Name: Drosophila melanogaster Larvaların MSS diseksiyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 29 s
Description: Öğrenin Drosophila melanogaster üçüncü dönem larvalarından merkezi sinir sistemi diseksiyonu tekniğini. Bu yöntem sinir sistemi gelişimi ve protein lokalizasyonu çalışmaları için değerli bir araçtır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li> Manikür bağlı MSS bırakarak, 3. instar larvaları parçalara ayır. 1.5 ml tüp yerleştirin. </li><li> Sallanan 40 dakika için% 2&#39;lik formaldehit içeren PBS (1x) sabitleyin. Her 5-10 disseke MSS 250ul kullanın. </li><li> PBS +% 0.1 Triton X-100 (PBST) formaldehit kaldırın ve kısa bir süre ile 3 kere yıkayın. Doku kaybını önlemek için ince çekilmiş Pasteur pipet kullanın. </li><li> Non-spesifik protein bağlayıcı siteleri engelleme ve PBST doku 1-8 saat inkübe hücre zarları permeabilize +% 5 4 sallanan BSA, ° C </li><li> 4 ° C gecede PBST +% 5 BSA sallanan seyreltilmiş primer antikor inkübe edin. Optimal antikor seyreltme farklı antikorları için değişecektir. </li><li> 4 az iki 30dk yıkar ° C tarafından takip 3x PBST durulayın </li><li> PBST içinde seyreltilmesi ikincil antikor inkübe + 4 sallanan 1-3 saat için% 5 BSA ° C. 4 az iki 30dk yıkar ° C tarafından takip 3x PBST durulayın Ikincil bir ışığa duyarlı bileşik konjuge ise tüp, alüminyum folyo ile sarın. </li><li> Daha doku teşrih (gerekirse) ve slaytlar monte. </li></ol>

<ol>
	<li>Lin, D. M., Goodman, C. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ectopic+and+increased+expression+of+fasciclin+II+alters+motoneuron+growth+cone+guidance.">Ectopic and increased expression of fasciclin II alters motoneuron growth cone guidance.</a> Neuron. 13, 507-523 (1994).</li><li>Park, Y., Fujioka, M., Kobayashi, M., Jaynes, J., Datta, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=even+skipped+is+required+to+produce+a+trans-acting+signal+for+larval+neuroblast+proliferation+that+can+be+mimicked+by+ecdysone.+Development+128.">even skipped is required to produce a trans-acting signal for larval neuroblast proliferation that can be mimicked by ecdysone. Development 128.</a> , 1899-1909 (2001).</li></ol>

Yazarların beyan edecek bir çıkar çatışması yoktur.

Bu video üçüncü instar Drosophila larvaları CNS incelemek için nasıl gösteriyor. Diseksiyonu sonra, merkezi sinir sistemi, bir standart immünohistokimya protokolü kullanılarak boyandı. Şu anda, hala çok yetişkin sinir sisteminin nasıl saklar yanı sıra nasıl oluşturulur bilinmiyor ve bilgi iletir. Gelişmekte olan Drosophila larva MSS çalışmalar, sinir sistemi kablolama ve işlevi hakkındaki bilgimizi artırmak gerekir. Drosophila larvaları gibi çevresel uyaranlara yanıt olarak stereotpyed davranışlar, bir dizi sergilerler. Bu davranışl...

<table><tbody><tr><td>Pens</td><td>ince uçlu</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>9 kuyucuklu saat camı</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plastik Petri kabı</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

drosophila melanogaster larvaların mss diseksiyonu

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

Drosophila larvaların merkezi sinir sistemi (MSS), karmaşık ve tam olarak anlaşılamamıştır. MSS araştırmak için bir yol, çeşitli roman ve marker proteinleri ifade incelemek için immünhistokimya kullanmaktır. Sert manikür beden boşluğunun içine nüfuz antikorlar engeller çünkü bütün larva boyama pratik değildir. Bu dokuların leke için sabitleme ve boyamadan önce hayvan incelemek için gereklidir. Bu yazıda, Drosophila larvaları MSS zarar vermeden nasıl incelemek göstermektedir. Ince forseps bir çift yarım larva yırtarak başlayın ve sonra MSS maruz kütikül &quot;iç-dış&quot; açmak. Diseksiyon dikkatli bir şekilde yapılırsa MSS manikür bağlı kalacaktır. Biz genellikle fiksasyon ve boyama adımları boyunca manikür bağlı MSS tutmak ve sadece cam slaytlar tamamen montaj örnekleri hemen önce manikür CNS kaldırmak. Ayrıca, Havva, MSS nöronların bir alt kümesi olarak ifade edilen bir transkripsiyon faktörü ile boyanmış bir larva MSS bazı temsili görüntü gösteriyor. Makalede, bu tekniği ve ortaya çıkabilecek olası zorlukları bazı pratik kullanımları ile ilgili bir tartışma ile sona erer.

Bu yazıda, merkezi sinir sistemi incelemek için nasıl üçüncü instar Drosophila larvaları göstermektedir.

Drosophila melanogaster Larvaların MSS diseksiyonu

Drosophila larvalarının merkezi sinir sistemi (MSS) karmaşıktır ve yeterince anlaşılamamıştır. MSS'yi incelemenin bir yolu, ... için immünohistokimyayı kullanmaktır.

Benim adım Nate Fer. Buradaki Princeton Üniversitesi'nde lisansüstü öğrencisiyim. Tamam. Yapmanız gereken şey solucanı bulmak ve ardından onu biraz PBS içeren bir kaba aktarmaktır.Görünüşleri böyle olacak; onları ikiye ayırdığınızda tüm iç organlar dışarı çıkar. Burada, birçok iç yapının bulunduğu kütikül var ve iç yüzünün dışarıya döndüğünden ve CNS'nin hâlâ bağlı olduğundan emin olmaya çalışıyorum. Tamamdır. Evet. İşte tam orada.Tam orada. Hangisi? Sağdaki pensetimde görebilirsiniz.Burada iki farklı lob var ve ardından, bir kazık kök gibi aşağıya doğru uzanan merkezi sinir sistemi (MSS) yer alıyor; tam burada, koyu renkli ağız kancalarının ve kütikülün geri kalanının hemen sağ tarafında bulunuyor. MSS'yi şu şekilde ayırmak ister misiniz? Evet, tabii ki.Bunu çekip çıkarabiliyorum. Ve bu yukarıdan aşağıya bakış açısıdır. Böylece iki lobu ve ardından Merkezi Sinir Sistemi'nin (CNS) kendisini görüyorsunuz.Peki, bu deneyi neden yapıyorsunuz? Larvaların sinir sistemindeki protein ekspresyonunu incelemek istiyoruz. Bunu yapmanın en iyi yolu ise larval dokuyu parçalarına ayırmaktır.Antikorların bütün haldeki bir dokuda kütikülü geçmesi zor olduğu için, önce larva Merkezi Sinir Sistemi'ni

dissection-of-larval-cns-in-drosophila-melanogaster

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Drosophila Larvaların NMJ Diseksiyon

Drosophila melanogaster larvaları larva segmental sinirler içinde aksonal taşıma mekanizmalarının araştırılması için ideal bir model sistem sağlar. Bu yordamı kullanarak, 3. instar larvaları çeşitli mutasyonları taşıyan vahşi tip larva mukayese edilebilir.

3 Larvaların segmental sinirler Görselleştirme Rd Instar Drosophila Larvaların Hazırlıkları

Biz, doku-spesifik FLP Gal80 ifade kalıplarını belirlemek için izin bir Flippase indüklenen intersectional Gal80/Gal4 baskı (FINGR) yöntemi açıklanmaktadır. Her yerde Gal4 ve FLP örtüşme, Gal4 ifade açık (Gal80 yukarı ve aşağı döndürülebiliyor) veya kapalı (Gal80 içinde döndürülebiliyorlar,). FINGR yöntem klonal analizi ve nöral devre haritalama için çok yönlüdür.

Larvaların ve Yetişkin Enhancer-trap Flippase İfade Haritalama ve Uygulama Drosophila MSS

Bu video, yetişkin Drosophila beyninin nasıl inceleneceğini ve izole edileceğini açıklar – aksi takdirde kütikül, göz ve trakeal doku tarafından gizlenen organı görselleştirmek için gerekli bir prosedür. Örnek protokol, Drosophila nörobiyolojisinde immün boyama ve görüntüleme yöntemleri için kullanılabilecek yüksek kaliteli preparatları veren ayrıntılı bir gösterimi göstermektedir.

Drosophila Erişkin Beyin Diseksiyonu: Sinek Nörobiyolojisinde Bir Yöntem

Bu video, Drosophila larvalarından elde edilen beyin eksplantlarının diseksiyonunu ve montajını göstermektedir. Göz disklerine bağlı merkezi sinir sistemi (CNS) larvalardan çıkarılır ve daha sonra fizyolojik bir tuzlu su çözeltisi içinde bir cam lam üzerine monte edilir.

Meyve Sineği Larva Beyin Eksplantlarının Diseksiyonu ve Montajı

Santral sinir sistemi rejenerasyon ve onarım araştırmak Drosophila larva ventral sinir kablosu kullanarak bir yaralanma paradigma açıklanmıştır. Kasıtlı geliştirilen yazılım ve genetiği ile kantitatif analiz ile birlikte zaman atlamalı ve sabit örneklerde konfokal mikroskopi lazer tarama, ardından bıçaklama MSS rejenerasyon ve onarım moleküler mekanizmalarının araştırılması için kullanılır.

Santral Sinir Sistemi Onarım İnceleyecek Bir Sakatlık Paradigma<em&gt; Drosophila</em

Bu protokol, dokunulmamış larva beyin bağlamında canlı hücre görüntüleme yapmak için kullanılan akıcı bir yöntem göstermektedir. Canlı hücre görüntüleme yaklaşımları sürekli daha önce gözardı mekanizmaları ortaya çıkarılması, asimetrik nöral kök hücre bölünmeleri çalışmanın yanı sıra diğer nörolojik ve gelişimsel süreçleri için paha biçilmezdir.

Canlı Görüntüleme<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva nöroblastomun

Bu iletişim kuralı diseksiyon ve yetişkin Drosophila melanogaster immunostaining açıklar beyin dokuları. Özellikle, bu iletişim kuralı doğru nöronal gelişim birçok yönlerini temel genel prensipler ortaya çıkarmak için kullanılabilecek örnek nöronal alt kümeleri olarak Drosophila mantar beden ve photoreceptor nöronlar kullanımı vurgulamaktadır.

Diseksiyon ve mantar vücut immünfloresan boyama ve yetişkin Drosophila melanogaster beynindeki nöronlar Photoreceptor

Bu iletişim kuralı maliyet-etkin ve uygun farmakolojik ajanları, sinirsel proteinlerin genetik mutasyonlar test etkinleştirmek için Drosophila melanogaster merkezi sinir sistemi azalan elektriksel aktivitesinin kaydetmek için bir yöntem açıklar, ve/veya keşfedilmemiş fizyolojik yolları rolü.

Üçüncü-biçim Drosophila Melanogaster merkezi sinir sisteminin etkinliğinin elektrofizyolojik kayıt

Bu protokol, larva ve yetişkin Drosophila optik loblarını görüntüleme için hazırlamak için üç adımı tanımlar: 1) beyin diseksiyonları, 2) immünohistokimya ve 3) montaj. Belirli optik lob yapılarını görselleştirmek için farklı montaj yönleri gerektiğinden, adım 3'e vurgu yapılır.

Optik lob görselleştirmesi için larva ve erişkin drosophila beyinlerinin diseksiyonu, immünohistokimyası ve montajı

Burada, fizyolojik koşullar altında hücresel ve hücre altı dinamikleri gözlemlemek için Drosophila melanogaster üçüncü instar larvalarından canlı eksplant beyinlerini hazırlamak, parçalamak, monte etmek ve görüntülemek için bir iş akışını tartışıyoruz.

Drosophila melanogaster Üçüncü Instar Larva Beyinlerinin Canlı Hücre Görüntülemesi

Öğrenin Drosophila melanogaster üçüncü dönem larvalarından merkezi sinir sistemi diseksiyonu tekniğini. Bu yöntem sinir sistemi gelişimi ve protein lokalizasyonu çalışmaları için değerli bir araçtır.

Drosophila melanogaster Larvaların MSS diseksiyonu

Daha fazla video keşfet