ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu proje, Howard Hughes Medical Institute araştırmacısı olan CGE'ye verilen Ulusal Bilim Vakfı (National Science Foundation) IOS 22207477 sayılı ödülü ile desteklenmiştir. Carausius morosus türünün Tamil Nadu, Hindistan kökenli olduğuna ve bu türe ait laboratuvar kültürlerinin en az 1908'den beri Hindistan dışında sürdürüldüğüne dair bilgileri onaylıyoruz. Kültürümüzü kurmak için kullanılan ilk yetişkin grubunu sağladıkları için Stanislav Gorb ve Thies Büscher'e (Kiel Üniversitesi'ne) ve ilk koloniyi kuran eski laboratuvar üyesi Dr. Upendra Bhattarai (güncel kurumu: Brown University) dahil olmak üzere Extavour laboratuvarının tüm üyelerine destekleri için içtenlikle teşekkür ederiz.

1. Çevresel yetiştirme koşulları
<ol>
	<li>Klima kontrollü bir oda veya inkübatörde laboratuvar kültürünü aşağıdaki çevresel ayarlarla sürdürülmelidir: 23 &#176;C, %70 bağıl nem, 12:12 saat aydınlık-karanlık fotoperiyodu. 
	NOT: Bu koşullar altında, C. morosus Yumurtaların, bırakıldıktan yaklaşık 74-80 gün sonra kapanması beklenir.</li>
</ol>
2. Örgü kafeslerin oluşturulması ve sürdürülmesi 
NOT: Mesh böcek kafeslerinin üç tarafında kumaş fileli havalandırma bulunması, barındırma için önerilir C. morosus61 x 61 x 91,5 cm boyutlarındaki bir kafes, 50 adet yetişkini veya yeni bir koloni kurulurken 500 adet yavruyu barındırmak için uygundur.
<ol>
	<li>Uygun boyutta bir ağ kafes seçin. Hayvanları yerleştirmeden önce kabın temiz ve artıklardan arınmış olduğundan emin olun.</li>
	<li>Olgun yetişkinler kullanarak yeni bir koloni kurmak için 25&#8211;50 yetişkin dişiyi temiz, 61 cm x 61 cm x 91,5 cm'lik bir file kapalı alana yerleştirin. 
	NOT: Örgü açıklıkları 0,2 aralığında olmalıdır&#8211;1.0 mm, küçük birinci evre yavruların kaçmasını önlemek için.</li>
	<li>Yeni bir koloni kurmak için yavruları kullanarak yaklaşık 500 kadar yavrayı temiz, 61 cm x 61 cm x 91,5 cm boyutundaki gözülü bir kafese aktarın.</li>
</ol>
3. Besleme ve bakım
<ol>
	<li>Kafes temizliği sırasında böceklerin kafeste kalmasına izin verin; temizlik yaparken onları yapraklardan nazikçe alın ve onları örgülü kafesin alt kısmına yerleştirin. 
	NOT: Temizleme işleminin yaklaşık 10 dakika süreceğini bekleyin&#8211;Kümes başına 20 dakika.</li>
	<li>Haftada bir defa sarmaşık, böğürtlen veya gül gibi taze yapraklar sağlayın. Tüm bitki materyalinin tarım ilacı içermemesini sağlayın. Kafeslere eklenmeden önce yaprakları musluk suyuyla yıkayarak yüzey kalıntılarını ve kontaminantları uzaklaştırın.</li>
	<li>Sapları, musluk suyu ile doldurulmuş küçük kavanoz veya şişelere sığacak şekilde keserek yaprakların nemliliğini koruyun. Hazırlanan yaprakları kapatma içine yerleştirin ve yaprakların yükseltilmiş konumda olmasına ve böceklere erişilebilir olmasına dikkat edin. Yerleştirmeden sonra kapatmayı dikkatlice kapatın.</li>
	<li>Haftalık kafes temizlikleri sırasında, kafesin dibinden solmuş veya kurumuş yaprakları ve birikmiş tüm dışkıları uzaklaştırın. 
	NOT: Yapraklarda kuruluk, gevreklik, solma veya renk değişimleri gibi kuruma belirtileri görüldüğünde bitki örtüsünü değiştirin. Koloninin sağlığı ve refahı için temiz bir ortamın korunması esastır.</li>
	<li>Her bir kabı günde bir kez hafifçe püskürtün&#8211;250 mL'lik bir sprey şişeden musluk suyundan 2 püskürtme yaparak uygun hidrasyonu sağlayın. 
	NOT: Bu, özellikle çok önemli olan bir durumdur.&#160;yavru olduktan sonraki ilk gün. Hızlı yem tüketimi gerçekleşirse yoğunluğu azaltın.</li>
</ol>
4. Toplama ve sürdürme Carausius morosus yavru bireyler
NOT: Bu çalışmada, şunu kullanıyoruz &#8220;yavru (yumurtadan yeni çıkmış)&#8221; yumurtadan yeni çıkmış bireyleri (ilk evre) ifade etmek için &#8220;nimf&#8221; ifade eder&#160;için&#160;embriyonik sonrası derilerin ardından gelen ergin öncesi evreler
<ol>
	<li>Yeni çıkmış yavrularla birlikte 6 cm'lik Petri kutularını toplayın.</li>
	<li>Blunt plastik forseps kullanarak, 500'den fazla olmayan yavru balıkları dikkatlice temiz bir 61 cm x 61 cm x 91,5 cm'lik örgülü kafese aktarın. 
	NOT: Yalnızca dış iskelet genişlemesini tamamlamış, tamamen ortaya çıkmış ve uzamış nymfları toplayın. Yumurtadan tamamen çıkmaları öncesinde nymfları rahatsız etmek, vücut uzamasını engelleyebilir ve erken ölümlere neden olabilir. Benzer nedenlerle, nymflar örgü kafese aktarıldıktan sonra doğrudan teması en aza indirmeye çalışın.</li>
	<li>Bölüm 3'te açıklandığı gibi taze yaprak malzemesi sağlayın.</li>
	<li>Yeni koloni kafeslerini şu bilgilerle etiketleyin: yumurta partisi toplama tarihi/tarih aralığı, çıkış tarihi veya çıkış tarih aralığı ve eklenen yavru sayısı. 
	NOT: Bu, kafes yaşını takip eder ve üreme olgunluğunun başlangıcını öngörür.</li>
	<li>Yavru aktarımından hemen sonra ve bundan sonraki her gün, her bir bölmenin üzerine hafifçe püskürtme yapın, 1&#8211;250 mL'lik bir sprey şişeden musluk suyuyla 2 püskürtme yaparak uygun hidrasyonun sağlanması. 
	NOT: Bu, özellikle yavrunun çıkışından sonraki ilk gün için çok önemlidir. Yavrular gelişimlerinin tamamı boyunca, yetişkinlik dönemine kadar aynı kafeste kalabilir. 1. bölümde tanımlanan laboratuvar koşullarında yaklaşık %13'ü yavru, 4&#8211;5 ayTablo 1).</li>
	<li>Haftalık kafes temizliği sırasında kontaminasyonu önlemek için ölü veya hasarlı yavruları çıkarın.</li>
</ol>
5. Toplama ve sürdürme C. morosus yumurtalar 
<ol>
	<li>Yetişkin dişileri içeren bir kavanozu açın.</li>
	<li>Eldivenli elinizle kafesin dibindeki, hem yumurta hem de dışkı maddesi içeren alt tabakaları ön açıklığa doğru hafifçe süpürün.</li>
	<li>Eldivenli el ile malzemeyi dikkatlice bir 15 cm'lik Petri kabına taşıyın ve yumurta toplama işlemini gerçekleştirin.</li>
</ol>
6. Böceklerin öldürülmesi ve yaşam alanının atıklarının bertaraf edilmesi
NOT: Her zaman C. morosus deneysel amaçlar için artık gerekli değilse, ölmüşse veya yumurtalara ihtiyaç duyulmuyorsa:
<ol>
	<li>Ötenazi/Böceklerin imhası: Kültür veya deneyler için artık gerekli olmayan canlı veya ölü böcekleri oto klavlanabilir bir atık torbasına aktarın ve -20'de saklayın &#176;en az 72 saat boyunca C dondurucusunda</li>
	<li>Yumurta tahribi: Aşırı nüfuslanmayı önlemek için herhangi bir yumurtayı çıkarın&#160;deneylerde kullanılmayanları kafeslerden veya Petri kutularından alarak otoklavlanabilir bir atık poşetine koyun ve -20'de saklayın &#176;en az 72 saat boyunca C</li>
	<li>Atık işleme: Kafeslerden veya yumurta ve böcek toplama için kullanılan malzemelerden çıkan bulaşmış atıkları otoklavlanabilir bir atık torbasına koyun ve -20 °C'de saklayın &#176;en az 72 saat boyunca C</li>
	<li>Donmuş malzemelerin ardından otoklavlanabilir atık poşetini uygun şekilde bertaraf edilmesi için biyolojik tehlike kutusuna aktarın. 
	NOT: Şu anda olarak C. morosus Hindistan'ın dışında invaziv bir tür olduğundan, çevreye yanlışlıkla salınmayı önlemek için yukarıda açıklandığı gibi tüm malzemelerin uygun şekilde bertaraf edilmesi hayati öneme sahiptir.</li>
</ol>
7. Yumurta toplama
<ol>
	<li>Blunt plastik forseps kullanarak her bir yumurtayı dikkatlice alınız ve temiz bir 6 cm'lik Petri kabına yerleştiriniz. 
	NOT: Olgun yumurtalar sert bir ekzokoryon tarafından korunur ve koyu kahverengi olup bitki tohumlarını andırır. Ayırma işlemi sırasında dışkıdan yumurtaları ayırt etmeye yardımcı olmak için beyaz bir arka plan kullanılabilir.</li>
	<li>Kabı, takip amacıyla toplama tarihi ve saatiyle etiketleyin. Havalandırmaya izin vermek için inkübasyon sırasında kapağı açık bırakın. 
	NOT: 200 adete kadar yumurta saklamak için 6 cm'lik Petri kabı yeterlidir.</li>
	<li>Beklenen kuluçka penceresinden yaklaşık 1 hafta önce (74&#8211;Yumurta bırakılmasından 80 gün sonra; Kovacikova &#38; Extavour, yayımlanmamış veriler), Petri kabı kapağını yerine takın.</li>
	<li>Beklenen kuluçka tarihinden önce yumurta kaplarını günlük olarak izlemeye başlayarak çıkan yavruları gözlemleyin.</li>
</ol>
8. Yaşam süresi 
<ol>
	<li>Kuluçkadan sonra, bireyleri laboratuvar koşullarında ortalama 139. günde üreme olgunluğuna ulaşıncaya kadar beş ila altı defa ekdvize uğrarlar; bu süreç boyunca takip edin (Tablo 1).</li>
	<li>Bu protokolü uygulamak için, bu kültür koşulları altında gelişimsel zamanlamayı şu şekilde tanımlayın: embriyogenez süresi (yumurta bırakma ile çıkış arasında) 74&#8211;80 gün; yumurtadan çıkıştan cinsel olgunluğa ulaşmaya (yumurtlamaya başlamaya) kadar geçen süre yaklaşık 135 gündür ve bu, yumurta bırakılmasından cinsel olgunluğa kadar yaklaşık 200 güne karşılık gelir. Yumurta bırakılmasından ölüme kadar olan toplam yaşam süresi yaklaşık 9,5 aydır.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Adamski Z, et al. Beetles as model organisms in physiological, biomedical and environmental studies: a review. Front Physiol. 2019;10:319.</li>
	<li>Schwander T, et al. On the repeated evolution of parthenogenesis in stick insects. Evolution. 2026;80(3):513-24.</li>
	<li>Arias AM. Drosophila melanogaster and the development of biology in the 20th century. Methods Mol Biol. 2008;420:1-25.</li>
	<li>Du&#776;rr V, K&#246;nig Y, Kittmann R. The antennal motor system of the stick insect Carausius morosus: anatomy and antennal movement pattern during walking. J Comp Physiol A Neuroethol Sens Neural Behav Physiol. 2001;187(2):131-44.</li>
	<li>Roth HL. XIX. Observations on the growth and habits of the stick insect, Carausius morosus, Br.; intended as a contribution towards a knowledge of variation in an organism which reproduces itself by the parthenogenetic method. Trans R Entomol Soc Lond. 1917;64(3-4):345-86.</li>
	<li>Pijnacker LP. The maturation divisions of the parthenogenetic stick insect Carausius morosus Br. (Orthoptera, Phasmidae). Chromosoma. 1966;19(1):99-112.</li>
	<li>Browaeys-Poly E. Extracellular matrix of the regeneration chamber and plasma membranes of the epidermis during leg regeneration in an insect Carausius morosus. Tissue Cell. 1991;23(1):41-55.</li>
	<li>Di Cristina G, et al. Pioneering genome editing in parthenogenetic stick insects: CRISPR/Cas9-mediated gene knockout in Medauroidea extradentata. Sci Rep. 2025;15(1):2584.</li>
	<li>Cavallin M. [&#8220;Substitutive polyembryony&#8221; and the problem of germinal line origin in the phasma Carausius morosus Br]. C R Acad Hebd Seances Acad Sci D. 1971;272(3):462-5.</li>
	<li>Giorgi F, Cecchettini A, Masetti M. Changes in the patterns of proteins stored and synthesized by developing embryos of the stick insect Carausius morosus Br. Comp Biochem Physiol B. 1990;95(1):107-13.</li>
	<li>Pijnacker LP, Godeke J. Development of ovarian follicle cells of the stick insect, Carausius morosus Br. (Phasmatodea), in relation to their function. Int J Insect Morphol Embryol. 1984;13(1):21-8.</li>
	<li>Pijnacker LP. Effect of centrifugation of the eggs on the sex of Carausius morosus Br. Nature. 1966;210(5041):1184-5.</li>
	<li>Hales KG, Korey CA, Larracuente AM, Roberts DM. Genetics on the fly: a primer on the Drosophila model system. Genetics. 2015;201(3):815-42.</li>
	<li>Truman JW, Riddiford LM. The evolution of insect metamorphosis: a developmental and endocrine view. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 2019;374(1783):20190070.</li>
	<li>Truman JW, Riddiford LM. The origins of insect metamorphosis. Nature. 1999;401(6752):447-52.</li>
	<li>Bedford GO. Description and development of the eggs of two stick insects (Phasmatodea: Phasmatidae) from New Britain. Aust J Entomol. 1977;15(4):389-93.</li>
	<li>Kim MJ, et al. Development of a phenology model for egg hatching of walking-stick insect, Ramulus mikado (Phasmatodea: Phasmatidae) in Korea. Forests. 2023;14(9):1710.</li>
	<li>Lee J, et al. Temperature-dependent development and oviposition models of Ramulus irregulariterdentatus (Phasmida: Phasmatidae). J Asia Pac Entomol. 2018;21(3):903-13.</li>
	<li>Donoughe S, Extavour CG. Embryonic development of the cricket Gryllus bimaculatus. Dev Biol. 2016;411(1):140-56.</li>
	<li>Conle O, Hennemann F, Riquelme PV, Kneubu&#776;hler B. Phasmatodea [Internet]. 2000. Available from: https://www.phasmatodea.com/</li>
	<li>Ventura MK, Stull VJ, Paskewitz SM. Maintaining laboratory cultures of Gryllus bimaculatus, a versatile orthopteran model for insect agriculture and invertebrate physiology. J Vis Exp. 2022; (184):e63277.</li>
	<li>de Miranda JR, et al. Virus diversity and loads in crickets reared for feed: implications for husbandry. Front Vet Sci. 2021;8:642085.</li>
	<li>Roark AM, Bjorndal KA. Bridging developmental boundaries: lifelong dietary patterns modulate life histories in a parthenogenetic insect. PLoS One. 2014;9(11):e111654.</li>
</ol>

Yazarların beyan edecekleri herhangi bir çıkar çatışması bulunmamaktadır.

Burada detaylandırılan bakım yöntemleri, C. morosus laboratuvar popülasyonlarının sürdürülmesi için basit ve tekrarlanabilir bir çerçeve sunmaktadır. C. morosus uzun süredir laboratuvarlarda veya evcil hayvan olarak beslenmiş olsa da, laboratuvar araştırma bakım protokolleri çalışmalar arasında farklılık göstermiştir6,9,10,11,12. Tutarlı çevresel koşulların ve besleme uygulamalarının sağlanması, C. morosus'un gelişimsel, fizyolojik ve evrimsel araştırmalar için güvenilir bir laboratuvar model organizması olmasını sağlamak açısından önemlidir.
Diğer model böceklerle karşılaştırmalı olarak C. morosus gelişme süreci
Meyve sineği Drosophila melanogaster gibi holometabol böceklere kıyasla C. morosus, daha yavaş gelişim hızları ve daha uzun bir juvenil evre sergiler. D. melanogaster 25 °C'de embriyogenezi ~24 h içinde tamamlayıp 10–12 gün içinde üreme olgunluğuna erişirken13, bizim yetiştirme koşullarımız altında C. morosus embriyogenez için 74–80 güne ve yumurtadan çıktıktan sonra üreme olgunluğuna erişmek için yaklaşık 135–139 güne ihtiyaç duyar; bu da 23 °C'de yumurtlamadan üreme olgunluğuna kadar yaklaşık 200 güne tekabül eder (veriler gösterilmemiştir). Bu uzamış zaman çizelgesi, hemimetabol ve holometabol böcekler arasındaki temel fizyolojik ve evrimsel farklılıkları yansıtır14,15 ve Phasmatodea genelinde defalarca görülür16,17,18. Cırcır böceği Gryllus bimaculatus gibi diğer hemimetabol böcekler embriyogenezi daha kısa bir sürede tamamlayıp cinsel olgunluğa erişirken (29 °C'de sırasıyla on gün ve altı hafta19), C. morosus'un daha yavaş gelişimi, tekrarlanabilir araştırmalar ile embriyogenez ve juvenil gelişimin ayrıntılı, boylamsal çalışmaları için eşsiz bir fırsat sunar.
Yaprak kaynağı ve besleme uygulamaları
Bu protokolde, C. morosus kolonisinin temel besin kaynağı olarak, yıl boyunca kampüs içindeki sabit bir konumdan toplanan sarmaşık (Hedera helix) kullanımını bildiriyoruz. Sarmaşık tüm laboratuvarlar için erişilebilir olmayabilir; ancak böğürtlen (Rubus spp.), ligustrum (Ligustrum spp.), ateş dikeni (Pyracantha spp.), gül (Rosa spp.), alıç (Crataegus monogyna), meşe (Quercus spp.) ve fındık (Corylus spp.) dahil olmak üzere çeşitli alternatif bitkisel besin kaynaklarının C. morosus kolonilerini sürdürmek için uygun olduğu rapor edilmiştir20. Dış kaynaklardan toplanan yapraklar kullanılırken dikkat edilmesi gereken önemli bir husus, besin içeriğinin standart diyetlere (örneğin, Drosophila melanogaster) dayanan laboratuvar sistemlerine göre daha az kontrollü olması ve bunun potansiyel olarak besinsel değişkenliklere yol açabilmesidir. Bunu sınırlamaya yardımcı olmak için, tüm mevsimler boyunca aynı konumdan aynı bitki türünü kullandık ve rutin kafes bakımı sırasında haftada bir kez tüm kafeslere yaprak sağladık. Besleme için kullanılan sarmaşık dalları tipik olarak yeni filizlenmiş ve olgunlaşmış yaprakların bir karışımına sahipti; dalları belirli bir yaprak gelişim aşamasına göre seçmedik. Tüm yapraklar kafeslere eklenmeden önce yıkandı. Tüm yaprakların çıkarılıp aynı gün yenilenmesini içeren haftalık değişim programı, tutarlılık sağlamak ve koloninin ölçeğini yönetmek için uygulanmıştır. Kesilmiş sarmaşık yaprakları, hafta boyunca nemliliğini korumak amacıyla kafes içindeki su dolu kaplarda tutuldu. Çoğu durumda yapraklar tüm hafta boyunca iyi durumda kaldı; ancak nadiren kuruma veya tükenme meydana gelebiliyordu, bu durumda yapraklar 1 haftadan daha erken değiştiriliyordu.
Koloni büyüklüğü, hayatta kalma oranları ve yetişkin üremesi
Uygun koloni kurulumu ve popülasyon yoğunluğunun dikkatli yönetimi, stokların sağlıklı tutulmasında kilit rol oynamıştır. 61 cm x 61 cm x 91.5 cm boyutlarındaki her bölme için maksimum yaklaşık 500 yavru veya 5 yetişkinin tutulması; stabil koşulları, koloni bakımını ve tekrarlanabilir gelişimsel gözlemleri desteklemiştir.
Ortalama günlük mortalitenin bir kafesteki kurucu yetişkin sayısı ile karşılaştırılması (Şekil 4A ve Tablo 1), bu iki parametre arasında öngörülebilir bir ilişki olmadığını ortaya çıkarmıştır. Benzer şekilde, toplam kurucu yetişkin sayısı ile toplam yumurta üretimi arasında güçlü bir öngörücü ilişki bulunmamıştır (Şekil 4B, Tablo 1 ve Tablo 2). Bunun yerine, ortalama günlük yetişkin mortalitesi daha düşük olan kafesler, daha yüksek ortalama günlük yumurta verimine sahip olma eğilimi göstermiştir (Şekil 4C). Ancak, kafesler arasındaki farklılıklar, yumurta üretiminin yetişkinler arasında değişkenlik gösterdiğini önermektedir (Tablo 1 ve Tablo 2); bu durum, yetişkin sağkalımının ötesindeki faktörlerin fekondite modellerine katkıda bulunduğunu ve bireysel dişilerin her gün yumurtladıkları yumurta sayısı bakımından da farklılık gösterebileceği anlamına gelebilir.
İzlenen tüm kafeslerdeki yumurta üretimi, deney süresince genel olarak azalmıştır (Şekil 2). Çoğu kafeste günlük yumurta yumurtlama oranları, üreme döneminin başında (ilk 50 gün) en yüksek seviyeye ulaşmuş, ardından üretim kademeli olarak azalmıştır (Şekil 2). Bu örüntü, bireylerin genellikle kuluçkadan çıktıktan yaklaşık 135 gün sonra cinsel olgunluğa erişip yumurtlamaya başladığı ve ölümlerin yaklaşık 90 gün sonra başladığı (~225 gün kuluçka sonrası; veriler gösterilmemiştir) gözlemimizle tutarlıdır.
Kuluçkanın zamanlaması ve dinamikleri
İzlenen yumurta partileri genelinde, çıkımların çoğu çıkışın başlangıcını takip eden tutarlı bir 12 günlük süre içinde gerçekleşmiştir (Şekil 3D). Benzer şekilde, parti boyutu ile %90 çıkım tamamlanma zamanı arasında bir korelasyon saptanmamıştır (Şekil 3A) ve çoğu parti, ilk yavrunun çıkmasından sonraki 10 ile 14. günler arasında %90 çıkım tamamlanma oranına ulaşmıştır (Şekil 3B). Bu öngörülebilir çıkım süresi, yavruların benzer yaşlarda kohortlar halinde gruplandırılmasına olanak tanıdığı için C. morosus koloni yönetimi açısından kullanışlı bir özelliktir; bu durum gelişimsel evrelemesini iyileştirir ve deneysel değişkenliği azaltır. Toplu çıkımın ne zaman gerçekleşeceğini bilmek, aynı zamanda kafes değişiminin ve kaynak tahsisinin daha iyi planlanmasına olanak tanır; buna kafeslerin, bitki örtüsünün ve takip materyallerinin zamanında hazırlanması dahildir ki bu durum özellikle büyük ölçekli veya uzun süreli çalışmalar için önemlidir. Hem seksüel hem de partenojenetik Phasmatodea türleri çalışılmış olsa da, tek başına üreme modunun embriyogenez zamanlamasındaki farklılıkları yönlendirdiğine dair herhangi bir kanıt bulunmamaktadır. Bunun yerine, gelişimdeki varyasyonların türe özgü olduğu ve çevresel koşullardan etkilendiği bildirilmiştir2.
Yumurta işlemleri ve substrat değerlendirmeleri
Yumurta taşıma yöntemimiz, yumurtaların doğrudan kafes tabanından toplanmasını ve havalandırmalı Petri kaplarında inkübe edilmesini içerir. Bu yaklaşım, yumurtaların hindistan cevizi lifi veya pamuk fitili gibi substratlarda toplandığı cırcır böceği sistemlerinin aksine, yumurtaların kolayca gözlemlenmesini sağlar21. C. morosus yumurtalarının sert ekzokoryonu, taşıma sırasında ve kurumaya karşı koruma sağlayarak, bizim kültür koşullarımız altında ek bir substrat olmaksızın Petri kaplarında güvenli inkübasyona olanak tanır. Topluca ele alındığında, bu standartlaştırılmış prosedürler; tekrarlanabilir gelişimsel, davranışsal, genetik veya fizyolojik araştırmalar için sağlıklı C. morosus popülasyonlarının sürdürülmesine yönelik yapılandırılmış bir yaklaşım sunar. Tutarlı çevresel kontroller (23 °C, 70% RH, 12:12 LD), düzenli kafes bakımı ve öngörülebilir gelişim zaman çizelgeleri, C. morosus'u erişilebilir ve düşük maliyetli bir model sistem haline getirir. Önemli bir nokta olarak, kalabalıklık, kanibalizm veya patojen yükünün kolonileri hızla istikrarsızlaştırabildiği bazı cırcır böceği sistemlerinin aksine22, C. morosus'ların bakımı kolaydır; bu da onları geniş ölçekli deneyler ve birden fazla nesli kapsayan çalışmalar için oldukça uygun kılar. C. morosus hemimetabol bir model tür olarak daha yaygın şekilde benimsendikçe, standartlaştırılmış yöntemlerin kullanımı, böcek biyolojisinin birçok alanındaki çalışmalar arasında tekrarlanabilirliği ve karşılaştırılabilirliği artırmalıdır.
Kuluçkadan yetişkinliğe hayatta kalma oranı
Çalışmamızdaki yumurtadan çıkıştan yetişkinliğe kadar olan sağkalım oranı (~%13), kontrollü laboratuvar koşulları altında C. morosus nimf sağkalımına ilişkin bir başka kantitatif çalışmada bildirilen oranlardan önemli ölçüde daha düşüktür; söz konusu çalışmada bireylerin %68'i kalori kısıtlaması altında, %87'ye kadarı ise ab libitum besleme altında yetişkinliğe ulaşmıştır23. Kolonimizde gözlemlediğimiz daha düşük sağkalımın (~%13) önceki rapora kıyasla, hayvanların yetiştirilme biçimindeki farklılıklardan kaynaklandığını ve bunun da bizim kültürümüzün ve önceki çalışmanın farklı hedeflerini yansıttığını tahmin ediyoruz. Protokolümüz, bireysel grupların sağkalımını maksimize etmekten ziyade, büyük ve sürekli üreyen kolonileri sürdürmek için tasarlanmıştır. Bu nedenle, yumurtadan yetişkinliğe kadar izole hayvanların bireysel kafeslerde yetiştirildiği önceki çalışmanın aksine, hayvanları nispeten yüksek yoğunluklarda tuttuk23. Burada tanımladığımız yüksek yoğunluklu kültür yönteminin, özellikle bireylerin kalabalığa veya rekabete karşı daha hassas olabileceği erken nimf evrelerinde, izole yetiştirmeye kıyasla mortaliteyi artırabileceğini tahmin ediyoruz. Bireylere bitki yapraklarından kesilmiş kontrollü boyutlardaki disklerin verildiği bireysel yetiştirme yaklaşımıyla karşılaştırıldığında23, daha büyük kafeslerimizdeki bitki kalitesi varyasyonları da bir rol oynamış olabilir. Bununla birlikte, nispeten daha düşük sağkalım oranına rağmen, kolonimiz tutarlı bir şekilde çok sayıda yumurta üretmiş ve zaman içinde stabil kalmıştır (Şekil 1, Şekil 3, Tablo 1 ve Tablo 2). Bu durum, burada tanımladığımız yaklaşımın uzun vadeli bir laboratuvar kültürünü sürdürmek için etkili olduğunu göstermektedir.
Sağkalımı etkileyen faktörler ve protokol kısıtlamaları
Bu protokoldeki birkaç faktörün sağkalım üzerinde etkili olması muhtemeldir ve dikkatle kontrol edilmelidir. Popülasyon yoğunluğu, özellikle erken instar evrelerinde aşırı kalabalıklaşma sağkalımı azaltabileceğinden önemli bir parametredir. Sağkalımı etkileyen bir diğer parametre ise, özellikle erken instar evrelerinde yeterli hidratasyondur. Protokolde açıklanan tüm prosedürler ve zamanlamalar, bu çalışmada kullanılan spesifik çevresel koşullara dayanmaktadır. Bununla birlikte, nem, sıcaklık, hava akışı veya bitki türündeki değişiklikler; su püskürtme sıklığını, yaprakların ne sıklıkla değiştirilmesi gerektiğini, yumurtaların açılma süresini ve genel sağkalımı etkileyebilir. Örneğin, daha kuru kültür koşullarında, hidratasyonu korumak için daha sık su püskürtme ve bitki değişimi gerekebilir. Farklı bitki türleri ayrıca beslenmeyi ve gelişimi etkileyebilir. Bu faktörler, yetiştirme koşullarına ve deneysel hedeflere bağlı olarak ayarlanmalıdır. Yüksek juvenil sağkalımı, bireysel takip veya davranışsal analizler gerektiren uygulamalar için daha düşük başlangıç yoğunlukları tercih edilebilir.

Memeli olmayan alternatif model sistemlere olan ilgi arttıkça, böcekler geniş bir biyolojik çeşitliliği keşfetme fırsatı sunmanın yanı sıra memeli modellere göre daha düşük maliyetli araştırma modelleri, daha basit bakım gereksinimleri ve daha az düzenleyici engel sağlamaktadır1. Gelişmekte olan böcek model sistemleri, örneğin Carausius morosus (Sinéty, 1901) gibi sopa böceklerindeki partenogenez dahil olmak üzere benzersiz biyolojik fenomenlerin araştırılmasını mümkün kılmaktadır2. Meyve sineği Drosophila melanogaster, 20. yüzyılın başlarından beri gelişimsel ve genetik süreçlere dair anlayışımızı şekillendirmiş olsa da3, C. morosus gibi diğer böcek model sistemleri yalnızca gelişimsel biyoloji için değil, aynı zamanda motor kontrol, lokomosyon ve nörohormonla düzenlenen sistemlerin araştırılması için de benzersiz bir fırsat sunmaktadır4.
Ayrıca, evrimsel gelişimsel biyoloji alanında, holometabola (dolaylı gelişim gösteren veya metamorfoz geçiren) böceklere kıyasla hemimetabola (doğrudan gelişim gösteren) böceklerin yeterince temsil edilmediği görülmektedir. D. melanogaster en iyi çalışılmış model böcek olarak hizmet eden. Doğrudan gelişen böcek türlerini çalışmak gibi C. morosus, cinsel olgunluğa erişmeden önce birkaç nimfa instar evresinden geçen5, evrimsel gelişimsel biyoloji araştırmalarındaki temel filogenetik boşlukları doldurmamıza olanak tanır. Bu durum, böcek evriminin erken dönemlerinde ayrılan ancak mevcut laboratuvar model sistemlerinde eşit düzeyde temsil edilmeyen hemimetabol ve holometabol böcekler arasında karşılaştırma yapılmasını sağlar. Daha geniş kapsamlı kullanımı... C. morosus bir laboratuvar organizması olarak kullanımı, tutarsız ve tekrarlanamayan bakım koşulları ile gelişim ve sağkalım için net kıstasların eksikliği nedeniyle sınırlı kalmıştır. Burada, embriyogenez takibi, boylamsal gelişim ve reprodüktif çıktı deneyleri dahil olmak üzere çok sayıda uygulamayı destekleyen, laboratuvarlar genelinde uygulanabilecek tanımlanmış kültür koşulları ve beklenen sonuçları içeren adım adım bir protokol sunuyoruz.
C. morosus esaret altında kolayca yetiştirilebilir, bu da onları hem laboratuvar araştırmaları hem de eğitim ortamları için oldukça uygun hale getirir. Partenogenetik olarak üreme yetenekleri6, karmaşık yetiştirme düzeneklerine olan ihtiyacı ortadan kaldırarak bakım gereksinimlerini azaltır ve popülasyon yönetimini kolaylaştırır. Başarılı bir yetiştirme süreci kontrollü çevresel koşullardan faydalanmaya dayalı olsa da, bakımı diğer birçok laboratuvar modeline kıyasla basit ve düşük maliyetlidir. C. morosus; sarmaşık (Hedera helix), böğürtlen (Rubus fruticosus) veya gül yaprakları (Rosa spp.) gibi yaygın bitki materyalleriyle kolayca beslenir. Bu sistemin diğer avantajları arasında ototomi, bacakları rejenerasyon yeteneği7, büyük vücut boyutu ve çeşitli konukçu bitkilerle beslenebilme kabiliyeti yer alır. Ancak, bu türün halka açık bir genom dizisinin bulunmaması, nispeten uzun gelişme süresi ve enjeksiyonları zorlaştırabilen sert bir embriyonik ekzokoryuma sahip olması gibi sınırlamaları da vardır8. Bu sınırlamalara rağmen C. morosus, hem araştırma hem de eğitim uygulamaları için pratik ve etkili bir model sunar.
C. morosus için standartlaştırılmış yetiştirme protokolleri, araştırma çalışmalarında tutarlı ve tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için kritik öneme sahiptir. Literatürde C. morosus üzerine çok sayıda laboratuvar çalışması bildirilmiş olsa da6,9,10,11,12, bildiğimiz kadarıyla, C. morosus'un laboratuvar ortamında yetiştirilmesine yönelik derinlemesine protokoller bugüne kadar yayınlanmamıştır. Bu çalışmada; yumurtaların, yeni çıkan larvaların ve reprodüktif olarak olgun erişkinlerin yetiştirilmesini içeren, C. morosus laboratuvar kültürleri için kapsamlı ve standartlaştırılmış bir protokol seti başarıyla oluşturulmuştur. Bu yöntemlerle, bu böceğin daha geniş biyolojik araştırma topluluğu için daha erişilebilir olmasını hedefliyoruz.

<table><tbody><tr><td>Otoklavlanabilir polipropilen torbalar, 30.5 cm &amp;times; 61 cm</td><td>VWR</td><td>95042-554</td><td>Böcek, yumurta ve kafes atıklarının bertarafı için</td></tr><tr><td>Biyotehlike atık kutusu</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Dondurma sonrası bertaraf için</td></tr><tr><td>Küt uçlu plastik pens</td><td>Amazon</td><td>B07YZ5FB27</td><td>Yumurta ve yeni çıkan larvaların toplanması ve taşınması için</td></tr><tr><td>İklim kontrollü oda veya inkübatör</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>23 &amp;deg;C, %70 RH ve 12:12 sa ışık-karanlık fotoperiyodunu korumak için</td></tr><tr><td>Tek kullanımlık eldivenler</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Yumurta toplama ve atık yönetimi için</td></tr><tr><td>Tek kullanımlık Petri kapları, 150 &amp;times; 15 mm</td><td>VWR</td><td>25384-326</td><td>Yumurta toplama için</td></tr><tr><td>Tek kullanımlık Petri kapları, 60 &amp;times; 15 mm</td><td>VWR</td><td>25384-092</td><td>Yumurta inkübasyonu için</td></tr><tr><td>Taze yapraklar (sarmaşık, böğürtlen veya gül yaprakları)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Pestisitsiz besin kaynağı</td></tr><tr><td>Dondurucu, -20 &amp;deg;C</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Ötanazi/bertaraf ve bertaraf öncesinde yumurtaları veya atıkları dondurmak için</td></tr><tr><td>Fileli böcek kafesleri</td><td>Amazon</td><td>B09GS2CH1G</td><td>Böcekleri barındırmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Sprey şişesi, 250 mL</td><td>Amazon</td><td>B000H88PCU</td><td>Fileli kafesleri nemlendirmek için</td></tr><tr><td>Yüksek cam kap, 18&amp;ndash;23 cm yükseklik</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Su ve bitki saplarını tutmak için kullanılır</td></tr><tr><td>Musluk suyu</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Nemlendirme ve yaprakların hidrasyonunu korumak için</td></tr><tr><td>Beyaz ayıklama yüzeyi veya tepsisi</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Ayıklama sırasında yumurtaları dışkılardan ayırt etmek için</td></tr></tbody></table>

laboratuvar ortamlarında carausius morosus (phasmatodea, insecta) yetiştirilmesi İçin standartlaştırılmış bir protokol

A Standardized Protocol for Rearing Carausius morosus (Phasmatodea, Insecta) in Laboratory Settings

Carausius morosusHindistan sopa böceği olan , Hindistan'a özgü, ince dal benzeri bir böcektir. Dünya çapında esaret yoluyla yaygın olarak tanıtılmış olmasına ve laboratuvarlarda yaygın olarak kullanılmasına veya evcil hayvan olarak beslenmesine rağmen, standardize edilmiş hayvan yetiştirme laboratuvar protokolleri eksiktir. Burada, şunlar için ayrıntılı laboratuvar kültürü koşullarını rapor ediyoruz C. morosusStokları şu koşullarda muhafaza ediyoruz: 23 &#176;C, %70 bağıl nem ve 12:12 saatlik ışık-karanlık fotoperiyodu. Bu kültür, diyet ve kafes kurulum koşullarına yönelik standartlaştırılmış protokollerin uygulandığı bu koşullar altında iki yılı aşkın süredir başarıyla sürdürülmektedir. Ayrıca, şunlarla yürütülen güncel deneyleri desteklemek amacıyla yumurta ve yavru bakımı yöntemlerini de sunmaktayız: C. morosusKültür koşullarımız altında, aynı 24 saatlik süre içinde yumurtlanan ve izlenen 105 parti yumurta, tutarlı bir 12 günlük süre içinde açılmış ve yavruların %13,9'u başarıyla yetişkinliğe ulaşmıştır. Bu standartlaştırılmış yöntemler, tekrarlanabilirliği ve erişilebilirliği artırarak C. morosus'un gelişim, davranış ve fizyoloji analizleri dahil olmak üzere çok çeşitli çalışmalar için bir laboratuvar model sistemi olarak daha yaygın kullanımına olanak tanımaktadır.

Eylül 2024 ile Kasım 2025 tarihleri arasında, C. morosus türünün yumurtalardan üreme yeteneğine sahip erişkinlere kadar başarılı laboratuvar yetiştirilmesini belgeleyen veriler topladık. Bu 14 aylık süre boyunca, şu parametrelerden biri veya daha fazlası için beş kafes kurduk, sürdürdük ve izledik: erişkin mortalitesi, yumurtlanan yumurta sayısı, yumurtaların çıkım zamanı ve yeni çıkan yavruların yetişkinliğe kadar olan sağkalımı. Yöntemimiz, patojen kaynaklı hastalık veya üreme kaybı gibi suboptimal sonuçlara yol açabilecek belirgin işaretler olmaksızın uzun süreli koloni bakımını desteklemektedir. İki yılı aşan sürekli kültür süresince, patojen kaynaklı belirgin kitlesel ölümler gözlemlenmedi; yumurta ve yavru üretimi nesiller boyunca stabil kaldı.
Şu şekilde gösterilen veriler Şekil 1 ve Şekil 2 kurulumdan yavruların yetişkinliğe erişimine kadar izlenen beş kafesteki gözlemleri, her bir kafes için yumurtlanan yumurtalar ve yetişkin mortalitesi dahil olmak üzere sunun. Her kafesteki kurucu bireyler cinsel olgunluğa erişip yumurtlamaya başladıktan sonra, ovipozisyon başlangıcındaki başlangıç popülasyonunu belirlemek amacıyla her kafeste bulunan yetişkin sayısını kaydettik. Zaman içinde her kafesteki yetişkin sayısı şurada gösterilmiştir: Şekil 1 ve Tablo 1Sağkalımdaki sürekli düşüşü, yaşa bağlı mortalite olarak yorumluyoruz.
Yetişkin sağkalımının izlendiği aynı beş kafeste yumurta üretimini de paralel olarak takip ettik (Şekil 1 ve Şekil 2). Kafes başına günlük yumurta sayıları, yumurtlama döneminin ilk 30–50 gününde en yüksek seviyedeydi ve sonrasında kademeli olarak azaldı. Toplam yumurta üretimi kafesler arasında farklılık gösterse de (Tablo 2), bu genel patern beş replika kafesin tamamında tutarlıydı. Toplam 105 yumurta grubu için 50 günlük bir süre boyunca yumurta çıkım dinamiklerini izledik; burada her bir yumurta grubu, 24 saatlik bir süre içinde aynı kafese bırakılan yumurtalar topluluğunu ifade etmektedir. Şekil 3'te gösterilen grup boyutu analizleri için 75 grup; küçük, orta ve büyük kategorilerine ayrıldı. Bir gruptaki ilk yumurta çıktıktan sonra, grup boyutundan bağımsız olarak (Şekil 3B), ilk yavrunun çıkışından sonraki 12 gün içinde %90 çıkım tamamlanma oranına ulaşıldığını tespit ettik (Şekil 3D). Bir gruptaki ilk yavrunun çıkışını takip eden belirli bir zaman noktasında, gruptaki yumurtaların çıkım yapmış olan oranını tanımlamak için “çıkım tamamlanması” terimini kullanarak, yumurta gruplarının %90 çıkım tamamlanma gününe göre dağılımının, çoğu grubun ilk yavru çıkışından sonraki 10 ile 14. çıkım günleri arasında (Şekil 3C) bu eşiğe ulaştığını belirtmekteyiz.
<img alt="Şekil 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/71225/71225fig2.jpg" /> 
Şekil 1. Yetişkin ölüm dinamiği. Zaman içinde beş tekrarlı C. morosus deney kafeslerindeki sağkalım yörüngeleri. İzlenen her kafesteki bireyler için yüzde sağkalım zamana karşı grafiğe dökülmüştür. Özet metriklere Tablo 1'den bakınız. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/71225/71225fig2large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Şekil 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/71225/71225fig3.jpg" /> 
Şekil 2Yumurta üretim dinamikleri. takip edilen aynı beş kafesten toplanan yumurta sayısı Şekil 11'den 5'e kadar olan kafesler sırasıyla 47, 58, 106, 129 ve 132 gün boyunca günlük olarak izlenmiştir. Grafik, yumurtlama sürecinin ilk 126 gününe ait verileri göstermektedir. Özet metriklere şuradan bakınız: Tablo 2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/71225/71225fig3large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Şekil 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/71225/71225fig1.jpg" /> 
Şekil 3Yumurta çıkım dinamikleri. (A) Batch başına toplam yumurta sayısı ile %90 kuluçka tamamlanma oranına ulaşmak için gereken gün sayısı arasındaki ilişki. (B) 7-20. kuluçka günleri boyunca, yumurta partilerinin %90 kuluçka tamamlanma oranına ulaştığı güne göre dağılımı. (C) Küçük, orta ve büyük yumurta gruplarında grup bazlı çıkım oranının dağılımı. Her grup boyutu kategorisi için n = 25 grup. (D) Parti boyutu analizinde kullanılan 75 yumurta partisi için 70 günlük toplama süresi boyunca izlenen çıkım yörüngeleri. Toplam 105 yumurta partisi izlenmiştir; burada gösterilen analizler için 75 parti, tersil kesim noktaları kullanılarak toplam yumurta sayısına göre gruplandırılmıştır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/71225/71225fig1large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Şekil 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/71225/71225fig4.jpg" /> 
Şekil 4Kafes başına yetişkin sayıları, yetişkin mortalitesi ve yumurta üretimi arasındaki ilişkiler. (A) Anlamlı bir ilişki yoktur (R2 ortalama yetişkin günlük ölüm oranı ile bir kafesteki kurucu yetişkin sayısı arasında (p = 0,025) [bir ilişki vardır].B) Anlamlı bir ilişki yoktur (R2 = 0,017) toplam yumurta üretimi ile bir kafesteki kurucu yetişkin sayısı arasında. (C) Orta düzeyde negatif bir korelasyon (R2 = 0,411) ortalama günlük yumurta üretimi ile ortalama yetişkin günlük mortalite arasındadır. Ortalama yetişkin günlük mortalite = (% toplam mortalite) / (toplam izleme gün sayısı). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/71225/71225fig4large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Kafes No</td>
			<td>eski kafes no</td>
			<td>İlk gün çıkımı 
			kurucu kafese yavrular eklendi</td>
			<td>Son gün çıkışı 
			yavrular kurucu kafese eklendi</td>
			<td># Kuluçka 
			kafese eklenen yavrular</td>
			<td>Kuluçka süresi aralığı 
			eklemeler yapıldı</td>
			<td>Kafes Başlangıcı ile Yetişkin Sayımı Arasındaki Ortalama Süre</td>
			<td>Yetişkinlerin Sayımının İlk Günü</td>
			<td>Yetişkinlerin Yumurta Yumurtlamaya Başladığı İlk Gün</td>
			<td>Kuluçkadan Çıkış ile Erginlik Arasında Geçen Süre</td>
			<td>Kuluçka Çıkışı ile Yumurta Yumurtlama Arasında Geçen Süre</td>
			<td>Başlangıç Erişkin Sayısı</td>
			<td>Yavru Hayatta Kalma Oranı ve Yetişkinliğe Geçiş 
			çeker ocak</td>
			<td>Yetişkin Sayımının Son Günü</td>
			<td>Yetişkinlerin Son Sayısı</td>
			<td>İzlenen Yetişkin Sayısının Süresi&#160; [gün]</td>
			<td>İzlenen Süre Boyunca Ortalama Yetişkin Mortalitesi [%]</td>
			<td>Günlük Ortalama Yetişkin Mortalitesi [%]</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1</td>
			<td>7</td>
			<td>12/7/ 
			2024</td>
			<td>12/21/ 
			2024</td>
			<td>Saptanmadı</td>
			<td>14.00</td>
			<td>166.00</td>
			<td>5/29/ 
			2025</td>
			<td>5/29/ 
			2025</td>
			<td>173.00</td>
			<td>173.00</td>
			<td>61.00</td>
			<td>Saptanmadı</td>
			<td>10/9/ 
			2025</td>
			<td>9.00</td>
			<td>133.00</td>
			<td>85.25%</td>
			<td>0.64%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2</td>
			<td>8</td>
			<td>2/10/ 
			2025</td>
			<td>3/9/ 
			2025</td>
			<td>ND</td>
			<td>27.00</td>
			<td>130.00</td>
			<td>7/17 
			/2025</td>
			<td>7/17/ 
			2025</td>
			<td>157.00</td>
			<td>157.00</td>
			<td>42.00</td>
			<td>ND</td>
			<td>11/5/ 
			2025</td>
			<td>12.00</td>
			<td>111.00</td>
			<td>71.43%</td>
			<td>0.64%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3</td>
			<td>9</td>
			<td>4/5/ 
			2025</td>
			<td>4/12/ 
			2025</td>
			<td>Saptanamadı</td>
			<td>7.00</td>
			<td>110.00</td>
			<td>7/17/ 
			2025</td>
			<td>7/27/ 
			2025</td>
			<td>103.00</td>
			<td>113.00</td>
			<td>45.00</td>
			<td>Saptanmadı</td>
			<td>11/5/ 
			2025</td>
			<td>36.00</td>
			<td>111.00</td>
			<td>20.00%</td>
			<td>0.18%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4</td>
			<td>10</td>
			<td>5/8/ 
			2025</td>
			<td>5/22/ 
			2025</td>
			<td>350</td>
			<td>14.00</td>
			<td>121.00</td>
			<td>9/4/ 
			2025</td>
			<td>9/13/2 
			025</td>
			<td>119.00</td>
			<td>128.00</td>
			<td>36.00</td>
			<td>10.29%</td>
			<td>11/5/ 
			2025</td>
			<td>24.00</td>
			<td>62.00</td>
			<td>33.33%</td>
			<td>0.54%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5</td>
			<td>11</td>
			<td>5/23/ 
			2025</td>
			<td>6/6/ 
			2025</td>
			<td>536</td>
			<td>14.00</td>
			<td>117.00</td>
			<td>9/4/ 
			2025</td>
			<td>9/24/ 
			2025</td>
			<td>104.00</td>
			<td>124.00</td>
			<td>86.00</td>
			<td>16.04%</td>
			<td>11/5/ 
			2025</td>
			<td>66.00</td>
			<td>62.00</td>
			<td>23.26%</td>
			<td>0.38%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ortalamalar</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>15.20</td>
			<td>128.80</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>131.20</td>
			<td>139.00</td>
			<td>54.00</td>
			<td>13.17%</td>
			<td></td>
			<td>29.40</td>
			<td>95.80</td>
			<td>46.65%</td>
			<td>0.48%</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tablo 1: Deneysel kafeslerdeki yetişkin sağkalım ve mortalite dinamikleri. Beş tekrarlı deneysel kafes için yetişkin sağkalım sonuçları. Her bir kafes için; kafesin kurulduğu tarih aralığı, her kafesi kurmak için kullanılan yavruların sayısı (5 kafesten 2'si için), yavruların yetişkinliğe kadar sağkalımı (5 kafesten 2'si için), kafes kurulumu, yetişkin sayımlarının başlatılması ve yumurtlamanın başlaması arasındaki süre, yetişkin izleme süresi, başlangıç ve bitiş yetişkin popülasyon büyüklükleri, izleme süresince gerçekleşen yetişkin mortalitesi ve ortalama günlük mortalite rapor edilmiştir. Yavruların yetişkinliğe kadar sağkalımı, yalnızca başlangıç yavru sayıları bilinen kafesler için hesaplanmıştır.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody >
		<tr >
			<td >Kafes No</td>
			<td >Yumurta Toplama Başlangıç Tarihi</td>
			<td >Yumurta Toplama Bitiş Tarihi</td>
			<td >Yumurta Toplama Süresi [gün]</td>
			<td >Kafes Başına Toplam Yumurta Sayısı</td>
			<td >Günlük Ortalama Yumurta Sayısı</td>
			<td >Başlangıçtaki Erişkin Birey Sayısı</td>
			<td >Başlangıçtaki Erişkin Başına Toplam Yumurta Sayısı</td>
			<td >Erişkin Başına Günlük Ortalama Yumurta Sayısı</td>
		</tr >
		<tr >
			<td >1</td>
			<td >5/29/2025</td>
			<td >10/8/ 
			2025</td>
			<td >132.00</td>
			<td >6721.00</td>
			<td >50.92</td>
			<td >61.00</td>
			<td >110.18</td>
			<td >0.83</td>
		</tr >
		<tr >
			<td >2</td>
			<td >7/4/2025</td>
			<td >11/10/2025</td>
			<td >129.00</td>
			<td >7333.00</td>
			<td >56.84</td>
			<td >42.00</td>
			<td >174.60</td>
			<td >1.35</td>
		</tr >
		<tr >
			<td >3</td>
			<td >7/27/2025</td>
			<td >11/10/2025</td>
			<td >106.00</td>
			<td >9198.00</td>
			<td >86.77</td>
			<td >45.00</td>
			<td >204.40</td>
			<td >1.93</td>
		</tr >
		<tr >
			<td >4</td>
			<td >9/13/2025</td>
			<td >11/10/2025</td>
			<td >58.00</td>
			<td >2583.00</td>
			<td >44.53</td>
			<td >36.00</td>
			<td >71.75</td>
			<td >1.24</td>
		</tr >
		<tr >
			<td >5</td>
			<td >9/24/2025</td>
			<td >11/10/2025</td>
			<td >47.00</td>
			<td >6104.00</td>
			<td >129.87</td>
			<td >86.00</td>
			<td >70.98</td>
			<td >1.51</td>
		</tr >
		<tr >
			<td >Ortalamalar</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td >94.40</td>
			<td >6387.80</td>
			<td >73.79</td>
			<td >54.00</td>
			<td >126.38</td>
			<td >1.37</td>
		</tr >
	</tbody >
</table>
Tablo 2: Deneysel kafeslerdeki yumurta üretimi. Olgun yetişkinleri içeren beş tekrarlı deneysel kafesin yumurta verme verimi. Her bir kafes için yumurta toplama başlangıç ve bitiş tarihleri, toplam yumurta toplama süresi, kafes başına kümülatif yumurta üretimi ve günlük ortalama yumurta sayısı rapor edilmiştir.

Bu makale, hayvan bakımı, yumurtaların işlenmesi, yeni çıkan yavruların bakımı, temsili performans metrikleri ile türün yaşam süresi ve biyolojik özelliklerine genel bir bakış dahil olmak üzere, bir Carausius morosus laboratuvar kolonisinin sürdürülmesine yönelik ayrıntılı protokolleri özetlemektedir.

Laboratuvar Ortamlarında Carausius morosus (Phasmatodea, Insecta) Yetiştirilmesi İçin Standartlaştırılmış Bir Protokol

Hindistan sopa böceği olan Carausius morosus, Hindistan'a özgü, ince dal benzeri bir böcektir. Dünyanın dört bir yanına esaret altında yaygın şekilde getirilmiş olsa da...

Carausius morosus, commonly known as the Indian stick insect or the laboratory stick insect, belongs to the order of Phasmatodea. Native to India, this species has been introduced to many regions worldwide and is now a common household pet. Due to their unique physiology and behavior, Carausius morosus is a valuable model organism for studying motor control, locomotion, and neurohormone-regulated systems.Carausius morosus culture stocks consist of parthenogenetic females that reproduce without the need for mating. These nocturnal insects undergo hemimetabolous development and molt five to six times before reaching sexual maturity. Carausius morosus primarily feeds on fresh leaves, with preferred food sources including ivy, blackberry, rose, and other common plants.These insects exhibit a behavior known as crypsis, allowing them to camouflage seamlessly with their surroundings by mimicking twigs when threatened. The laboratory culture should be maintained in a climate-controlled room or incubator with the temperature set to 23 degrees Celsius, the relative humidity to 70%and a photoperiod of 12 hours of light and 12 hours of darkness. Mesh insect enclosures, which are containers of varying sizes with fabric mesh ventilation, are ideal for housing stick insects.These containers offer plenty of space for both animals and their food sources, convenient access to researchers for husbandry tasks, sufficient ventilation for the animals, and are lightweight, portable, and easy to assemble or disassemble as needed. To establish a new colony with adults, place 25 to 50 adults into a clean mesh insect enclosure measuring 61 by 61 by 91.5 centimeters. Provide fresh foliage as described before to ensure proper nutrition.To begin a cage with hatchlings, add no more than 500 individuals to a clean mesh enclosure of the same dimensions along with fresh foliage. Under our laboratory conditions, approximately 13%of hatchlings survive to adulthood, meaning if you start a cage with 500 hatchlings, you should expect around 60 adults in four to five months. Hatchlings can remain in the same enclosure throughout their development until they reach adulthood.Tracking the number of hatchlings placed into the enclosure and recording how many survive to adulthood is essential for monitoring developmental success and overall colony health. Provide fresh foliage, such as ivy, bramble, or rose, once a week, with earlier replacement if leaves dry, wilt, or are depleted. Ensure plant material has not been treated with pesticides or other chemical agents prior to use, as it can be lethal to the animals.Trim the ivy stems to fit a vessel, typically small jars or bottles, to keep the leaves hydrated at the risk of insects drowning. Place the ivy securely inside, and make sure the leaves are elevated and accessible to the stick insects. Then carefully close the mesh enclosure.During weekly cage cleanings, remove any dried or wilting ivy, as dehydrated leaves can pose a hazard to the insects due to indigestion. Be sure to also clear out any accumulated excrement from the bottom of the enclosure. Maintaining a clean environment is essential for the health and well-being of the colony.Oviposition in Carausius proceeds by a release of the eggs from the ovipositor, casually dropping the eggs to the bottom of the cage. The mature eggs are protected by a hardened and brittle eggshell called an exochorion. The dark brown eggs resemble plant seeds.To collect the eggs, gently sweep the mixture of eggs and droppings towards the front of the cage using a gloved hand, and gently transfer them to a 15-centimeter Petri dish for egg retrieval. Using blunt plastic forceps, carefully pick up each egg and place into a new, clean 6-centimeter Petri dish for monitoring of hatching. Remember to label the container with the date and time of egg collection.Maintain the eggs in a well-ventilated container that has a lid to prevent hatchlings from escaping throughout the incubation period. Under these laboratory conditions, you should expect to see eggs begin to hatch between 74 and 80 days after egg-laying. During the incubation period, leave the Petri dish uncovered to ensure proper ventilation.About a week before expected hatching time, which occurs between 74 and 80 days after egg-laying, place the lid back on the dish. This will prevent the hatchlings from escaping once they begin to emerge. Towards the expected time of hatching, start monitoring egg containers daily to watch for hatchlings to emerge.Once eggs begin to hatch, gently transfer hatchlings with plastic forceps to an escape-proof and well-ventilated or mesh insect enclosure containing fresh foliage. Remember to label each cage with the date or range of hatching, the number of hatchlings added, and the egg batch date to track the age of the animals and know when to expect them to become sexually mature. Lightly mist each enclosure daily with one to two sprays of tap water to ensure proper hydration during the early nymph stages.Pause here if you wish to view a daily and weekly summary of animal husbandry. Embryonic development in Carausius morosus takes about 74 to 80 days. After hatching, you should expect individuals to molt five to six times and reach sexual maturity in roughly 135 days, with a total generation time of about nine and a half months.To understand hatching patterns in our culture, we track the number of hatchlings produced each day for groups of eggs laid within a 24-hour period, which we call an egg batch. In total, we analyzed 75 egg batches and divided them into tertiles based on batch size, ranking them from smallest to largest so that the smallest 25 batches were classified as small, the middle 25 batches as medium, and the largest 25 batches as large. To understand the relationship between the total number of eggs per batch and how long it took for 90%of the eggs to hatch, we calculated the collection day at which 90%of the hatchlings from each batch emerged by using the total number of hatchlings produced from each batch and tracking hatching across collection days.This plot shows the number of days it took for 90%of hatchlings to emerge on the x-axis and the total number of eggs per batch on the y-axis, with each dot representing one batch. Our data suggests no strong correlation between batch size and the number of days required to reach 90%hatching. This helps us understand that batch size does not strongly influence hatching time.This plot shows the distribution of the number of days it took each egg batch to reach 90%hatch completion after the onset of hatching. We observed that most egg batches reached 90%completion between seven and 20 days after the first egg hatched, with the majority reaching this point between 11 and 13 days. This suggests that while there is some variability in hatching timing among batches, most reach near-complete hatching with a consistent time window.These data help predict hatching timing in our culture, which is useful for planning egg collections and experiments. To determine whether hatch rate varied across different batch sizes, we calculated what percent of eggs successfully hatched for each batch across small, medium, and large categories. We plotted batch hatch rate for each size, producing a box-whisker plot with each point representing one batch.The X indicates the average, the horizontal line shows the median, the box shows the interquartile range, and the whiskers show the minimum and maximum values. We observed that an average of 48.6%of eggs hatched from the small batches, 38.2%hatched from the medium batches, and 48.3 hatched from the large batches. This is helpful for understanding hatching success to maintain stable cultures.To understand hatching patterns within our culture, we counted the number of hatchlings that emerged daily across 75 egg batches, which are grouped into small, medium, and large egg batch categories. We plotted the number of hatchlings per day on the y-axis over time shown on the x-axis, with day zero being the start of hatching. Each line represents one batch.We observed that all batch sizes followed a similar pattern, with peak hatching taking place in the first 12 days of the onset of hatching and the decline over time. This data is important for predicting hatching times of egg batches. We were interested in understanding adult survival across cages in our laboratory culture.To do this, we tracked adult survival in five separate cages over time. At each time point, we counted how many individuals were still alive in each cage. For each cage, the percentage of surviving individuals was determined relative to the starting population.Survival was plotted as a percent survival on the y-axis over time on the x-axis, with each line representing a cage. We found that in all cages, adult survival gradually declined over time, which we interpret as age-related mortality. Understanding adult survival is crucial in a laboratory population as it provides insight onto factors such as egg production and overall population dynamics.To understand egg production trends in our culture, we counted the number of eggs produced over time in the same five cages in which we had tracked adult mortality. The number of eggs collected at each time point is shown on the y-axis, plotted over time on the x-axis, with each line representing a different cage. Egg production increases early after onset of egg laying in cages and gradually declines over time across all cages, likely reflecting a combination of adult individuals dying, aging, and producing fewer eggs.This is important as it helps our understanding of reproductive output changes over time and how it affects overall lab population trends. In this video, we introduced Carausius morosus care in the lab, including an introduction to the species, best practices for husbandry, egg collection and maintenance, hatchling care, and an overview of their lifespan. We hope this information supports your work with Carausius morosus and contributes to successful research.

a-standardized-protocol-for-rearing-carausius-morosus-phasmatodea

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video, laboratuarda arka Anofel gambiae kullanılan genel teknikler gösterilmektedir. Kan besleme yetişkin için pupa larva organizmanın yaşam döngüsünün tüm aşamalarında laboratuar sivrisinek bakımı için yöntemleri gösterilmektedir.

Sivrisinek Yetiştirme Protokolü (A. gambiae)

Fopius arisanus Tephritid meyve sinekleri bu önemli tropikal zararlıları biyolojik kontrol başarıyla kullanılan bir yumurta larva parazitoit. Biz burada F. yetiştirme için optimize edilmiş bir protokol tarif hazır malzemeler kullanılarak küçük bir ölçekte arisanus.

Yetiştirilmesi için Optimum Protokol Fopius arisanus Tephritid Meyve bir parazitoit Sinekler

Bu protokol zebrafish yetiştiriciliği için en uygun koşulları sağlamak için düzenli bakım ve bakım özetliyor. Video sistemi bakımı, düzenli barınma, beslenme, üreme ve zebrafish larvaların yetiştirme için protokol göstermektedir.

Bir Zebra balığı Düzenli Bakım ve Onarım (<em&gt; Br.rerio</em&gt;) Laboratuvar: An Introduction

SIVQ-LCM lazer yakalama mikrodiseksiyon (LCM) işlemi sürücü, bir bilgisayar algoritması, Mekansal Değişmeyen Vektör Nicelemek (SIVQ) sürdürür yenilikçi bir yaklaşımdır. SIVQ-LCM akışı büyük ölçüde araştırma ve klinik ortamlarda hem de uygulamaları ile, Mikrodiseksiyon hızını ve doğruluğunu artırır.

ArcturusXT Instrument için SIVQ-LCM Protokolü

En yaygın bağırsak içeriği macroinvertebrates, görsel analizlerdir. Av organizmaların morfolojik çeşitlilik hakkında yoğun bilgi gerektiren, onlar yumuşak gövdeli yırtıcı özledim ve, nedeniyle güçlü ezme yırtıcı solungaçlarınızı de dahil olmak üzere bazı organizmalar için neredeyse imkansız. Biz macroinvertebrate için detaylı, yeni genetik yaklaşımlar diyet tanımlaması solungaçlarınızı av sağlar.

Su Macroinvertebrates kullanma gruba özel rDNA astar genetik Gut içerik analizleri için laboratuvar iletişim kuralı

Laboratuvar muhafazasını turkuaz ev ve verimli bir şekilde standart Zebra balığı özellikleri için kullanılan aynı altyapı istihdam Merkezi su filtrasyon sistemi, bireysel balık binlerce yükseltmek killifish ölçeklendirilecektir. Burada verimli killifish bakım izin standart yordamların listesini ayrıntılı.

Laboratuvar konut, turkuaz Killifish (Nothobranchius furzeri) için bir iletişim kuralı

İstikrarlı sinekler (Stomoxys calcitrans) yetiştirme için bir yordam sunulur. Yordam diyet bileşenleri, malzeme ve ek malzemeler için mevcut yerel malzemeler kullanır.

Laboratuvar istikrarlı sinek ve diğer Muscoid Diptera yetiştirme

Bu yazıda, fenotipik olarak çıkışları farklı gelişim aşamalarında bir dizi pozlama etkisini Eğitim amacı ile kirleticiler için Drosophila cins içinde tür teşhir için ve daha fazla bir nesil için detaylı bir protokol sağlar.

Drosophila toksisite laboratuvarda test etmek için bir omurgasız Model sistemi olarak kullanmak için deneysel protokol

Tarla lokasyonlarında yakalanan vahşi hayvanların izole mitokondrilerindeki solunum hızlarını ölçmek için mobil bir laboratuvar tasarladık ve inşa ettik. Burada, mobil bir mitokondriyal laboratuvarın tasarımını ve donanımını ve ilgili laboratuvar protokollerini açıklıyoruz.

Sahada Mitokondriyal Enerjileri Ölçmek için Mobil Mitokondriyal Fizyoloji Laboratuvarının Geliştirilmesi

Polip kurtarma, mercan poliplerinin onları kolonilerine bağlayan dokuyu sindirdiği ve birey olarak yaşamak için ondan ayrıldığı akut stresin neden olduğu bir süreçtir. Mevcut protokol, hipersalin veya kalsiyum içermeyen deniz suyu arıtımları kullanılarak kurtarma yoluyla mercan mikroyayılımının nasıl indükleneceğini açıklamaktadır.

Mercan Kolonilerinde Polip Kefalinin Laboratuvar Deneysel Kullanımı için Bireyselleştirilmiş Mikropropagatlar Elde Edilmesini İndüklemek

Harvard University.  This paper outlines detailed protocols for maintaining a Carausius morosus laboratory colony, including key procedures for animal husbandry, egg handling, hatchling care, representative performance metrics, and an overview of the species lifespan and biological characteristics.

Laboratuvar Ortamlarında Carausius morosus (Phasmatodea, Insecta) Yetiştirilmesi İçin Standartlaştırılmış Bir Protokol

Daha fazla video keşfet