Name: İnsan Embriyonik Kök Hücreleri Manyetik Rezonans Görüntüleme için in vitro Etiketleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-03T14:45:00.000+00:00
Duration: 11 min 41 s
Description: Öğrenin, insan embriyonik kök hücrelerini mangan klorür ile etiketleyerek manyetik rezonans görüntüleme için canlı hücre takibini nasıl gerçekleştireceğinizi. Bu yöntem, demir oksit yerine pozitif sinyal sağlayarak hücre canlılığının değerlendirilmesini kolaylaştırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

İnsan Embriyonik Kök Hücre Manganez Etiketleme <ol><li> Besleyici 5 dakika için koşullar kültüre sahip insan embriyonik kaynaklanıyor Trypsinize. Kültür ortamı ekleyerek tripsin nötralize. </li><li> 20 800 rpm&#39;de 5 dakika santrifüj hücreleri aşağı Spin ° C. Yeniden askıya hücre pelletini sonra, Tripan mavisi hücre sayısını. Elde edilen hücre sayımı dayanarak, dört alikotları konik tüpler içine 3 milyon hücre içine hücreleri bölün. Santrifüj tekrar Pelet hücreleri. </li><li> Sadece manganez etiketleme başlamadan önce,% 0.9 sodyum klorür solüsyonu 0.1mm manganez klorür çözeltisi yapmak için taze manganez klorür çözülür. </li><li> Kalsiyum kanal aktivitesini izlemek amacıyla dört örnekleri hazırlanmıştır. Ilk örnek, sadece% 0.9 sodyum klorür içinde inkübe hücreler içerir bizim kontrolümüz. Ikinci örnek, 0.1 mM MnCl 2 inkübe hücreler içerir . Örnek 3 ve 4, Ca 2 + kanal agonist ile 5 mcM 0.1 mM MnCl 2 inkübe hücre (ler )-(-)- Bay K8644, ya da Ca 2 +-kanal antagonisti olan verapamil 250 mcM içerir . 37 dört örnekleri inkübe ° 30 dakika süreyle% 5 CO2 ile Celcius. </li><li> 30 dakika sonra, 20 ° C de 5 dakika boyunca 800 rpm&#39;de hücreler aşağı doğru döndürün. Sonra süpernatant aspirat ve etiketli hücreler PBS ile iki kez yıkayın. 200 mcL PBS ve transfer ile yıkadıktan sonra, PCR tüpleri içine her pelet yeniden askıya. Bu pelet genellikle beyazdır. </li></ol> İnsan Embriyonik Kök Hücre Demir Etiketleme <ol><li> Klinik dereceli protamin sülfat 1 mg / mL stok çözelti elde etmek için saf su ile karıştırın. </li><li> Insan embriyonik kök hücre kültür ortamı içeren bir tüp, 12 mcg / ml protamin sülfat eklenmesi ile 100 mcg / mL ferumoxides ekleyin. Beş dakika boyunca şiddetle çözüm karıştırın. </li><li> 50 mcg / ferumoxides ml ve 6 mg / ml protamin sülfat etiket hücrelere son bir konsantrasyon elde etmek için hücre kültürü medya eşit miktarda karışık çözüm ekleyin. 12 saat boyunca bu çözüm hücreleri inkübe edin. </li><li> 10U/ml heparin içeren ekstrasellüler ferumoxides protamin sülfat kompleksi çözmek için son yıkama, hücreler PBS ile iki kez yıkayın. Yıkadıktan sonra, hücreler tek bir hücre süspansiyonu elde etmek trypsinize. </li><li> Gerekli sayıda numune içine hücreleri ve kısım güvenin. 200 mcL PBS ve transfer ile yıkadıktan sonra, PCR tüpleri içine her pelet yeniden askıya. Bu pelet turuncu rengi koyu kahverengi olmalıdır. </li></ol> Hücresel Manyetik Rezonans Görüntüleme Sahne <ol><li> Hücre pelletleri içeren tüpleri stabilize etmek ve aynı zamanda çevredeki havadan tarama sırasında bozulmaları önlemek için bir hayalet olun. Bunu yapmak için, agar% 0.8 ve% 1 bakır sülfat distile su ile karıştırın ve 5-7 dakika mikrodalga kaynatın getirmek. En az 1 saat önce bir jel ulaşmak için tarama için bu karışımı soğutun. </li><li> Tarama için hayalet etiketli hücre pelletleri içeren tüpler yerleştirilir. In vitro hücre MRG klinik diz bobin kullanarak Signa HDX 3T MR (GE Medical Systems) yapılır. </li><li> Her bir spin eko sekansı kullanarak üç örnek için manganez etiketli hücreleri Tarama: TR Tekrar süresi = 800 milisaniye. TE; Echo zaman = en az, FOV, görüş alanı = 12 x 12 cm; matrix = 256x256, 1 NEX. </li><li> Gradient-eko sekansı ile demir etiketli hücreleri tarayın. Bu görüntüleme için aşağıdaki parametreleri kullanın: TR = 100 msn, TE = 10 msn, FA, flip angle = 30 °; FOV = 12 x 12 cm; matriks = 256 x 256, 1 NEX. </li></ol> MR Sonuçlar Analizi <ol><li> Manganez etiketli hücreleri, 4 farklı örneklerinden MRI tarama görüntüleri analiz: <ul><li> Örnek # 1, yalnız% 0.9 sodyum klorür içinde inkübe hücreler içerir bizim kontrolümüz. </li><li> Örnek # 2, 0.1 mM MnCl 2 inkübe hücreleri içerir . </li><li> Örnek # 3 5 mcM, Ca 2 +-kanal agonist (s )-(-)- Bay K8644 ile 0.1 mM MnCl 2 inkübe hücreler içerir. </li><li> Örnek # 4 Ca 2 +-kanal antagonisti olan verapamil 250 mcM ile 0.1 mM MnCl 2 inkübe hücreler içerir. </li></ul></li><li> Tahmin ettiğimiz gibi, manganez etiketli hücreleri sinyal intensitesi farklılıklar görülebilir. Mangan tamamen etiketli hücreleri ile karşılaştırıldığında, kalsiyum kanal agonist varlığı açıkça sinyal yoğunluğu artar ve kalsiyum kanal antagonisti varlığı azalır. Manganez etiketli hücreler için sinyal yoğunluğu artmıştır alan Image J (NIH, Bethesda, MD, ABD) kullanılarak ölçülür. Aynı yazılım alanında demir etiketli hücreleri koyu off-rezonans sinyali analiz etmek için kullanılır. Demir-işaretli hücrelerin karanlık sinyal boyutu, hücre veya hücrelerin içerdiği demir parçacıklarının sayısı sayısına bağlıdır. Bu durumda, Bir milyon hücre karanlık sinyal üç milyon hücre sinyal göre daha küçük bir alanı gösterir. </li></ol>

<ol><li>Bruvold, M., Nordhoy, W., Anthonsen, H. W., Brurok, H., Jynge, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manganese-calcium+interactions+with+contrast+media+for+cardiac+magnetic+resonance+imaging%3A+a+study+of+manganese+chloride+supplemented+with+calcium+gluconate+in+isolated+Guinea+pig+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Radiol%22%5BJournal%5D)">Manganese-calcium interactions with contrast media for cardiac magnetic resonance imaging: a study of manganese chloride supplemented with calcium gluconate in isolated Guinea pig hearts.</a> Invest Radiol. 40, 117-125 (2005).</li>
<li>Aoki, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+labeling+for+magnetic+resonance+imaging+with+the+T1+agent+manganese+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22NMR+Biomed%22%5BJournal%5D)">Cell labeling for magnetic resonance imaging with the T1 agent manganese chloride.</a> NMR Biomed. 19, 50-59 (2006).</li>
<li>Arbab, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+magnetic+cell+labeling+with+protamine+sulfate+complexed+to+ferumoxides+for+cellular+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Efficient magnetic cell labeling with protamine sulfate complexed to ferumoxides for cellular MRI.</a> Blood. 104, 1217-1223 (2004).</li>
<li>Arbab, A. S., Frank, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+MRI+and+its+role+in+stem+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Cellular MRI and its role in stem cell therapy.</a> Regen Med. 3, 199-215 (2008).</li>
</ol>

Bu sonuçlar, manganez de hücre canlılığı gösterebilir voltaj kapılı kalsiyum kanal ve manganez MRG kontrast madde olarak kullanılan, yoluyla girin. Göstermektedir. Bu nedenle, mangan güdümlü MRG, insan embriyonik kök hücre transplantasyonu sonrası miyokard hücre canlılığı izlemek için yararlı olabilir öneririz.

<table><tbody><tr><td>Manganez klorür tetrahidrat</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8054</td><td></td></tr><tr><td>(S)-(-)-Bay K8644 </td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B133</td><td></td></tr><tr><td>(+)-Verapamil hidroklorür, minimum %99.0 titrasyon </td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V4629</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Klorür %0.85-0.90 A/H</td><td>Reaktif</td><td>VWR international</td><td>VW 3257-1</td><td></td></tr><tr><td>Feridex I.V. </td><td>Reaktif</td><td>Berlex Laboratories</td><td>NDC 59338-7035-5</td><td>ferumoksit enjekte edilebilir solüsyon 11.2mg demir/mL</td></tr><tr><td>Protamin sülfat</td><td>Reaktif</td><td>American Pharmaceutical Partners</td><td>NDC 63323-229-05</td><td>50 mg (10 mg/mL)</td></tr><tr><td>Knockout SR (ES hücreleri için serum alternatifi)</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>10828</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12 (1:1)</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>11330</td><td></td></tr><tr><td>2-merkapto&amp;#8211;etanol %98+</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M 3148</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin 200mM 100x</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>25030</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin 10,000 ünite/ml</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>MEM Esansiyel Olmayan Amino Asitler 100x solüsyon</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>11140</td><td></td></tr><tr><td>Signa HDx 3T MRI</td><td>Ekipman</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>klinik Diz bobini</td><td>Ekipman</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14190</td><td></td></tr></tbody></table>

İnsan embriyonik kök hücreleri manyetik rezonans görüntüleme için in vitro etiketleme

In vitro Labeling of Human Embryonic Stem Cells for Magnetic Resonance Imaging

İnsan embriyonik kök hücreleri (hESC) yaralı miyokardın geri yeteneğini göstermiştir. Manyetik rezonans görüntüleme (MRG), yaralı miyokardın yeniden değerlendirmek için baskın görüntüleme yöntemlerinin biri olarak ortaya çıkmıştır. Ayrıca, demir-oksit nano gibi ex-vivo etiketleme ajanlar, izlemek için istihdam ve nakledilen kök hücrelerin lokalize edilmiştir. Ancak, bu yöntem nakledilen hücrelerin canlılığı ile ilgili temel bir hücre biyolojisi özelliği izlemez. Manganez klorür (MnCl 2) voltaj bağımlı kalsiyum (Ca 2 +) hücreleri biyolojik olarak aktif kanallar aracılığıyla hücrelere girer ve T 1 kısalma efekti oluşturmak için intraselüler olarak birikir bilinmektedir. Bu nedenle, mangan güdümlü MRG miyokard içine hESC nakli sonra hücre canlılığı izlemek için yararlı olabilir öneririz. Bu video, MnCl 2 ve nasıl bu hücrelerin in vitro MRI kullanarak açıkça görüleceği hESC etiket nasıl gösterecektir. Aynı zamanda, biyolojik aktivite Ca 2 + kanalları eşlik eden sinyal değişiklikleri değerlendirmek için Ca 2 + kanal agonist ve antagonist kullanan modüle olacaktır.

Bu video, manganez klorür ile insan embriyonik kök hücreleri (hESC) (MnCl etiket nasıl gösteriyor<sub&gt; 2</sub&gt;) Hücrelerinin biyolojik olarak aktif voltaj bağımlı kalsiyum kanalları üzerinden hücreleri girebilirsiniz. Ayrıca, biz MnCl kullanımı gösteriyor<sub&gt; 2</sub&gt; Hücresel MRG kontrast madde olarak in vitro hESC canlılığını belirlemek için.

İnsan Embriyonik Kök Hücreleri Manyetik Rezonans Görüntüleme için in vitro Etiketleme

İnsan embriyonik kök hücreleri (hESC), hasarlı miyokardiyumu onarma yeteneği göstermiştir. Manyetik rezonans görüntüleme (MRI), ... bir tanesi olarak ortaya çıkmıştır.

Manyetik Rezonans Görüntüleme veya MRI, nakledilen kök hücrelerin konumunu belirlemek ve rejenerasyon mekanizmasını daha iyi anlamak için baskın bir görüntüleme modalitesi olarak ortaya çıkmıştır. Bu MRI çalışmaları tipik olarak görüntüleme kontrast ajanı olarak demir oksit nanoparçacıkları kullanır. Ancak, demir parçacıkları kök hücre ölümünden sonra dokuda kalabilir ve makrofajlar tarafından alınabilir; bu durum, canlı nakledilen hücrelerin izlenmesi için suboptimal koşullara yol açar.Bu video, manganez klorürün etkili bir alternatif olduğunu gösterecektir. Manganez klorür ile kontrast madde işaretlemesi, demir oksit işaretlemesine göre çeşitli avantajlar sunar. Örneğin, iyon parçacıkları negatif bir sinyal üretirken, manganez pozitif bir sinyal verir.Ek olarak, manganez iyonunun voltaj kapılı kalsiyum kanalları aracılığıyla hücrelere girdiği bilinmektedir. Bu nedenle, MRI'daki görünürlüğü, biyolojik olarak aktif hücreler tarafından canlı olduğunun göstergesidir. Merhaba, ben Stanford Üniversitesi Kardiyovasküler Tıp bölümündeki Philip Yang laboratuvarından Uni mother.Bugün size, manyetik rezonans görüntüleme için insan embriyonik kök hücrelerinin manganez ile nasıl etiketleneceğ

in-vitro-labeling-human-embryonic-stem-cells-for-magnetic-resonance

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Değerlendirilmesi için yeni kök hücre tedavileri ile enjekte edilen hücrelerin in vivo takip non-invaziv önemlidir. Bu video demir oksit bazlı kontrast ajanlar ile insan mezenkimal ve embriyonik kök hücreleri, in vivo sonraki MR, in vivo olarak nasıl etiketlemek için size gösterecektir.

Demir Oksit hESC ve hMSCs Etiketleme MR Görüntüleme in vivo Takip Non-Invasive Nanopartiküller

Bu video floresan boya ile insan embriyonik kök hücreler ve mezenkimal kök hücreler etiketleme teknikleri gösterir. Bu teknik, in vivo olarak bir optik görüntüleme ile nakledilen kök hücrelerin izleme ve floresan mikroskobu ile histopatolojik korelasyon kullanılabilir.

Optik Görüntüleme ile non-invaziv Algılama için Floresan Boyalar Kök Hücreler Etiketleme

Giderek artan bir ilgi ile kök hücre tedavileri, moleküler görüntüleme teknikleri transplantasyonu sonrası izleme kök hücre davranışı için idealdir. Lusiferaz muhabiri genler hücre sağkalım, konumu ve in vivo çoğalması non-invaziv, tekrarlayan değerlendirme sağladı. Bu video izlemek için yaşayan bir fare hESC çoğalması gösterecektir.

In vitro ve in vivo Biyoparlaklık Reporter Gen Görüntüleme İnsan Embriyonik Kök Hücreleri

Sunumun Amaç, kıkırdak defektleri, MR görüntüleme ile görüntülendi olabilir matris ilişkili kök hücre implantları üretmek için son derece tekrarlanabilir bir yöntem göstermektir. Kök hücreler, agaroz ile karışık FDA onaylı Ferumoxides, kıkırdak hasarlarının içine implante edilerek 7T MR tarayıcı ile görüntülü olarak etiketlenir.

Ferumoxides implantasyonu Kıkırdak Kusur İnsan Mezenkimal Kök Hücreler Etiketli

Erken Civciv Embriyo morfogenetik Doku deformasyonlar Takibi

Biz, FDA onaylı, süperparamanyetik demir oksit (SPIO), ferumoxytol (Feraheme) ile kök hücre etiketleme ve izleme için kullanılan bir tekniktir açıklar. Hücresel görüntüleme tekniği, manyetik rezonans görüntüleme (MR) görüntüleme için kullanır Bu, başarılı ya da başarısız hastalarda kök hücre engraftments uzun vadeli izleme ve teşhis için kolay erişilebilir.

Kök Hücreler Ferumoxytol, FDA Onaylı Demir Oksit Nanopartikül Etiketleme

In vivo biyolüminesans ve manyetik rezonans görüntüleme (i) ve (ii) post mortem histolojik analiz: Bu makale ile kemirgen beyinde hücresel greft multimodal görüntüleme için optimize edilmiş olaylar dizisi anlatılmaktadır. Tek bir hayvan bu görüntüleme yöntemleri birleştirerek, yüksek çözünürlüklü, duyarlılık ve özgüllük ile hücresel greft değerlendirilmesine olanak tanımaktadır.

Fareler ve Merkezi Sinir Sisteminde Kök Hücre İmplantasyonu Multimodal Görüntüleme

MRI kullanarak hücrelerin Takip geçmiş yıllarda kayda değer bir ilgi kazanmıştır. Bu protokol, flor ile dendritik hücrelerin etiketlenmesi açıklanmaktadır...

Kullanarak İzleme Dendritik Hücre Göç<sup&gt; 19</sup&gt; F /<sup&gt; 1</sup&gt; H Manyetik Rezonans Görüntüleme

Biz, (E) 9.5 ve daha sonraki aşamalarında embriyonik gün fare embriyoları olan embriyonik veya pluripotent hücrelerinden elde edilen iç ve aşılanmış hücrelerden hücre kaderine ve fenotipi hem izlenmesi amacıyla, boyalar enjekte DNA vektörleri, virüs, ve hücreler, bir dizi yöntem tarif gelişme.

Embriyonik Fare Kalpler Gelişmekte Hücre Etiketleme ve Enjeksiyon

Kök hücrelerden kondrogenezis kültür koşulları ince ayar gerektirir. Burada, hücreleri yoğunlaştırmak için bir manyetik yaklaşım sunmak, önemli bir adım kondorjenez başlatmak için. Buna ek olarak, bir biyo-reaktör içinde dinamik olgunlaşma hücresel yapıların mekanik uyarma uygulanır ve kıkırdak hücre dışı matris üretimini artırdığını göstermektedir.

Kıkırdak Yenileme için 3D Manyetik Kök Hücre Toplama ve Biyoreaktör Olgunlaşma

Burada sunulan non-invaziv mezenkimal kök hücre için bir protokol (MSC) teslim ve travmatik beyin hasarı bir fare modeli nde izleme. Süperparamanyetik demir oksit nano partikülleri, msc etiketlemesi için manyetik rezonans görüntüleme (MRG) prob ve gerçek zamanlı MRG kullanılarak intranazal doğumdan sonra invaziv in vivo izleme için non-invaziv in vivo izleme olarak kullanılır.

Travmatik Beyin Hasarı Murine Modelinde İntranazal Doğum sonrası MRG kullanarak Süperparamanyetik Demir Oksit etiketli Mezenkimal Kök Hücrelerin Takibi

Öğrenin, insan embriyonik kök hücrelerini mangan klorür ile etiketleyerek manyetik rezonans görüntüleme için canlı hücre takibini nasıl gerçekleştireceğinizi. Bu yöntem, demir oksit yerine pozitif sinyal sağlayarak hücre canlılığının değerlendirilmesini kolaylaştırır.

İnsan Embriyonik Kök Hücreleri Manyetik Rezonans Görüntüleme için in vitro Etiketleme

Daha fazla video keşfet