira, I. F., Moura, D. F., Magina, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+regulating+melanogenesis.">Mechanisms regulating melanogenesis.</a> An Bras Dermatol. 88, 76-83 (2013).</li><li>Ratz-&#321;yko, A., Arct, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resveratrol+as+an+active+ingredient+for+cosmetic+and+dermatological+applications:+a+review.">Resveratrol as an active ingredient for cosmetic and dermatological applications: a review.</a> J Cosmet Laser Ther. 21, 84-90 (2019).</li><li>Xu, M., Pirtskhalava, T., Farr, J. N., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Senolytics+improve+physical+function+and+increase+lifespan+in+old+age.">Senolytics improve physical function and increase lifespan in old age.</a> Nat Med. 24, 1246-1256 (2018).</li><li>Ogrodnik, M., Evans, S. A., Fielder, E., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+senescent+cell+clearance+alleviates+age-related+brain+inflammation+and+cognitive+impairment+in+mice.">Whole-body senescent cell clearance alleviates age-related brain inflammation and cognitive impairment in mice.</a> Aging Cell. 20, e13296 (2021).</li><li>Hernandez-Segura, A., de Jong, T. V., Melov, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unmasking+transcriptional+heterogeneity+in+senescent+cells.">Unmasking transcriptional heterogeneity in senescent cells.</a> Curr Biol. 27, 2652-2660.e4 (2017).</li></ol>

<table><tbody><tr><td>0.22 &micro;m membrane filter</td><td>Merck&nbsp;</td><td>SLGVR33RS</td><td></td></tr><tr><td>1 M sitrik asit&nbsp;</td><td>Merck&nbsp;</td><td>K91567844</td><td>aq. dest.'de hazırla</td></tr><tr><td>1 M MgCl2</td><td>Merck</td><td>A649033</td><td>aq. dest.'de hazırla</td></tr><tr><td>1 M Na2HPO4</td><td>Merck</td><td>K56036736</td><td>aq. dest.'de hazırla</td></tr><tr><td>10 M NaOH</td><td>Lab Honeywell</td><td>30620</td><td>aq. dest.'de hazırla</td></tr><tr><td>37% formaldehit</td><td>Sigma</td><td>252549</td><td></td></tr><tr><td>4% paraformaldehit</td><td>CarlRoth</td><td>0335.3</td><td></td></tr><tr><td>5 M Sodyum Klorür&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S3014</td><td>aq. dest.'de hazırla</td></tr><tr><td>50% glutaraldehit</td><td>Sigma</td><td>G6403</td><td></td></tr><tr><td>5-Brom-4-Klor-3-indol-&beta;-D-Galaktopiranozid (X-Gal)</td><td>Sigma</td><td>B9146</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor-konjuge ikincil antikor 2 mg/mL</td><td>Invitrogen</td><td>A11008</td><td></td></tr><tr><td>BSA (bovin serum albümini)</td><td>Sigma</td><td>A7030</td><td></td></tr><tr><td>Kimyasal ışık veren substrat</td><td>Sigma</td><td>WBKLS0500</td><td></td></tr><tr><td>Costar CellLifter&nbsp;</td><td>Corning</td><td>3008</td><td></td></tr><tr><td>Hücre kültürü/mikroskopi için kapak camı</td><td>Epredia</td><td>CB00200RA120MNZ0</td><td></td></tr><tr><td>DermaLife Bazal Ortam</td><td>CellSystems</td><td>LM-0004</td><td></td></tr><tr><td>DermaLife M Melanosit Kiti&nbsp;</td><td>CellSystems</td><td>LS-1041</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Fosfat Tamponlu Salin&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>İnsan neonatal melanositler</td><td>CellSystems</td><td>FC-0023</td><td></td></tr><tr><td>LaminB1 antikoru (tavşan)</td><td>Abcam</td><td>AB16048</td><td>5% BSA içinde 1:1000 seyrelt</td></tr><tr><td>DAPI içeren montaj maddesi</td><td>Abcam</td><td>AB104139</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin çözeltisi&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>Poliakrilamid gradyan jelleri</td><td>Bio-Rad</td><td>456-8095</td><td></td></tr><tr><td>Poli-D-Lizin, 0.1 mg/mL&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>A38904-01</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum ferisiyanür</td><td>Sigma</td><td>P8131</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum ferrosiyanür</td><td>Sigma</td><td>P-9387</td><td></td></tr><tr><td>pRB antikoru (tavşan)</td><td>CellSignalling</td><td>93085</td><td>5% BSA içinde 1:1000 seyrelt</td></tr><tr><td>Protaze inhibitör kokteyli</td><td>kendi hazırladığım</td><td>N/A</td><td>500 mM NaF; 2 &micro;g/ml Aprotinin; 1 mM PMSF; 1 mM aktive Na-Ortovanadat</td></tr><tr><td>RIPA tamponu&nbsp;</td><td>kendi hazırladığım</td><td>N/A</td><td>içeren: 50 mM Tris-HCl; 1% NP-40; 0.5% Na-deoksikolat; 0.1% SDS; 150 mM NaCl; 2 mM EDTA</td></tr><tr><td>RLT tamponu</td><td>Qiagen</td><td>1015762</td><td>RNeasy Mini Kit'te dahil&nbsp;</td></tr><tr><td>RNeasy Mini Kit</td><td>Qiagen</td><td>74106</td><td></td></tr><tr><td>Yağsız süt tozu (TBS-T içindeki %5 süt)</td><td>Sigma</td><td>70166</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum sitrat (%0.1 çözelti için)</td><td>Sigma</td><td>S4641</td><td></td></tr><tr><td>Soya fasulyesi tripsin inhibitörü, 0.5 mg/mL&nbsp;</td><td>Thermofisher</td><td>17075-029</td><td></td></tr><tr><td>tert-Butil hidroperoksit (tBHP)</td><td>Sigma</td><td>458139</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100 (%0.3 çözelti için)</td><td>Sigma</td><td>T9284</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA çözeltisi</td><td>Sigma</td><td>T3924</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-merkaptoetanol</td><td>CarlRoth</td><td>4227.3</td><td></td></tr><tr><td>&gamma;H2AX antikoru (tavşan)</td><td>CellSignalling</td><td>2577S</td><td>1:200 seyrelt&nbsp;</td></tr></tbody></table>

tert-bütil hidroperoksit kullanarak birincil insan melanositlerinde stres kaynaklı erken yaşlanma için standart bir protokol

A Standardized Protocol for Inducing Stress-Induced Premature Senescence in Primary Human Melanocytes Using Tert-butyl Hydroperoxide

Tert-bütil hidroperoksit kullanarak birincil insan melanositlerinde stres kaynaklı erken yaşlanma için standart bir protokol

Environmental stressors, including UV radiation, air pollution, or cigarette smoke, drive extrinsic skin aging. Exposure to these extrinsic aging factors ...

Araştırmamız, melanositlerin senesans fenotipini ve bunun ekstrinsik cilt yaşlanmasına olan katkısını incelemeye odaklanmaktadır. Mevcut senesans modelleri fibroblastları kullanmakta ve melanosite özgü biyolojiyi yakalamada yetersiz kalmaktadır. Bu protokol, primer insan melanositlerinde tBHP aracılı oksidatif stres indüklemektedir.Başlamak için gerekli reaktifleri hazırlayın. Melanositleri çözüp üç gün boyunca toparlanmalarına izin verdikten sonra, ekim gününde hücrelerin %80 ila %90 konfluens düzeyine ulaştığından emin olun. Flasktaki besiyerini aspire edin.Hücreleri iki kez DPBS ile yıkayın. Hücreleri ayırmak için iki mililitre tripsin EDTA çözeltisi ekleyin. Balonu %5 karbon dioksit içeren 37 °C sıcaklıktaki inkübatöre beş dakika boyunca yerleştirin.Erleni hafifçe tıklatın. Ardından, hücrelerin tamamen ayrıldığını doğrulamak için mikroskop altında hücreleri gözlemleyin. Reaksiyonu durdurmak için hacmin 1,5 katı kadar tripsin inhibitörü ekleyin.Hücre süspansiyonunu 15 mililitrelik konik bir tüpe aktarın. Süspansiyonu DPBS ile 10 mililitrelik bir son hacme gelecek şekilde seyreltin. Hücre süspansiyonunu 100 bağıl santrifüj kuvvetinde beş dakika boyunca santrifüjleyin.Süpernatantı aspire edin ve hücre peletini istenen hacme ulaşacak şekilde besiyerinde yeniden süspande edin. tert-Bütil hidroperoksit veya tBHP uygulanacak plaklar için 10 santimetrelik kap başına 600.000 hücre ekleyin. Kontrol plakları için plaka başına 400.000 hücre ekleyin.tBHP stokundan DPBS veya besiyeri kullanarak 10 millimolar çalışma çözeltisi hazırlayın. Her işlem için hücrelere bir saat boyunca 100 micromolar tBHP ekleyin. tBHP'nin besiyeri genelinde eşit şekilde dağılması için plakayı ileri geri hareket ettirin.Hücreleri 37 °C'de ve %5 karbondioksit içeren inkübatörde tam bir saat boyunca bekletin. tBHP işlemini sonlandırmak için medyumu aspire edin. Plakaları 37 °C'de önceden ısıtılmış DPBS ile iki kez yıkayın.Plakalara uygun hacimde taze besiyeri ekleyin. Plakaları inkübatöre yerleştirin ve bir sonraki işlemden önce hücrelerin en az dört saat boyunca toparlanmasını sağlayın. İkinci işlem için aynı günün ilerleyen saatlerinde işlem prosedürünü tekrarlayın.Tedavi rejimine dördüncü güne kadar devam edin, ardından senesans belirteçlerini değerlendirmek için hücreleri dokuzuncu güne kadar kültürde tutun. tBHP ile işlem görmüş hücreleri ve kontrol hücrelerini sayın. Hücreleri aynı başlangıç yoğunluğunda yeniden ekimleyin veya tBHP ile işlem görmüş plakalardan 600,000 hücreden daha az elde edildiyse toplanan tüm hücreleri yeniden ekimleyin.Kültürün dördüncü, dokuzuncu ve 15. günlerinde hücreleri sayın. Dokuzuncu günde, hücreleri iki kez PBS ile yıkayın. Hücreleri %2 formaldehit ve %0,4 glutaraldehit kullanarak fikse edin.Fikse edilmiş hücreleri iki kez PBS ile yıkayın. Fikse edilmiş hücreleri pH 6 değerindeki bir boyama çözeltisi içinde inkübe edin. Plakayı ışıktan korumak için kapatın, ardından hücreleri karbondioksit yokluğunda 37 °C'de 18 saat boyunca inkübe edin.Hücreleri PBS ile iki kez yıkayın. Işık mikroskobu kullanarak, mavi boyanmış hücreleri görüntüleyin ve sayılarını belirleyin. Bu sayıyı aynı görüş alanındaki toplam hücre sayısına bölün.Sonuçları pozitif hücrelerin yüzdesi olarak ifade edin. Oksidatif stres indüksiyonunun ardından, tBHP uygulaması melanosit proliferasyonunu kontrollere kıyasla önemli ölçüde azaltmıştır. Uygulama yapılan hücreler dokuzuncu güne kadar yalnızca 1.4 kümülatif popülasyon ikiye katlanmasına (cPDL) ulaşırken, kontroller 3.1 cPDL'ye ulaşmıştır.15. güne gelindiğinde, işlem görmüş hücreler 1,9 cPDL değerinde durağanlaşırken, kontrol hücreleri 5,1 cPDL'ye kadar genişlemiştir. tBHP ile işlem görmüş melanositler, ölçülen tüm zaman noktalarında kontrollere kıyasla artmış hücre yüzey alanı göstermiş ve bu büyüme 15. güne kadar ilerleyerek senesent hücrelerin genişlemiş ve yassılaşmış morfolojisiyle uyumlu bir seyir izlemiştir. tBHP ile işlem görmüş melanositler, kontrollerdeki %3'lük orana kıyasla %32 pozitif hücre ile senesensle ilişkili beta-galaktosidaz veya SA-beta-galaktosidaz aktivitesinde bir artış göstermiştir.SA-beta-galaktosidaz pozitifliğindeki artış, senesent bir fenotiple tutarlıydı. İmmünofloresan analiz, tBHP ile işlem görmüş melanositlerde kontrollere kıyasla artmış gamma-H2AX seviyeleri gösterdi. İşlem görmüş hücreler, kontrollere göre daha güçlü gamma-H2AX sinyali sergiledi.Gerçek zamanlı kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu analizi, interlökin-8'in en büyük artışı göstermesiyle birlikte, yaşlanma ile ilişkili salgılayıcı fenotip faktör ekspresyonunda artış olduğunu göstermiştir. İnterlökin-6 ve matriks metalloproteinaz-1 ise orta düzeyde artışlar göstermiştir. Western blot analizi, yaşlanma indüksiyonunu doğrulamıştır.tBHP ile işlem görmüş melanositlerde, kontrollere kıyasla Lamin B1 seviyelerinde belirgin bir azalma gözlenmiştir. tBHP ile işlem görmüş melanositlerde, fosforile retinoblastom proteini seviyeleri kontrollere göre azalmıştır. tBHP uygulaması, melanositlerde p16 ve p21'in transkripsiyonel ekspresyonunu artırmıştır.Bu model, araştırmacıların senesent melanositlerin pigmentasyonu nasıl etkilediğini ve SASP inflamatuar faktörleri aracılığıyla çevre hücrelerle nasıl iletişim kurduğunu incelemelerine olanak tanır. Bu protokoldeki zorluk, zamanlamanın hassasiyetidir. tBHP, günde iki kez ve en az dört saatlik aralıklarla uygulanmalıdır.Bu protokol takip edilerek, yaşlılık; yaşlılıkla ilişkili beta-galaktosidaz boyaması, immünofloresan, RT-qPCR ve belirlenmiş yaşlılık belirteçlerinin Western blotting yöntemleri kullanılarak karakterize edilebilir.

a-standardized-protocol-for-inducing-stress-induced-premature

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu videoda, insan derisini taklit eden bir fare modeli olan insanlaştırılmış bir fare modelinde UV duyarlılığını ölçmeye yönelik bir yöntem açıklanmaktadır. Ciltte kızarıklık veya ödem oluşturabilecek UV radyasyonunun minimum eritematöz dozunu (MED) belirliyoruz. Yöntem, UV duyarlılığını azaltmak için kullanılan ilaçların etkinliğini bulmaya yardımcı olabilir.

Minimum Eritematöz Doz Deneyi: Fare Modellerinde UV Duyarlılığını Ölçmek İçin Bir Yöntem

Epidermal melanin tenli UV duyarlı insan bir fare modelinde forskolin topik uygulanmasıyla elde edilir. En az eritematöz doz (MED) deneyi ile ölçüldüğü gibi güçlü bir UV aracılı enflamasyonun (güneş yanığı) karşı koruma koyulaşması deri ve epidermal cAMP düzeyleri farmakolojik manipülasyonu.

Bir Insanlaşmış Fare Modeli epidermal melanin ve Karşı Koruma yanığı Farmakolojik İndüksiyon

Bu çalışma, bir nöral ile insan pluripotent kök hücreleri pigmentli olgun melanosit üretilmesi ve besleyici içermeyen, 25 günlük protokolünü kullanarak ara madde aşama melanoblast için bir in vitro farklılaşma protokolü tarif eder.

Insan pluripotent kök hücreleri gelen melanosit besleyici içermeyen türetilmesi

Burada, bir dizi indüksiyon için protokol ve kültürlü hücrelerdeki hücresel yaşlanma doğrulanmasını tartışmak. Biz farklı yaşlanma-inducing uyaranlara üzerinde odaklanmak ve ortak yaşlanma ilişkili işaretçileri miktar açıklayın. Fibroblastlar içerebilen bir model olarak kullanarak teknik ayrıntıları sağlar, ancak iletişim kuralları için çeşitli hücresel modelleri adapte edilebilir.

İndüksiyon ve birincil insan hücrelerinde hücresel yaşlanma doğrulama

Aşağıdaki prosedür, genetik olarak tasarlanan bir fare modelini kullanarak, murine dorsal deride melansitik tümör başlamasını uzamsal ve temporal kontrol etmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu protokol makroskopik ve mikroskopik kutanöz Melanom inisiyasyonu açıklanmaktadır.

Mutant melanosit kök hücrelerinden Murine Melanoma başlangıcı uzamsal ve temporal kontrol

Bu protokolün amacı, fare derisinde öldürücü olmayan seviyelerde reaktif oksijen türlerinin (ROS) geçici in vivo üretimini indüklemek ve dokudaki fizyolojik tepkileri daha da teşvik etmektir.

Fare Derisinde Kök Hücre Nişlerinin Uyarılması ve Doku Rejenerasyonu, Değiştirilebilir Protoporfirin IX'a Bağlı Reaktif Oksijen Türlerinin Fotojenerasyonu ile Yerinde

Bu makale, Y-27632'nin TIVA ortamına eklenmesinin yetişkin cilt dokularından melanosit lerin verimini önemli ölçüde artırabileceğini bildiriyor.

Y-27632 Yetişkin Cilt Dokularından İnsan Melanositlerin Verimini Zenginleştirir

Hücre morfolojisi, canlılık, yoğunluk, glutatyon ve UCP-2 seviyesini analiz eden retina pigment epitel hücrelerini H2O2ile tedavi ederek oksidatif stres modelinin geliştirilmesi ve kullanımı için bir protokol sunuyoruz. Transposon transfected hücreler tarafından salgılanan proteinlerin nöroretinal dejenerasyonu tedavi etmek için antioksidan etkisini araştırmak için yararlı bir modeldir.

Uyuyan Güzel Transposon Transposon Transfected İnsan Retina Pigment Epitel Hücrelerinde Oksidatif Stresin İndüksiyonu ve Analizi

Burada, melanositler için optimize edilmiş bir doğrudan yeniden programlama sistemi ve sorunsuz doğrudan yeniden programlama sağlayan yüksek verimli, konsantre bir virüs paketleme sistemi açıklanmaktadır.

Fare Fibroblastlarının Melanositlere Doğrudan Yeniden Programlanması

Bu yöntem, yaşlı cilt fibroblastlarının sağlıklı fibroblastları nasıl etkilediğini inceler. Yaşlanma, UVB maruziyeti yoluyla indüklenir ve koşullu ortam normal fibroblastlara uygulanır. Cilt yaşlanmasında değişen hücre-hücre iletişimini hedefleyen biyoaktif bileşiklerin değerlendirilmesine yardımcı olur.

Yaşlı Hücrelerden Koşullu Ortamla In vitro Modelde Sağlıklı Hücreler Arası İletişimi Yeniden Sağlayacak Antioksidan Kombinasyonu

Universität Innsbruck.  HNM'de erken yaşlanmayı tetiklemek için tBHP kullanılarak standartlaştırılmış bir protokol, büyüme durması, SA-β-galaktosidaz aktivitesi ve SASP faktörleri dahil olmak üzere temel yaşlanma belirteçlerini analiz etmek için standartlaştırılmış protokoller.

Tert-bütil hidroperoksit kullanarak birincil insan melanositlerinde stres kaynaklı erken yaşlanma için standart bir protokol

Daha fazla video keşfet