Name: Site Özel Recombinase (SSR) Teknoloji İlkeleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-29T12:11:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: Öğrenin Cre/lox sistemi ile koşullu mutagenez mekanizmalarını ve gen fonksiyonlarını değerlendirme yöntemlerini. Bu teknoloji, geleneksel knockout stratejilerine göre daha esnek genetik manipülasyon imkanı sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

site Özel recombinase (ssr) teknoloji İlkeleri

Principles of Site-Specific Recombinase (SSR) Technology

Site özel recombinase (SSR) teknolojisi, gen yapısı manipülasyon gen fonksiyonu keşfetmek için izin verir ve moleküler biyoloji ayrılmaz bir aracı haline gelmiştir. Site özel recombinases farklı DNA hedef dizileri bağlayan proteinlerdir. Cre / lox sistemi ilk kez 1980&#39;li yıllarda bakteriyofajlar olarak tarif edilmiştir. Cre recombinase iki loxP (X-over P1 lokus) siteler arasında siteye özgü rekombinasyon DNA katalize Tip I topoizomeraz. Cre / lox sistemi, herhangi bir kofaktör gerektirmez. LoxP dizileri surround rekombinasyon ve yeniden düzenlenmesi yer alır yönlü bir çekirdek dizisi Cre recombinases için farklı bağlanma yerleri içerir. Hücreleri loxP siteleri içeren ve Cre recombinase ifade, bir rekombinasyon olayı oluşur. Çift iplikli DNA, Cre recombinase tarafından iki loxP sitelerde kesilmiş, yeniden düzenlenmiş ve (&quot;makas ve tutkal&quot;) bağlandı. Rekombinasyon olayı Ürünler asimetrik dizilerinin göreli yönü bağlıdır. SSR teknolojisi, gen fonksiyonu keşfetmek için bir araç olarak sık sık kullanılır. Burada ilgi gen Cre hedef siteleri loxP (&quot;floxed&quot;) ile çevrili. Hayvanlar daha sonra özel bir doku organizatörü kontrol altında Cre recombinase ifade hayvanlarla geçti. Cre recombinase ifade dokularda hedef dizileri bağlanır ve floxed gen maktu vergileri. Kontrollü gen delesyonu ve farklı zaman noktalarında özel dokularda gen fonksiyon soruşturma sağlar. SSR teknolojisi --- mutagenez koşullu istihdam gen fonksiyon Analizi - gen delesyonu sık sık ölümcül geleneksel knock-çıkışları üzerinde önemli avantajları vardır.

Siteye özgü recombinase (SSR) teknolojisi ve Cre / lox sistemi gelişi, moleküler biyoloji alanındaki birçok gelişmeler açmıştır ve transgenik hayvanların gen fonksiyonunu değerlendirmek için değerli bir araç olarak kendini kanıtlamıştır. Bu röportaj, halka kapanması recombinase (Cre) ve bu enzim kullanımı geleneksel vuruş stratejileri üzerinde önemli avantajlara sahiptir koşullu mutagenez, gelişmesine yol açmıştır sahaya özgü rekombinasyon mekanizması tartışıyor.

Site Özel Recombinase (SSR) Teknoloji İlkeleri

Site-spesifik rekombinaz (SSR) teknolojisi, gen fonksiyonunu araştırmak amacıyla gen yapısının manipülasyonuna olanak tanır ve moleküler ...'nin ayrılmaz bir aracı haline gelmiştir.

Merhaba, benim adım Frank Buchholz. Max PL Moleküler Hücre Biyolojisi ve Genetiği Enstitüsü'nde grup lideriyim. Çalışmalarımız sürdürülmektedir.Çalışmalarımızın iki yönü bulunmaktadır. Birincisi RNA I taraması ile ilgilidir. Diğeri ise gelişmiş genom mühendisliği için bölgeye özgü rekombinaz geliştirilmesi ile ilgilidir.Geçmişimle ilgili olarak; biyolog ve moleküler biyolog olduğumu, biyoloji eğitimimi tamamladığımı söyleyebilirim. Ardından Heidelberg'deki Avrupa Moleküler Biyoloji Laboratuvarları'nda doktora yaptım ve sonrasında San Francisco'daki UCSF'de Mike Bishop ile lösemi hayvan modelleri üzerine çalışarak doktora sonrası araştırmalarımı yürüttüm. Buradaki Max Planck Enstitüsü, temel olarak hücrelerin dokuları nasıl oluşturduğunu anlamaya çalışmak amacıyla, gelişim biyologları ve hücre biyologları gibi en az iki farklı alanı bir araya getirmeyi hedeflemektedir.Bu, temel olarak Ston'daki enstitünün genel hedefidir. Temelde iki alan üzerinde çalışıyoruz. Alanlardan biri, biyolojik süreçlerde daha önce tanımlanmamış genlerin yeni işlevlerini belirlemeye çalışan RNAi taramaları yapmayı kapsamaktadır.Diğeri ise, özellikle bölgeye özgü rekombinazlar kullanarak genomların gelişmiş

principles-of-site-specific-recombinase-ssr-technology

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Günümüzde HIV-1 stratejileri, viral bir yaşam döngüsü bastırmak için değil, etkili bir şekilde enfeksiyonu ortadan kaldırmak hareket ederler. Burada göstermektedir ki enfekte hücreleri genom bir mühendislik recombinase verimli tüketim entegre HIV-1 proviral DNA.

Röportaj: Evolved Recombinase kullanarak HIV-1 Proviral DNA eksizyonu

Maya mitokondriyal nükleoit proteini Mgm101, büyük oligomerik halkalar oluşturan bir Rad52 tipi rekombinasyon proteindir. Bir protokol, maltoz bağlanma proteini (MBP)-etiketleme katyon değişimi ve boyut dışlama kromatografisi ile birlikte stratejisi kullanılarak çözülebilir rekombinant Mgm101 hazırlamak için tarif edilmektedir.

MBP tabanlı Etiketleme Stratejisi Mgm101 Rekombinasyon Protein hazırlanması

Gen hedefleme metodolojileri, nakavt, knock-in ve etiketli alellere sahip transgenik fareler oluşturmak için kullanılabilir.  Burada, E. coli'de, özel gen hedefleme vektörlerini hızlı bir şekilde oluşturmak için kullanılabilecek 'alt klonlama artı ekleme' olarak adlandırdığımız gelişmiş bir yeniden birleştirme yöntemini açıklıyoruz.

Alt klonlama Artı Ekleme (SPI) - Gen Hedefleme Vektörler Rapid İnşaat için Yeni Bir Yöntem Recombineering

Doğrusal kovalent kapalı (LCC) DNA minivektörü (DNA ministring), yüksek transfeksiyon verimliliği sunan viral olmayan bir gen dağıtım vektörüdür ve herhangi bir DNA dağıtım uygulamasıyla ilgilidir. Üretim sistemi basit, hızlı ve in vivo olarak ölçeklenebilir. Aşağıdaki protokol, DNA mini dizilerinin üretimi için görsel adım adım talimatlar sağlar.

Çift şeritli DNA Ministrings üretimi

Burada daha önce tarif edilen sistemler geliştirir insan pluripotent kök hücreler (hPSCs) arasında AAVS1 lokusunda RMCE göre hızlı ve etkili bir gen düzenleme yöntemi sunulmaktadır. Bu tekniği kullanarak, izogenik hatları hızlı ve güvenilir hPSCs ile transgenesis aracılı araştırma kolaylaştıran, uygun karşılaştırmalı çalışmalar için oluşturulabilir.

içinde Recombinase aracılı Kaset Borsası tarafından Rekombinant insan pluripotent kök hücreleri hızlı ve verimli Nesil<em&gt; AAVS1</em&gt; Odağı

Burada, fare embriyonik kök Southern blot ve/veya PCR kullanarak hücre Homolog rekombinasyon olayları tanımlamak için detaylı bir iletişim kuralı mevcut. Bu yöntem ile nonmuscle myosin II genetik değiştirme fare modelleri geleneksel embriyonik kök hücre tabanlı Homolog rekombinasyon aracılı hedefleme teknolojisi kullanarak oluşturma tarafından örneklenir.

Fare embriyonik kök hücre kullanarak Southern blot ve polimeraz zincir reaksiyonu Homolog rekombinasyon olaylar tanımlaması

Yeni dizi özgüllüğü olan restriksiyon endokleazları kısmen dejenere olmuş bir diziyi tanıyan enzimlerden geliştirilebilir. Burada, NlaIV enziminin dizi özgüllüğünü değiştirmek için başarıyla kullandığımız ayrıntılı bir protokol salıyoruz. Protokolün temel bileşenleri transkripsiyon/çeviri reaksiyonunun in vitro bölümleme ve yeni dizi özellikleri ile varyantların seçimidir.

In Vitro Yönettiği Evrim bir Kısıtlama Enonuklelease Daha Sıkı Özgüllük ile

AviTag-spesifik Konum Kısıtlı Aydınlatma Takviyeli Biyotinilasyon (ALIBi), ribozom popülasyonlarının etiketlenmesi ve afinite-affinite-arındırıcı olarak arındırılması amacıyla geliştirilen, sonraki dizileme ve proteomik analiz için geliştirilen yeni bir optogenetik olarak aktive edilmiş yöntemdir.

Rekombinant Peptit Etiketine Özgü Konum Kısıtlı Aydınlatma Güçlendirilmiş Biyotinilasyona Dayalı Subhücresel Ribozom Alt Popülasyonlarının İzolasyonu

Burada yönettiği, moleküler evrim yoluyla Tre recombinase nesil raporu. Tre recombinase enfekte insan hücreleri provirus eksizyon ve eradikasyon, HIV-1 provirus LTR dizileri içinde önceden tanımlanmış bir hedef sırası tanır. Hala emekleme döneminde olsa da, yönlendirilmiş moleküler evrim moleküler cerrahi ve moleküler tıp araçları olarak hizmet verecek özel enzimlerin yaratılmasına izin verecek.

Tre Recombinase Moleküler Evrim

Cerrahi denemeden önce, yeni bir cerrah cerrahi teknikler ve kavramlar temel eğitim olmalıdır. Bu makale, kemirgenler bir vurgu ile temel cerrahi değerlendirmeler sunacaktır.

Yeni Cerrah Kemirgen Cerrahisi İlkeleri

Öğrenin Cre/lox sistemi ile koşullu mutagenez mekanizmalarını ve gen fonksiyonlarını değerlendirme yöntemlerini. Bu teknoloji, geleneksel knockout stratejilerine göre daha esnek genetik manipülasyon imkanı sunar.

Site Özel Recombinase (SSR) Teknoloji İlkeleri

Daha fazla video keşfet