Name: Meme morfogenezini yeniden düzenleyen üç boyutlu insan meme organoidleri üretmek için tanımlanmış hidrojel tabanlı bir yöntem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 52 s
Description: Öğrenin, tanımlanmış hidrojel matris kullanarak insan meme organoidleri üretmeyi ve meme morfogenezini yeniden düzenlemeyi. Bu yöntem, meme gelişimi ve erken karsinojeniz araştırmaları için ölçeklenebilir bir platform sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol>
	<li>Rauner G, Gupta PB, Kuperwasser C. From 2D to 3D and beyond: the evolution and impact of in vitro tumor models in cancer research. Nat Methods. 2025;22:1776-87.</li>
	<li>Traugh N, et al. Immune-epithelial interactions via TGF-&#946; orchestrates stem-cell niche formation and morphogenesis [Preprint]. Available from: https://doi.org/10.1101/2025.05.22.655596. 2025.</li>
	<li>Rauner G, et al. Single-cell organogenesis captures complex breast tissue formation in 3D. Development. 2025. Available from: https://doi.org/10.1242/dev.204813.</li>
	<li>Trepicchio C, et al. DDR1 regulates RUNX1-CBF&#946; to control breast stem cell differentiation [Preprint]. bioRxiv. 2024. Available from: https://doi.org/10.1101/2024.02.21.581255.</li>
	<li>Rauner G, et al. Breast tissue regeneration is driven by cell-matrix interactions coordinating multi-lineage stem cell differentiation through DDR1. Nat Commun. 2021;12:7116.</li>
	<li>Schedin P, Keely PJ. Mammary gland ECM remodeling, stiffness, and mechanosignaling in normal development and tumor progression. Cold Spring Harb Perspect Biol. 2011;3:a003228.</li>
	<li>Fata JE, Werb Z, Bissell MJ. Regulation of mammary gland branching morphogenesis by the extracellular matrix and its remodeling enzymes. Breast Cancer Res. 2004;6:1-11.</li>
	<li>Sokol ES, et al. Growth of human breast tissues from patient cells in 3D hydrogel scaffolds. Breast Cancer Res. 2016;18:19.</li>
	<li>Parrish M, et al. Environmental chemical mixtures reprogram mammary epithelial development to epigenetic states associated with breast cancer [Preprint]. Available from: https://doi.org/10.64898/2026.04.01.715968. 2026.</li>
	<li>Stingl J, Emerman JT, Eaves CJ. Enzymatic dissociation and culture of normal human mammary tissue to detect progenitor activity. Methods Mol Biol. 2005;290:249-63.</li>
	<li>Antoine EE, Vlachos PP, Rylander MN. Review of collagen I hydrogels for bioengineered tissue microenvironments: characterization of mechanics, structure, and transport. Tissue Eng Part B Rev. 2014;20:683-96.</li>
	<li>Ngo P, Ramalingam P, Phillips JA, Furuta GT. Collagen gel contraction assay. Methods Mol Biol. 2006;341:103-9.</li>
	<li>Lancaster MA, Knoblich JA. Organogenesis in a dish: modeling development and disease using organoid technologies. Science. 2014;345:1247125.</li>
	<li>Linnemann JR, Meixner LK, Miura H, Scheel CH. An organotypic 3D assay for primary human mammary epithelial cells that recapitulates branching morphogenesis. Methods Mol Biol. 2017;1612:125-37.</li>
	<li>Bonnans C, Chou J, Werb Z. Remodelling the extracellular matrix in development and disease. Nat Rev Mol Cell Biol. 2014;15:786-801.</li>
	<li>Hynes RO. The extracellular matrix: not just pretty fibrils. Science. 2009;326:1216-9.</li>
	<li>Hughes CS, Postovit LM, Lajoie GA. Matrigel: a complex protein mixture required for optimal growth of cell culture. Proteomics. 2010;10:1886-90.</li>
	<li>Sokol ES, et al. Perturbation-expression analysis identifies RUNX1 as a regulator of human mammary stem cell differentiation. PLoS Comput Biol. 2015;11:e1004161.</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>15 mL konik tüpler</td><td>VWR</td><td>89039-664</td><td>Dokunun işlenmesi ve santrifüjleme için steril tüpler</td></tr><tr><td>40 µm hücre süzgeci</td><td>VWR</td><td>732-2757</td><td>Tek hücreli süspansiyon hazırlığı için filtreleme cihazı</td></tr><tr><td>Düşük hacimlerde 40 µm hücre süzgeci</td><td>Bel-Art</td><td>136800040</td><td>Tek hücreli süspansiyon hazırlığı için filtreleme cihazı</td></tr><tr><td>Otomatik hücre sayacı</td><td>Bio-Rad</td><td>1450102</td><td>Hücreleri saymak ve canlılığı belirlemek için kullanılan cihaz</td></tr><tr><td>Boğa hipofiz özü</td><td>Thermo Scientific</td><td>13028014</td><td>Epitel hücre ortamı için takviye</td></tr><tr><td>Hücre sayım slaytları</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0011</td><td>Hücre sayımı için kullanılan çift hazneli slaytlar</td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Yok</td><td>Yok</td><td>Tezgah üstü santrifüj/ler en az 500 x g hız kabiliyetine ve 15 mL ve 1.5 mL tüplerin konaklanmasına sahip olmalıdır. </td></tr><tr><td>Kollajen I</td><td>Millipore Sigma</td><td>08-115</td><td>Hidrojel oluşumu için kullanılan hücre dışı matris proteini</td></tr><tr><td>Kollajenaz A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11088793001</td><td>Dokunun ayrışması için kullanılan enzim</td></tr><tr><td>Krioviyaller</td><td>Corning</td><td>976171</td><td>Numunelerin kriyojenik depolanması için steril şişeler</td></tr><tr><td>Kültür kapları (örn., hazneli slaytlar, çok kuyucuklu plakalar)</td><td>Corning</td><td>354104 354108 3603</td><td>Hidrojel birikimi ve organoid kültürü için platformlar.</td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit</td><td>Millipore Sigma</td><td>317275</td><td>Dondurma ortamında kullanılan kriyoprotektif</td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Roche</td><td>4942078001</td><td>İkincil doku ayrışması için kullanılan enzim</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Roche</td><td>10104159001</td><td>Hücre ayrışması sırasında kullanılan enzim.</td></tr><tr><td>Fetal boğa serumu</td><td>Gibco</td><td>10437</td><td>Yıkama ve nötralizasyon ortamında kullanılan serum takviyesi</td></tr><tr><td>Fibronektin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2006</td><td>Hücre dışı matris proteini bileşeni</td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Thermo Scientific</td><td>35050061</td><td>Epitel hücre ortamı için takviye</td></tr><tr><td>İnsan epidermal büyüme faktörü</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9644</td><td>Epitel hücre ortamı için takviye</td></tr><tr><td>Hidrokortizon</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H0888</td><td>Epitel hücre ortamı için takviye</td></tr><tr><td>Hiyalüronik asit</td><td>Millipore Sigma</td><td>385908</td><td>Hidrojel formülasyonu için hücre dışı matris bileşeni</td></tr><tr><td>Hiyaluronidaz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3506</td><td>Dokunun ayrışması için kullanılan enzim</td></tr><tr><td>İnkübatör</td><td>Thermo Scientific</td><td>3598</td><td>Dokunun kültürü inkübasyonu için kullanılan cihaz</td></tr><tr><td>İnsülin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9278</td><td>Epitel hücre ortamı için takviye</td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Gibco</td><td>23017-015</td><td>Hücre dışı matris proteini bileşeni</td></tr><tr><td>Meme epitelyal bazal ortamı</td><td>Thermo Scientific</td><td>M171500</td><td>Epitel hücreleri için büyüme ortamı</td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj tüpleri (1.5 mL)</td><td>Thermo Scientific</td><td>3451</td><td>Küçük hacimli reaksiyonlar için kullanılan tüpler</td></tr><tr><td>Orbital döndürücü</td><td>Thermo Scientific</td><td>400110</td><td>Enzimatik ayrışma sırasında dokunun dağılımı için kullanılan döndürücü</td></tr><tr><td>P1000 pipeti</td><td>Gilson</td><td>P1000</td><td>1.000 µL'ye kadar hacimlerin karıştırılması ve aktarılması için kullanılan cihaz</td></tr><tr><td>Penisilin-streptomisin</td><td>Thermo Scientific</td><td>15140122</td><td>Epitel hücre ortamı için antibiyotik takviyesi</td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin</td><td>Gibco</td><td>20012-027</td><td>Yıkama ve durulama için kullanılan tampon çözeltisi</td></tr><tr><td>Hassas denge</td><td>Mettler Toledo</td><td>ML303E</td><td>Dokunun tartılması için kullanılan denge</td></tr><tr><td>Serolojik pipet</td><td>Nunc</td><td>170356N</td><td>Yapışkan olmayan epitel hücrelerini hasat etmek için kullanılan pipet</td></tr><tr><td>Sodyum hidroksit (1 N)</td><td>Fisher Chemical</td><td>SS261</td><td>Kollajen nötralizasyonu için kullanılan reaktif</td></tr><tr><td>Sterili skülpel</td><td>Bard-Parker</td><td>372615</td><td>Mekanik doku doğramada kullanılan aletler</td></tr><tr><td>Tripan mavisi çözeltisi</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td>Hücre canlılık değerlendirmesi için kullanılan boya</td></tr><tr><td>Tripsin (%0,25)</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>Hücre ayrışması için kullanılan enzimatik reaktif</td></tr><tr><td>Su banyosu (37 °C)</td><td>VWR</td><td>10LA</td><td>Numunelerin kontrollü çözülmesi için kullanılan cihaz</td></tr></tbody></table>

meme morfogenezini yeniden düzenleyen üç boyutlu insan meme organoidleri üretmek için tanımlanmış hidrojel tabanlı bir yöntem

A Defined Hydrogel-Based Method For Generating Three-Dimensional Human Breast Organoids That Recapitulate Mammary Morphogenesis

Meme morfogenezini yeniden düzenleyen üç boyutlu insan meme organoidleri üretmek için tanımlanmış hidrojel tabanlı bir yöntem

The development of physiologically relevant human model systems that recapitulate tissue architecture and cell-state dynamics remains a major challenge in ...

Araştırmamız; insan meme gelişimi ve laktasyonu, doku organizasyonu, çevresel maruziyetler ve kanserdeki biyolojik değişikliklere yol açan genetik faktörlere odaklanmaktadır. Mevcut modeller, insan meme dokusu mimarisini, gelişimsel zamanlamayı ve mikroçevreyi hatalı bir şekilde yansıtmaktadır. Bu protokol, insan sisteminde 2D ve hayvan modelleri arasında bir köprü kurmaktadır.En az 24 saat boyunca kriyoprezervasyonla saklanmış, sindirilmiş insan meme dokusu temin edin. Hücre ölümünü minimize etmek için kriyoviyali kapağa kadar 37 °C'lik bir su banyosuna hemen daldırın ve bir dakika boyunca hızla çözdürün. Tamamen çözüldüğünde, kriyoviyal içeriğini 10 mL meme epitelyal büyüme ortamı (MEGM) içeren 15 mL'lik konik bir tüpe aktarın ve 250g'de beş dakika boyunca santrifüjleyin.Süpernatan atıldıktan sonra, pellet %0,25 trypsin içeren ve 37 °C'ye önceden ısıtılmış 500 µL dissosiyasyon enzim çözeltisi içinde yeniden süspande edin. Süspansiyonu 1,5 mL'lik bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın. Dissosiyasyonu kolaylaştırmak için P1000 pipet kullanarak örneği 20 kez tritüre edin.Tüpü 37 °C'de üç ila beş dakika inkübe edin. Bir P1000 pipeti kullanarak, örneği 20 ila 30 kez tritürasyon yaparak mek

a-defined-hydrogel-based-method-for-generating-three-dimensional

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

İnsan meme epitelinin hormon etkisini incelemek için uygun bir 3D kültür modelini tanımlıyoruz.

İnsan Meme Bezi Epitelinin Bir Hormon duyarlı 3D Kültür Modeli

Bu yazıda, üç boyutlu (3D) tek tip diziler ekstraselüler matriks çevrili tanımlanan geometri epitel doku mühendisi yumuşak litografi tabanlı teknik anlatılmaktadır. Bu yöntem, hücre tipleri ve deneysel bağlamlarda çeşitli için uygun olan ve aynı çoğaltır yüksek verimli tarama sağlar.

Ekstraselüler Matrix içinde Gömülü Mühendislik Üç boyutlu Epitel Dokular

Fare meme bezlerinden geliştirilen organoidler ışınlanmış ve epitelyal özellikleri ve immün hücrelerle etkileşimleri değerlendirmek için karakterize edilmiştir. Işınlanmış organoids daha iyi radyal normal dokuda tümör hücre işe neden olabilir hücre hücre etkileşimleri değerlendirmek için kullanılabilir.

Mammary bezlerinden ışınlanmış Organoidlerin büyüme ve karakterizasyonu

Epitel ve stromal hücrelerden oluşan ve yerli endometrial dokunun özelliklerini koruyan insan primer endometriyal organoidler oluşturmak için bir protokol sunulmuştur. Bu protokol, rahim dokusu alımından endometrial organoidlerin histolojik işleme yöntemlerini açıklamaktadır.

Multicellular Human Primer Endometrial Organoidlerin Üretimi

Meme bezi, dış miyoepitelyal ve iç luminal epitel hücrelerinden oluşan çift katmanlı bir yapıdır. Sunulan diferansiyel trippsinizasyon kullanarak organoidler hazırlamak için bir protokoldür. Bu verimli yöntem araştırmacılar ayrı ayrı meme bezi formu ve fonksiyonu rollerini ile ilgili soruları keşfetmek için bu iki hücre türleri işlemek için izin verir.

Diferansiyel Tripsinizasyon a göre Mozaik Meme Organoidlerinin Üretimi

Bu protokolün amacı, ilaç tarama çalışmaları için kullanılabilecek 3D meme endotelyal ortak kültür modellerini hızla oluşturmak için önceden oluşturulmuş endotel ağlarına çok hücreli sferoidler olarak meme epitel hücrelerini doğrudan biyobaskılamaktır.

3D Çok Hücreli Meme Sferoidlerinin Endotel Ağlarına Doğrudan Biyobaskı

Bu protokolün amacı, kardiyak doku mühendisliği, ilaç taraması ve hastalık modelleme uygulamaları için biyomimetik, kollajen bazlı bir hidrojel içinde kardiyak fibroblastlar (KF' ler) ile birlikte kültürlenmiş kök hücre türevi kardiyomiyositlerden oluşan, yüksek hizalanmış insan kardiyak dokusunun üç boyutlu (3D) mikroakışkan modelinin gelişimini açıklamak ve göstermektir.

Mikroakışkan Bir Platformda 3D Organize İnsan Kardiyak Dokusu Geliştirme

Bu protokol, diferansiyel santrifüjleme yoluyla primer normal ve tümör meme dokusundan epitel organoidleri üretmek için bir yaklaşımı tartışmaktadır. Ayrıca, gömülü organoidlerin immünofloresan görüntülenmesinin yanı sıra üç boyutlu kültürleme için talimatlar da dahil edilmiştir.

Normal ve tümörlü meme dokusundan fare ve insan epitel organoidlerinin passiz olmadan üretilmesi ve görüntülenmesi

Burada, timik epitel hücresi (TEC) olgunlaşmasını ve uzun süreli bakımı ve ayrıca in vitro timopoezi desteklemeyi amaçlayan 3D fibrin hidrojellerde büyütülen insan iPSC'den türetilmiş timus organoidlerinin oluşumu için bir protokol açıklıyoruz.

Üç Boyutlu Fibrin Hidrojellerinde İnsan Timus Organoidlerinin Oluşumu

Kanser metastazını incelemek için heteroselüler karışmayı yakalayan 3D kanser modellerine kritik bir ihtiyaç vardır. Çalışmamız, invazyon ve hücresel mekansal dağılımları incelemek için kullanılabilecek iskele ve iskelesiz bir ortamda heteromultisellüler stromal-epitel oluşumunu sunmaktadır.

İstilayı Yönlendirmek İçin Epitelyal Kanser Hücrelerinin İskelesiz 3D Kültürlerinde Heteromultihücreli Stromal Hücreler

Öğrenin, tanımlanmış hidrojel matris kullanarak insan meme organoidleri üretmeyi ve meme morfogenezini yeniden düzenlemeyi. Bu yöntem, meme gelişimi ve erken karsinojeniz araştırmaları için ölçeklenebilir bir platform sunar.

Meme morfogenezini yeniden düzenleyen üç boyutlu insan meme organoidleri üretmek için tanımlanmış hidrojel tabanlı bir yöntem

Daha fazla video keşfet