Name: MODS tüberküloz tanısı için yöntem ve dirençli tüberküloz ilaca (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 23 min 6 s
Description: Öğrenin, mikroskobik gözlem ilaç duyarlılığı yöntemiyle tüberküloz ve çok ilaçlı dirençli tüberkülozu hızlı ve düşük maliyetli teşhis etme tekniklerini. Bu yöntem, kaynak sınırlı ortamlarda erken tanı ve bulaşmayı önleme için kritik öneme sahiptir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz Sean Fitzwater ve Carmen Giannina Luna Colombo tüberküloz büyüme time-lapse video segment için kabul etmek istiyorum. Biz eksiksiz ve mükemmel bir geri bildirim için geçerli protokol çoğunlukla birebir alındığı Kullanım Kılavuzu, düzenleme sırasında Marty Roper teşekkür ediyorum ve co-yazma. Bu video Üretim NIH / Fogarty Uluslararası Merkezi tarafından finanse edildi <a href="http://www.fic.nih.gov/">http://www.fic.nih.gov/</a> David AJ Moore Imperial College London Bulaşıcı Hastalıklar Tropikal Tıp ve Reader Wellcome Trust Klinik Araştırma Görevlisi (Fellowship olarak katkıda ödül sayısı 078067/Z/05). Mark F. Brady bir NIH / Fogarty Uluslararası Araştırma Merkezi Araştırma Görevlisi olarak katkıda bulundu.

<ol><li> Stok çözelti hazırlayın <ol><li> Fosfat tampon stok <ol><li> , Potasyum fosfat tekbazlı çözüm 950ml (1000ml distile su içinde çözünmüş potasyum fosfat tekbazlı 9.07g) ve karıştırın, sodyum dibazik çözüm 950ml (1000ml distile su içinde çözünmüş sodyum fosfat dibazik 9.47g) karıştırın; ayarlamak için her çözümün geri 50ml tutabilecek pH gerekli özelliğine </li><li> PH 6.8 ± 0.2 ayarlayın: pH yükseltmek eklemek sodyum fosfat dibazik çözümü; düşük pH potasyum fosfat tekbazlı çözüm eklemek </li><li> 121-124 az Otoklav ° C&#39;de 15 dakika sterilize </li><li> Plaka 48 saat için 37 Petri kabı ve inkübe besin agar fosfat tampon çözeltisi ° C 100μl kısım kısırlık onaylamak için </li><li> Buzdolabında saklayın 2-8 ° C için bir ay kadar Not: Her balgam örneği fosfat tampon çözelti 10ml gerektirir . </li></ol></li><li> Dekontaminasyon stok <ol><li> Kombine sodyum hidroksit çözeltisi eşit hacimlerde (200 ml steril distile su içinde çözünmüş sodyum hidroksit 8.0g) ve sodyum sitrat solüsyonu (5.8g, 200 ml steril distile su distile sodyum sitrat) </li><li> 121-124 ° C&#39;de 15 dakika boyunca karıştırın ve otoklav </li><li> Buzdolabında saklayın 2-8 ° C için bir ay kadar Not: Her bir balgam örneği dekontaminasyon stokunun 2ml gerektirir </li></ol></li><li> Kültür medya stok <ol><li> Steril distile su 900ml içine gliserol ve casitone 7H9 orta toz ve 5.9g 1.25g 3.1ml ekleyin; tamamen eriyene kadar sürekli ajitasyon ile karıştırın </li><li> 15 dakika süreyle 121-124 ° C&#39;de Otoklav </li><li> Serin ve antibiyotik çözümleri ve iç kontrollerin hazırlanması için steril numune hazırlama için 16x 100 mm cam tüpler ve 10.8ml alikotları 4.5ml alikotları içine steril ortamda bölmek </li><li> Kısırlık (bulanıklık eksikliği) doğrulamak için 37 ° C&#39;de 48 saat süreyle inkübe </li><li> 2-8 ° C kap ile saklayın sıkı bir ay kadar kapalı Not: Her bir balgam örneği 7H9 orta bir tüp içeren 4.5ml gerektirir. </li></ol></li><li> Antibiyotik stok çözümleri <ol><li> A. İzoniyazid stok (8 mg / ml) <ol><li> 20 mg 2.5ml steril distile su tamamen izoniazid çözülür </li><li> Sulu solvent 0.2μm şırınga filtresi ile filtreleme </li><li> 6 aya kadar -20 ° C&#39;de steril mikro santrifüj tüpleri 20μl alikotları saklayın Not: Her saklanan 20μl kısım 100 numune (fire dahil) için yeterli </li></ol></li><li> B. Rifampisin stok (8 mg / ml) </li></ol><ol><li> 20 mg rifampisin 1.25ml DMSO tamamen çözülür </li><li> 1.25ml steril distile su eklenir ve karıştırılır </li><li> Organik çözücü 0.2μm şırınga filtresi ile filtreleme </li><li> 6 aya kadar -20 ° C&#39;de steril mikrosantrifüj tüpler 20μl alikotları saklayın Not: Her saklanan 20μl kısım 100 numune (fire dahil) için yeterli </li></ol></li></ol></li><li> Çalışma çözümler hazırlayın <ol><li> Dekontaminasyon çalışma çözümü <ol><li> NALC kristalleri gerekli dekontaminasyon çözüm her 20ml 0.1g çözülür Not: Her bir örnek dekontaminasyon çözüm 2ml ihtiyacı Not: NALC mukolitik faaliyet zaman içinde kaybeder gibi 24 saat sonra kullanılmayan kalan NaOH-NALC dekontaminasyon çözümü atın </li></ol></li><li> Kültür medya çalışma çözüm <ol><li> Şu şekilde anlatılır: <ol><li> 7H9 orta her balgam örneği için 1 tüp işlenmiş olması, artı her plaka için 1 tüp (negatif kontrol sütun için) </li><li> 7H9 orta pozitif kontrol için 2 tüp (3 monoresistant suşları kullanılmıştır) </li><li> 10.8ml 7H9 antibiyotik çözeltisi ile 1-2 tüpler </li></ol></li><li> Her bir örnek tüp 7H9 4.5ml 0.5 ml OADC </li><li> 10.8ml 7H9 tüpler 1.2ml OADC </li><li> (Bu PANTA gerekmez) antibiyotik çözelti hazırlama için kullanılacak 12ml 7H9 OADC (ler) pozitif kontrol için 5ml 7H9-OADC ve tüp 2 tüpleri kenara koyun </li><li> PANTA sulandırın ve her numune tüpü ve negatif kontrol tüpleri (7H9-OADC-PANTA: toplam hacim = 5.1ml) 0.1ml eklemek Not: PANTA (7H9-OADC-PANTA) ile tam orta balgam örnekleri ve negatif kontroller için kullanılır; pozitif kontrol ve antibiyotik çözeltisi PANTA olmadan 7H9-OADC </li></ol></li><li> Antibiyotik çalışma çözümleri <ol><li> 1. Kullanılmayan bir 24 plaka antibiyotik çalışma çözümü için adımlar için Bkz: Şekil 1 Not: doğru bir duyarlılık sonuç için, son antibiyotik konsantrasyonları kritik öneme sahiptir. Aşağıdaki yordam l için uygundur.aboratories mikropipetler ile donatılmıştır. Mikropipetler mevcut değilse, tüberkülin şırınga Kılavuzu Ek 3 modsperu.org Kullanıcı açıklanan dilüsyonları farklı bir dizi ile kullanılabilir Not: yeniden dondurmak veya ilaç aktivitesi yok olabilir antibiyotik çalışma veya hisse senedi çözümleri yeniden kullanımı, işlem günü Şekil 1 sonunda tüm kullanılmayan antibiyotik çözümler atın . Antibiyotik çalışma çözümler (modsperu.org Kullanım Kılavuzu) </li></ol></li></ol></li><li> Balgam örneği ve plaka hazırlama <ol><li> Arındırma <ol><li> 15ml bir santrifüj tüpü içine balgam örneği Yeri 2ml (eğer daha az, 2 ml fosfat tamponu ile makyaj daha varsa, sadece 2ml kullanın) </li><li> 2ml NaOH-NALC çözüm ekle </li><li> Kap sıkıca tüp ve 20 saniye boyunca girdap; NaOH-NALC çözüm kişiler, tüm iç tüp yüzey ve kapak sağlamak için tüp ters </li><li> En az 15 dakika bekletin örnek özellikle viskoz ise bir kaç dakika uzatabilir. Tedavi üzerinde önlemek için, 20 dakikayı geçmemelidir </li><li> 4 kez alkali nötralize ve dekontaminasyon işlemi sona erdirmek ve tüpü ters çevirerek iyice karıştırın fosfat tamponu (pH 6.8) ile 14ml tüp doldurun </li><li> 3000 g de 15 dakika süreyle santrifüj (3000 g ulaşmak için gerekli dakikadaki dönüş denklemi için modsperu.org Kullanım Kılavuzu Ek 2) </li><li> Dikkatlice bir sıvı atık kap içine% 10 sodyum hipoklorit veya diğer uygun bir dezenfektan ile süpernatant kapalı dökün ve pelet korumak </li></ol></li><li> Son örneği süspansiyon ve yedekleme hazırlanması <ol><li> 7H9-OADC-PANTA (5.1ml içeren tüp), Pasteur pipeti ile santrifüj tüpüne toplam hacmi 2 ml örnek pelet tekrar süspansiyon, iyice karıştırın </li><li> Yedek olarak 2-8 örnek bir mikrosantrifüj tüp içinde süspansiyon ve mağaza ° C 1 ml çıkarın </li><li> Ikinci 1ml örnek süspansiyon kalan 7H9-OADC-PANTA ile tüp ekleyin, iyice karıştırın. Bu kaplama için hazır son örnek çözümdür </li></ol></li><li> 24-plaka örnek süspansiyonlar yerleştirilmesi <ol><li> 24 plaka bir sütun 4 kuyuların her birine son örnek süspansiyon Yeri 900μl </li><li> Sütun 3 ek örnekler dışında, plaka tüm sütunlar kadar tekrarlayın (ya da tüm örnekler kaplama kadar) doldurulur </li><li> Her numune plaka Sütun 3 4 kuyu (negatif iç kontrollerin) örnek olmadan 7H9 OADC orta Yeri 900μl </li></ol></li><li> Örnekler antibiyotik ekleme <ol><li> Çok kanallı pipet kullanarak, dikkatli bir şekilde 7H9-OADC ve antibiyotik çalışma çözümleri (Sütun 2 antibiyotik seyreltme plaka Şekil 1) ile kuyulardan 100μl doldurmak 4 ipucu </li><li> Levha veya örnek dokunmadan 900μl örnek çözümleri ile sütun 1 kuyu 100μl alikotları ekle </li><li> Tüm sütunları orta ek 100μl (ilaçsız kuyular) veya (negatif kontrol sütun 3 de dahil olmak üzere) antibiyotik çözümler aldık kadar bu işlemi tekrarlayın </li><li> Yapışmalı, polietilen (KİLİTLİ) çanta ve mühür kapak ve yer ile plaka kapatın (çanta Bu noktadan itibaren tekrar açıldı) </li><li> 37 ° C (CO 2 zenginleştirme gerekli değildir) inkübe </li></ol></li></ol></li><li> Kalite kontrolü <ol><li> Negatif kontroller, her bir plaka üzerinde çalıştırılır. Negatif kontrol sütununda herhangi bir kuyu herhangi bir büyüme varlığı, çapraz kontaminasyon, bu nedenle tüm plaka atılmalıdır ve örnekleri yeniden kaplama gösterir. </li><li> Pozitif kontrolleri günün sonunda ayrı bir plaka üzerinde çalıştırılır. Bir tümüyle ilaçlara duyarlı gerginlik, bir sütun ve başka bir sütun çalıştırmak INH ve RIF bir yük dayanıklı çalıştırılır . MDR gerginlik çalıştırma hakkında endişe, INH monoresistant gerginlik hem RIF monoresistant suşu duyarlı ve MDR suşlarının yerde çalıştırılabilir varsa. Tüm pozitif kontrol medya desteği büyüme göstermek için uyuşturucu ücretsiz kuyularda büyüme olmalıdır. Ilaç konsantrasyonları doğru olduğunu göstermek için, duyarlı bir gerginlik INH veya RIF kuyuları büyümek değil, ancak MDR gerginlik INH ve RIF kuyuları da büyümeye büyümek gerekir. </li></ol></li><li> Plaka okuma <ol><li> &quot;Gün 0&quot; olarak kaplama gün ile plaka okuma 5. gününde başlar, ve eğer negatifse Günü&#39;nde okuma 5 gün 14 ve 15 gün sonra her 2-3 gün kadar (ya da iş yüküne bağlı olarak alternatif gün) her gün yapılıyor -21. Tabaklar bir incelenir10x hedefi ile ters ışık mikroskobu </li><li> Olumlu bir kültür İKİ uyuşturucu ücretsiz kuyulardan iki veya daha fazla koloni oluşturan birim (2 CFU) var olan biridir. Erken mikobakteriyel büyüme küçük kavisli virgül veya spiral (5-9 gün) gibi görünüyor. Colony oluşumu genellikle &quot;kordonlar&quot; veya &quot;Tangles&quot; (modsperu.org görüntü kütüphanesi) ilerler </li><li> Günü uyuşturucu içeren kuyu okunacağı 2 kuyu, uyuşturucu ücretsiz bir kültür pozitif bir ilacın varlığında herhangi bir büyüme bu ilaca karşı direnç gösterir . Not: Ara sıra uyuşturucu ücretsiz kuyularda pozitif bir kültür olduğunu kaydetti&gt; 1 hafta sonra ilaç içeren kuyuların okuma yapılırsa, bu büyüme break-direnci temsil olmayabilir görülür </li><li> Gün 21 ile pozitif numune negatif kültürler kabul edilir </li><li> Mikobakteriyel büyüme bulutluluk sonuç vermez ise kuyuların bulutluluk, kirlenme aşırı çoğalma sonucu </li><li> 21 gün tamamlanması kültürler atılabilir. Kültürler mühürlü torbalar içinde kalır ve otoklav torbaları yerleştirilir ve 45-60 dakika süreyle 121-124 ° C&#39;de otoklava </li></ol></li></ol>

<ol><li>Arias, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+evaluation+of+the+microscopic-observation+drug-susceptibility+assay+for+detection+of+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Clinical evaluation of the microscopic-observation drug-susceptibility assay for detection of tuberculosis.</a> Clin Infect Dis. 44, 674-674 (2007).</li>
<li>Caviedes, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid%2C+efficient+detection+and+drug+susceptibility+testing+of+Mycobacterium+tuberculosis+in+sputum+by+microscopic+observation+of+broth+cultures.+The+Tuberculosis+Working+Group+in+Peru%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Rapid, efficient detection and drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis in sputum by microscopic observation of broth cultures. The Tuberculosis Working Group in Peru.</a> J Clin Microbiol. 38, 1203-1203 (2000).</li>
<li>Caviedes, L., Moore, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introducing+MODS%3A+a+low-cost%2C+low-tech+tool+for+high-performance+detection+of+tuberculosis+and+multidrug+resistant+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Introducing MODS: a low-cost, low-tech tool for high-performance detection of tuberculosis and multidrug resistant tuberculosis.</a> Indian J Med Microbiol. 25, 87-87 (2007).</li>
<li>Caws, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+MODS+culture+technique+for+the+diagnosis+of+tuberculous+meningitis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the MODS culture technique for the diagnosis of tuberculous meningitis.</a> PLoS ONE. 2, e1173-e1173 (2007).</li>
<li>Ejigu, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscopic-observation+drug+susceptibility+assay+provides+rapid+and+reliable+identification+of+MDR-TB%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Tuberc+Lung+Dis%22%5BJournal%5D)">Microscopic-observation drug susceptibility assay provides rapid and reliable identification of MDR-TB.</a> Int J Tuberc Lung Dis. 12, 332-332 (2008).</li>
<li>Kim, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+of+occupational+tuberculosis+in+National+Tuberculosis+Programme+laboratories+in+Korea%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Tuberc+Lung+Dis%22%5BJournal%5D)">Risk of occupational tuberculosis in National Tuberculosis Programme laboratories in Korea.</a> Int J Tuberc Lung Dis. 11, 138-138 (2007).</li>
<li>Mello, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+evaluation+of+the+microscopic+observation+drug+susceptibility+assay+for+detection+of+Mycobacterium+tuberculosis+resistance+to+isoniazid+or+rifampin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Clinical evaluation of the microscopic observation drug susceptibility assay for detection of Mycobacterium tuberculosis resistance to isoniazid or rifampin.</a> J Clin Microbiol. 45, 3387-3387 (2007).</li>
<li>Moore, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Future+prospects+for+the+MODS+assay+in+multidrug-resistant+tuberculosis+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Future prospects for the MODS assay in multidrug-resistant tuberculosis diagnosis.</a> Future Microbiol. 2, 97-97 (2007).</li>
<li>Moore, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infrequent+MODS+TB+culture+cross-contamination+in+a+high-burden+resource-poor+setting%5BTitle%5D)+AND+%22Diagn+Microbiol+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Infrequent MODS TB culture cross-contamination in a high-burden resource-poor setting.</a> Diagn Microbiol Infect Dis. 56, 35-35 (2006).</li>
<li>Moore, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscopic-observation+drug-susceptibility+assay+for+the+diagnosis+of+TB%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Microscopic-observation drug-susceptibility assay for the diagnosis of TB.</a> N Engl J Med. 355, 1539-1539 (2006).</li>
<li>Moore, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscopic+observation+drug+susceptibility+assay%2C+a+rapid%2C+reliable+diagnostic+test+for+multidrug-resistant+tuberculosis+suitable+for+use+in+resource-poor+settings%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Microscopic observation drug susceptibility assay, a rapid, reliable diagnostic test for multidrug-resistant tuberculosis suitable for use in resource-poor settings.</a> J Clin Microbiol. 42, 4432-4432 (2004).</li>
<li>Moore, D. A., Roper, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+of+smear-negative+tuberculosis+in+people+with+HIV%2FAIDS%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Diagnosis of smear-negative tuberculosis in people with HIV/AIDS.</a> Lancet. 370, 1033-1033 (2007).</li>
<li>Oberhelman, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+recovery+of+Mycobacterium+tuberculosis+from+children+using+the+microscopic+observation+drug+susceptibility+method%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Improved recovery of Mycobacterium tuberculosis from children using the microscopic observation drug susceptibility method.</a> Pediatrics. 118, e100-e100 (2006).</li>
<li>Palomino, J. C., Martin, A., Portaels, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MODS+assay+for+the+diagnosis+of+TB%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">MODS assay for the diagnosis of TB.</a> N Engl J Med. 356, 188-189 (2007).</li>
<li>Park, W. G., Bishai, W. R., Chaisson, R. E., Dorman, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performance+of+the+microscopic+observation+drug+susceptibility+assay+in+drug+susceptibility+testing+for+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Performance of the microscopic observation drug susceptibility assay in drug susceptibility testing for Mycobacterium tuberculosis.</a> J Clin Microbiol. 40, 4750-4750 (2002).</li>
<li>Shiferaw, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+microscopic+observation+drug+susceptibility+assay+for+detection+of+multidrug-resistant+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of microscopic observation drug susceptibility assay for detection of multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis.</a> J Clin Microbiol. 45, 1093-1093 (2007).</li>
<li>Tovar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+diagnosis+of+pleural+tuberculosis+using+the+microscopic-+observation+drug-susceptibility+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Improved diagnosis of pleural tuberculosis using the microscopic- observation drug-susceptibility technique.</a> Clin Infect Dis. 46, 909-909 (2008).</li>
<li>Vargas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+of+sputum-scarce+HIV-associated+pulmonary+tuberculosis+in+Lima%2C+Peru%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Diagnosis of sputum-scarce HIV-associated pulmonary tuberculosis in Lima, Peru.</a> Lancet. 365, 150-150 (2005).</li>
</ol>

MODS tahlil, kaynak sınırlı ayarları hedeflenmektedir. Ilk kez, MODS tüberküloz hızlı sıvı kültür algılama yeteneği getiriyor ve hemen altında test başına 3 $ kaynak sınırlı ayarları dirençli tüberküloz ilaca. MODS ticari olmayan, iteratif metodoloji ve MODS topluluk her zaman diğer laboratuvarlardan yapmak başarmış iyileştirmelerini de ilgileniyor. Sıvı dökülürse veya aerosolize olabilir, çünkü tüberküloz sıvı medya kültürü, nükseden bir endişe biyogüvenlik. MODS testi dolaylı olarak ilaç duyarlılık testi mikobakteriler, dökülme ve...

<table><tbody><tr><td>Buzdolabı/dondurucu</td><td>Ekipman</td><td></td><td></td><td>önceden hazırlanmış besiyeri ve antibiyotik stoklarını saklamak için</td></tr><tr><td>Vorteksle karıştırın</td><td>Ekipman</td><td></td><td></td><td>balgam dekontaminasyonuna yardımcı olmak için</td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Ekipmanlar</td><td></td><td></td><td>balgam konsantrasyonu için; 3000 g'ye ulaşabilen; d&amp;#8211;soğutulması gerekmez ancak biyogüvenli OLMALIDIR (kovalar sızdırmaz şekilde kapatılabilir)</td></tr><tr><td>İnkübatör (37 °C)</td><td>Ekipman</td><td></td><td></td><td>kültür için; CO2 ile zenginleştirilmesine gerek yoktur</td></tr><tr><td>Ters ışık mikroskobu</td><td>Mikroskop</td><td></td><td></td><td>MODS plaklarını okumak için</td></tr><tr><td>Otoklav</td><td>Ekipmanlar</td><td></td><td></td><td>besiyerlerini, PBS'yi ve kullanılmış plakaları sterilize etmek için</td></tr><tr><td>Terazi</td><td>Ekipman</td><td></td><td></td><td>izoniazid, rifampisin ve NALC tartmak için</td></tr><tr><td>Middlebrook 7H9 besiyeri (Difco)</td><td>Reaktif</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0713-17-9</td><td>500gr/şişe; kültür ortamı bazı</td></tr><tr><td>Casitone (pankreatik sindirim kazein)</td><td>Reaktif</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0259&amp;#8208;17&amp;#8208;9</td><td>500gr/şişe; kültür besiyeri bazı</td></tr><tr><td>Liyofilize gliserol (gliserin)</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G&amp;#8208;33&amp;#8208;500</td><td>500 ml/şişe; kültür ortamı bazı</td></tr><tr><td>PANTA (Liyofilize antibiyotik karışımı BD) </td><td>Reaktif</td><td>Fisher Scientific</td><td>B4345114</td><td>6 şişe/paket; antibiyotikli besiyeri takviyesi</td></tr><tr><td>OADC (Middlebrook OADC zenginleştirme BD)</td><td>Reaktif</td><td>Fisher Scientific</td><td>B11886</td><td>10 x 20ml/paket; besiyeri takviyesi</td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit (Hibri-Max)</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D-2650</td><td>şişe başına 100 ml; rifampisin stok çözeltisi hazırlamak için</td></tr><tr><td>Antibiyotik stokları: izoniazid</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I-3377</td><td>50gr/şişe; doğrudan duyarlılık testi</td></tr><tr><td>Antibiyotik stokları: rifampisin</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R-3501</td><td>1gr/şişe; doğrudan duyarlılık testi</td></tr><tr><td>Sodyum hidroksit (pelet)</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221465</td><td>500gr/şişe; sputum dekontaminasyonu</td></tr><tr><td>Sodyum sitrat (trisodyum tuz dihidrat)</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S-4641</td><td>500gr/şişe; sputum dekontaminasyonu</td></tr><tr><td>N-asetil-L-sistein</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-7250</td><td>50gr/şişe; sputum dekontaminasyonu</td></tr><tr><td>Potasyum Fosfat Monobazik kristal. KH2PO4</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0662</td><td>500gr/şişe; sputum dekontaminasyonu</td></tr><tr><td>Sodyum Fosfat Dibazik, susuz. Na2HPO4</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0876</td><td>500gr/şişe; sputum dekontaminasyonu</td></tr><tr><td>Sodyum hipoklorit</td><td>Reaktif</td><td>ev tipi çamaşır suyu</td><td></td><td>kontamine atıkları bertaraf etmek için</td></tr><tr><td>15 ml santrifüj tüpleri (polipropilen 15 ml Falcon 35&amp;#8208;2096)</td><td>Sarf Malzeme</td><td>Fisher Scientific</td><td>14&amp;#8208;959&amp;#8208;49B</td><td>Kasa başına 500 adet; balgam dekontaminasyonu ve konsantrasyonu için</td></tr><tr><td>24 kuyucuklu plakalar (Plates Tissue 24 wells BD Falcon 35&amp;#8208;3047)</td><td>Sarf Malzemesi</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-1</td><td>koli başına 50 plaka; kültür ve okuma için</td></tr><tr><td>Kilitli polietilen torbalar 6 X 6 &amp;#8220; (kilitli torba)</td><td>Sarf Malzemesi</td><td></td><td></td><td>biyogüvenlik amacıyla 24 kuyucuklu plakayı muhafaza etmek için</td></tr><tr><td>Kapaklı cam tüpler (16 x 100mm ve 18 x 145mm)</td><td>Sarf Malzeme</td><td>VWR international</td><td>47729-583</td><td>Kutu başına 500 tüp; hazırlanan besiyeri stoklarının saklanması için</td></tr><tr><td>Vidalı kapaklı mikrosantrifüj tüpleri (1,5 ml)</td><td>Sarf Malzemesi</td><td>Fisher Scientific</td><td>05&amp;#8208;669&amp;#8208;22</td><td>kasa başına 1000 adet; antibiyotik stok alikotlarını saklamak için</td></tr><tr><td>0.22&amp;mu;m filtreler (sulu çözücüler) Şırınga filtresi Millex blue</td><td>Sarf Malzeme</td><td>Fisher Scientific</td><td>SLGL 025 OS</td><td>kasa başına 50 adet; antibiyotik stoklarını filtrelemek için</td></tr><tr><td>0.22&amp;mu;m filtreler (organik çözücüler) Şırınga filtresi Millex sarı</td><td>Sarf malzeme</td><td>Fisher Scientific</td><td>SLGV 033 RS</td><td>koli başına 50 adet; antibiyotik stoklarını filtrelemek için</td></tr><tr><td>Tek kullanımlık Pasteur pipetleri borosilikat cam 9&amp;#8243;</td><td>Sarf Malzemesi</td><td>Fisher Scientific</td><td>13&amp;#8208;678&amp;#8208;20°C</td><td>koli başına 720 adet; PANTA'yı medya karışımıyla karıştırmak için</td></tr><tr><td>Aerosol bariyerli uçlar 1000&amp;#8208;1300&amp;mu;l</td><td>Sarf Malzemesi</td><td>Fisher Scientific</td><td>02&amp;#8208;707&amp;#8208;51</td><td>1000 adet/paket; plaklara besiyeri dağıtmak için</td></tr><tr><td>USA Scientific Tips One 1&amp;#8208;200&amp;mu;sarı uçlar</td><td>Sarf malzemesi</td><td>Fisher Scientific</td><td>1111&amp;#8208;0006</td><td>1000 uç/paket; antibiyotik stoklarını seyreltmek için</td></tr></tbody></table>

mods tüberküloz tanısı için yöntem ve dirençli tüberküloz ilaca

The MODS method for diagnosis of tuberculosis and multidrug resistant tuberculosis

Aktif akciğer tüberküloz (TB) olan hastalar, hasta kür ve yeni enfeksiyonların önlenmesi için gerekli aktif verem teşhis yapma, yılda 10-15 kişi enfekte. Ayrıca, çok ilaca dirençli tüberküloz (MDRTB) ortaya çıkması, ilaç direncinin saptanması ilaca dirençli suşların yayılmasını durdurmak için gerekli anlamına gelir. Mikroskopik gözlem ilaç duyarlılık (MODS) testi, TB ve MDRTB yüksek performanslı bir algılama için düşük maliyetli, düşük teknolojili bir araçtır. Mycobacterium tuberculosis (MTB) mikroskobik MTB büyüme katı ortam kolonilerinin makroskopik görünüm için beklemek yerine sıvı ortamda daha önce tespit ve olabilir) katı ortam 2 daha sıvı ortamda hızlı büyür 1): MODS testi üç temel ilkeye dayanır büyüme altkültürü gerçekleştirmek için ihtiyaç kalmayabilir, MTB karakteristik ilaçlar izoniazid ve rifampisin MDRTB eş zamanlı olarak doğrudan tespiti için izin MODS testi dahil edilebilir atipik mikobakteriler veya mantar veya bakteriyel kontaminasyon 3) ayırt edilmesi için izin dolaylı bir ilaç duyarlılık testi. Rekabet mevcut teşhis balgam smear ile düşük hassasiyet, katı ortam kültürü, mevcut sıvı ortam kültür yöntemleri ile yasaklı yüksek maliyet ve MDRTB tespit etmek için dolaylı olarak ilaç duyarlılık testi için altkültürü yapmak ihtiyacı ile tanıya kadar uzun gecikmeler engel. Buna karşılık, ticari olmayan MODS yöntemi, TB ve MDRTB için bir yüksek hassasiyet vardır bir görece hızlı kültür yöntemi, MDRTB için eş zamanlı olarak ilaç duyarlılık testi sağlar, ve TB için test için sadece altında ABD doları 3 kaynak sınırlı ayarları erişilebilir ve MDRTB.

Mikroskopik gözlem ilaç duyarlılık (MODS) tayini, düşük maliyetli, yüksek performanslı bir algılama tüberküloz (TB) ve çoklu ilaca dirençli tüberküloz (MDRTB) düşük teknolojili bir araçtır. Bu video MODS sıvı medya kültürü yöntemi açıklanmıştır.

MODS tüberküloz tanısı için yöntem ve dirençli tüberküloz ilaca

Aktif pulmoner tüberküloz (TB) hastaları yılda 10-15 kişiyi enfekte etmekte olup, aktif TB tanısı koymak hem hastanın iyileştirilmesi hem de ... için esastır.

Dünyadaki her üç kişiden biri tüberküloz enfeksiyonuna yakalanmıştır. Aktif tüberkülozun teşhis edilmesi yeni enfeksiyonları önler çünkü aktif tüberkülozu olan hastalar, tedavi edilene veya hayatını kaybedene kadar yılda 10 ile 15 arasında başka kişiye enfeksiyon bulaştıracaktır. MODS, mikroskopik gözlem (microscopic observation) ve ilaç duyarlılık testi (drug susceptibility assay) ifadelerini sürekli tekrarlamamak için kullandığımız bir kısaltmadır; bu ismin verilme nedeni, metodoloji açıklandıkça belirginleşecektir.Bu kısa videoda, tüberküloz ve çoklu ilaç dirençli tüberkülozun hızlı ve düşük maliyetli teşhisi için mods metodolojisini ana hatlarıyla açıklayacağız. Videoda metodoloji adım adım sunulacaktır. Sıvı kültürle çalışmanın biyogüvenlik etkilerini tartışacak ve ayrıca bu metodolojinin kullanımı için gerekli olan bazı önemli kalite güvence konularını açıklayacağız.Mods testi, Peru'nun Lima kentindeki Kayana Üniversitesi'nde, Bob Gilman'ın laboratuvarında geliştirilmiştir. Bu çalışma, başlangıçta loose cavi tarafından yapılan gözlemleri takip etmiştir. LOOSE, kolorimetrik indikatörler kullanarak kültürlerde mycobacterium tuberculosis'i tespit etmenin hızlı yollarını belirlem

the-mods-method-for-diagnosis-tuberculosis-multidrug-resistant

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Mycobacterium tuberculosis Antimikrobiyal duyarlılık testi zor ama hasta bakımı için kritik. Bu mikrotiter plate formatı 12 antimikobakteriyel ilaçların test sunar ve uygun tedavi yardımcı olacak minimum inhibitör konsantrasyon (MİK) değerleri sağlar.

Microtiter Plate Format Broth Seyreltme Birinci ve İkinci Line İlaçları Mycobacterium tuberculosis kompleksi Antimikrobiyal Duyarlılık Testi

Xpert MTB / RIF testi aynı anda tespiti için numune dekontaminasyon, eller serbest kullanım, on-board örnek işleme ve ultra-hassas hemi-nested PCR...

Xpert MTB / RIF Testi ile Akciğer Tüberkülozu Tanısı

Bir amplifikasyon mikrodizi önemli ölçüde son kullanıcı için mikro-dizi iş akışını tek bir oda içine asimetrik PCR amplifikasyonu ve mikrodizi hibridizasyon birleştirir. Mikrodizi iş akışı basitleştirilmesi rutin alt-kaynak ortamlarda kullanılabilir mikroarray tabanlı tanı oluşturmak için gerekli bir ilk adımdır.

Çok ilaca dirençli Demonstrating<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; Amplifikasyon Microarray

Bu hücre içi, Mycobacterium tuberculosis karşısında roman bileşiklerin bulunması hedefleme için ve in suyu memeli konakçı hücreye karşı bakteri hem de sitotoksisite büyüyen modüler yüksek verimli bir tarama sistemini geliştirdik.

Hücre içi Hedefleme İnhibitörleri Etkinliği ve Sitotoksisite Taraması için sistem<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em

Mycobacterium tuberculosis'in aşağı akış hedefli yeni nesil dizilemesi için manyetik boncuk saflaştırması ile birleştirilmiş matris tabanlı bir ekstraksiyon yöntemi kullanarak dekontamine balgamdan DNA ekstraksiyonu için optimize edilmiş bir yöntem sunuyoruz.

Dekontamine Balgam Örneklerinde Hedeflenen Yeni Nesil Dizileme için Matris Tabanlı DNA Ekstraksiyonu

Burada, fenotipik tarama yoluyla potansiyel anti-tüberküloz ilaç adaylarını belirlemek için bir protokol sunuyoruz; bu protokol 4-aminokinolin bileşiğinin kimyasal sentezini, Mycobacterium tuberculosis karşısında minimum inhibitör konsantrasyonunun belirlenmesini ve memeli hücre hatlarında sitotoksisitesinin değerlendirilmesini kapsıyor.

Potansiyel Anti-TB Adaylarının Tanımlanması: Memeli Hücrelerinde Sentez, MIC Belirleme ve Sitotoksisite Değerlendirmesi için Adım Adım Rehber

Anofel stephensi sivrisinekler, sıtma yaşayan Hindistan ve Asya'da vektörleri. Bu video bu türün sivrisinek sıtma karşı direnç kazandırırlar transgenlerin microinjections gerçekleştirmek için teknik göstermektedir. Bu video gösterdi metodoloji diğer sivrisinek türlerinin mikroenjeksiyon teknikleri uygulanabilir.

Bir, Enjeksiyon. stephensi Embriyolar Sıtma dayanıklı Sivrisinekler oluşturun

Bu protokolde, çözünebilir bir protein deterjan kompleksi olarak, ifade, çözünmüş ve recombinantly ifade membran proteini, MexB arıtma göstermektedir. MexB fırsatçı bakteriyel patojen Pseudomonas aeruginosa bir çok ilaca direnç membran taşıyıcı.

İfade, Deterjan çözünürleştirme ve Membran Transporter, MexB ilaca Direnç Protein Saflaştırılması

Tüm embriyo kültürü tekniği kültür fare ve sıçan embriyolar için bize izin...

Rotator-tipi Şişe Kültür Sistemi kullanılarak Kemirgen Tüm Embriyo Kültürü Yöntemi

Biz kloroplast trnL-F boşluk bölge içinde hedef DNA dizisi farklılıklar çeşitler arasındaki farklılaştırmak için çeşitli spesifik PCR primerleri kullanan bir maliyet-etkin ve hızlı moleküler genotipleme protokol...

Wild-tip ve Süs Çeşitler arasında ayırt A PCR tabanlı Genotiplendirme Yöntemi Imperata cylindrica</em

Öğrenin, mikroskobik gözlem ilaç duyarlılığı yöntemiyle tüberküloz ve çok ilaçlı dirençli tüberkülozu hızlı ve düşük maliyetli teşhis etme tekniklerini. Bu yöntem, kaynak sınırlı ortamlarda erken tanı ve bulaşmayı önleme için kritik öneme sahiptir.

MODS tüberküloz tanısı için yöntem ve dirençli tüberküloz ilaca

Daha fazla video keşfet