ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>1.5 mL microtubes Axygen</td><td>Corning</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Falcon tüpler</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339651</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Falcon tüpler</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339652</td><td></td></tr><tr><td>6 kuyuluk Falcon polistiren mikroplaklar</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>&nbsp;08-772-1B</td><td></td></tr><tr><td>Asetik asit, 60%&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A38-212</td><td></td></tr><tr><td>Akrilamid 30%&nbsp; ve bis-akrilamid çözeltisi, 29:1</td><td>Biorad</td><td>1610157</td><td></td></tr><tr><td>Alüminyum katlama</td><td>Reynolds&nbsp;</td><td>U07211R0</td><td></td></tr><tr><td>Amonyum Persülfat (APS)</td><td>Merck</td><td>A3678</td><td></td></tr><tr><td>Binoküler stereomikroskop</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Bovin Serum Albumini (BSA)&nbsp;</td><td>Merck</td><td>&nbsp;A9418</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Merck</td><td>D9542</td><td></td></tr><tr><td>DelltaVision mikroskobu</td><td>Olympus</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Damıtılmış H2O</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>PES filtreli 0.45 &mu;m gözenekli tek kullanımlık Filtre Üniteleri</td><td>Thermo Fisher Scientific/Nalgene</td><td>09-740-63B</td><td></td></tr><tr><td>İnce forseps FST Dumont SS</td><td>Fine Science Tools&nbsp;</td><td>11200-33</td><td></td></tr><tr><td>keçi (IgG H+L) yüksek oranda çapraz adsorbe edilmiş anti-sıçan AlexaFluor647 ile etiketli</td><td>Invitrogen</td><td>A-21247</td><td></td></tr><tr><td>keçi (IgG H+L) yüksek oranda çapraz adsorbe edilmiş anti-tavşan AlexaFluor568 ile etiketli</td><td>Invitrogen</td><td>A-21428</td><td></td></tr><tr><td>keçi (IgG H+L) yüksek oranda çapraz adsorbe edilmiş anti-ginea domuzu AlexaFluor488 ile etiketli&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>A-11073</td><td></td></tr><tr><td>Eldiven</td><td>Merck</td><td>Z412392</td><td></td></tr><tr><td>Büyütme odaları / sera / veya tarla</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>DTT</td><td>Merck</td><td>D0632</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E6758</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>Maskeleme bandı 3M</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-047-259</td><td></td></tr><tr><td>Mısır tohumları</td><td>NA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop 22 x 22 mm-1,5 cam kapakçıklar&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-542-B</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop 22 x 22 mm-H kapakçıklar&nbsp;</td><td>Deckgläser, Zeiss</td><td>474030-9020-000</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskopik cam slaytlar</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-230-900</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop slayt kutusu</td><td>Fisher Scientific,</td><td>03-448-9</td><td></td></tr><tr><td>Mikropipetler P20, P200, P1000</td><td>Merck</td><td>CLS4069</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Merck</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>Tırnak cilası</td><td>Electron Microscopy Science</td><td>72180</td><td></td></tr><tr><td>Kağıt havlu</td><td>Merck</td><td>Z188956</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Merck</td><td>P7668</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit 16% çözeltisi&nbsp;</td><td>Elektron Mikroskobu Grade</td><td>&nbsp;15710</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Merck</td><td>P4474</td><td></td></tr><tr><td>Kapaklı plastik kutu</td><td>Tupperware</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Poli-L-Lizin</td><td>Merck</td><td>P4707</td><td></td></tr><tr><td>Birincil antikorlar (rat anti-ZmAFD1, tavşan anti-ZmASY1, ginea domuzu anti ZmZYP1)</td><td>NA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Prolong Antifading</td><td>Molecular Probes</td><td>P36934</td><td></td></tr><tr><td>Petri kabı (D x Y: 35 mm x 10 mm)</td><td>Corning</td><td>351008</td><td></td></tr><tr><td>Petri kabı normal boyut</td><td>Merck</td><td>P5731</td><td></td></tr><tr><td>PIPES</td><td>Merck</td><td>P1851</td><td></td></tr><tr><td>Pipet uçları (0.5-10 uL) steril&nbsp;</td><td>Merck/Corning</td><td>AXYT300</td><td></td></tr><tr><td>Pipet uçları (200 uL) steril</td><td>Merck/Corning</td><td>AXYT200Y&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Pipet uçları (1000 uL) steril</td><td>Merck/Corning</td><td>AXYT1000BRS</td><td></td></tr><tr><td>Tıraş bıçağı - tek kenarlı</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-640</td><td></td></tr><tr><td>Sallanan platform şeyker</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Spermin</td><td>Merck</td><td>85590</td><td></td></tr><tr><td>Spermidin&nbsp;</td><td>Merck</td><td>S2626</td><td></td></tr><tr><td>Sorbitol</td><td>Merck</td><td>S8143</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Merck</td><td>P9416</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>9002-93-1</td><td></td></tr><tr><td>Ultra saf Akrilamid</td><td>Invitrogen</td><td>15512023</td><td></td></tr><tr><td>Vakum</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

mısır meiositlerinde Üç boyutlu İmmünolokalizasyon

Three-Dimensional Immunolocalization In Maize Meiocytes

Mısır Meiositlerinde Üç Boyutlu İmmünolokalizasyon

During meiotic prophase I, the physical configuration of chromosomes varies widely across developmental stages, fortunately these stage-specific ...

Araştırmamız, mısır erkek meyositlerini incelemek ve tek hücrelerdeki meyotik proteinleri görselleştirmek için 3B bir yaklaşım geliştirmeye odaklanmaktadır. Bu protokol, mısıra ek olarak pirinç, çavdar, arpa ve buğdaydaki meyositlerin incelenmesinde de uygulanabilir. Başlamak için, çiçeketleri hala gövdenin içinde büyümekte olan V13 evresindeki mısır bitkilerini temin edin.Miyotik anter fiksasyonunun yapıldığı hafta, eldiven giyilmiş haldeyken, genişlemiş gövdenin şişkin kısmına nazikçe bastırarak kesilip açılacak kadar yumuşak olup olmadığını kontrol edin. Gerekli tampon çözeltileri hazırladıktan sonra, plastik bir kutunun içine beş ila 10 adet nemlendirilmiş kağıt havlu yerleştirerek nemli bir hazne hazırlayın. Haznedeki fazla suyu uzaklaştırın.Bir jilet kullanarak, püskül dallarını ve yan dalları açığa çıkarmak için gövdeyi çiçeklenme seviyesinden kesin. Yan dalları diseke edip topladıktan sonra, oda sıcaklığında tutulan nemli hazne havlularına sarın. Bir stereo mikroskop kullanarak, çiçekçiklerden taze anterleri, iki mililitre 1X tampon A veya BA içeren 35 milimetrelik bir Petri kabına toplayın. Boyut ve renge göre miyotik evreleri belirleyin.Anterler yeni bir 35 milimetrelik Petri kabına aktarıldıktan sonra, anterlere üç mililitre tespit çözeltisi ekleyin. Formaldehit buharlaşmasını önlemek için Petri kabını parafilm ile mühürleyin. 35 milimetrelik Petri kabını, oda sıcaklığında 45 dakika boyunca 40 ila 60 RPM'ye ayarlanmış bir orbital çalkalayıcı üzerindeki daha büyük Petri kabının üzerine yerleştirin.Anterleri üç mililitre 1X BA ile durulayın. Anterleri küçük bir Petri kabına aktardıktan sonra, Petri kabını kapatın ve oda sıcaklığında, hızı 40 ile 60 RPM arasında ayarlanmış bir orbital çalkalayıcıda 45 dakika boyunca bekletin. Temiz bir pens kullanarak anterleri, içinde üç mililitre 1X BA bulunan küçük 35 milimetrelik bir Petri kabına aktarın.Petri kabı parafilm ile sıkıca kapatıldıktan sonra, küçük Petri kabını daha büyük bir Petri kabının içine yerleştirin. Alüminyum folyo ile kapladıktan sonra, örneği kullanıma kadar dört degrees Celsius'ta saklayın. Birinci günde, eşit hacimlerde acrylamide ve two XBA karıştırarak iki milliliters acrylamide çözeltisi hazırlayın.Sodyum sülfit ve amonyum persülfat eklemeden önce akrilamid çözeltisini vakum altında beş ila 10 dakika boyunca gazdan arındırın. Hazırlanan lam sayısına göre, bir bir akrilamid ve iki XBA karışımından 100 µL'lik alikotları 1,5 mL'lik tüplere paylaştırın. Bir Petri kabının üzerine iki santimetreye iki santimetrelik parafilm parçaları yerleştirin ve bunları bir diseksiyon stereoskobunun altına konumlandırın.Pipet ucu makasla kırpıldıktan sonra, anter içeren 50 µL BA çözeltisini parafilmin üzerine pipetleyin. Parafilmin başka bir alanına 25 µL BA çözeltisi pipetleyin. Anterleri pensle tuttuktan sonra, bir skalpel kullanarak uçlarını kesin.Meiyositler dışarı itildikten sonra, onları bir pipet yardımıyla 25 µL BA damlasına aktarın ve nazikçe karıştırın. Meiyosit karışımından 10 µL'yi ayrı bir lamel üzerine pipetleyin. Akrilamid ve iki XBA içeren 1,5 mL'lik bir tüpe hızla beş µL sodyum sülfit ve beş µL amonyum persülfat ekleyin.Bu karışımdan beş µL'yi lamel üzerine pipetleyin ve meyositlerle karıştırın. Üzerine poli-lizin kaplı bir lameli 45 derecelik açıyla yerleştirin. Oda sıcaklığında tam polimerizasyon için 30 ila 50 dakika bekledikten sonra, lamelleri bir jilet yardımıyla dikkatlice ayırın.Ardından, bunları bir Petri kabına ped tarafı yukarı gelecek şekilde yerleştirin. Lamelini, oda sıcaklığında iki saat boyunca bir milimolar etilendiamintetraasetik asit (EDTA) ve %1 Triton ile desteklenmiş bir mililitre 1XPBS ile durulayın. Tespit sırasında belirgin sinyaller elde etmek için farklı konak türlerden gelen primer antikorları hazırlayın ve birleştirin.Seyreltilmiş birincil antikordan 50 µL'yi, pedi içeren lamelin merkezine ekleyin. Ardından, Petri kabını gece boyunca nemli bir bölmeye yerleştirin. İkinci günde; 1X PBS, %0,1 Tween 20 ve 1 mM EDTA içeren 500 mL yıkama tamponu hazırlayın.Bir pipet kullanarak, gece boyu bekletilen çözeltiyi uzaklaştırın. Lamelini bir mililitre yıkama tamponu ile iki kez yıkayın. Tamponu uzaklaştırdıktan sonra, tekrar bir mililitre yıkama tamponu ekleyin ve oda sıcaklığında bir saat boyunca inkübe edin.Bu yıkama adımını yedi kez daha tekrarlayın. Son yıkamadan sonra, kabın ağzını kapatın ve bir nemli oda içerisinde gece boyunca bekletin. Sekonder antikorları, bloklama tamponunda 1/50 oranında seyrelterek hazırlayın.Yıkama solüsyonu uzaklaştırıldıktan sonra, her bir pad'in merkezine 50 µL seyreltilmiş sekonder antikor ekleyin. Ardından, Petri kabını oda sıcaklığında iki saat boyunca nemli bir hazneye yerleştirin. Solüsyon kuyucuktan uzaklaştırıldıktan sonra, oda sıcaklığında her biri bir saat sürecek şekilde, bir mililitre yıkama tamponu ile dört kez yıkayın.Kuyucuğu 1 mL PBS ile 10 dakika boyunca yıkayın ve bu işlemi iki kez daha tekrarlayın. Kuyucuğa, son konsantrasyonu 1 µg/mL olacak şekilde hazırlanan 500 µL DAPI ekleyin ve oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin. Uzatılmış altını 4 °C'den çıkardıktan sonra, oda sıcaklığına ulaşana kadar çözdürün.Lamları bir mililitre PBS ile 30 dakika boyunca yıkayın ve bu işlemi iki kez tekrarlayın. Son yıkama çözeltisini uzaklaştırdıktan sonra, pedi merkezine iki damla prolonged antifade ekleyin. Lamel kuyucuktan kaldırıldığında, etiketlenmiş lamların üzerine monte edin.Bir vakum kullanarak lamel kenarlarındaki fazla gliserolü temizleyin ve iki kat oje ile mühürleyin. Görüntüleri yakalamak için uygun eksitasyon dalga boyları ve filtreleri kullanarak lamları mikroskop altında inceleyin. DAPI boyaması; net bir çekirdek ve kromatin boyamasının yanı sıra, plastid ve mitokondriyal DNA'nın daha sönük doğal sitoplazmik boyamasını göstermiştir.Preleptinema sırasında kromozomlarda ve sitoplazmada lokalize olan Absence of first division one veya AFD1, asynaptic one veya ASY1 ve Zipper1 veya ZYP1 görülmüştür. Daha sonraki aşamalarda, sinapsis tamamlanmadan önce sinyal kromozom üzerinde yoğunlaşırken, önemli miktarda ZYP1 sitoplazmada kalmaya devam etmiştir. Meyotik kohezin AFD1, ancak zigonema sonrasında lineer bir yapı oluşturmuştur.Sinaptonemal kompleksin lineer filamentlerinin oluşumuyla eş zamanlı olarak, ZYP1 ve AFD1 lineer yapılara yüklendikten sonra ASY1 sinyali nispeten zayıflamıştır. Bu protokol, araştırmacıların protein ko-lokalizasyonunu ve dinamiklerini, doğal subselüler lokalizasyonu, 3B kromozomal mimariyi, meyotik ilerlemeyi ve evrelemeyi incelemelerine olanak tanır.Bu protokoldeki temel zorluk, primer ve sekonder antikorların uyumlu kombinasyonlarının dikkatle seçilmesidir. Çalışmalar, athelchasminin altında yatan moleküler mekanizmayı araştırmak için erkek ve dişi mayozunu karşılaştırarak bu çalışmanın üzerine inşa edilebilir.

three-dimensional-immunolocalization-in-maize-meiocytes

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bitkilerde Transkriptler Hassas Yerelleştirme Situ Hibridizasyon

Beyin inflamatuar yanıtının karmaşıklığı hakkında yeni bilgiler edinmenin bir yolu sunulmaktadır. İmmünofloresan tabanlı protokolleri ve ardından fokal iskeminin bir fare modelinde mikroglia/makrofaj fenotip belirteçlerinin birlikte ekspresyon modelini araştırmak için üç boyutlu konfokal analizi tanımladık.

Deneysel Beyin Hasarında Polarizasyonun Mikroglia/Makrofaj Belirteçlerinin Üç Boyutlu Konfokal Analizi

Yetişkin farelerin lenf düğümlerinde 120 um derinliğe kadar kontrastlı sahip yüksek-çözünürlüklü intravital görüntüleme uzamsal bir multi-odak iki foton mikroskop uyarım modelini modüle edilmesi ile elde edilir. 100 mikron derinliğinde biz böylece saçılma ve difraksiyon sınırlarını engellemeyi, 487 nm çözünürlük (lateral) ve 551 nm (eksenel) ölçüldü.

Germinal Merkezleri derece Çözülmüş Intravital Çizgili-aydınlatma Mikroskopi

Bu makalede açıklanan dolaylı immünfloresan protokol algılama ve fare meme bezinde proteinlerin yerelleştirme verir. Tam bir yöntem olup, meme bezi örnekleri hazırlamak için floresan mikroskobu ile görüntü, doku kesitlerinde immunhistokimya gerçekleştirmek için ve görüntüleri yeniden verilir.

Fare Meme Bezinin Dondurulmuş Bölümler Dolaylı İmmünofloresan

Kirpikler geliştirme için uygun organogenesis hayati önem taşımaktadır. Bu iletişim kuralı etiket ve Zebra balığı siliyer hücreleri görselleştirmek için en iyi duruma getirilmiş bir yöntemini açıklar.

Zebra balığı bütün Dağı Floresan Situ hibridizasyon ve ayirt kombine bir protokol aracılığıyla Multiciliated hücrelerde görüntülenmesi

Bu protokolü nasıl görüntü yaşamak ve sürgün apikal sürgen confocal mikroskobu tarama lazer kullanarak farklı bitki türü üzerinden analiz sunuyor.

Sürgün apikal sürgen farklı bitki türü üzerinden confocal canlı görüntüleme

Burada, konfokal mikroskopi için uygun ve aynı zamanda tekrarlanabilir ve güvenilir etiketlemeye izin vermek için Drosophila testislerinin tüm montaj hazırlığı ve immünostainingi için geliştirilmiş bir protokol sunuyoruz. Bu protokolü, büyük S4-S5 spermatositleri üzerindeki kolokalizasyon deneylerinin 3D gösterimi ve niceliği ile göstermektedir.

Büyük Spermatositlerin 3D Konfokal Analizi için Tüm Kazdağları Drosophila Testlerinin İmmünostaining

Tilki kuyruğu mozaik virüsünün ve şeker kamışı mozaik virüslerinin mısır fidelerine aşılanması için Agrobacterium bazlı enjeksiyon (agroinjection) protokolü sunulmaktadır. Bu şekilde aşılama viral enfeksiyona, belirteç genlerinin virüs kaynaklı gen susturmalarına ve GFP'nin viral aşırı ekspresyonuna yol açar.

Rekombinant Foxtail Mozaik Virüs ve Şeker Kamışı Mozaik Virüs Bulaşıcı Klonlar ile Enjeksiyon ile Mısır Fidelerinin Doğrudan Agroinokokülasyonu

Mısır yaprağı primordiaları derinlemesine kaplanır ve yuvarlanır, bu da onları incelemeyi zorlaştırır. Burada, floresan ve konfokal görüntüleme için enine kesitler ve açılmış mısır yaprağı primordialarının bütün montajlarını hazırlamak için yöntemler sunuyoruz.

Enine kesitler hazırlamak için geliştirilmiş yöntemler ve floresan ve konfokal görüntüleme için mısır yaprağı primordiasının bütün montajlarını açma

Bu makale, mantar bitki patojenleri ile mısır etkileşimlerinin tekrarlanabilir sitolojik, fizyolojik ve moleküler çalışmaları için ayrılmış mısır yaprağı kılıflarını kullanan optimize edilmiş bir aşılama protokolünü detaylandırmaktadır. Yaprak kılıfları, sabitlenmemiş dokularda canlı bitki ve mantar arasındaki hücresel etkileşimlerin gerçek zamanlı gözlemini kolaylaştırır.

Mantar yaprakları mısır patojenlerinin neden olduğu enfeksiyonun canlı hücre görüntülemesi için müstakil mısır kılıfları

Mayoz fazı sırasında kromozom hareketi, spor oluşumu için temel olan, yeterince anlaşılmamış bir olgudur. Bu protokol, Arabidopsis thaliana erkek mayositlerinde mayotik faz sırasında sentromer hareketlerini elde etmek, analiz etmek ve ölçmek için bir yöntemi açıklar.

Arabidopsis thaliana'da Erkek Mayoz Fazı Sırasında Sentromer Hareketlerinin Canlı Görüntüleme Karakterizasyonu

255 Görüntüleme.  National Autonomous University of Mexico (UNAM). Araştırmamız, mısır erkek meiyositlerini incelemek ve meiyotik proteinleri tek hücrelerde görselleştirmek için 3B yaklaşım geliştirmeye odaklanmaktadır. Mısır dışında bu protokol, pirinç, çavdar, arpa, buğdayda meiyositleri incelemek için de kullanılabilir. Başlamak için, infloresanslar hala gövde içinde büyüyorken V13 aşamasında mısır bitkilerini elde edin.Miyozitik anter fiksasyon haftası boyunca, eldiven giyerken yumuşaması yeterli olup olmadığ?...

Mısır Meiositlerinde Üç Boyutlu İmmünolokalizasyon

Daha fazla video keşfet