Hemefir Taşıma Yollarının Eşzamanlı Lenfatik ve Kan Damarları Örneklemesi Yoluyla Değerlendirilmesi İçin Kapsamlı Fare Modeli

Laboratuvarımız, lenfatik sistemin inflamatuar ve kardiyometabolik hastalıklardaki rolünü inceler ve bu hastalıkları tedavi etmek için lenfatikleri hedef almak için ilaç dağıtım stratejileri geliştirir. Bu protokol, ilaç metabolizması, besin akışı, bağışıklık sinyalleri ve karaciğer yanıtı gibi karaciğer süreçlerinin çeşitli koşullarda değerlendirilmesini sağlar. Başlangıç olarak, yaklaşık 250-300 gram ağırlığında, karotis ater ve juguler ven aracılığıyla dorsal yatma pozisyonunda başarıyla kanüllenmiş bir anestezi altındaki erkek Sprague-Dawley faresini cerrahi mikroskop altında yerleştirin.

Orta hattan sağ kanata doğru yaklaşık 1,5-2 santimetre aşağıda, kaburga kafesinin altında 4-5 santimetre yatay bir deri kesisi yapın. Deriyi geri çekin ve dış ile iç oblik kaslarda uyumlu kesiler yapın. İşlem sırasında karşılaşılan büyük kan damarlarını koterize edin veya bağlayın.

Karaciğeri diyaframa, mideyi sola ve ince bağırsağı alt tarafa taşımak için tuzlu nemli pamuklu çubuklar kullanın. Organları tuzlu gazlı bezle geri çekin. Karaciğer arterine paralel ve hafifçe kaudal olan, sağ böbreğe medial ve inferior vena kava bitişiğinde bulunan karaciğer lenf kanalını tespit edin.

Daha büyük opak veya beyaz mezenterik lenf kanalını, kaudal olarak konumlanan saydam ve dar karaciğer lenf kanalını tanımlamak için anatomik bir işaret olarak kullanın. Lenf kanalı ve vena kava üzerindeki bağ dokusunu çıkarmak için düz Graefe forseps kullanın. Pensepsleri sağ böbreğin altındaki yağ yatağından geçirerek vena kava altında bir tünel oluşturun.

Forsepsi, vena kavanın karşı tarafındaki hepatik lenf kanalına paralel olarak uçlar çıkana kadar ilerledin. Foreps'i kullanarak önceden hazırlanmış kanülün dış ucunu tutun ve kanülü tünelden çekip ucu karşı tarafta çıkana kadar çekin. Halsted Mosquito Hemostat forsepslerini kullanarak 25 kalibre iğnesinin ucunu yaklaşık 90 dereceye bükebilirsiniz.

Eğik iğneyi kullanarak, operatöre en yakın sağ taraftaki karaciğer lenf kanalını dikkatlice delin. Kanülün önceden antikoagülant çözeltisiyle doldurulduğunu kontrol edin ve varsa hava kabarcıklarını çıkarın. Eğimli ucu kanala yaklaşık 2 milimetre sokuyorum.

Kanülün dış ucunda saatte yaklaşık 100 mikrolitre oranında lenf akışını doğrulayın. Eğer akış gözlemlenmezse, kanülü ayarlayın veya yeniden takın. Kanülü toplama ucundan tıkayın, ardından yerleştirme yerini sabitlemek için küçük bir veteriner yapıştırıcısı damlası uygulayın.

Yapıştırıcı kuruduktan sonra, lenf akışının boru üzerinden geçtiğini doğrulayın. Sonrasında gazlı bezi çıkarın ve organları orijinal konumlarına geri döndürün. Antikoagülan çözeltiyi içeren toplama tüpünü kanül çıkışının altına yerleştirin ve lenfin tüpe damla olarak aktığını doğrulayın.

Daha sonra karın duvarını kapatarak iç oblik, dış oblik ve deri katmanlarını sıralı olarak dikebilirsiniz. Karaciğer lenf kanülasyonundan hemen sonra, juguler ven kanülünden saatte 1,5-3,0 mililitre oranında steril salin enjekte ederek rehidrasyonu başlatın. Burun konusuyla anestezi sürdürürken nefes ve refleksleri takip edin.

Juguler ven kanüsü aracılığıyla terapötik dozlama yaptıktan sonra, karaciğer lenfini antikoagülant çözeltisi içeren tüplere sürekli olarak toplayın. Toplama tüplerini saat başı veya gerektiğinde değiştirin. Belirlenen zaman noktalarında karotis arter kan örnekleri alın, toplam hacmi tahmini dolaşımdaki kan hacminin %10'unun altında tutarak terminal örnekleme alınmasını sağlar.

Karın kesisini tekrar açın, üst karın boşluğunu açığa çıkarın, derin anestezi ve stabil solunum korunur. Karaciğeri diyaframa, mideyi sola ve ince bağırsağı alt tarafa doğru nazikçe çekmek için tuzlu nemli gazlı bez kullanın. Mezenterik lenf kanalının yanında bulunan karaciğer lenf kanalına paralel uzanan karaciğer arterini tanımlayın.

Dış çapı 0,61 milimetre, iç çapı 0,28 milimetre olan bir polivinil kanülü önceden antikoagülan çözelti ile doldurulmuş ve hava kabarcıklarını çıkarın. Eğimli iris forsepsleri kullanılarak, karaciğer arterinin kısa bir segmentini izole edin. Arterin altına 4-0 ipek dikiş yerleştirin.

Atardamarı nazikçe kaldırın ve birincinin distalına ikinci bir dikiş yerleştirin. Distal dikişi geri akışı kontrol etmek için bağlayın, proksimal dikiş ise daha sonra kapanmak için açık bırakın. İnce uçlu mikro makas kullanarak, dikişler arasındaki arter duvarında yaklaşık 0,5 milimetre çapında küçük bir enine kesi yapın.

Dumont forsepsinin ucunu kullanarak damar lümenini kanül yerleştirmek için damar kapağını kaldırın. Polivinil kanülün eğik ucunu açıklığa sokun ve kanülü yaklaşık 2-3 milimetre ilerletin. Kanülü, proksimal dikişi hem damarın hem de kanülün etrafına bağlayarak sabitleyin.

Doğru yerleştirmeyi az miktarda parlak kırmızı arterial kan hafifçe aspire ederek doğrulayın. Antikoagülan içeren önceden etiketlenmiş bir tüpte 0,5-1 mililitre kan toplayın. Torasek, karaciğer ve mezenterik lenf boyunca intravenöz uygulanan makromoleküler tedavilerin lenfatik iyileşmesi, modelin lenfatik taşınımı değerlendirmede kullanışını göstermektedir.

Hepatik lenf, torakal ve mezenterik lenflere göre belirgin şekilde daha düşük toplam lipid içeriğine sahiptirken, protein konsantrasyonu diğer lenf kaynaklarıyla karşılaştırılabilir. Bu protokol, karaciğer lenfi ve kanın eşzamanlı ölçümlerini sağlayarak ilaçlar, besinler ve sinyaller dahil moleküllerin taşınması, metabolizması ve temizlenmesini değerlendirir. Karaciğer lenf kanalının hassas kanülasyonu teknik olarak zordur ve dikkatli anatomik tanımlama ile cerrahi teknik gerektirir.

Gelecekteki çalışmalar, bu tekniği karaciğer taşını, klülans ve metabolizmayı haritalamak için kullanabilir, karaciğer hastalıkları ve hedefli tedaviler hakkında daha iyi anlaşılmayı geliştirebilir.