Name: Fare Epidermal Sinir Crest Kök Hücre (EPI-NCSC) Kültürler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-09T01:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: Öğrenin fare bıyık foliküllerinden epidermal sinir crest kök hücre (EPI-NCSC) izolasyonu için mikro-disseksiyon ve doku kültürü yöntemlerini. Bu teknik sinir gelişimi ve kök hücre biyolojisi araştırmalarında kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Güneydoğu Wisconsin Biyomedikal Teknoloji Alliance Milwauke, WI, ABD; Bryon Riesch Felç Vakfı&#39;nın, Milwaukee, WI, ABD; Eagles Kardeş Sipariş, Midwest Bölüm USPHS hibe NS38500, Ulusal Nörolojik Hastalıklar Enstitüsü ve İnme, NIH, ABD tarafından desteklenen: ABD Ulusal Spinal Kord Yaralanma Birliği, Milwaukee Bölüm, ABD, Kuzey Doğu İngiltere Kök Hücre Enstitüsü, Newcastle Üniversitesi, Birleşik Krallık.

Yetişkin Fare Whisker foliküllerin Bulge diseksiyonu <ol><li> Biz 10 hafta ile 6 ay eski fareler kullanın. Genç farelerin, genellikle daha fazla hücre verim. Fare ve betadin (iyot çözeltisi) ve yaklaşık 3 dakika boyunca hidrojen peroksit (eczane) 1:1 karışımın içine daldırın tüm hayvan Euthanize. </li><li> Squirt tüm fare,% 75 etanol ile özellikle yüz bölgesi, ve laminer akış kaput diseksiyon mikroskobu fare taşımak. </li><li> Saç soğanı içine kesme, HBSS havuz ve dikkatle kaçınarak, bıyık pedleri parçalara ayır. </li><li> Oda sıcaklığında HBSS bıyık kıl follikülleri ve havuz teşrih. Bir forseps ile saç folikülü cilt tutan ve daha sonra düz makas ile folikül etrafında kesme bunu. Saç soğanı yaralamaktan kaçınmak için derin kesin. </li><li> Bıyık yastık bıyık folikül kaldırın ve taze HBSS ile yeni bir levha koymak. </li><li> Bıyık folikülleri temiz olana kadar tampon squirts gevşek adipous ve dermal doku yıkayın. Gerekirse, bıyık folikül sinir kesme ve kazıma ve HBSS tekrarlanan basması yapışık doku kaldırmak. </li><li> Deri parçası üzerine folikül yanında tutmak için microforceps kullanarak, bilenmiş tungsten iğneler kullanarak Sylgard kaplı cam Petri kabı üzerine temiz saç follilce Pin. </li><li> Kes bıyık MicroBlade longitudically folikül. Bu çıkıntı zarar gibi, çok derin bir kesme kaçının. Gitmiş kadar HBSS tekrarlanan squirts kan çıkarın. Kan Görünüm kesim yeterince derin olduğu için iyi bir göstergedir. Longitudial kesim yeterince uzun değilse, bükülmüş microscissors uzatılabilir. </li><li> Kavernöz sinüs seviyesinden enine kesilmiş ve daha sonra ikinci bir halka sinüs içinde düzeyinde enine kesilmiş, cilde yakın. </li><li> Artık kapsül içindeki çıkıntı göreceksiniz. </li><li> Forseps ile kollajen kapsül sona tut ve şişkinliği bükük bir tungsten iğne ile dışarı rulo. Artık boş kapsül ve izole bir çıkıntı göreceksiniz. </li><li> Havuzu, oda sıcaklığında HBSS bir ayrı bir kültür plakasına şişkinlikler izole edilmiştir. Başka hiçbir doku toplanmış şişkinlikler kirlenmesine neden olduğundan emin olun. </li></ol> Çıkıntı eksplantlar Kültür <ol><li> 50 ul kolajen ve birbirlerine önümüzdeki 10 ul steril% 6 NaCl koyarak Coat kollajen ile 35 mm kültür plakaları. Bir çift bükülmüş Pasteyr pipetlemeyin ile iyice karıştırınız ve kültür plaka kenarına doğru itin. Temiz bir desikatöre gece inkübe, ancak kuru izin vermeyin. Kullanmadan önce, tabak tuzlu su ile durulayın. </li><li> Kültür ortamı ile yaklaşık 3 saat önceden inkübe kollajen kaplı ve durulanır kültür plakaları. Kültür orta,% 85,% 10 fetal sığır serumu ve% 5 gün 11 civciv embriyo ekstresi Alpha-modifiye MEM oluşur. </li><li> Re-inkübasyondan sonra, tabak kültür ortamı kaldırmak ve mümkün olduğunca az orta birkaç şişkinlikler ekleyin. Aşırı kültür ortamı çıkarın. </li><li> Hücre kuvöz, 1 saat% 10 oksijen ve% 5 CO 2 ile nemlendirilmiş bir atmosferde inkübe edin, ama uzun. </li><li> 1 saat sonra 1,5 ml kültür ortamı yavaşça ekleyin. Bulge eksplantlar kollajen altyapısını uymalıdır. % 50 günlük kültür ortamı değiştirin. </li><li> Içinde 3 - 4 gün, yüksek göç hücrelerinin şişkinliği eksplantlar göç edecektir. Stellat morfoloji, motilite ve hücre-hücre kişilerin hakim olmaması dikkat edin. Önümüzdeki birkaç gün içinde, daha fazla hücre göç ve hücreler hızla çoğalacak göç etti. </li><li> EPI-NCSC göç başlangıcı, ucu sivriltilmiş bir tungsten iğne ile şişkinliği 2 - 3 gün sonra çıkarın. Şişkinlikler daha uzun süre kalır, onlar düzleştirmek ve EPI-NCSC saf kültürleri elde etmek imkansız hale eğilimindedir. </li><li> Önemli: Nadir hücreler bazen birkaç gün sonra EPI-NCSC daha belirgin hale gelir ve basık morfolojisi, EPI-NCSC daha az hareketli, ancak varsayılan epidermal kök hücre / atalarıdır. EPI-NCSC ve varsayılan epidermal kök hücre / atalarıdır içeren bu hücrelerin oluşan Kültürler, ya da karma kültürlerin atılır gerekir. </li><li> İpucu: varsayılan parakrin / otokrin büyüme faktörü sinyalizasyon nedeniyle, yüksek hücre yoğunluğu hızla ayırt etmek eğilimi olarak hücreler, primer eksplant orta çok uzun süre tutmak. </li></ol>

<ol><li>Sieber-Blum, M., Grim, M., YF, H. u, Szeder, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pluripotent+neural+crest+stem+cells+in+the+adult+hair+follicle%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Pluripotent neural crest stem cells in the adult hair follicle.</a> Dev. Dyn. 231, 258-269 (2004).</li>
<li>Sieber-Blum, M., Grim, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adult+hair+follicle+-+cradle+for+pluripotent+neural+crest+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Research+%28Part+C%29%22%5BJournal%5D)">The adult hair follicle - cradle for pluripotent neural crest stem cells.</a> Birth Defects Research (Part C). Tuan, R., Grim, M. 72, 162-172 (2004).</li>
<li>Sieber-Blum, M., Schnell, L., Grim, M., Schneider, R., Schwab, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+epidermal+neural+crest+stem+cell+%28EPI-NCSC%29+grafts+in+the+lesioned+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22Pub%22%5BJournal%5D)">Characterization of epidermal neural crest stem cell (EPI-NCSC) grafts in the lesioned spinal cord.</a> Pub. 32, 67-81 (2006).</li>
<li>Hu, Y. F., Zhang, Z. -J., Sieber-Blum, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+epidermal+neural+crest+stem+cell+%28EPI-NCSC%29+molecular+signature%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">An epidermal neural crest stem cell (EPI-NCSC) molecular signature.</a> Stem Cells. 24, Epub ahead of print 2692-2702 (2006).</li>
</ol>

Onların göç yeteneği sayesinde, EPI-NCSC, kök hücreler, in vitro açılabilir son derece saf bir nüfus olarak izole edilebilir. Yetişkin bir yerde embriyonik kalıntıları olarak, EPI-NCSC gelecek hücre replasman tedavileri, biyomedikal mühendislik ve / veya rejeneratif tıp için çekici potansiyel adaylardır. Arzu özellikleri göstermektedir Biz, spinal kord yaralanması bir fare modelinde EPI-NCSC test ettik. LongSAGE (www.ncbi.nlm.nih.gov / coğrafi, seri numarası GSE4680) gen ekspresyon profili sayesinde gösterdi ki, beklendiği gibi, embriyonik ...

fare epidermal sinir crest kök hücre (epi-ncsc) kültürler

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell (EPI-NCSC) Cultures

EPI-NCSC yetişkin bir konuma, saç köklerinin şişkinliği embriyonik nöral krest kalıntıları vardır. Onlar multipotent kök hücreleri nöronların, sinir destekleyen hücreler, düz kas hücreleri, kemik / kıkırdak hücreleri ve melanositler de dahil olmak üzere geniş bir yelpazede, farklılaşmış hücre türleri oluşturmak için fizyolojik özelliği vardır. EPI-NCSC saçlı deride kolaylıkla erişilebilir ve kök hücreler, son derece saf bir nüfus olarak izole edilebilir. Bu video bıyık kıl follikülleri fare EPI-NCSC kültürlerin hazırlanması için ayrıntılı bir protokol sağlar. Yetişkin bir farenin bıyık ped kaldırılır ve bıyık kıl follikülleri diseke. Folikülleri sonra şişkinliği bölgenin altında ve üstünde boydan boya ve daha sonra enine kesilir. Çıkıntı kollajen kapsül kaldırılır ve bir kültür plaka yerleştirilir. Epi-NCSC şişkinliği eksplantlar 3 ila 4 gün sonra göç etmeye başlar.

Burada fare epidermal nöral krest kök hücreleri (EPI-NCSC) izole etmek için yöntem gösteriyor. Tekniği içerir mikro diseksiyon, bıyık kıl follikülleri, şişlik izole ve doku kültürü içine placeing. 4 gün - 3 gün içinde EPI-NCSC alt tabaka üzerine çıkıntı eksplantlar göç etmeye başlar.

Fare Epidermal Sinir Crest Kök Hücre (EPI-NCSC) Kültürler

EPI-NCSC'ler, yetişkin konumunda, kıl foliküllerinin şişkinliğinde bulunan embriyonik nörallelemiş hücrelerin kalıntılarıdır. Bunlar, ... özelliklerine sahip multipotent kök hücrelerdir.

Merhaba, ben Newcastle Üniversitesi'nden İnsan Genetiği Enstitüsü ve Kuzeydoğu İngiltere Kök Hücre Enstitüsü'nden Maya Sibu Bloom. Ve yanımda Medical College of Wisconsin'dan bir arkadaşım var. Bugün size farelerin viskeral foliküllerinden Al Eksplan hazırlama prosedürümüzü göstereceğiz.B Explanlar, epidermal nöral krist kök hücre kültürleri hazırlamak için kullanılan başlangıç dokularıdır. Bu prosedür, bıyık pedinin diseksiyonunu ve kıl foliküllerinin mikro diseksiyonunu, ardından BUL'ların izole edilerek bir kültür plağına yerleştirilmesini içerir. Hadi başlayalım.Bu prosedür, yetişkin fare bıyık foliküllerinden bulge kısmının diseksiyonu ile başlar. Genellikle iki ila altı aylık fareler kullanıyoruz; ancak daha genç fareler daha fazla kök hücre sağlama eğilimindedir. Hayvanlar sterilize edilir ve dezenfeksiyon için yaklaşık üç dakika boyunca Betadine ve hidrojen peroksit bir bire bir karışımına tamamen daldırılır; ardından tüm fareye, özellikle yüz bölgesine %75 etanol püskürtülür ve fare diseksiyon mikroskobuna taşınır.Laminar akışlı kabinde, kıl foliküllerine zarar vermemeye dikkat ederek WHI pedlerini dikkatlice disseke edin ve oda sıcaklığındaki dengeli tuz çözeltisine yerleştirin. WHI foliküllerini disseke etmek için, folikülün yanındaki deriyi pensle tutun ve ardından düz makasla folikülün etrafını kesin. Derinlemesine kesin.Kıl köklerine zarar vermemek için, bıyık folikülünü bıyık pedinden kaldırın ve yeni bir plakaya yerleştirin. Taze HBSS kullanarak folikülleri aynı plaka içinde çekin. Sivritilmiş pens ve iğneler yardımıyla bir kıl folikülünü, HBSS içeren ipek koruyucu kaplı bir cam Petri kabına sabitleyin.Vibrissa folikülü temizlenene kadar, gevşek adipoz doku ve dermal dokuyu tampon çözelti püskürterek yıkayın. Gerekirse, vibrissa folikülüne giden siniri kesin ve yapışık dokuyu sıyırarak ve tekrarlayan HBSS yıkamalarıyla uzaklaştırın. Visco folikülünü bir mikro bıçakla boylamasına kesin.Şişkinliğe zarar verebileceği için çok derin kesmekten kaçının. Kan tamamen temizlenene kadar tekrarlanan HBSS püskürtmeleriyle kanı uzaklaştırın. Kanın görülmesi, kesinin yeterince derin olduğunun iyi bir göstergesidir.Ardından, coness sinüs seviyesinin üzerinden transvers bir kesi yapın ve sonrasında izole edilen folikül parçası içinde, ring sinüs seviyesinde cilde çok yakın bir noktadan ikinci bir transvers kesi gerçekleştirin. Artık kapsülün içindeki şişkinliği göreceksiniz. Bakınız, işte orada.Kapsülün bir ucunu pensle tutun ve şişkinliği çıkarın. Artık boş kapsülü ve izole edilmiş şişkinlik havuzunu göreceksiniz. İzole edilen şişkinlikleri, oda sıcaklığındaki HBSS içeren ayrı bir kültür plağına yerleştirin.Havuzlanmış şişkinliklerin başka hiçbir doku tarafından kontamine edilmediğinden emin olun. Bu noktada, şişkinlik bitkileri, kültür tüpleri içine alınmadan önce kültüre edilebilir. 35 milimetrelik kültür plakaları, 50 µL kolajen ve 10 µL steril damlalar yerleştirilerek kolajen ile kaplanır.%6 saline yan yana gelecek şekilde yerleştirilir. Çift bükümlü bir poster pipetle iyice karıştırılıp kültür plağının kenarına doğru itilir; temiz bir ortamda gece boyunca inkübe edilir ancak kurumasına izin verilmez. Bu amaçla, altında bir kap su bulunan bir desikatör kullanırız.Ertesi gün, kültür günüdür. Plakaları salin ile durulayın; kolajen kaplı ve durulanmış kültür plakalarını, inkübatörde yaklaşık üç saat boyunca ön inkübasyona bırakın. Kültür medyumu %85 alpha modifiye MEM, %10 fetal bovin serum ve %5 11. gün civciv embriyo ekstraktından oluşmaktadır.Ön inkübasyondan sonra, kültür ortamını plakalardan uzaklaştırın ve mümkün olduğunca az ortam içeren birkaç BUL ekleyin. Fazla kültür ortamını uzaklaştırın. %10 oksijen ve %5 CO2 içeren nemlendirilmiş bir atmosferde, hücre inkübatöründe bir saat boyunca inkübe edin.Bir saat sonra, yavaşça 1,5 mililitre kültür ortamı ekleyin. CHE bitkileri kolajen substrata yapışmış olmalıdır; kültürel ortamın %50'sini her gün yenileyin. Tamam, şimdi başlayalım.Şimdi kültürlere bir göz atalım. Üç ila dört gün içinde, yüksek göç kapasitesine sahip hücreler hücre kürelerinden dışarı çıkacaktır. Hücrelerin yıldız benzeri morfolojilerini ve hücreler arası temasların büyük ölçüde yokluğunu not edin.Önümüzdeki birkaç gün içinde daha fazla hücre göç edecek ve göç eden hücreler hızla çoğalacaktır; yassı morfolojiye sahip olan ve bazen epidermal nöral kristen birkaç gün sonra belirginleşen önemli nadir hücreler görülecektir. Bu kültürlerde bazen kök hücrelere rastlanabilir. Bu hücreler epidermal nöral krist kök hücreleri değil, aksine daha az hareketli olan, muhtemel epidermal kök hücreler veya progenitörlerdir; bu hücreleri içeren kültürler imha edilmelidir.Epidermal nöro-kök hücreler içeren bulge eksplant kültürlerinin nasıl hazırlandığını size göstermiş olduk. Nöro-kök hücreler oldukça göçer olduklarından, üç ila dört gün içinde bulge eksplantını terk edeceklerdir. Eksplantasyon sonrasında, bulge kısmı çıkarılır ve kültür plakasında saf nöro-kök hücre popülasyonu kalır.Bu prosedür uygulanırken, kontaminasyonu önlemek için farenin dikkatlice dezenfekte edilmesi gerektiğini unutmamak önemlidir. Ayrıca, foliküllere zarar vermemek için yastıkçık riskli bölgesinde derin kesiler yapılmalıdır. Kültürlerle ilgili olarak, göç eden distilat, nöral krista hücreleri ve göç etmeyen kaldırım taşı şeklindeki keratinositler arasındaki farkı ayırt etmek önemlidir.İşte bu kadar. İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.

mouse-epidermal-neural-crest-stem-cell-epi-ncsc-cultures

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video embriyonik farelerin gelişmekte olan korteks neuroprecursors izolasyonu için kullanılan yöntem açıklanır. , Embriyoların rahim kaldırarak, kortikal doku diseksiyon, ve sindirerek izole serebral korteks prosedür gösterilmiştir.

Fare Nöral Kök Hücre Öncüleri Kültür

In vitro nöral krest kök hücreler (NCSC) yetiştirmek için özel bir orta (NCSCM) gereklidir. NCSCM önemli bir parçası civciv embriyo ekstraktı (CEE). Biz burada, izolasyon, maserasyon, santrifüj ve filtrasyon işlemleri gibi ayrıntıları da dahil olmak üzere saf ve kaliteli CEE maksimize miktarda üretmek için doğru teknikleri anlatıyoruz.

Civciv Embriyo Özü murin Sinir Crest Kök Hücre Yetiştiriciliği Üretimi

Insan derisi canlı yetişkin epitelyal kök hücreleri izole bir hızlı, sağlam bir şekilde açıklanmıştır. Bu yöntem cilt kollajen matriks enzimatik sindirim, saç folikülleri ve hücre kültürü için, tek bir hücre süspansiyonları ya da doku parçalarının izolasyonu koparma kullanır.

İnsan Cilt Yetişkin Epitel Kök Hücre İzolasyonu ve Kültür

Bu makale, insan saç köklerinin gelen nöral krest kök hücrelerin izolasyonu ve kültür için sağlam bir protokol sunar.

İnsan Saç köklerinin arasından Sinir Crest Kök Hücre İzolasyonu ve Kültür

Nöral tüpten embriyonik nöral krest izolasyonu kullanımını...

Embriyonik Mürin Nöral Tüp çıkan sinirsel Crest Hücre İzolasyonu ve Kültür

Insan pluripotent kök hücreleri (hPSC) türetilmiş nöral krest (NC) hücreler, insan gelişimi ve hastalık modelleme ve hücre replasman tedavileri için büyük bir potansiyele sahiptir. Burada, şu anda yaygın olarak kullanılan bir besleyici ücretsiz...

İnsan Pluripotent dan Sinir Crest Progenitör Hücreler besleyici ücretsiz Derivasyon Kök Hücre

Epitelden mezenkimal geçişe (EMT) kanserlerin invaziv hale gelmesine izin verir. EMT'yi araştırmak için, serum ve enzimlerden yoksun bir nöral kök hücre (NSC) tabanlı in vitro model tanımlanmıştır. Bu standartlaştırılmış sistem, hücre göçünün, gen ve protein ekspresyonunun kantitatif ve kalitatif değerlendirmesine izin verir. Model, ilaç keşfi için uygundur.

Ilaç keşfi için uygundur EMT araştırma için enzim ve serum içermeyen nöral kök hücre kültürü modeli

Bu protokolün amacı, moleküler biyoloji, biyokimya, floresan aktif hücre ayrıştırma ve primer in vitro kullanımlar (örneğin, klojenojenik) gibi çeşitli downstream uygulamaları için yetişkin farelerin dorsal deriden epidermal keratinositleri izole etmektir. keratinositler).

Fare Epidermal Keratinositlerin İzolasyon ve In Vitro Klojenik Kültür

Burada, E13 fare embriyo ganglionic itibar bir roman mikrocerrahi teknik nöral kök hücrelerin izolasyonu için tanıtmak.

Yalıtım ve kültür embriyonik fare nöral kök hücrelerin

Bu protokol, öncelikle hücre göçü çalışmaları için fare modellerinden kranial nöral krest hücrelerinin diseksiyon ve kültürünü açıklar. Kullanılan canlı görüntüleme tekniklerini ve hız ve hücre şekli değişikliklerinin analizini anlatıyoruz.

Nöral Krest Hücre Delaminasyonu ve Göçü Çalışması İçin Fareden Birincil Kranial Nöral Krest Hücrelerinin Diseksiyonu, Kültürü ve Analizi

Fare embriyonik kök hücrelerinden kraniyal nöral krest hücreleri üretmek için tekrarlanabilir boyutta nöroküreler üreten üç boyutlu (3D) bir in vitro farklılaşma protokolü sunuyoruz. Bu metodolojinin önceki protokollere kıyasla değişkenliği azalttığını ve kraniyal nöral krest hücre gelişimini incelemek için çoğullanmış test için nasıl kullanılabileceğini gösteriyoruz.

Kraniyal Nöral Krest Hücreleri Çoğullanmış Test için Üç Boyutlu İn Vitro Farklılaşma Protokolü

Öğrenin fare bıyık foliküllerinden epidermal sinir crest kök hücre (EPI-NCSC) izolasyonu için mikro-disseksiyon ve doku kültürü yöntemlerini. Bu teknik sinir gelişimi ve kök hücre biyolojisi araştırmalarında kullanılır.

Fare Epidermal Sinir Crest Kök Hücre (EPI-NCSC) Kültürler

Daha fazla video keşfet